Reporte Práctica No 1

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Universidad Veracruzana
Facultad de Bioanálisis Región Xalapa
Experiencia Educativa
“Bioquímica Básica”
Académico:
Vázquez Ballona Ricardo
Alumna:
Hernández Bautista Dayra Elizabeth
Matrícula: S20020971
Práctica #1: Fragilidad Osmótica de los Eritrocitos.
Fecha: 01/09/2021
PRÁCTICA #1: FRAGILIDAD OSMOTICA DE LOS ERITROCITOS.
Objetivos:
· Establecer los efectos producidos por los factores osmóticos sobre los eritrocitos a diferentes concentraciones de solución salina (NaCl).
· Demostrar el comportamiento de la membrana celular en diferentes concentraciones de soluciones salinas.
Generalidades:
El término fragilidad eritrocitaria hace referencia a la susceptibilidad de los eritrocitos a la hemólisis cuando se exponen crecientemente a una solución salina hipotónica. En un paciente normal, el glóbulo rojo presenta una forma bicóncava que permite que, al ser expuesto a osmolaridades diferentes a la del plasma, experimente cambios en su forma incorporando o eliminando agua de su interior, pudiendo llegar finalmente a lisarse en medios de baja osmolaridad.
En ciertas patologías donde los hematíes presentan forma esférica (esferocitos) éstos se vuelven más susceptibles a la disminución de osmolaridad por ser menos deformables. Es así como en estos casos la lisis de dichos glóbulos rojos se producirá a niveles de osmolaridad mayores respecto a un paciente normal. Se dice entonces que la fragilidad osmótica eritrocitaria se ve incrementada.
Históricamente el Test de Fragilidad Osmótica se realiza enfrentando los hematíes del paciente en estudio, a concentraciones cada vez más hipotónicas y evaluando la liberación de hemoglobina al lisarse los mismos.
Procedimiento:
1. Verter 10 mL de agua destilada en el matraz de 25 mL. 
2. Preparar 9 tubos de ensayo como se indica en la tabla.
	TUBO
	1
	2
	3
	4
	5
	6
	7
	8
	9
	Agua destilada mL
	0
	0.2
	0.4
	0.6
	0.8
	1.0
	1.2
	1.4
	1.6
	Suero Fisiológico tamponado mL
	1.8
	1.6
	1.4
	1.2
	1.0
	0.8
	0.6
	0.4
	0.2
	Concentración obtenida en g/L
	9
	8
	7
	6
	5
	4
	3
	2
	1
	Sangre total con EDTA
	2 gtas.
	2 gtas.
	2 gtas.
	2 gtas.
	2 gtas.
	2 gtas.
	2 gtas.
	2 gtas.
	2 gtas.
3. Mezclar suavemente y dejar reposar un tiempo considerado alrededor de 30 min.
4. Centrifugar a 2000 r.p.m. durante 5 min. 
5. Aspirar el sobrenadante con pipeta Pasteur y pasarlo a una celda, usar una pipeta por muestra, (no decantar).
6. Leer la absorbancia de los sobrenadantes en el colorímetro o espectrofotómetro, calibrando a 0 de absorbancia y 100% transmitancia con blanco de agua.
7. Reportar resultados.
Materiales y equipo.
Material por equipo:
· 1 gradilla
· 9 tubos de ensayo de 13 x 1oo mm
· Pipetas automáticas de 100-1000 uL
· Puntas azules nuevas
· 1 piseta con agua destilada
· 1 matraz Erlenmeyer de 25 mL
Material traído por los alumnos por grupo:
· Material para toma de muestra de sangre
· 1 tubo con anticoagulante EDTA
· 1 marcador para tubo de vidrio
Material por grupo:
· Un espectrofotómetro con filtro verde a 540 nm, ajustado a 0 de absorbancia y 100% transmitancia con blanco de agua.
· Centrífuga clínica
· Contenedor de agujas
· Bolsa roja para RPBI
Reactivos por equipo:
· 50 mL de agua destilada
Sustancias traídas por los alumnos por grupo:
· Suero fisiológico tamponado, 100 mL
Precauciones:
· Colocarse la respectiva bata de laboratorio, abotonada.
· Colocarse los accesorios de protección individual (cubrebocas, lentes de protección, guantes).
· Tener bien tapados los tubos de ensayo. 
· Mantener los tubos de ensayo en la gradilla.
· Cambiar las puntillas de las pipetas automáticas al momento que se deban cambiar.
Resultados.
	TUBO
	1
	2
	3
	4
	5
	6
	7
	8
	9
	Lectura Absorbancia,
	0.004
	0.011
	0.010
	0.20
	0.301
	2.454
	2.454
	2.425
	2.485
	Coloración observada
	No hay
	No hay
	Poca 
	Media
	Rojo claro
	Rojo intenso
	Rojo intenso
	Rojo intenso
	Rojo intenso
	% de Hemólisis
	0.16%
	0.44%
	0.40%
	0.80%
	12.11%
	97.75%
	98.75%
	97.58%
	100%
Materiales que utilizar. Mostrando los 9 tubos.
	
	
Agregando la solución salina a los tubos.
Agregando la muestra a los tubos.
	
Conclusiones.
Se llevó a cabo esta practica para ver la resistencia osmótica de los eritrocitos. El resultado que se obtiene o lo que se espera de la practica es comprobar a que cantidad es mas resistente cada tubo dependiendo de la cantidad de agua destilada y suero agregado.
Observamos que a los tubos que se les agregó mayor cantidad de suero fisiológico tamponado y cantidad menor de agua destilada, no llegan a alcanzar la hemólisis porque sus eritrocitos no están dispersos en líquido.
¿Qué factores son condicionantes para predecir la hemólisis?
Hemólisis más frecuente mientras se efectúa la recogida de muestras en sangre:
	· Aspiración intensa, particularmente durante la punción superficial de las venas. La aspiración por medio de agujas finas suele causar menos hemólisis que con agujas gruesas. Sin embargo, el flujo de corriente es más bajo y la velocidad de fluido, turbulencia y hemólisis se supone que son menores. /5/
· La obstrucción parcial de un catéter venoso o arterial. La consecuencia es una aspiración más intensa si la muestra es extraida con una jeringa.
· Extracción con una jeringa y después repartir alicuotas en varios tubos de ensayo.
Causas de hemólisis después de la recogida de muestras de sangre
	· Agitación de la sangre vigorosamente
· Centrifugación de la sangre antes de la completa coagulación
· Centrifugación de muestras parcialmente coaguladas procedentes de pacientes con medicación de anticoagulantes
· Presión positiva o negativa en los tubos de muestra
· Dilución de la sangre con solución hipotónica
· Congelación y descongelación de la sangre
· Almacenamiento o transporte de sangre durante varios días a temperatura ambiente.
¿Qué enfermedades pueden producir hemólisis?
· Reacciones inmunitarias.
· Infecciones.
· Medicamentos.
· Toxinas y venenos.
· Tratamientos como la hemodiálisis o el uso del sistema de circulación extracorporal.
Referencias.
· Evaluación de Fragilidad Osmótica de los Hematíes por Citometría de Flujo - Cibic Laboratorios. (2018, October 3). Retrieved September 2, 2021, from Com.ar website: http://www.cibic.com.ar/laboratorios-bioquimicos/evaluacion-fragilidad-osmotica-los-hematies-citometria-flujo/
· Examen de la fragilidad osmótica. (n.d.). Retrieved September 2, 2021, from Medlineplus.gov website: https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/003641.htm
· Hemólisis. (n.d.). Retrieved September 2, 2021, from Medlineplus.gov website: https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/002372.htm
· MSc. Yamirka Alonso-Geli, MSc. Yamisleydi Alonso-Moreno, Lic. José E. Falcón-Diéguez, Est. Liset Lucambio-Miró, Est. Mariana Castro-Piñol. (2014). Caracterización de la fragilidad osmótica de eritrocitos humanos en la anemia drepanocítica. REVISTA CUBANA DE QUÍMICA, 27, 110–118.
· Thomas, L. (2002). 107-113 Thomas L L kirschbaumweg 8, 60489 Frankfurt, Deutschland E-mail: Th-books@t-online.De. Spa journal article hemolisis Como influencia Y factor de interferencia. 2002 06 10. eJIFCC, 13(4), 107–113.