Práctica 4 Reacción de Benedict

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Universidad Veracruzana
Facultad de Bioanálisis – Xalapa
Bioquímica Básica
Ricardo Vázquez Ballona
Alicia de los Ángeles Zamudio Sánchez
PRACTICA 4. 
Reacción de Benedict
22 de septiembre de 2021
Práctica 4
 Reacción de Benedict.
Objetivo
· Identificar carbohidratos reductores y no reductores.
Generalidades
El reactivo fue creado por el químico estadounidense Stanley Rossiter Benedict en 1909, quien publicó su artículo científico A reagent for detection of reducing sugars, en la revista J. Biol. Chem.
La reacción o prueba de Benedict identifica azúcares reductores (aquellos que tienen libre su OH del C anomérico), como la lactosa, la glucosa, la maltosa y la celobiosa. En disoluciones alcalinas pueden reducir el Cu2+, que tiene color azul, a Cu+, que en el medio alcalino precipita como Cu2O de color rojo-naranja.
El reactivo de Benedict consta de:
· Sulfato cúprico (comúnmente la sal pentahidratada);
· Citrato de sodio (estabiliza el Cu2+ durante el almacenaje del reactivo),
· Carbonato anhidro de sodio y NaOH, que sirven para alcalinizar el medio.
El fundamento de esta reacción radica en que, en un medio alcalino, el ion cúprico (otorgado por el sulfato cúprico) es capaz de reducirse por efecto del grupo aldehído del azúcar (-CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se observa como un precipitado rojo ladrillo correspondiente al óxido cuproso (Cu2O).
El medio alcalino facilita que el azúcar esté de forma lineal, puesto que en disolución forma un anillo piranósico o furanósico. Una vez que el azúcar está lineal, su grupo aldehído puede reaccionar con el ion cúprico.
En estos ensayos es posible observar que la fructosa (una cetohexosa) es capaz de dar positivo. Esto ocurre por las condiciones en que se realiza la prueba: en un medio alcalino caliente esta cetohexosa se tautomeriza (pasando por un intermediario enólico) a glucosa y manosa (que es capaz de reducir al ion cúprico).
Procedimiento.
Para la preparación de la disolución de sacarosa:
1. Prepara una disolución al 10 % de sacarosa a un volumen final de 20 mL con agua destilada en un vaso de precipitados de 50 mL. Esta disolución la prepara sólo un equipo y servirá para todos los demás equipos.
Para la preparación de la disolución de almidón:
1. Pela y ralla la papa dentro del vaso de precipitado, añade 50 mL de agua destilada y mezcla con un agitador de vidrio.
2. Filtra el extracto de papa en un matraz Erlenmeyer de 150 mL usando el embudo y la gasa. Los residuos de papa pueden ser desechados en áreas verdes, así como el extracto sobrante. Esta disolución la prepara sólo un equipo y servirá para todos los demás equipos.
Para el experimento:
Identifica cuidadosamente cada tubo antes de iniciar.
1. Rotula los tubos como: 1 glucosa, 2 fructosa, 3 sacarosa, 4 almidón, 5 control negativo.
2. Pipetea 1 mL de reactivo de Benedict a cada tubo de ensaye rotulado y caliéntalo a ebullición en baño maría.
3. Saca el tubo del baño maría con las pinzas para tubo de ensaye y añade a cada tubo 1 mL de la disolución de carbohidrato correspondiente, al control negativo añade 1 mL de agua destilada.
4. Mezcla suavemente por inversión con papel parafilm, retira el papel y vuelve a poner el tubo en baño maría en el mechero hasta ebullición.
Si la reacción es positiva aparece un precipitado rojizo, aunque si la cantidad de azúcar es pequeña puede dar un color anaranjada o verdoso.
Materiales y equipo.
	Material por equipo:
5 tubos de ensaye de 13 x 100 mm Gradilla para tubos
Pinzas para tubo de ensaye 1 pipeta graduada de 5 mL
5 pipetas graduadas de 2 mL Perilla
Vaso de precipitados de 250 mL
Mechero y tripie con tela de asbesto
	Material por grupo:
Balanza granataria con platillo de aluminio para tarar
Espátula
Vaso de precipitados de 50 mL Vaso de precipitados de 250 mL Agitador de vidrio
Embudo
Matraz Erlenmeyer de 150 mL
	Reactivos por equipo:
5 mL Benedict
1 mL glucosa 1 %
1 mL fructosa 1%
10 mL agua destilada
Sustancias	traídas	por	los alumnos, por grupo:
1 papa chica
1 rallador de cocina
5 g de azúcar morena 
1 gasa
Precauciones.
· Colocarse la respectiva bata de laboratorio, abotonada.
· Colocarse los accesorios de protección individual (cubrebocas, lentes de protección, guantes).
· Tener bien tapados los tubos de ensayo. 
· Mantener los tubos de ensayo en la gradilla.
· Rotular los tubos de ensayo.
· Cambiar las puntillas de las pipetas automáticas al momento que se deban cambiar.
· Usar pinzas para agarrar los tubos cuando se saquen del baño maría.
· Mantener extremo cuidado con la placa calefactora para el baño maría.
Resultados
	
	Tubo 1 Fructosa 1%
	Tubo 2 Azúcar de casa 1%
	Tubo 3 Orina Paciente 1
	Tubo 4 Orina Paciente 2
	Tubo 5 Control
	Cloración observada
	Verde claro
	Naranja ladrillo
	Marrón claro
	Marrón claro
	Azul
	Benedict (+), (-)
	Ligeramente positivo
	Positivo
	Positivo
	Positivo
	
	Tubo 1
Fructosa
Ligeramente positivo
	
	Tubo 3
Orina
Paciente 1
Positivo
1000 mg/dl
	
	Tubo 2
Azúcar de casa
Positivo
2000 mg/dl
	
	Tubo 4
Orina
Paciente 2
Positivo
1000 mg/dl
	
Conclusiones
Normalmente cantidades detectables de sustancias reductoras no son encontradas en la orina, excepto em glicosuria renal. La sustancia reductora más comúnmente encontrada en la orina es la glucosa y sua presencia indica glicosuria renal. Los azúcares reductores reducen sales cúpricas, es el caso del reactivo de Benedict, en soluciones calientes, cambiando la coloración de los mismos.
Referencias.
Pretendido: U. REACTIVO DE BENEDICT [Internet]. Ind.br. [citado el 22 de septiembre de 2021]. Disponible en: https://es.renylab.ind.br/wp-content/uploads/2018/05/Reactivo-de-Benedict.pdf
Reactivo de Benedict: para qué sirve, componentes, preparación [Internet]. Lifeder.com. 2020 [citado el 22 de septiembre de 2021]. Disponible en: https://www.lifeder.com/reactivo-de-benedict/
REACCIÓN DE BENEDICT - LABORATORIOS DE BIOQUÍMICA [Internet]. Google.com. [citado el 22 de septiembre de 2021]. Disponible en: https://sites.google.com/site/laboratoriosbioquimica/bioquimica-i/carbohidratos/reaccion-de-benedict
Wikipedia contributors. Reacción de Benedict [Internet]. Wikipedia, The Free Encyclopedia. [citado el 22 de septiembre de 2021]. Disponible en: https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Reacci%C3%B3n_de_Benedict&oldid=132764978
Ciencias.ua.es. [citado el 22 de septiembre de 2021]. Disponible en: https://ciencias.ua.es/es/extension-universitaria/documentos/extension-universitaria/ven-a-hacer-practicas/2017/bioquimica-identificacion-de-azucares.pdf