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Valoración de la actividad enzimática del páncreas: Determinación de lipasa. FASE PRE ANALÍTICA 1. Recibir al paciente. 2. Llevar al paciente a la zona de toma de muestra. 3. Sentar al paciente en una silla para empezar con el proceso. 4. Pedir permiso al paciente para poder inspeccionar los brazos para determinar cuál es la mejor vena para sacar la sangre. 5. Una vez identificado el brazo y por ende la vena, limpiar la zona ejerciendo un poco de presión con una torunda con alcohol. 6. Colocar el torniquete alrededor de la parte superior del brazo con el fin de aplicar presión en la zona y permitir que la vena se llene de sangre. 7. Introducir la aguja en la vena en un ángulo aproximado de 25°. 8. Colocar los tubos de tapón rojo para empezar a extraer la sangre y retirar el torniquete inmediatamente. En caso de ser con jeringa, extraer la cantidad de sangre necesaria y retirar el torniquete. 9. Una vez obtenida la cantidad de muestra necesaria en los tubos, colocar una torunda en la zona en donde está la aguja y retirar la misma. 10. Pedir al paciente que ejerza un poco de presión con la torunda para que la sangre deje de salir. 11. Colocar un curita en la zona donde se introdujo la aguja. 12. Agradecer al paciente y guiarlo a la recepción. 13. Llevar la muestra a la zona de análisis. *NOTA: Es importante verificar que el paciente se sienta bien al momento de estar realizando la extracción, en caso de que presente mareos detener la toma de muestra, retirar la aguja, brindarle una torunda con alcohol, esperar a que el paciente se recupere y proceder a tomar la muestra en otro brazo o en otra vena* FASE ANALÍTICA PERFIL PANCREÁTICO El perfil Analítico Pancreático es un análisis clínico que permite diagnosticar y realizar el seguimiento de trastornos que afecten al páncreas. Los análisis que se pueden realizar son: - Hemograma. - Amilasa. - Lipasa. - Glucosa. (Lab Duran Bellido, s.f). LIPASA La lipasa es una enzima que pertenece a las hidrolasas, hidroliza los ésteres de glicerol de triglicéridos de ácidos grasos de cadena larga. Se puede observar actividad de lipasa en páncreas, mucosa intestinal, estómago, leucocitos y tejido adiposo; sin embargo, sólo la lipasa pancreática tiene significado clínico. Su principal función es hidrolizar los triglicéridos de la dieta que han sido emulsificados por ácidos biliares y ayudan así a la absorción de grasas en el intestino delgado. (UNAM, 2009). DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE LIPASA IVD. Principio del método. La lipasa pancreática en presencia de colipasa, iones calcio y desoxicolato, hidroliza el sustrato 1-2-O-dilauril-rac-glicerol-3-glutárico-(6’-metilresorufina)-éster. Las secuencias de las reacciones directa de la lipasa son las siguientes: Reactivos R1 Tampón. TRIS pH 8.3 → 40 mmol/L Colipasa → ≥1 mg/L Desoxicolato → 1.8 mmol/L Taurodesoxicolato → 7.2 mmol/L R2 Microemulsión. Tartrato pH 4.0 → 15 mmol/L Sustrato de Lipasa → ≥0.7 mmol/L Cloruro cálcico ( ) → 0.1 mmol/L𝐶𝑎𝐶𝑙 2 LIPASA CAL Patrón. Suero humano liofilizado. Preparación R1 - R2 Listos para su uso. R2 Mezclar suavemente antes de usar. Lipase Cal: Reconstituir (→) con 1 mL de agua destilada. Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. Material - Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 580 nm. - Baño termoestable a 37°C (±0.1°C) - Celdas de 1 cm de paso de luz. Muestra Suero Procedimiento 1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. 2. Pipetear en una celda: a. Blanco → 1 mL R1, 200 μL R2, 10 μL de agua destilada. b. Calibrador / Muestra → 1 mL R1, 200 μL R2, 10 μL del patrón /muestra. 3. Mezclar, incubar a 37°C 1 min. 4. Leer la absorbancia inicial de la muestra, poner en marcha el cronómetro y leer la absorbancia cada minuto durante 2 minutos. 5. Calcular el promedio de la diferencia de absorbancia por minuto ( )∆𝐴/𝑚𝑖𝑛 Cálculos (∆𝐴/𝑚𝑖𝑛)𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 − (∆𝐴/𝑚𝑖𝑛)𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 = (∆𝐴/𝑚𝑖𝑛) 𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (∆𝐴/𝑚𝑖𝑛)𝑃𝑎𝑡𝑟ó𝑛 − (∆𝐴/𝑚𝑖𝑛)𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 = (∆𝐴/𝑚𝑖𝑛) 𝐶𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑑𝑜𝑟 (∆𝐴/𝑚𝑖𝑛)𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (∆𝐴/𝑚𝑖𝑛) 𝐶𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑑𝑜𝑟 𝑥 𝐴𝑐𝑡𝑖𝑣𝑖𝑑𝑎𝑑 𝐶𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑑𝑜𝑟 = 𝑈/𝐿 𝑑𝑒 𝑙𝑖𝑝𝑎𝑠𝑎 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 Interferencias - Triglicéridos a 300 mg/dL interfieren en la determinación de la lipasa reduciendo su actividad un 6%. - Hemoglobina hasta 150 mg/dL de bilirrubina hasta 20 mg/dL no interfieren. - Varias drogas y otras sustancias interfieren en la determinación de lipasa. FASE POST ANALÍTICA Valores de referencia para este método Adultos: ≤38 U/L (37°C) Como esta enzima se produce principalmente en las células acinares del páncreas, su utilidad clínica se relaciona casi de manera exclusiva con el diagnóstico de pancreatitis aguda. Otras afecciones en las cuales se incrementa la actividad de lipasa incluyen intoxicación aguda con alcohol y traumatismos o accidentes quirúrgicos del abdomen. Referencias Lab Duran Bellido. (s.f). Perfil Analítico Pancreático. Consultado el 31 de agosto de 2021. Recuperado de: https://laboratoriodeanalisisclinicos.com/analisis-clinicos-medicina-personalizada/perfil-analit ico-pancreatico/ SPINREACT. (2017). Determinación cuantitativa de lipasa IVD. Consultado el 31 de agosto de 2021. Recuperado de: https://spinreact.com.mx/public/instructivo/QUIMICA%20CLINICA/LIQUIDOS/1001275%20L IPASE%20LQ%202011.pdf UNAM. (2009). Manual de prácticas de bioquímica clínica. Consultado el 31 de agosto de 2021. Recuperado de: http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/MANUALBIOQUIMICACLINICA_10817.pdf https://laboratoriodeanalisisclinicos.com/analisis-clinicos-medicina-personalizada/perfil-analitico-pancreatico/ https://laboratoriodeanalisisclinicos.com/analisis-clinicos-medicina-personalizada/perfil-analitico-pancreatico/ https://spinreact.com.mx/public/instructivo/QUIMICA%20CLINICA/LIQUIDOS/1001275%20LIPASE%20LQ%202011.pdf https://spinreact.com.mx/public/instructivo/QUIMICA%20CLINICA/LIQUIDOS/1001275%20LIPASE%20LQ%202011.pdf http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/MANUALBIOQUIMICACLINICA_10817.pdf
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