PRÁCTICA6 Araceli Labourdette

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Facultad de Bioanálisis
Región Xalapa
Microbiología General.
Docente: Edith Pozos Mestizo
Practica 6: PRUEBAS BIOQUIMICAS
Araceli Labourdette Calderón
Universidad Veracruzana
PRÁCTICA No. 5
Fundamento
Las pruebas bioquímicas permiten determinar las características metabólicas de las bacterias objeto de identificación. Algunas de estas pruebas son técnicas rápidas, ya que evalúan la presencia de una enzima preformada y su lectura varía entre unos segundos hasta unas pocas horas.
Son empleadas principalmente para la identificación y clasificación de bacterias y hongos. El IMVIC se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato.
Objetivos
· Aprender a diferenciar entre las diferentes pruebas bioquímicas y sus resultados.
Material
· Tubos de ensayo con las diferentes pruebas bioquímicas
· Cultivo puro
· Ajuga de inoculación
· Asa bacteriológica 
· Mechero bunsen
Prueba TSI
Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de los hidratos de carbono glucosa, lactosa y sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico.
Superficie alcalina/profundidad ácida (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa. 
Superficie ácida/Profundidad ácida (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
Superficie alcalina/Profundidad alcalina (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares. 
La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo indican que el microorganismo produce gas.
Prueba del Citrato
Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando una alcalinización del medio.
Las bacterias capaces de usar el citrato provocarán el cambio de color del medio de verde a azul intenso, por viraje del indicador de pH, azul de bromotimol, a la vez que se observa crecimiento en la superficie.
Prueba UREA
En el medio de cultivo y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el rojo de fenol es el indicador de pH. El agar es el agente solidificante. Las bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberan amoníaco y dióxido de carbono. Estos productos alcalinizan el medio de cultivo haciendo virar el indicador rojo de fenol del color amarillo al rojo.
Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad ureásica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp. otras enterobacterias y estafilococos. 
Microorganismos que hidrolizan la urea: el medio de cultivo es de color rosado-rojizo. 
Microorganismos que no hidrolizan la urea: el medio de cultivo permanece de color amarillo.
Prueba LIA
El Medio de Lisina y hierro (L.I.A.) es un medio de cultivo ampliamente utilizado para la diferenciación de bacilos Gram negativos entéricos, especialmente miembros del género Salmonella, sobre la base de la producción de H2S y la actividad de la enzima Lisina decarboxilasa. También es posible observar cambios debidos a la actividad de la enzima lisina deaminasa, característica del género Proteus y Providencia. 
Descarboxilación de la lisina: 
Resultado Positivo: superficie alcalina / profundidad alcalina (pico violeta / fondo violeta). 
Resultado negativo: superficie alcalina /profundidad ácida (pico violeta / fondo amarillo). 
Desaminación de la lisina: 
Resultado positivo: superficie rojiza / profundidad ácida. Esto sucede con cepas del género Proteus, Providencia y algunas de Morganella spp. 
Producción de SH2: 
Resultado positivo: ennegrecimiento del medio de cultivo (especialmente en el límite entre la superficie y profundidad). 
Resultado negativo: el medio de cultivo permanece sin cambio de color.
Prueba medio MIO
Medio utilizado en la identificación de miembros de la familia Enterobacteriaceae en base a la movilidad, producción de indol y actividad enzimática ornitina decarboxilasa.
Los microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el medio de cultivo y producen viraje del color púrpura al amarillo. Las condiciones de acidez son favorables para la actividad enzimática ornitina decarboxilasa, que actua sobre la ornitina generando putrescina, con la consecuente alcalinización del medio de cultivo y viraje al color púrpura
· Movilidad: 
Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de siembra. 
Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra. 
· Ornitina decarboxilasa: 
Resultado positivo: color púrpura. 
Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violáceo en la superficie del medio.
· Prueba del indol: 
Agregar al medio de cultivo 3-5 gotas de Indol
Resultado positivo: color rojo. 
Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento.
Mis medios de cultivo crecieron abundantemente. A través de la lupa observé las características de las colonias formadas de las bacterias cultivadas. 
Conclusiones
Las pruebas bioquímicas son fundamentales para la identificación bacteriana, ya que te orienta hacia dónde y que pruebas a seguir para confirmar la identificación de las bacterias.
Referencias
· Hernandez, A. (s. f.). Reporte de práctica 3. Pruebas bioquímicas. https://es.slideshare.net/alanivanhh/reporte-de-prctica-3-pruebas-bioqumicas
· Métodos de identificación bacteriana. https://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-microbiologia-clinica-28-articulo-metodos-identificacion-bacteriana-el-laboratorio-S0213005X11001571