Anexo_Composicion_medios_de_cultivo

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Lic. Silvia Gómez 
 Microbiología Agrícola 
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Anexo 
Medios de cultivos y reactivos 
 
Reactivos Gram 
Solución de Cristal violeta 
Cristal violeta 0,5g 
Agua 
destilada 
100 mL 
 
Alcohol-acetona 
Alcohol 80 mL 
Acetona 20 mL 
 
Lugol 
Yodo (S) 1g 
KI 2g 
Agua 
destilada 
200 mL 
 
Solución diluida de Fucsina fenicada 
Fucsina 
básica 
1g 
Etanol 
absoluto 
10 mL 
Fenol 5 g 
Agua 
destilada 
1600 mL 
 
Colorante para bacteroide 
Fucsina 
fenicada 
1 g 
Fenol 5g 
Agua 
destilada 
100 mL 
 
Lactofenol-azul de algodón 
Fenol 20 g 
Ácido láctico 20g 
Glicerina 40g 
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Azul de 
algodón 
 
0,05 g 
Agua destilada 20 mL 
 
Reactivo de Nessler 
Solución A 
 Yoduro 
mercúrico 
50g 
Yoduro de 
potasio 
36,5 g 
 
Se añade un poco de agua destilada, se tritura en mortero y finalmente se completa a 
1000cc 
 
Solución B 
Potasa en 
pastillas 
150g 
Agua 
destilada 
1000cc 
 
Se mezclan ambas soluciones en el momento de usar. 
 
Solución diluyente ( pH=7,1 ±0,2) 
Peptona 1g 
Agua 
destilada 
1000 mL 
 
Agar EMB (con eosina y azul de metileno)( pH=7,2) 
Peptona 10g 
Lactosa 5 g 
Fosfato 
dipotásico 
2 g 
Eosina 
amarillenta 
0,4 g 
Azul de 
metileno 
0,065 g 
Agar 13,5 g 
 
Distribuir en erlenmeyer en porciones de 100 o 200 mL y se esteriliza en autoclave durante 
15 minutos a 120ºC 
 
 
 
 
 
 
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Agar recuento en placa (pH=7) 
Triptona 5 g 
Extracto de 
levadura 
2,5 g 
Glucosa 1 g 
Agar 15 g 
Agua 
destilada 
1 L 
 
Disolver los ingredientes por calentamiento hasta ebullición, repartir en tubos o 
erlenmeyer y esterilizar en autoclave a 120ºC durante 15 minutos. 
 
Agar nutritivo (pH=7,2) 
Extracto de 
carne 
3 g 
Peptona 5 g 
Cloruro de 
sodio 
5 g 
Agar 20 g 
Agua 
destilada 
1 L 
 
Caldo Mac-Conkey (pH=7,3) 
Peptona de 
caseína 
20g 
Lactosa 10 g 
Bilis de Buey 
desecada 
5 g 
Púrpura de 
bromocresol 
0,01 g 
Agua 1 L 
 
Se disuelven los componentes en agua destilada, se ajusta el Ph a 7,3 ±0,2. Se distribuyen 
volúmenes de 10 mL en tubos de 150 x15 mm con campanitas de Durham invertidas. Se 
esteriliza en autoclave a 120ºC durante 15 minutos. 
 
Medio para actinomicetes ( pH=7,5) 
Asparaginato 
de sodio 
1 g 
Glicerol 10 g 
Fosfato 
dipotásico 
1 g 
Sol. de 
oligoelementos 
1cc 
Agar 15 g 
Agua destilada 1L 
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Medio para hongos 
Glucosa 10 g 
Peptona 5 g 
K2 HPO4 1g 
MgSO4 .7H2 O 0,5g 
Rosa bengala 
1/3000 
100cc 
Sol. de 
oligoelementos 
1cc 
Agar 20 g 
Agua destilada 900 L 
 
Se coloca el agua destilada en un vaso de precipitación y se agrega todos los componentes. 
Calentar a punto cercano a ebullición y una vez fundido el agar, ajustar el pH a 6,5. Distribuir en 
tubos colocando 10 cc por tubo. 
Se esteriliza a 120ºC durante 20 minutos. Una vez esterilizado para evitar el crecimiento 
bacteriano, se agrega 1 cc de la solución de sulfato de estreptomicina (75000 ug en 100 cc de agua 
destilada) en cada tubo de ensayo. 
 
Solución Salina Standart 
Fosfato 
dipotasico 
5 g 
Sulfato de 
magnesio 
2,5 g 
Cloruro de sodio 2,5 g 
(SO4)3 Fe2 
 
0,05 g 
Sulfato de 
manganeso 
0,05g 
Agua destilada 1000cc 
 
Se coloca los ingredientes en un vaso de precipitación con el agua destilada. La solución presenta 
un aspecto opalescente con un principio de precipitación, se corrige el pH a 7-7,5 y se reparte en 
frascos tapados con algodón. Se esteriliza a 120ºC durante 20 minutos. Se agita antes de usar. 
Solución de Oligoelementos 
Molibdato de 
potasio 
0,05 g 
Borato de 
potasio 
0,05 g 
NO3 Co 0,05 g 
SO4 Cd 
 
 0,05 g 
SO4 Zn 
 
0,05g 
SO4 Cu 0,05g 
SO4 Mn 
 
0,05g 
Percloruro de Fe 1gota 
Agua destilada 1000cc 
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Se coloca los ingredientes en un vaso de precipitación con el agua destilada. La solución 
presenta un aspecto opalescente con un principio de precipitación, se corrige el pH a 7-7,5 
y se reparte en frascos tapados con algodón. Se esteriliza a 120ºC durante 20 minutos. Se 
agita antes de usar. 
 
Medio Recuento Microflora Total 
Fosfato 
bipotásico 
1 g 
sulfato de 
magnesio 
0,2 g 
Cloruro de 
sodio 
0,1 g 
Cloruro férrico 0,002 g 
Nitrato de 
potasio 
0,5g 
Asparagina 0,5g 
Manita 1g 
Agar 15 g 
Agua destilada 1000mL 
 
Se ajusta el pH a 7,2 con KOH 0,1N y se esteriliza a 120ºC durante 20 minutos. 
 
Medio para determinación de celulolíticos aerobios 
K2 HPO4 1 g 
NaNO3 0,5 g 
Mg SO4 0,5 g 
Cloruro férrico 0,002 g 
Nitrato de 
potasio 
0,5g 
FeSO4 0,01g 
Agua destilada 1000mL 
 
Se reparte en tubo a razón de 8 mL y se colocan tiras de 1 x 10 cm de papel de filtro. Se 
esteriliza en autoclave 120ºC durante 20 minutos. 
 
Medio Recuento de microflora amonificante 
Asparagina 0,2 g 
SSS 50cc 
Sol. De 
oligoelementos 
1cc 
Cloruro férrico 0,002 g 
Agua destilada 950mL 
 
Se reparte en tubo a razón de 10 mL. Se esteriliza en autoclave 120ºC durante 20 minutos. 
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Solución nutritiva para la determinación de nitritadores 
SSS 50cc 
Sulfato de 
amonio 
50cc 
Agua destilada 950mL 
 
El enduído se prepara agregando 1 mL a cada placa de una solución de carbonato de 
calcio al 40% en agua. Se distribuye uniformemente con pipeta en las placas de silico-gel. 
Se colocan seguidamente las placas en estufa a 45-50°C para eliminar el exceso de agua. 
 
Medio agar manitol-rojo congo (pH=7) 
Cloruro de 
sodio 
0,2 g 
Fosfato 
dipotásico 
0,5 g 
Sulfato de 
magnesio 
0,3g 
Carbonato de 
Calcio 
0,1 g 
Sulfato de 
Calcio 
0,1g 
Manita 10 g 
Extracto de 
levadura 
1g 
Agar 20 g 
Rojo Congo 
(1:400) 
10cc 
Agua destilada 1000cc 
 
Se esteriliza en autoclave durante 20 minutos. 
 
 
Medio LG ( para Azotobacter) 
Sacarosa 20 g 
K2HPO4 0,05 g 
KH2PO4 0,15 g 
CaCl2 0,01g 
MgSO4. 7H20 0,20 g 
Na2MoO4 2H20 0,002 g 
FeCl3 0,01g 
Azul bromotimol ( 0,5% en etanol) 2,0 mL 
CaCo3 1,0 g 
Agar 15 g 
Agua 1L 
pH 6,8 
 
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Medio para la determinación de Azotobacter 
Manitol 5 g 
Carbonato de 
calcio 
0,25 g 
SSS 25 cc 
Sol. de 
Oligoelementos 
0,5cc 
Extracto de 
tierra 
5 cc 
Agua destilada 500mL 
Se distribuyen 9mL del medio en tubos de ensayo y se esteriliza a 120ºC durante 20 
minutos 
 
Medio agar cetrimide (pH=7,2) 
Peptona de 
caseína 
20 g 
Cloruro de 
magnesio 
1,4 g 
Sulfato 
potasico 
10 g 
Cetrimide 0,3 g 
Aditivo: 
glicerina 
10 mL 
Agar 13 g 
Agua destilada 1 L 
 
Medio Mellins-Norkrans modificado(pH=5,5 a 5,7) 
Extracto de 
malta 
3 g 
Glucosa 10 g 
Fosfato de 
amonio 
0,25g 
Fosfato 
monopotásico 
0,5 g 
Sulfato de 
magnesio 
0,15g 
Cloruro de 
calcio 
0,05 g 
Cloruro férrico 
( sol. 1%) 
1,2cc 
Tiamina HCl 10ug 
Agar 20g 
Agua destilada 1 L 
 
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En forma aséptica se agrega al medio esterilizado, estreptomicina en una concentración de 
0,75g/L 
 
Medio King A (pH=7,2) 
Bacto Peptona 2 g 
Glicerol 1 g 
Sulfato di 
potásico 
1 g 
Cloruro de 
magnesio 
0,14 g 
Agar 1,5 g 
Agua destilada 100mL 
 
 
Medio King B (pH=7,2) 
Proteosa 
Peptona 
2 g 
Glicerol 1 g 
fosfato di 
potásico(anhidr
o 
0,15 g 
Sulfato de 
magnesio 
.7H2O 
0,14 g 
Agar 1,5 g 
Agua destilada 100mL 
 
Extracto de tierra 
- Elegir un suelo fértil con pH neutro o ligeramente alcalino y tomar una porción a una 
 profundidad de 5 a 30 cm. 
- Mezclar en un recipiente grande 1 kg de la muestra con con 1 litro de agua lo mas pura 
 posible. 
- Macerar durante 24 horas a temperatura ambiente. 
- Esterilizar a 130 ºC durante 1 hora, es recomendable dejar salir el vapor cuando la 
 temperatura del autoclave alcance los 110 ºC con lo que producimos un enfriamiento más 
 rápido, evitando el oscurecimiento del extracto como consecuencia de un cocimiento pro- 
 longado. 
- Decantar y filtrar en caliente la solución. 
- Verificar y corregir el pH si es necesario ( pH ). 
- Esterilizar a 120 ºC durante 20 minutos. 
- Si se desea preparar agar extracto de tierra se agrega agar al 1,5 a 2 %, calentando a 
baño María y luego se esteriliza. 
 
 
 
 
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Sílico-gel: ( Método clásico de Winograsky ). 
Para prepararlo se usa ácido clorhídrico y silicato de sodio.El silicato de Na comercial es 
concentrado (40-60 º Bmé ) y contiene impurezas, por lo cuál se lo debe clarificar de la 
siguiente forma: 
- Se lo diluye a una densidad de 10-11 ºBmé y se lo lleva a autoclave a 120 ºC durante 20 
minutos. 
- Se deja enfriar y se lo filtra con papel de filtro. 
- Se lo diluye 9 º Bmé (densidad 1,06 ). 
- Se mezclan volúmenes iguales de soluciones de Silicato de Na y HCl 13 º(densidad 
1,02) vertiendo el silicato sobre el ácido y agitando. 
- Se vierten en cajas de Petri 30 ml de la mezcla. Las cajas deben estar sobre una 
superficie horizontal. 
- Se Dejan reposar hasta que se halla formado el gel (aproximadamente 5-6 hs ). 
- Comprobar que al golpear el borde de la caja el gel vibre, si esto no ocurriera debe 
desecharse la caja ya que hubo una mala gelificación. 
 - Colocar las cajas en un baño de agua corriente durante toda la noche y a veces durante 
1 o 2 días para eliminar el exceso de HCl y los cloruros formados. 
- Al finalizar el lavado se usa agua destilada y se comprueba la desaparición de cloruros 
con Nitrato de plata. Las cajas deben guardarse en un ambiente húmedo para evitar la 
desecación y rotura del gel. 
 
Esterilización de las placas con sílico-gel 
Se pueden usar dos técnicas: a) pasar las cajas por un recipiente con agua hirviendo 
durante 20 segundos y luego secarlas en la estufa, b) con radiaciones U.V. dejándolas 
destapadas en la sala de siembra durante 30 minutos. Se llevan a estufa a 60 ºC para 
eliminar el exceso de agua. 
Posteriormente se lo impregnará con la solución nutritiva estéril específica para el grupo 
fisiológico en estudio.