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408 | Genoma, patología molecular y terapia génica Figura 23-5. Estrategias para la unión de moléculas de ADN para formar ADN recombinante. a) Si las moléculas de ADN a «recom- binar» se digieren independientemente con una endonucleasa de restricción que genere fragmentos monocatenarios cohesivos y se mez- clan los fragmentos, éstos interaccionarán mediante formación de enlaces por puentes de hidrógeno entre las bases complementarias de los extremos, pudiendo unirse después de forma covalente mediante tratamiento con ADN ligasa. b) A los dos tipos de ADN (ADN1 y ADN2) se le pueden crear extremos homopoliméricos monocatenarios mediante la transferasa terminal: extremo de poli(A) al ADN1 incubando con dATP y de poli(T) al ADN2 incubando con dTTP; tras mezclar las dos poblaciones, se consigue la unión covalente de los fragmentos que han interaccionado por medio de la ADN ligasa. c) A los dos tipos de ADN se les puede añadir, por medio de la ADN ligasa de T4, un pequeño ADN conector que contiene la secuencia diana de una endonucleasa de restricción. Tras digerir con dicha endonucleasa los fragmentos con extremos cohesivos se unirán por medio de la ADN ligasa. ADN1 ADN2 a) b) Digestión Endonucleasa de restricción Fragmentos extremos cohesivos Mezcla de fragmentos Unión ADN ligasa ADN recombinante ADN1 ADN2 dATP Transferasa terminal dTTP Mezcla Unión ADN ligasa ADN recombinante ADN1 ADN2 ADN ligasa T4Conector Conector Endonucleasa de restricción Mezcla y unión ADN recombinante TTT(T)nTTT c) AAA(A)nAAA TTT(T)nTTT AAA(A)nAAA TTT(T)nTTT AAA(A)nAAA AAA(A)nAAA TTT(T)nTTT AAA(A)nAAA TTT(T)nTTT 23 Capitulo 23 8/4/05 11:43 Página 408
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