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1 Membrana Plasmática Transducción de señales Citoesqueleto Sistema de endomembranas I y II Transducción de energía y mitocondrias Nucleo interfasico, cromatina, cromosomas Duplicación y replicación de ADN Transcripcion del ADN, estructura de los genes Síntesis, funcionalidad y renovación de proteínas Reguacion de la expresion genic Mitosis y meiosis Regulación del ciclo celular, la célula tumoral En este apunte podes encontrar la transcripción de los videos de biología de cátedra 2. En caso de tener alguna sugerencia o alguna pregunta podes mandarme un mensaje directo a mi cuenta de instagram. ¡Exitos! 2 Membrana plasmática La membrana plasmática separa una célula del medio externo. En el caso de las bacterías es la única membrana que posee, pero una célula eucariota posee otras membranas internas que la dividen en compartimientos intracelulares. Funciones: ● Recibir información del medio extracelular ● Permitir el ingreso y egreso de sustancias de forma regulada ● Tiene capacidad de crecimiento y movilidad Estructura: se postuló como modelo de mosaico fluido en 1972 y es el que usamos desde entonces. Todas las membranas están compuestas mayormente por lípidos y proteínas y en menor medida por hidratos de carbono. Todas comparten esta estructura fundamental y es independiente de su ubicación. Los lípidos se organizan en una bicapa lipídica y actúan como barrera para moléculas hidrosolubles. Las proteínas cumplen diversas funciones como receptoras de señales externas, transportadores de sustancias, proteínas de anclaje, etc. Lípidos: se dividen en 3 grupos, FOSFOLÍPIDOS, COLESTEROL Y ESFINGOLÍPIDOS (forman glucoesfingolípidos como los gangliósidos y cerebrósidos) ● Los fosfolípidos son los lípidos más abundantes y se forman por UN ALCOHOL, EL GLICEROL QUE SE UNE A DOS ÁCIDOS GRASOS Y UN GRUPO FOSFATO (es la parte polar del molecula y se la conoce como cabeza hidrófila o polar), el resto de la molécula es no polar y se la llama cola hidrofóbica. -a la cabeza le gusta el agua, a la cola no- Por todo esto, son anfipáticas, por su parte hidrofílica y la otra hidrofóbica. Una de las cadenas hidrocarbonadas de los ácidos grasos suelen tener un doble enlace entre dos carbonos lo que provoca una desviación de la cadena. Tipos de fosfolípidos: 1. Fosfatidil etanolamina 2. Fosfatidil serina 3. Fosfatidil colina (el más abundante) 3 4. Esfingomielina y esfingosina (derivados del esfingol al que se le unen ácidos grasos, son anfipáticos y pueden formar junto con monosacáridos u oligosacáridos los glicoesfingolípidos) Entonces los fosfolípidos de la membrana son anfipáticos y adoptan la conformación más estable que es forma de bicapa,donde las cabezas polares interactúan con el medio acuoso intra o extracelular y las colas hidrofóbicas interactúan entre sí. Los lípidos en la bicapa lipídica pueden rotar y moverse lateralmente, rara vez cambian de una capa a otra (flip flop) Colesterol: presenta un grupo polar mientras que el resto de la molécula es no polar. Se ubica entre los fosfolípidos en el espacio que deja una cola hidrocarbonada insaturada. Son moléculas cortas y rígidas y por eso otorgan rigidez a la membrana, cuando más colesterol tiene menos fluida es. ● La fluidez disminuye a mayor cantidad de colesterol y esfingolípidos y también si las colas hidrofóbicas son más largas ● aumenta la fluidez con el número de enlaces dobles de las colas y con el aumento de temperatura 4 Glucolípidos:están SOLO en la cara externa de la membrana. Esto hace referencia a que las dos caras no son iguales, por eso es asimétrica. La cara citosólica tiene fosfatidilserina, fosfatidilinositol y fosfatidil etanolamina. Fosfatidilcolina y colesterol en ambas capas. La cara citosólica es negativa. Glucocaliz: conjunto de hidratos de carbono que está en la parte extracelular de la membrana.Sus funciones son crear un microambiente propicio para la actividad de las enzimas que actúan en la MEC, proteger la célula del medio externo, interviene en reconocimiento célula-célula y procesos de adhesión celular. Los glúcidos están siempre unidos a lípidos y proteínas, teniendo glucolípidos y glucoproteínas y proteoglicanos. 5 Las proteinas que estan en la membrana tenemos: ● Integrales o transmembrana, que atraviesan toda la membrana y están unidas covalentemente a ella. Estas tienen aminoácidos no polares que interactúan con las colas hidrofóbicas y están en contacto con los fosfolípidos de la membrana. Los AA que están por fuera contactan el citosol y MEC, entonces son hidrofílicos. 1. Paso simple 2. Pso múltiple 3. los canales 4. unidas a lípidos ● Periféricas, no están unidas fuertemente a la membrana y establecen uniones débiles. 7 y 8. periféricas Funciones: depende de sus proteínas. Pueden ser transportadoras, de anclaje asociándose con proteínas, receptoras y enzimáticas. 6 ¿Cómo es el transporte? ● Difusión: solutos disueltos en solvente tienden a igualar concentraciones a través de una membrana por la que pasan libremente. Será simple si va del lugar de mayor concentración al de menor, o sea a favor del gradiente y llegan al equilibrio. Las moléculas se transportan a través de difusión simple o con difusión facilitada (transporte pasivo) donde se usan proteínas que ayudan a atravesar las moléculas a la membrana. Las moléculas grandes y polares y los iones no pueden difundir. Agua-osmosis: realiza difusión simple, el agua es el solvente entonces entra a una célula con mucha concentración de soluto respecto al medio externo celular y puede hacer lisis. ● Si el medio externo tiene la misma concentración de un st que el medio interno es isotónico. ● Si el medio tiene mayor concentración que el interior, es hipertónico, el agua escapa de la célula ● si el medio tiene menor concentración de soluto que el interior el agua entra a la célula y se hincha., es hipotónico. Transporte pasivo o difusión facilitada: a favor del gradiente, tiene más velocidad que la difusión simple, ocurre por proteínas. ej : glucosa, aminoácidos y nucleótidos. Se da por 2 tipos de proteínas que ayudan a pasarlos a través de la membrana, los carriers que tienen partes móviles que desplazan las moléculas modificando conformación y tienen un sitio de unión que encaja con la célula, así que es específico. Los canales iónicos son poros hidrofílicos chicos formados por proteínas complejas con subunidades proteicas. Todos tienen AA que seleccionan que ion pasa, los canales estrechos no permiten el pasaje de iones grandes y los que están revestidos por carga negativas no 7 permiten el ingreso de los iones negativos) que pasan iones inorgánicos, y también es específico porque hay canales para cada ion. Para el agua existen las acuaporinas. Los canales se abren ante señales específicas. Transporte activo: hidroliza ATP para transportar en contra del gradiente de concentración. 1. Cotransportadores (mueven una molécula a favor del gradiente y otra en contra) Pueden ser simporte -la de glucosa/Na- en la misma dirección o antiporte en la dirección opuesta, los que transportan una molécula son uniporte. 2. bombas impulsadas por ATP 3. Bombas impulsadas por luz Bombas P: Na/K (saca 3 Na y entran 2 K hidroliza atp y se autofosforila), bomba Ca2+ en el retículo del músculo, las bombas H + para ph bajo en estómago/lisosomas. 8 Transportador Glucosa/Na+: tiene un estado que se abre al espacio extracelular y une el sodio con la glucosa, luego el transportador cambia de conformación y se libera el sodio y la glucosa en el interior de la célula como en los enterocitos, luego en el lado basal se encuentra el carriers para la glucosa y la bomba Na/K. Transporte en masa: con gasto de energía porque involucra a una parte de la membrana ● Endocitosis: la partícula se internaliza dando vesículas para ir dentro de las células. 1. Fagocitosis, agarra bacterias o partes de la misma, también partículas grandes 2.Pinocitosis, se agarra líquido con sustancias diluidas como lípidos ● Exocitosis: se liberan vesículas afuera de la célula, hay fusión de la membrana plástica con la membrana de la vesícula. Transducción de señales ● En una comunicación típica de las células, la que es señalizador produce una molécula señal que es detectada por la célula diana, la cual tiene proteínas receptoras que responden en forma específica. ● La molécula señal puede ser proteínas, péptidos, AA, nucleótido, esteroides, gases, derivados de A.G. 1. Endocrina: la célula produce una hormona y la secreta al torrente sanguíneo la cual es distribuida a todo el organismo 2. Paracrino: célula libera señales al fluido extracelular cercano, y mediadores locales 3. autocrino: las células responden a mediadores locales que ellas mismas producen 4. neuronal: la señales se transmiten a lo largo de los axones y mediante la liberación del neurotransmisor alcanza a la celua blano. 5. depende de contacto: una molécula señalizadora unida a la superficie se une a una proteína receptora de una célula vecina. El tiempo que se toma una célula para responder a una señal puede variar, según lo que pase luego de recibir el mensaje. Algunas señales son rápidas como en segundos/minutos porque afecta la actividad de proteínas o moléculas que ya están presentes en célula diana y solo deben activarse. Otra respuesta tiene más tiempo como el crecimiento y la división celular tardan horas porque la respuesta requiere cambios en la expresión génica. 9 Moleculas de señalizacion: 1. Moléculas que son muy grandes o hidrófilas para atravesar la membrana entonces se usan a receptores de la célula diana. La proteína receptora hace el primer paso de transducción de señales, genera señales intracelulares corriente abajo. 2. Moléculas hidrófobas que pasan por la membrana y en el interior atizan enzimas o se unen a proteínas receptoras que regulan la expresión génica. Una clase importante son las hormonas como el cortisol, estradiol y testosterona. La unión de la hormona esteroide induce a un cambio de conformación del receptor que le permite liberarse de proteínas inhibitorias y hace que el complejo hormona receptor se traslade al núcleo y allí se unen a regiones reguladoras del gen diana activando o reprimiendo la transcripción. Hay 2 tipos de respuestas a hormonas esteroides 10 Receptores de membrana: ● Acoplado con canales iónicos dando flujo que cambia potencial de membrana y da corriente eléctrica. Los receptores acoplados a canales iónicos regulados por ligando actúa transmitiendo señales de forma rápida por la sinapsis, por ejemplo. Llevan una señal química en forma de neurotransmisor hacía la célula diana como señal eléctrica a través de un cambio de voltaje. Cuando se une el neurotransmisor puede abrir o cerrar el canal iónico de la membrana, dando flujo de Na, Cl, K, Ca. Son impulsados por los gradientes electroquímicos y entran o salen de la célula generando un cambio del potencial de membrana y puede dar un impulso nervioso. ● Acoplados a proteína G las cuales activan a proteínas de unión a gtp triméricas unidas a membrana llamadas proteínas G que después activan enzima o canal iónico de MP dando una cascada de otro efectos Los acoplados proteína G constituyen la familia más grande de los receptores Están compuestos por una sola cadena polipeptídica que atraviesa la membrana 7 veces. La proteína G acoplada al receptor está formada por subunidades alfa con actividad GTPasa y beta/gamma. ● Los acoplados a Proteína G son la familia más grande de los receptores. Están compuestos por una sola cadena polipeptídica que atraviesa la membrana 7 veces. La proteína g acoplada al receptor está formada por subunidades alfa con actividad GTPasa y beta/gamma. ● La unión de una señal el receptor modifica su conformación que a su vez modifica la conformación de la proteína g, cuando se altera la subunidad alfa, se cambia el GDP por GTP y activa el complejo beta/gamma y así interactúan con las proteínas dianas. 11 ● Muchas señales extracelulares actúan a través de receptores a la proteína G inciden en la actividad de la adenilato ciclasa y modifican la conformación del AMP cíclico 2do mensajero). Este último ejerce sus efectos por la activación de la proteína kinasa A y modifica la actividad de proteínas por fosforilación. ej: la liberación de la hormona adrenalin a la sangre y cuando se une al receptor de la célula esquelética se activa la proteína G -> activa el ampc - > activación PKA, la última activa la fosforilasa kinasa -> degradación del glucagón para dar glucosa siendo ésta combustible de la contracción muscular. ● Otra de las enzima acopladas a la proteína G es la fosfolipasa C. cuando está activada degrada una molécula lipídica componente de la MP generando dos 2dos mensajeros -> IP3 y DAG -> apertura de canales de Ca+ para activar proteínas y activación de PKA C ● Acoplados a enzimas: actúan ellos mismos como enzimas o se asocian a enzimas dentro de la célula y activan vías de señalización intracelular. Presentan sus dominios de unión al ligando de la superficie externa. Las moléculas señal son mediadores locales que actúan en concentraciones bajas. Están involucrados en supervivencia, crecimiento, diferenciación, migración celular. 12 El mecanismo se da por un dímero de la molécula señal induce que dos moléculas receptoras se acerquen y formen un dímero en membrana. El contacto de la porción intracelular tiene función kinasa y se fosforilan. Después las tirosinas actúan como sitio de unión para proteínas de señalización intracelular las cuales son fosforiladas y activadas. Proteínas diana: ● RAS: es un proteína que se une a la cara citoplasmática de la membrana. Es una GTPasa , parecida a la subunidad alfa de la proteína G. actúa de manera similar. Activa cuando está unida a GTP ( promueven una cascada de fosforilación, son tres MAP kinasas. estimulan la proliferación) e inactivan cuando se une a GDP. Una parte de los cánceres se deben a una mutación en Ras. ● PI3K: una señal de supervivenci activa una tirosina kinasa -> activa PI3K -> fosforila inositol y este atrae proteínas de señalización intracelular -> una es AKT -> se libera de la membrana plasmática y promueve supervivencia. Una manera de hacerlo es fosforilar y desactivar a BAD, que cuando está activada suprime la apoptosis al unirse a Bcl 2 (suprime apoptosis). Cuando AKT la fosforila bad libera a bcl 2 y se bloquea la apoptosis. ● JAK Stat: los receptores se asocian a quinasas llamadas Jak. Este tipo es de la hormona prolactina, la cual estimula la producción de leche. La unión de la prolactina 13 hace que las jak se fosforilen y activan entre sí -> las jak activadas fosforilan receptoras ->las STAT son fosforiladas por jak y al activarse migran al núcleo donde activan la participación de genes que codifican proteínas de la leche. Citoesqueleto 14 Es una red compleja de filamentos que se extiende por todo el citoplasma. Es una estructura dinámica formada por proteínas filamentosas y asociadas (estabilizadora, motora, etc): ● Filamentos finos de actina (es un polímero de actinas globulares formando una cadena retorcida. Los microfilamentos tienen un extremo más donde la velocidad de crecimiento es mayor y un extremo menos donde la velocidad de crecimiento es menor)- El filamento se forma cuando un monómero de actina libre unido a una molécula de ATP se une a otra actina globular unida a otro ATP. Este se hidroliza a ADP y así la fuerza de unión se reduce de los monómeros de actina y la estabilidad del polímero es menor para desensamblarse. Son regulados o estabilizados por diversas proteínas llamadas proteínas relacionadas con actina: 1. Ayudan a que crezcan o a nuclear los filamentos 2. secuestran monómeros para que los polímeros no se formen 3. cortan y entrecruzan filamentos 4. estabilizan haces de filamentos paralelos 5. les ponen capuchón para estabilizar e impedirsu degradación 6. actúan como proteínas motoras ● Filamentos de actina en músculo. tiene disposición paralela y separada para que las miosinas puedan interactuar con los filamentos. Están estabilizados por la alfa actinina. ● En las microvellosidades están estabilizados por la fimbrina, haciendo que lo haces de actina esten más juntos para que la miosina no entre y no haya contracción. ● Para establecer las uniones cruzadas existe la filamina, ella forma una red que puede observarse en la corteza celular (da forma las células) ● Funciones de actina: 15 ● Fijación espacial y unión cel-cel (se forma un cinturón adhesivo) y cel-matriz (contacto focal) Las uniones adherentes están formadas por filamentos de actina que se unen a varias cateninas y ellas se unen a proteínas transmembrana llamadas cadherinas y esta se une con la cadherina vecina. En el contacto focal el filamento estabilizado por un capuchón se une a proteínas que interactúan con un proteína integral de membrana llamada integrina y esta última se une a la fibronectina de la matriz extracelular. ● El epitelio del intestino delgado posee microvellosidades que aumentan la superficie de absorción. Estas tienen microfilamentos de actina muy juntos estabilizados por fimbrinas. 16 ● En el desplazamiento celular los filamentos de actina se ensamblan produciendo filopodios (orden paralelo) y lamelipodios (menos orden)- aquí se polimerizan los filamento de actina en el extremo más y se extiende hacia delante formando un contacto focal con la MEC y la actina dentro de la célula con la ayuda de la miosina II se contrae para desplazarla hacia adelante. ● Proteínas motoras: son esenciales para mover la célula. Hay varias clases, miosina I desplaza un microfilamento o respecto otro o la membrana plasmática y transportan vesículas; la II se asocia con otra II e induce el deslizamiento de filamentos de actina. La miosina II forma dímeros para formar un filamento grueso y estos se intercalan con los finos de actina para formar un sarcómero en las células musculares ● En la citocinesis se forma un anillo de actina que ayuda a estrangular a la célula para dividir el citoplasma en dos partes. 17 ● Filamentos intermedios (en el núcleo y citoplasma, resisten tensión mecánica- las queratinas en el epitelio, la vimentina en tj. conectivo, neurofilamentos en neuronas). Son los más estables de los 3, formados por monómeros que al unirse en espiral forman dímeros y ellos se alinean cabeza-cola formando tetrámeros -> al tener 8 tetrámeros con enlaces no covalentes tenemos un filamento. Poseen plectina, una proteína se estabiliza mediante uniones cruzadas 1. queratinas - tienen los monómeros más diversos, ácidos, básicos. Si hay mutaciones, los pacientes pueden tener epidermolisis ampollar. Poseen uniones epiteliales: desmosoma hemidesmosoma unión entre dos células por sus lados laterales, las queratinas se unen a una placa de proteínas de anclaje que a su vez se une a las cadherinas de la célula que a su vez se une a la cadherina de la célula siguiente. queratinas unidas a placa de anclajes unidas a integrinas que se unen a la laminina que está en la MEC. 2. vimentinas, desminas 3. neurofilamentos - en las neuronas, forman el esqueleto del axón. si la plectina está mutada puede existir degeneración nerviosa 4. lámina nuclear - tapizan y refuerzan la superficie de la membrana nuclear interna. encontramos proteína llamada lámina, esta forma una red que funciona como sitio de unión para la cromatina ● filamentos gruesos (microtúbulos) :tubos proteicos rígidos que se ensamblan rápidamente. Están formados por dímeros de alfa y beta tubulina que se apilan formando protofilamentos. Cuando se apilan 13 de estos últimos, se formará el microtúbulo. Presentan polaridad ya que tiene un extremo + y un extremo - ● La unión de los dímeros entre sí está controlada por el GTP, esto hace que se unan fuertemente entre dímeros. Si están unidos GDP la unión es débil. 18 ● El dímero tubulina unido a GTP tiende a seguir creciendo (tiene un casquete de GTP). Si el crecimiento es lento el GTP unido al dímero se hidroliza en GDP y el microtúbulo tiende a desensamblarse. ● MAPS y Tau: se unen al microtúbulo estabilizando para que no se desarme ● Y tubulina: inicia la polimerización formando una estructura de anillo desde donde se nuclean los dímeros de alfa y beta tubulina para formar los microtúbulos. los anillos están en el centrosoma (cerca del núcleo, tiene centriolos y matriz centrosomal) ● Motoras: dineina (transportan vesículas desde la membrana plasmática hacia el centrosoma) y quinesina (vesículas desde el centrosoma a la membrana) Presentan dominios de unión en un extremo y en el otro extremo se unen proteínas que ayudan a transportar las vesículas. así se transportan varias vesículas algunas en sentido de la MP las cuales tienen kinesina y otras en sentido contrario asociadas con dineinas. (DIME MENOS, QUIEREME MÁS) 19 ● Asociaciones de microtúbulos: en dobletes ( dos microtúbulos, siendo el 2do incompleto ya que comparen protofilamentos) o tripletes (lo mismo que el anterior pero son 3) ● COMTs: los centros organizadores tiene 9 tripletes cada uno, los centriolos son centros organizadores de microtúbulos que se encuentran de a pares y en forma perpendicular uno del otro en el centrosoma. Otro tipo de centro organizador es el cuerpo basal, que posee 9 tripletes. están en la base de cilios y flagelos (tienen 9 dobletes + un par de microtúbulos entero que se llaman par central) , además presenta nexina y dineína ciliar es la que da el movimiento a las estructuras. En la base de todos los flagelos y cilias existe el suero basal. 20 ● Huso mitótico: son microtúbulos que se forman en división celular para repartir el material genético entre células hijas. Hay 3 tipos, los astrales en el plano de la célula, los cinetocóricos que enganchan a los cromosomas y los polares que se solapan para separar cromátidas hermanas). Sistema de endomembranas y peroxisomas Este sistema se distribuye por todo el citoplasma y está formado por varios subcompartimientos como cisternas y túbulos conectados por vesículas. Tienen interconexión funcional, de hecho las vesículas brotan desde un compartimiento donante hasta un compartimiento receptor fusionándose con la membrana. como consecuencia una parte de la membrana y una parte del compartimiento donde se transfieren a la membrana y al compartimiento receptor respectivamente dando 2 compartimientos: ● Intramembranoso ● Citosólico Componentes: Carioteca Formada por 2 membranas, una interna y otra externa dando un espacio perinuclear que continúa con la luz del retículo. Las membranas continúan con el espacio del retículo endoplasmático. Está interrumpida por poros nucleares, por acá las moléculas entran o 21 abandonan el núcleo. Cada complejo del poro está formado por 8 columnas proteicas y fibrillas que protruyen por ambos lados del complejo, del lado nuclear forman como una jaula/canasta. El complejo el poro está anclado al espacio perinuclear mediante proteínas, también tienen proteínas radiales que permiten el transporte selectivo. Las moléculas hidrosolubles pequeñas pasan libremente y las grandes como proteínas y ARN tienen que presentar una señal para pasar por transporte activo. Cuando la ran GDP reingresa al núcleo, la GDP es intercambiada por un GTP por la Ran GEF -> ran GTP -> se hidroliza por Ran GAP cuando sale al citosol -> da una ran GDP otra vez 22 REG Forma una red que se extiende por el citoplasma. Realizan la síntesis de proteínas para secreción al espacio extracelular o para incorporarlas al sistema de endomembranas (proteínas luminales, integradas a membrana, para formar parte de lisosomas). También se realiza la glicosilación proteica en asparagina y la formación de puentes disulfuro. ● Para sintetizar proteínas comienza en el citosol,según la señal de distribución específica dentro de la secuencia primaria vana culminar la síntesis en ribosomas libres en citosol para quedarse allí (para ir a citosol, mitocondrias, cloroplastos, peroxisomas) o si cuenta con secuencia señal el re van a continuar su síntesis mediante ribosomas unidos al mismo (Golgi, MP, Vesículas, lisosomas) Golgi Está cerca del núcleo formado por sacos aplanados limitados por membranas llamadas cisternas. Cada pila del aparto tien dos caras, una cis de entrada (apunta al RE) y una trans de salida (apunta a la MP) La cisterna más externa de cada cara se conecta con una red de túbulos y vesículas membranosas interconectados. Las proteinas solubles y de membrana ingresan en la red cis por medio e las vesiulas de transporte. La proteínas sufren modificaciones químicas en el Golgi: O-glicosilación proteica en serina o treonina, remoción y transferencia de monosacáridos, fosforilación de glúcidos, agregado de sulfatos, síntesis de glucolípidos. 23 REL Encargado de la biosíntesis de membranas celulares, síntesis de lípidos, almacenamiento y liberación de Ca2+ (ingresa desde el citosol a través de bombas, si la célula lo requiere se libera al citosol), detoxificación, movilización de glucosa (almacenada como glucógeno pasa a glucosa-6 fosfato la cual mediante la glucosa-6-fosfatasa se transforma en glucosa) 24 Lisosom as completan la digestión de material incorporado por endocitosis. Tiene composición hidrolítica. A éste llegan hidrolasa ácidas por la señal manosa 6 fosfato (es incorporado a la futura enzima lisosomal en el RE, es la señal que hace que las enzimas vayan a su destino en los endosomas. se une al receptor, formando una vesícula cubierta por clatrina para ir al endosoma). La cara luminal está protegida por glicoproteínas. Cuando llega el endosoma se activa una bomba protónica que baja el ph a 6 y luego a 5 haciendo que se transforme en lisosoma. Peroxiso mas no forman parte del sistema de endomembranas. tienen una sola membrana en todas las células. Se divide por fisión binaria, tiene vida corta, tiene oxidasas y catalasas. oxidan ácidos grasos, AA y purinas. Detoxifica y hacen la beta oxidación de los AG ● La síntesis empieza en ribosomas libres del citosol. Para las que tengan secuencia señal en el retículo, estas tienen secuencia señal sobre la cadena polipeptídica en crecimiento en el extremo amino terminal el cual es reconocido por una partícula PRS. Esta se une a la canal y detiene la síntesis proteica traslocando el complejo ribosoma-proteína en crecimiento hacia la membrana del RE y se une a un receptor de PRS. Así el translocon se abre y la proteína continúa la síntesis en luz del RE. 25 ● La PRS es un complejo ribonucleoproteico formado por 6 proteínas diferentes + molécula de ARNsc. Presenta un dominio de pausa transduccional, un sitio de unión para el receptor de PRS y uno para la secuencia señal en la cadena en crecimiento. ● En una proteína soluble, la secuencia señal se une al canal proteico ->transfiere la proteína en crecimiento a través de la membrana del RE cómo un bucle -> peptidasa señal escinde el péptido señal de la proteína-> canal se abre y eyecta la secuencia sela donde se degrada -> se libere el péptido soluble como una proteína soluble dentro de la luz del RE ->se cierra el poro del canal ● En las proteínas transmembrana monopaso -> secuencia señal N terminal inicia la transferencia ->la proteína tiene un secuencia de detención de transferencia y al ingresar en el canal este descarga la proteína por los laterales de la bicapa lipídica -> la secuencia N terminal se escinde y deja a la proteína anclada en membrana 26 ● En las proteínas membrana multipaso una secuencia señal interna del RE actúa como señal de comienzo de transferencia -> el canal descarga ambas secuencias en la bicapa -> la cadena polipeptídica entera está anclada a la membrana como una proteína transmembrana de paso doble (las proteínas que atraviesan muchas veces la membrana tienen mayor número de pares de secuencia de detención y comienzo) ● N glicosilación en asparagina: cuando la cadena ingresa a la luz del RE se glucosila por el agregado de cadenas laterales de oligosacáridos a las asparaginas mediante el dolicol fosfato. Esta reacción es catalizada por una enzima llamada oligosacárido protein transferasa. Luego estas proteínas glicosiladas serán parte de la MP siendo transportadas por una vesícula para fusionarse con ella. La porción glucídica quedará del lado extracelular de la membrana, ● El RE envía sus proteínas al Golgi para ser distribuidas a los compartimientos celulares. Transporte vesicular: organizado, cada vesícula debe tomar solo las proteínas apropiadas para su destino y fusionarse solo con la membrana adecuada. para que esto ocurra son necesarias proteínas específicas que se asocian a las membranas de las vesículas formando una cubierta (da forma y captura moléculas) 1. CLATRINA : de Golgi al exterior, a partir de la MP en su camino endocítico hacia el interior. La cubierta está compuesta por unidades llamadas trisqueliones las cuales están integradas por tres cadenas pesadas y tres livianas. Estos se colocan sobre un área de la cara citosólica de la membrana y se ensamblan hasta formar una canasta. En la MP se unen a los dominios receptores de las sustancias que deben transportarse a 27 través de una proteína llamada ADAPTINA. La unión de los trisqueliones a la membrana le confiere la fuerza mecánica y provoca su curvatura. Forman una fosita que al desprenderse de la membrana con la ayuda de la proteína DINAMINA, se convierte en una vesícula que se libera en el citosol. 2. COP I : del Golgi al RE 3. COP II : vesículas que van del RER al Golgi. La cubierta se forma por la posición ordenada de múltiples unidades proteicas la COPI y las COP II. Después de brotar del compartimiento de origen la vesícula se saca la cubierta y permite que su membrana interactúe con la del destino para fusionarse. ● Las proteínas residentes del RE poseen una secuencia señal llamada KDEL. En la membrana del RE existe receptores para esta secuencia los cuales formarán parte de vesículas de transporte que se fusionan con el Golgi ● Las proteínas residentes del RE que alcancen al golgi a través de vesículas serán captadas por los receptores de KDEL los cuales se asocian a COPII que serán transportadas RE para su recuperación. ● cuando las vesículas se desprenden de su cubiertas, deben viajar por el citosol para fusionarse con la membrana adecuada. Esto depende de 2 tipos de proteínas: una del compartimiento donante V-SNARE y una del compartimiento receptor la T-SNARE. Este mecanismo requiere especificidad entonces por cada pareja de compartimientos existe una pareja de V-SNARE Y T-SNARE complementarias, ello hace que durante el traslado de una vesícula la V debe tantear muchas T hasta encontrar su complementaria. 28 ● Caveolas: en las membranas de células endoteliales, musculares lisas y adipocitos. Se forman a partir de las balsas lipídicas que son ricas en colesterol y esfingolípidos. La fuerza mecánica que invagina estas áreas es generada por proteínas llamadas caveolas produciendo la invaginación. ● Endocitosis: ingreso de macromoléculas y partículas al interior celular. De acuerdo con el tamaño y las propiedades de lo que será endocitado, este mecanismo se llama pinocitosis (inespecífica o regulada-interactúan con receptores) o fagocitosis (se forma una vesícula grande llamada fagosoma) La endocitosis mediada por receptor como la del COLESTEROL. 29 ● Transcitosis: en algunos epitelios, lo endocitado atraviesa el citoplasma y sale por exocitosis por la cara opuesta. El cruce lo realizan por una vesícula. ● Exocitosis: las vesículas salen al exterior de la célula. existe la constitutiva y una regulada. La célula secreta muchas proteínas solubles por medio de la vía constitutiva, esta aporta lípidos y proteínas a la MP.Por otro lado las células secretoras especializadas tienen una vía de exocitosis regulada por la cual se derivan proteínas de la red trans hacia la vesícula secretora donde se concentran, y se almacenan hasta que una señal extracelular estimule su secrecion. 30 Transducción de energía y mitocondrias Las mitocondrias son organelas presentes en todas las células eucariontes. Según la teoría endosimbiótica se cree que provienen de bacterias aeróbicas que fueron fagocitadas por una célula eucariota ancestral anaeróbica, creando una relación simbiótica en la cual ambas células se ayudaron para sobrevivir y reproducirse. ● desde un punto de vista estructural está formada por 2 membranas, una externa permeable al agua por la cantidad de porinas y una interna plegada en crestas impermeables a iones y moléculas pequeñas. En la última encontramos los complejos proteicos de la cadena de transporte de e- y la ATP sintasa. ● Entre ambas membranas está el espacio intermembrana con enzimas que usan el ATP para fosforilar otro nucleótidos y su ph es 7 ● Dentro de la MMI encontramos la matriz que tiene enzimas de oxidación y AG, adn mitocondrial y la maquinaria de síntesis de proteínas mitocondriales, su ph es 7,5 ● Poseen gran movilidad cambiando de forma y posición dentro de la célula. Sin embargo, en algunas células permanecen en lugares fijos impulsando el ATP directamente hacia un sitio de alto consumo. Por ejemplo en los miocardiocitos se encuentran cerca del sarcómero que es el aparato contráctil y en los los espermas están enrollados alrededor del flagelo. ● ADN mitocondrial: es circular con varias copias del mismo, no está asociado a histonas por lo cual está denudo, tiene un solo origen de replicación y los codones son diferentes del ADN nuclear. Tiene poco ADN no codificante, se transcriben ambas cadenas y codifica 13 proteínas, 22 ARNt y dos ARNr 16s y 12s. ● Si se requiere las mitocondrias pueden sufrir los procesos de fisión (genera 2) o fusion (2 se unen y forman 1) ● Las proteínas mitocondriales tienen 2 orígenes. Al tener su propio ADN puede ser transcrito y traducido dentro de la misma mitocondria para sintetizar proteínas. Sin embargo la mayor parte está codificada por el núcleo (adn genómico) el cual puede ser transcripto y traducido en el citosol para generar proteínas precursoras que ingresaran al mitocondria mediante el siguiente proceso: 1. Proteínas mitocondriales sintetizadas en citosol tienen secuencia señal en extremo N terminal y es reconocido por receptor del complejo TOM en la MME de la organela. 2. El complejo unido a la proteína difunde lateralmente hacia un sitio de contacto entre la MME y MMI y la proteína es translocada a través del complejo TOM y TIM 3. En el interior una peptizada señal cliva la secuencia generando una proteína mitocondrial madura 31 ● Remoción del Ca2+ citosólico: las células tienen una concentración en el citosol muy baja dado que tiene la capacidad de unirse a moléculas y alterar los niveles de actividad. El Calcio bajo se logra por parte del REL y por las moléculas de unión del calcio en citoplasma como la proteína calmodulina. Sin embargo cuando el calcio aumenta de forma peligrosa se pone en acción una calcio ATPasa en la MMI de la mitocondria que bombea el ion hacia la matriz. ● Síntesis de hormonas esteroideas: en células de la corteza suprarrenal, ovarios o testículos, las mitocondrias tienen función esteroidogénica. 32 ● Vía intrínseca apoptosis: ante un estímulo apoptótico como la falta nutrientes daño en el adn se libera citocromo c hacia el citosol y este a su vez junto con proteínas + procaspasa 9 forman un complejo proteico llamado APOPTOSOMA. Este activa caspasas efectoras y lleva a la muerte. ● Producción de energía en forma de ATP: las mitocondrias toma la energía depositada en las uniones covalentes de las moléculas de alimento y junto con el O2 la transfiere al ADP para formar ATP, el cual es utilizado en diversos procesos celulares. La energía del ATP es liberada en los procesos celulares por hidrólisis de esta molécula generando a su vez el ADP el cual volverá a ser transformada en ATP en la mitocondria. ● Las células necesitan una provisión continua de energía para mantenerse vivas. La cual proviene de enlaces químicos de las moléculas de alimento. Cuando una molécula de glúcidos se degrada (se oxida a CO2 y H2O) se libera gran cantidad de energía. ● La oxidación gradual controlada de los glúcidos conserva la energía útil. Al distribuir la energía pueden ser enviadas por moléculas transportadoras para realizar trabajo útil. El NADH y FADH2 son moléculas transportadoras activadas que participan en reacciones de oxido reducción. Cuando una molécula de alimento se oxida transfiere electrones y protones de alta energía al NAD o FAD, los cuales a su vez se reducen a NADH o FADH2. Estos electrones y protones serna a su vez cedidos con facilidad a otra molécula en una relación posterior de óxido reducción (por eso transportan energía) ● Las proteínas, polisacáridos y grasas de los alimentos deben degradarse en moléculas más chicas para poder utilizarlos. este proceso que utiliza enzimas para degradar, se denomina catabolismo celular (desdoblamiento de macromoléculas, glucólisis convierte cada glucosa en 2 moléculas de piruvato y se transporta desde el citosol a la matriz mitocondrial y se oxida a actilcoa produciendos ATP Y NADH, por último dentro de la mitocondria se oxida el acetil coa y produce mucho atp y nadh) ● Glucólisis: proceso de 10 pasos en el citosol Del 1 al 3: a partir de una molécula de glucosa y con gasto de energía en forma de 2 moléculas de atp se genera una molécula de fructosa-1-6-bifosfato 33 4 y 5: desdoblamiento de 6 carbonos en 2 moléculas de 3 carbono cada una, el gliceraldehído-3-fosfato 6 a 10: estas moléculas se transforman en 2 moléculas de piruvato y se genera energía en forma de 2 moléculas de ATP y 2 de NADH A PARTIR DE 1 GLUCOSA -> 2 NADH 2 ATP 2 PIRUVATO ● Descarboxilación oxidativa: en matriz mitocondrial El piruvato ingresa a organela y se oxida a acetil coA generando una molécula de NADH. TENEMOS 2 MOLÉCULAS DE NADH Y 2 ACETIL COA ● El acetil coa ingresa a un ciclo de 8 pasos enigmático dentro de la matriz mitocondrial llamado ciclo de krebs en el cual por cada molécula de acetil coa vamos a obtener 3 moléculas de NADH, 1 FADH2, 1 ATP y 2 CO2 Entonces el resultado final del ciclo será: 6 NADH 2 FADH2 2 ATP 4 CO2 ● Las reacciones catabólicas finales tienen lugar en la MMI y en su continuo se llama fosforilación oxidativa (la energía que s efue acumuando en ls transportadores de energía NADH y FADH2 es transferida a una serie de proteínas en la MMI que en su conjunto conforman la cadena de transporte de electrones. ¿cómo realiza la transformación de energía? 1. El NADH dona sus electrones al complejo 1 (nadh deshidrogenasa) y se oxida a NAD 2. El FADH2 los electrones entran a la cadena a través del complejo 2 (succinato deshidrogenasa) 3. Los electrones pasan de un complejo al siguiente mediante reacciones de oxido reduccion y pierden energía en cada paso. 4. En el complejo 4 (citocromo oxidasa) los electrones combinan una molécula de oxígeno para generar H20. La energía es utilizada por los complejos para bombear protones a la MMI hacia el espacio intermembrana donde se van acumulando. este bombeo activo de protones genera por un lado un gradiente de voltaje en la MMI en el cual la matriz es - y el espacio intermembrana es +- Por otro lado se genera un gradiente de concentración de protones, es decir un gradiente de ph en el que el ph es 0,5 veces más alto en la matriz con respecto al espacio intermembrana. 34 El gradiente electroquímico total consiste en una gran fuerza que responde al potencial de membrana delta V y una fuerza proveniente más pequeña del gradiente de concentración de ph. ambas fuerzas se combinan en la fuerza protón motriz. ● La fuerza protón motrizes la que conduce a los protones devuelta hacia la matriz mitocondrial a favor del gradiente electroquímico. Es la que impulsa la síntesis de ATP. Esto es posible gracias a una enzima la ATP sintasa que está ubicada en la MMI y que acopla el pasaje de protones a favor del gradiente electroquímico con la síntesis de ATP a partir del ADP y el fósforo. ● ATP sintasa es una proteína de gran tamaño formada por varias subunidades. Una porción enzimática grande o F1 se proyecta hacia la matriz mitocondrial y se adhiere a un transportador de protones transmembrana o porción F0 a través de una subunidad delgada con forma de tallo. El pasaje de protones a través del transportador hace que el tallo gire rápidamente por dentro de las porciones F1 induciendo a formar atp. Este mecanismo es capaz de generar más de 100 moléculas de atp. Es un mecanismo con un acoplamiento reversible es decir puede aprovechar el flujo de protones a favor del gradiente electroquímico y generar ATP lo cual es su función en la mitocondrias, como también puede hidrolizar atp para bombear los protones a través de la membrana (la atp sintasa funciona como bomba de protones) 35 ● La síntesis de ATP no es el único proceso dirigido por el gradiente electroquímico de los protones. Los transportadores de moléculas como el piruvato, el ADP y el fosfato inorgánico, pueden acoplar su transporte con el flujo energéticamente favorable de los protones hacia el interior de la matriz mitocondrial. Por ejemplo el piruvato y fósforo inorgánico son transportados hacia el interior de la matriz al mismo tiempo que lo hacen los protones a favor de su gradiente de concentración . Por otro lado, una proteína antiporter aprovecha el gradiente de voltaje para expulsar atp hacia el citosol, e importar adp hacia la matriz mitocondrial. ● Los Ácidos grasos son un combustible alternativo de los azúcares para la generación de energía. Los AG se convierten en acetil coA dentro de la matriz mitocondrial mediante la beta oxidación. Este proceso es catalizado por una serie de 4 enzimas en la matriz mitocondrial. las cuales acortan la cadena del ácido graso en 2 carbonos cada vez generando una molécula de acetil coa, 1 NADH, 1 FADH2 en cada vuelta del ciclo. Dado que los AG tienen cadenas largas estos aportan más energía que los glúcidos. ● Muchos de intermediarios formados en la glucólisis y el ciclo de krebs se desvían hacia vías síntesis o anabólicas dónde series de reacciones enzimáticas los convierten en AA, nucleótidos, lípidos y otras moléculas. 36 ● En ausencia de oxígeno algunos microorganismos anaerobios o el tejido muscular pueden seguir funcionando obteniendo energía a través de la oxidación parcial del alimento. En el caso del músculo estriado esquelético el piruvato se mantiene en el citosol y se transforma en lactato. En el caso de las levaduras el piruvato se convierte a través de acetaldehído en CO2 y etanol. Ambas vías dan menor energía. 37 Núcleo interfásico, cromatina y cromosomas ● El núcleo es una organela que se encuentra por lo general en el centro de las células eucariontes. Tiene la mayor parte del material genético que está organizado en moléculas de ADN muy largas y lineales unido a proteínas, conformando los cromosomas. ● La función del núcleo es mantener la integridad de los genes y controlar las actividades celulares regulando la expresión génica. ● Los cromosomas se vuelven evidentes a medida que las células se parara para la división. En el esquema vemos dos células fotografiadas con el M.O. Los cromosomas están condenados en la célula izquierda porque esta célula está en mitosis, en cambio el núcleo de la célula derecha contiene los mismos cromonas pero tienen una forma mucho más extendida porque está en interfase (acá podemos encontrar la envoltura nuclear que lo rodea y por dentro la cromatina que es el adn unido a proteínas y el núcleo que se observa denso). Envoltura nuclear Son 2 membranas concéntricas (MNI y MNE, entre ambas el espacio perinuclear). Lámina nuclear Por dentro de la MNI y es una red fibrosa que otorga soporte estructural. Está formada por proteínas llamadas láminas de la familia de los filamentos intermedios. Existen 3 genes que codifican para las láminas, A,B y C, por lo cual las proteínas reciben los mismos nombres. Las láminas interactúan con receptores de la MNI y así interaccionan con la cromatina mediante unión a las histonas y también pueden unirse directamente al ADN. Poros nucleares Perforan la membrana nuclear. son compuertas para las moléculas. Cada 38 poro está formado por 100 proteínas diferentes y tienen un canal lleno de agua a través del cual pasan de manera libre las sustancias hidrosolubles. Las moléculas más grandes presentan una señal de distribución. Nucleolo Es la estructura más prominente. se sintetiza el ARN ribosomal y se ensamblan las unidades ribosomales. Posee una zona fibrilar donde contiene las copias del gen del ARN 45S, moléculas de ARN 45S, los factores de transcripción, la ARN polimerasa I; y una zona granular que contiene subunidades ribosomales en diferentes estadios. ● De los 4 ARN presentes en las subunidades ribosomales, 3 se sintetizan en el núcleo y surgen por el corte de un ARN transcripto común que es el pre ARNr (ARN 45S). Este contiene los ARN de 18, 5,8 y 28 S, además de regiones espaciadoras transcriptas que están representadas en color gris en el esquema. Las regiones espaciadoras son eliminadas por ribonucleoproteínas pequeñas nucleares, las cuales se unen al pre ARNr para formar un complejo de procesamiento. 39 Cromatina: ● Es una sustancia que forma los cromosomas, se asocian al ADN con proteínas histónicas y no histónicas. ● Las histonas más abundantes son las llamadas “clásicas”: H1, H2A H2B, H3, H4 ● Las proteínas no histónicas comprenden rutinas que forman parte de la matriz nuclear o citoesqueleto. También existen las que se relacionan con la transcripción, replicación, etc. ● Cada molécula del adn consiste en dos cadenas de nucleótidos complementarias que están unidas por enlaces de hidrógeno entre las bases de los nucleótidos. ● Los nucleótidos están formados por una pentosa (desoxirribosa) la cual se une un grupo fosfato y una base nitrogenada (adenina, citosina, timina o guanina) ● Los núcleos se unen entre sí de manera covalente formando una cadena con polaridad química (indica el extremo 3’ a 5’) ● Los nucleótidos están unidos por enclaves hidrógenos. ● GUANINA + CITOSINA, ADENINA + TIMINA ● Las 2 cadenas del ADN se enrollan una alrededor de la otra formando una hélice dextrógira con 10 bases por vuelta. Este enrolamiento crea al surco mayor y al surco menor. 40 ● Cada célula humana tiene 2 metros de ADN pero este está compactado. Las proteínas se encargan de plegar. Las proteínas que se unen al ADN formando los cromosomas se dividen en 2 clases generales: las histonas (responsables del primer nivel de compactación, el NUCLEOSOMA) y las no histonas. ● La estructura de la partícula central del nucleosoma se determinó mediante la digestión de la cromatina. Al final se observó que solo se degrada el ADN que está entre las partículas centrales de los nucleosomas, este ADN se denomina espaciador/ligador. ● Cada partícula central está formada por un complejo de 8 histonas con 2 moléculas de las histonas H2A H2B H3 Y H4 + ADN bicatenario que se enrolla alrededor del octámero de histonas. ● El término nucleosoma significa una partícula central más uno de sus ADN espaciadores contiguos. ● La formación de los nucleosomas convierte una cadena de ADN en una hebra de cromatina que tiene alrededor de de su longitud inicial dando el primer nivel de ⅓ condensación del ADN ● A las particulares centrales del nucleosoma se una la 5ta histona: H1 formando una unidad de cromatina llamada CROMATOSOMA (la sucesión de estos da la imagen de collar de perlas que se ve en el M.E) ● La cromatina se condensa aún más, haciendoque los cromatosomas se enrollen dando los SOLENOIDES. ● El grado de condensación de la cromatina varía durante el ciclo celular. Cuando hay mitosis los cromosomas se 41 condensan para distribuirse en las células hijas. Los lazos de cromatina se pliegan dando los cromosomas compactos que se observan en la metafase (con proteínas no histónicas). ● En la interfase la cromatina está en estado laxo (eucromatina). Los genes se transcriben activamente. ● Las células disponen de diferentes mecanismos para ajustar la estructura de la cromatina a nivel local para hacerla más o menos laxa. Uno de esos mecanismos es el uso de complejos de remoción de la cromatina que utilizan la energía de hidrólisis del ATP para cambiar la posición del ADN enrollado a los cromosomas. Estos complejos producen ciclos repetitivos de hidrólisis del ATP y permiten que se afloje el adn nucleosomico al empujarlo a lo largo del centro de histonas. Esto provoca un desplazamiento del nucleosoma y expone el ADN a otras proteínas. ● Otro mecanismo es la modificación química reversible de las histonas. Los extremos amino y carboxilo de las 4 Histonas centrales que se denominan colas de las histonas, sobresalen de la partícula central y son accesibles para recibir modificaciones covalentes por parte de enzimas. Así aumenta o disminuye el enrollamiento. 42 Ciclo celular : una célula se reproduce a través de una serie ordenada de eventos en los que duplica su contenido y se divide en 2. ● La fase de división se llama fase M y es en este momento cuando se puede observar los cromosomas como entidades ideales. ● Para producir un cromosoma que pueda duplicarse y luego dividirse se necesitan los orígenes de replicación , el centrómero y los toros. ● Cada cromosoma tiene múltiples sitios de replicación del ADN, ● en un ciclo típico el ADN se duplica en interfase comenzando en los orígenes de replicación y avanza bidireccionalmente a lo largo del cromosoma ● En la fase M el centrómero une los cromosomas duplicados al huso mitótico de modo que se distribuye una copia a cada célula hija. además contribuye a mantener juntos los cromosomas duplicados hasta que estén listos para separarse. ● Los telómeros garantizan que los extremos de los cromosomas se dupliquen y que gracias a su estructura especial impiden que estos extremos se confundan con ADN dañado que necesita reparación. ● Como consecuencia de la duplicación cromosómica de la interfase cada cromosoma tiene 2 moléculas de adn hijas idénticas. Cada una de estas moléculas de adn con sus proteínas asociadas se denomina cromatina y ambas están unidas en forma estrecha a todo lo largo del cromosoma. En la zona medial se observa el centrómero y cada porción que esté por arriba o debajo se denomina brazos cromosómicos. ● El centrómero divide al cromosoma en dos brazos que pueden tener longitudes iguales o diferentes: 1. Brazo corto se llama brazo P 2. brazo largo se llama brazo Q ● En la metafase se presentan 3 formas básicas y se clasifican de acuerdo con la longitud de los brazos: 1. metacéntricos: ambos brazos iguales con el centrómero en el medio 2. submetacéntricos: brazos diferentes con el centrómero próximo a uno de los extremos 3. acrocéntrico: el centrómero está cerca de un extremo con un brazo corto muy pequeño. Estos tienen constricción secundarias con los brazos P que ostentan trozos muy pequeños de cada cromátida llamados tallos y satélite con el centrómero. los tallos tiene organizadores nucleolares que contienen a los genes que contienen ARNr 45S 43 44 El SKY identifica cromosomas pintando cada par de un color diferente. Se usan 5 fluorocromos, una mezcla de sondas de ADN complementaria a cada uno de los pares. Cada sonda está marcada con una combinación de fluorocromos diferentes se necesitan un equipo de microscopia diferente. Se usa con otras técnicas. Es caro. 45 Ciclo celular /Replicaci n y reparaci n del ADNó ó ● El tiempo que dura la vida de una célula se denomina ciclo celular. En este tiempo la célula crece, aumenta de tamaño y se divide generando dos células hijas. ● La función básica es duplicar de forma exacta el ADN y distribuir las copias en las células hijas. ● En la replicaron la célula copia su ADN. En este proceso a partir de una copia de ADN se duplica la información intentando otra molécula de ADN idéntica. ● En la interfase en G1 tenemos las 2 cadenas de ADN antiparalelas y complementarias. En S estas cadenas se abren para ser copiadas y las copian quedan unidas. En la fase M estas copias se separan en 2 células hijas, las cuales reciben una molécula cada una. ● Cada cadena de ADN es complementaria a la otra, entonces sirven como molde para sintetizar la complementaria. En la figura tenemos S y S'. ● El ADN actúa como molde para su propia replicación. Esto permite que la información se copie en forma precisa. Lo llamamos replicación semiconservativa. En cada ronda de replicación cada célula hija recibe una cadena molde y una cadena recién sintetizada. ● Para poder copiar el ADN hay que separar las cadenas que están unidas por puentes de hidrógeno. ● La síntesis del ADN comienza cuando una proteína se une al ADN rompiendo estos enlaces puentes de hidrógeno 46 ● El ADN se abre en lugares específicos marcados por una secuencia de nucleótidos llamada origen de replicación. Al tener muchos orígenes, la replicación empieza en muchos lugares y es más rápida. ● Cuando el ADN está abierto se forma la horquilla de replicación y a partir de acá las proteínas que llevan a cabo el proceso de copiado en direcciones opuestas. ● La síntesis del nuevo ADN la realiza la ADN polimerasa, está cataliza la unión de un nucleótidos (extremo 3 OH libre) a la cadena nueva por un enlace fosfodiéster. Lee la cadena molde en sentido 3 > 5 y sintetiza en sentido 5 > 3. Se usa como sustrato de dNTPS y requiere de un primer/cebador de ARN para empezar la replicación. ● La enzima que sintetiza el cebador se llama ARN primasa. ● Cómo la polimerasa sintetiza en sentido 5 > 3 surge un problema en la horquilla. Una cadena se puede leer de 3 > 5 y sintetizar 5 > 3 pero la complementaria hay que sintetizarla 3 > 5 para avanzar en la misma dirección entonces la horquilla es asimétrica. Para que las dos se copien en la misma dirección deben sintetizarse en diferentes sentidos. ● La ADN polimerasa sólo añade al extremo 3 entonces las 2 cadenas deben sintetizarse en sentido 5 > 3 por lo cual una cadena se sintetiza de forma continua y otra de forma discontinua en pequeños fragmentos en dónde la polimerasa se mueve hacia atrás respecto de la dirección de la horquilla. ● Los segmentos de ADN llamados fragmentos de okazaki se unen para formar una cadena. 47 ● La cadena de ADN que se sintetiza con fragmentos, o sea discontinua se denomina retrasada. La cadena que se forma de manera continúa se llama adelantada. ● En la replicación la ADN polimerasa se autocorrige. Chequea que el nucleótidos que agrego sea el correcto. Si es incorrecto la enzima lo corta usando su actividad 3>5 exonucleasa. Luego une otros nucleótidos. Este mecanismo disminuye los errores. ● ADN helicasa: abre la doble hélice con gasto de energía. Mientras avanza por la cadena va rompiendo los puentes de hidrógeno dejando una cadena simple. ● Las proteínas de unión al ADN de cadena simple se une a la cadena simple generada por la helicasa evitando que se vuelva a formar uniones con la otra cadena. Las proteínas se unen de forma cooperativa, manteniendo estirada la cadena. ● La polimerasa se mantiene unida al ADN por medio de una proteína denominada abrazadera deslizante, sino se despegará antes de terminar la síntesis. Es un anillo que se coloca alrededor del ADN y sujeta la polimerasa mientras sintetiza el nuevo ADN. Para ensamblar la abrazadera de requiere el cargador de la abrazadera que usa ATP cada vez que asegura una abrazadera al ADN. Una vez que carga la abrazadera, elcargador es liberado y se une al ADN polimerasa. Está carga se produce una vez por replicación, pero en la cadena retrasada se produce por cada fragmento de okazaki. ● 48 49 ● La topoisomerasa I alivia el supernerorlamiento que ocasiona la helicasa cuando separa las cadenas. Produce un corte en una sola cadena lo que permite que gire libremente. 50 ● La topoisomerasa II forma un enlaces covalente en las dos cadenas provocando una ruptura transitoria en lugares donde las dos se enrollan sobre sí mismas. La ruptura se da por hidrólisis del ATP. ● Los telómeros tienen un problema de replicación en su extremo ya que al final de la cadena retrasada no hay lugar para hacer un cebador para sintetizar el fragmento de okazaki. Hay secuencias especiales de ADN telomérico que atrae una enzima llamada polimerasa (agrega nucleótidos usando un molde interno de ADN en la cadena parental actuando como molde para que la polimeras complete la replicación del ADN) 51 Mutaciones: alteraciones en secuencia de ADN ● Dependiendo de dónde ocurran pueden dar consecuencias nulas, drásticas o beneficiosas. ● La fidelidad en la replicación es muy importante para evitar errores, para ellos existen mecanismos. ● Un error en la replicación deja un nucleótido mal apareado pero pueden ser arreglados en la cadena recién sintetizada. ● El ADN puede sufrir daño espontáneo cómo la despurinización ( se pierden purinas A y G), la desaminación (de pierden grupos aminos), los dímeros de pirimidina (se unen en forma covalente dos bases pirimidinas entre sí por rayos UV). ● En la despurinización se hidroliza o se rompe la unión glicosídica que une al azúcar a la base. Esto produce la pérdida de la base en este nucleótido, se llama sitio apurínico. Es espontáneo ● En la desaminación la base nitrogenada pierde un grupo amino y cambia a otra base. Todas las bases menos las timinas son promesas a desaminarse. ● Los dímeros de timina se forman cuando dos de ellas se unen por enlaces covalentes carbono-carbono distorsionando la cadena. ● El BER: una base desaminada cómo el uracilo es reconocida por la uracil ADN glicosilasa que corta la base nitrogenada generando un sitio apurínico. Luego la nucleasa AP remueve el nucleótido sin base y la polimerasa une el nucleótido correcto y la ligasa une el Nick. 52 ● NER: repara dímeros de oirimidida. Una endonucleasa detecta el dimero y corta un segmento en la cadena de ADN a los lados del dimero. La polimerasa copia los nucleótidos faltantes, la ligasa sella el Nick y el dinero queda reparado. ● Ruptura en las dos cadenas: daño grave, causado por radiación, problemas en la horquilla, agentes oxidantes y metabolitos. Si está lesión no se repara se fragmentan los cromosomas. Pero si se repara lo hace por la unión de extremos no homólogos. Se pierden algunos nucleótidos. También existe la recombinación homóloga dónde hay intercambio entre las cadenas de ADN homólogas. 53 Transcripción del ADN y estructura de los genes ● La información genética está guardada en el ADN, se duplica en la replicación y se copia al ARN por el proceso de transcripción. La información que está en el ARN pasa a proteínas por el proceso de traducción o síntesis proteicas. Entonces la información genética fluye desde el ADN a las proteínas. También existen organismos que pueden sintetizar ADN a partir de ARN, está transcripción inversa se da en algunos tipos de de virus. ● La tasa de expresión de un gen es la velocidad con la que se transcribe un gen. El gen A tiene una alta tasa de transcripción lo que lleva a más cantidad de proteínas. En cambio el gen B tiene una tasa de transcripción menor y por lo tanto sintetiza menos cantidad de proteínas. Entonces la célula puede producir mucho o poco. ● 54 ● El primer paso a la expresión génica es la transcripción, proceso en el cual se copia la info. del ADN al ARN, sintetizando una nueva molécula de ARN. Primero se abre la doble cadena de ADN y una de las cadenas actúa cómo molde para copiar la complementariedad de bases. La transcripción difiere de la replicación del ADN ya que el ARN no se unen por uniones puente de hidrógeno a la cadena molde. ● Las enzimas que realizan este proceso son las ARN polimerasas. Están catalizan la unión fosfodiéster entre dos ribonucleótidos. No se necesitan cebadores por lo tanto tampoco corrigen. Está enzima lee la cadena molde en sentido 3 > 5 para sintetizar 5 > 3. Los ribonucleótidos trifosfatados entran por un canal y cuyos enlaces de alta energía aportan la energía necesaria para realizar el enlace. El ARN ya sintetizado sale por un canal. 55 Estructura de los genes 1. Un promotor que es una secuencia de nucleótidos de ADN que regula el inicio de la transcripción y a este promotor se unen los factores basales de la transcripción 2. El gen X compuesto de intrones (secuencias de ADN que no forman parte de la proteína) y exones (codifican para la proteína) 3. Secuencias regulatorias que pueden aumentar la transcripción o inhibirla. ● Entonces el primer paso el posicionamiento del ARN polimerasa 2 en la secuencia promotora con la ayuda de los factores basales (también ayudan a separar las cadenas de ARN) ● El TF2D se une a la caja TATA (secuencia de ADN en el promotor) y se induce la unión del factor TF2B y está reconoce a otras secuencias ayudando a posicionar el ARN polimerasa. ● El TF2F estabiliza la unión del ARN Polimerasa con los factores basales y atrae al TF2E y TF2H y este abre el ADN en el inicio de la transcripción y fosforila la cola carboxi terminal del ARN Polimerasa. ● Este evento libera a la Polimerasa que empieza a transcribir y libera factores basales que ya no son necesarios. ● La Polimerasa con factores que la ayudan a mantenerse unida al ADN, sintetiza el ARN. ● Además de los factores se necesitan proteínas reguladoras llamadas activadores, factores específicos o reguladores de la transcripción que se unen a regiones regulatorias que pueden ser intensificadoras o inhibitorias. ● Los activadores necesitan la precisan de un complejo llamado mediador que permite que el activador se comunique con el ARN Polimerasa y los factores de inicio de la transcripción. Cuando esté complejo está listo, recién empieza la transcripción. ● Para empezar a transcribir la cromatina debe estar laxa y para esto se reclutan complejos enzimáticos cómo el complejo moderador de la cromatina o histonas acetiladas. Entonces en los lugares donde los genes se expresan mucho la cromatina está más laxa. 56 1. El gen X va a ser transcripto ya que un activador y otros factores activan al ARN Polimerasa que está junto con los factores basales en el promotor. Está activación se da a través de un mediador y el resultado es el transcripto de ARN. 57 ● Los arn mensajeros son procesados antes de salir del núcleo para ser traducidos en el citosol. El ARN mensajero transcripto primario sufre una maduración que consiste en 3 procesos: encapuchamiento, corte y empalme y poliadenilación. Estos procesos son exclusivos del ARN mensajero. ● Las enzimas que realizan el proceso de ARN están en la cola carboxi terminal de la polimerasa y a media que sale el arn transcripto primaria van actuando sobre esta. Primero se encapucha, después corta y empalma y al final se hace la poliadenilación. ● El encapuchamiento consiste en agregar al extremo 5' un nucleótido modificado, la 7 metil guanosina. Está modificación da estabilidad al ARN mensajero. ● El corte y empalme (splicing) es un proceso en el cual se remueven los intrones (la secuencias no codificantes, las que no me sirven) y se empalman los exones (secuencias codificadas). Esto ocurre cuando el arn pequeño nuclear unidos a proteínas forman ribonucleoproteínas y todas juntas forman el splicesoma. Este remueve los intrones y empalma exones. El U1 reconoce el comienzo del intrón y el U2 reconoce el final para cortarlo. También existe un corte y empalme alternativoque ayuda a producir proteínas distintas a partir de un mismo gen. ● La poliadenilación consiste en el agregado al final del ARN transcripto primario de una cola de poli A (tiene adenina). Primero la ARN polimerasa pasa por la señal de corte y poliadenilación y al terminar de sintetizas el mensajero el ARN es clivado por proteínas, la poli a Polimerasa agrega nucleótidos de adenina y también hay proteínas que estabilizan la cola en el extremo 3'. 58 ¿Cómo sale el arn maduro del núcleo? 59 ● En el núcleo se degrada a arn que corresponde a intrones y los que tienen errores. El ARN maduro no debe tener proteínas que reconozcan intrones y si debe tener proteínas que ayudan a distinguirlas ● El ARN mensajero tiene una proteína unida al capuchón, las proteínas que se unen a la cola poli A y también tiene ribonucleoproteínas. ● Para salir al núcleo tiene una exportina que lo ayuda a pasar por el complejo del poro nuclear y cuando pasa se recicla. ● En el citosol el capuchón puede su proteína que se reemplaza por factores del inicio de la traducción, dejando el arn mensajero listo para ser traducido. ● Además del ARN mensajero sintetiza otro ARN. El ARN ribosomal consigue el 80% del total. Este es sintetizado por la polimerasa 1 y al no tener la cola carboxi terminal los arn no tendrán capuchón ni cola poli A. ● La ARN polimerasa 1 sintetiza a partir de la copias del gen arn 45S en el núcleo. Es un precursor que luego de modificaciones químicas y del cliente genera los arn 18, 5,8 y 20 S. ● La ARN Polimerasa 3 sintetiza el arn 5S fuera del núcleolo y no requiere modificaciones químicas. ● En el núcleolo se reúne los genes que sintetizan el arn 45 S. La ARN Polimerasa 1 los transcribe en ese lugar. ● Las proteínas ribosomales que fueron sintetizadas en el citosol ingresan por el poro nuclear. El ARN 5S es sintetizado por la Polimerasa 3, entra al núcleolo y los arn pequeños nucleolares empiezan a procesar proteínas y arn para formar las subunidades ribosomales. ● Las subunidades ribosomales sufren una maduración donde se ensamblan para formar la síntesis de proteínas. ● Los arn de transferencia son arn pequeños sintetizados por arn Polimerasa 3. 60 ● Estos forman una estructura terciaria que es estabilizada por puentes de hidrógeno entre sus bases nitrogenadas. Posee una región llamada anticodón que es un triplete de nucleótidos consecutivos que van a aparearse con el codón que está en el arn mensajero. ● A los extremo 3' de los ARNt se les agrega un triplete CCA par todos y a este se le une covalentemente el aminoácido que le corresponde ● El ARNt es un es un traductor del idioma del ARNm al idioma de las proteínas y van cumplir su función en la síntesis proteica. Síntesis, funcionalidad y renovación de proteínas 61 ● Las proteínas están formadas por aminoácidos y estos son un grupo heterogéneo de moléculas con un grupo ácido carboxilo y un grupo amino ambos unidos a un mismo átomo de carbono llamado carbono alfa. Se diferencian entre sí por la cadena lateral que está unida al carbono alfa. ● Las proteínas están formadas por 20 AA diferentes. Existen polares y no polares. Además pueden tener carga negativa, positiva y sin carga. ● 62 ● Los AA se unen entre sí entre enlaces peptídicos covalentes cuando el átomo de carbono del grupo carboxilo ataca químicamente al grupo amino de un segundo AA. En esta reacción de condensación se forma una molécula de H2O y se gasta una molécula de ATP. ● Una proteína está formada por AA unidos entre sí en una cadena polipeptídica. Los AA unidos mediante la unión peptídica forman un esqueleto de estructura repetitiva del que se proyectan las cadenas laterales de los AA. ● Los dos extremos de cada cadena polipeptídica son químicamente diferentes. El extremo que tiene el grupo amino libre se llama grupo amino terminal. El extremo que lleva el grupo carboxilo se llama o-C-terminal. ● Las cadenas polipeptídicas largas son muy flexibles. Muchos de los enlaces covalentes permiten la rotación libre de los átomos que vinculan. Por eso las proteínas pueden plegarse. ● Cada cadena plegada está restringida por numerosos enlaces no covalentes débiles que se forman dentro de las proteínas, como los de hidrógeno, las fuerzas de Van der Wals, etc. Estas están para que la proteína no pierda su forma. ● Existe una cuarta fuerza débil, la interacción hidrófoba, la cual desempeña un papel central en la determinación de la forma proteica. Las cadenas laterales no polares o hidrófobos tienden a agruparse en el interior de una proteína plegada para evitar el contacto con el citosol acuoso. Por el contrario, las cadenas polares están cerca de la parte externa donde pueden formar enlaces de hidrógeno con el agua. 1. Estructura primaria: se da por el orden de los AA de su cadena. 2. Secundaria: las cadenas polipeptídicas a menudo se pliegan en uno o dos patrones de plegamiento regular. Puede ser hélice alfa dónde el hidrógeno del grupo amino está unido mediante enlaces de hidrógeno, al oxígeno del grupo carboxilo vecino. La hoja beta plegada de forman enlaces de hidrógeno entre segmentos adyacentes de la cadena polipeptídica. Cuando una estructura consiste en cadenas polipeptídicas vecinas que corren en la misma orientación, se la considera una hoja beta paralela. 63 Cuando la cadena se pliega una y otra vez sobre sí misma y por lo tanto cada sección de la cadena corre en dirección opuesta a la de sus vecinas inmediatas se llama hoja beta antiparalela. 3. Terciaria: es el plegamiento global de la cadena polipeptídica que da lugar a una estructura tridimensional. 4. Cuaternaria: estructura que adoptan las proteínas que tienen más de una cadena polipeptídica. Síntesis proteica o traducción ● Cómo hay sólo cuatro nucleótidos distintos en el ARN mensajero pero 20 tipos diferentes de AA en una proteína está traducción se da por el código genético. ● La secuencia de nucleótidos del ARN mensajero se lee consecutivamente en grupos de 3. Cada triplete de nucleótido se denomina codón. Cómo el arn es un polímero lineal formado por 4 nucleótidos diferentes, existen 64 combinaciones posibles. ● Es universal, no ambiguo (cada codón codifica para un solo AA), redundante (existe más de 1 codón para cada AA) y degenerado. 64 ● La secuencia de nucleótidos es leída de 5' a 3' por el marco de lectura. ● El marco de lectura se establece con el codón de iniciación siendo este AUG y se requiere un ARNt especial para empezar la traducción ya que siempre transporta el AA metionina. Por eso todas las proteínas recién sintetizadas tienen metionina cómo primer AA en el extremo N terminal. Luego la metionina es eliminada. ● ● El ARNt son moléculas adaptadoras que pueden unirse al codón en el ARN mensajero y por el otro a un AA. ● Los ARNt están plegados en una estructura tridimensional formando pares de bases entre diferentes regiones de la molécula formando una estructura parecida a una hoja de trébol. Esta hoja se pliega aún más formando una L la cual es mantenida por puentes de hidrógeno. ● Dos regiones de nucleótidos no apareados son cruciales para la función del ARNt en la síntesis proteica. Una de estas regiones da el anticodón que por apareamiento de bases se une al codón complementario del ARN mensajero. La otra es una región monocatenaria corta en el extremo 3' de la molécula que es el sitio del AA que se corresponde con el codón se une al ARNt. ● 65 ● El ARNt tiene que unirse a su respectivo AA. Esto se da gracias a enzimas llamadas aminoacil-ARNt-sintetasa, las cuales acoplan covalentemente cada AA con su grupo apropiado de ARNt. Existen 20 tipos fuentes de está enzima, cada una reconoce un AA. ● ● La reacción catalizada por la enzima que une el AA al extremo 3´requiere ATP y produce un enlace de alta energía entre el ARNt y el AA. la energía de este enlace se utiliza en una etapa posterior de la síntesis proteica para unir covalentementeel AA a la cadena polipeptídica en crecimiento. ● La maquinaria para formar proteínas es el ribosoma, es un complejo proteico compuesto por proteínas y ARN ribosomal. Los ribosomas están formados por una subunidad grande y otra pequeña que se encajan y forman un ribosoma completo. ● La subunidad pequeña hace coincidir los ARNt con los codones de ARNm. ● La subunidad grande cataliza la formación de enlaces peptídicos que unen a los AA. ● Cada ribosoma contiene un sitio de unión para las moléculas de ARNm y 3 sitios para los ARNt denominados sitio A, P y E. Para añadir un AA a una cadena polipeptídica en crecimiento en el ARNt cargado ingresa en el sitio A por el apareamiento de bases con el codón complementario en la molécula ARNm y después su AA es unido a la cadena polipeptídica sostenido por el ARNt en el sitio P vecino. 66 ● El ARNt es movido al sitio antes de ser eyectado. Este ciclo se repite cada vez que se carga un aminoácido a la cadena. ● La traducción tiene 3 etapas: 1. Iniciación en la cual el ribosoma se une al ARNm y comienza la traducción de una proteína a partir del codón de iniciación. El ARNt de iniciador acoplado a metionina es cargado en la subunidad ribosomal pequeña junto con el factor de iniciación 2 con gasto de energía en forma de ATP. 2. Elongación etapa en la cual la cadena se elonga por el agregado sucesivo de AA 3. Terminación: luego de encontrar un codón stop el polipéptido se libera y el ribosoma se disocia ● Si el ARNm es traducido de manera eficiente un nuevo ribosoma alcanza el extremo 5’ del ARNm casi tan pronto como el ribosoma anterior ha traducido la secuencia de nucleótidos para apartarse. por lo tanto las moléculas de ARNm que están siendo traducidas suelen hallarse en forma de polirribosomas los cuales son grandes ensamblajes citoplasmáticos formados por varios ribosomas separados por 80 nucleótidos a lo largo de una única molécula de ARNm 67 ● La capacidad de traducir con exactitud el ARNm a proteínas es fundamental para la vida. Muchos de los antibióticos más eficaces actúan mediante la inhibición de síntesis proteica bacteriana. Como los antibióticos se unen a diferentes regiones del ribosoma bacteriano estos fármacos con frecuencia inhiben diferentes pasos de la síntesis. ● La síntesis proteica comienza en los ribosomas libres del citosol. estas proteínas vana contener en la secuencia primaria señales de localización las cuales puede hacer que sean traducidas en los ribosomas libres en el citosol (proteína que quedan en el citosol, núcleo, mitocondria, peroxisomas) o pueden tener señales en el RE y finalizar su traducción en la luz del retículo, estas son las proteínas que termina en el RE o se distribuyen en el sistema de endomembranas. ● Una vez que termina la traducción sufren modificaciones para tener funciones adecuadas. 1. La N glicosilación en el RE - se agregan oligosacáridos a las asparaginas- 2. O glicosilación -agregado de oligosacárido a residuo de serina o treonina- 68 3. Clivaje - es irreversible, un polipéptido grande llamado POMC es clivado en la células de la pituitaria anterior para dar lugar a la beta lipotropina y la pro acth la cal es nuevamente clivada para dar lugar a la hormona adrenocorticotrofina (ACTH). Las caspasas también son un ejemplo. 4. Ejemplo de la insulina. 5. Fosforilación a cargo de una kinasa y desfosforilación a cargo de fosfatasa. son reversibles. Activan o desactivan proteínas. 69 6. El plegamiento se logra por las chaperonas ya que acompañan a los proteínas para prevenir el planeamiento prematuro 70 71 72 ● En el citosol existen estructuras que desempeñan función opuestas a la de los ribosomas, es decir degradan proteínas. así cuando una proteína debe desaparecer porque tiene errores o ya cumplió su función es degradada por un complejo enzimático llamado proteosoma, compuesto por proteasas que tiene una cavidad central. En cada extremo hay un casquete proteico reguladores. 73 ● Cuando la proteína está destinada a degradarse se activa una señal de degradación en la misma. Esta activación puede ocurrir por diferentes procesos, como la fosforilación, desenmascaramiento, creación N terminal desestabilizante. ● Una vez activada la señal de degradación las proteínas deben ser marcadas para la destrucción en este proceso participan las ubiquitinas y 3 enzimas que los activan y transfieren a la proteína va ser etiquetada. ● La primera ubiquitina es activado por E1 que la transfiere a la E2, a continuación con ayuda de la ligasa E3 el complejo se une a la proteína que debe degradarse. Este proceso se repite varias veces y así la proteína queda conectada a una cadena de unibiquinas. De inmediato esta proteína marcada es reconocida por uno de los casquetes del proteosoma los cuales separan a la ubiquitinas, deshacen el plegamiento de la proteína y la mete al proteosoma. Allí es degradada por las proteasas y se originan polipéptidos cortos las cuales salen al citosol. ● todo el proceso consume energía del ATP 74 75 Control de la expresión génica ● En un organismo tenemos diferentes tipos de células, por ejemplo las neuronas es diferente de un linfocito. Aunque todas las células de un organismo contienen el mismo genoma no todas las células son iguales. ● La diferenciación celular se da porque células diferentes expresan diferentes ARN y diferentes proteínas. O sea, hay regulación de la expresión génica. ● En la clonación se toman células epiteliales de un animal y se introducen dentro del óvulo de otro animal de la misma especie. Esto genera un cigoto que es implantado en una madre sustituta y sin embargo el animal que nace es genéticamente igual al animal 1. ● Existen pasos desde el ADN a la proteína para controlar la expresión génica y todos ellos pueden ser regulados. 1. Cuando y con qué frecuencia se transcribe un gen (el más importante) 2. Control de procesamiento de ARNm (en los genes que tienen corte y empalme alternativo, esto genera diferentes isoformas de la proteína) 3. Control sobre que ARN es exportado al citosol/control y transporte (solo uno de cada 20 ARNm salen del núcleo, normalmente se degradan en el núcleo los 76 que tienen error. Los arn tienen diferentes localizaciones codificadas en los extremo 5' y 3' que no se traducen) 4. Selección de ARNm que son traducidos (los extremos 5 y 3 que no se traducen tienen secuencias que pueden unir proteínas que estabilizan al ARN para que no sea degradado o secuencias que unen proteínas que mantienen frenada la traducción del ARN cómo la ferritina - esta une hierro en el citosol-) [cuando no hay hierro en la célula la aconitasa se une al extremo 5 del ARNm de la ferritina y bloquea su traducción. Por otro lado, la aconitasa se une al extremo 3 del receptor de transferrina, una proteína que une hierro y lo mete a la célula. Entonces la aconitasa estabiliza el ARNm ya que tapa un sitio para una endonucleasa y el arn es traducido. Si no hay hierro se produce el receptor para que este ingrese a la célula] 77 5. Degradación de ARNm en el citosol (la zona 3 del mensajero que no se traduce tiene secuencias que controlan la vida media del ARNm. Hay sitios de unión para proteínas que aumenten o disminuyan el acortamiento de la cola poli A, saque el capuchón o degraden el ARNm. También existen mecanismos especializados que degradan los ARNm utilizando ARN de interferencia, estos son arn no codificantes pequeños) Los micro arn controlan la expresión génica de determinados arn mensajeros que reconoce por apareamiento de bases controlando su estabilidad. Estos forman RISC, patrullan el citoplasma buscando ARNm complementario al micro arn que contiene, y cuando lo encuentra una nucleasa lo degrada. Los arn de interferencia actúan como defensa contra arn extraños que son doble cadena (es de virus) 78 6. Control de la actividad de la proteína (se lleva a cabo por el proteosoma, que vimos en el tp anterior).
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