Tarea 2 Bioquimica Fase III

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Bioquímica Aplicada
Efecto de la vitamina C y E sobre el estrés oxidativo y el sistema antioxidante en
las glándulas salivales de ratas diabéticas inducidas por STZ
Introducción
La hiperglucemia diabética está directamente relacionada con la producción de especies
reactivas de oxígeno (ROS), lo que conduce a la glicación de proteínas y a la formación de
productos finales de glicación avanzada (AGE). La glicación de proteínas puede inactivar las
enzimas involucradas en el sistema antioxidante del cuerpo. Otra consecuencia de la
hiperglucemia es la autooxidación de la glucosa por enolización en la sangre. La
peroxidación lipídica, marcador de daño oxidativo, es una de las consecuencias del aumento
de ROS, que conduce a la unión de ROS a ácidos grasos insaturados y por tanto a una
modificación de su estructura y a la formación de malondialdehído (MDA).
El sistema antioxidante en el cuerpo es aquel que puede prevenir el daño causado por ROS.
Está compuesto por superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y glutatión peroxidasa
(GPx), así como vitamina E y vitamina C no enzimáticas, y carotenoides.
El estrés oxidativo representa un desequilibrio entre prooxidantes y antioxidantes, que
conduce a la formación de ROS (Especies reactivas del oxígeno). Por esta razón los
antioxidantes son sustancias que reducen o previenen significativamente la oxidación a
niveles bajos en comparación con los sustratos oxidables. Se ha estudiado el uso de
antioxidantes para el tratamiento del estrés oxidativo.
Pero algunas vitaminas tienen capacidad antioxidante, por lo que pueden utilizarse como
tratamientos complementarios para pacientes con diversas enfermedades. Por eso en ambas
vitaminas su función importante es:
- La vitamina C (ácido ascórbico) es una vitamina esencial soluble en agua y su ingesta
se correlaciona negativamente con los niveles de glucosa en sangre en ayunas.
- La vitamina E (α-tocoferol) es una vitamina soluble en grasa que se ha demostrado
que previene el desarrollo de diabetes y enfermedades relacionadas. complicación.
Objetivos
● Examinar los efectos de la suplementación con vitamina C y E en la prevención del
estrés oxidativo en las glándulas salivales de ratas diabéticas inducidas por
estreptozotocina (STZ).
● Proporcionar información sobre el potencial de la vitamina C y E como enfoque de
tratamiento para la recuperación funcional de las glándulas salivales en pacientes con
diabetes.
http://www.scielo.sa.cr/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1409-00152019000100091
Técnicas usadas
1. Animales e inducción de la diabetes:
Para esta investigación se utilizaron 48 ratas Wistar macho con un peso inicial de
aproximadamente 200 g. Los animales se dividieron aleatoriamente en seis grupos:
control sin ningún suplemento vitamínico (C), control suplementado con vitamina C
(Cvc), control suplementado con vitamina E (Cve), diabético sin ningún suplemento
vitamínico (D).
Posteriormente, se les inyectó por vía intraperitoneal 60 mg/kg de estreptozotocina
disuelta en citrato de 0,1 M (pH 4,5) para inducir diabetes. Los animales del grupo de
control sólo recibieron el vehículo.
El nivel de glucosa en sangre se determinó mediante un glucómetro 72 h después de
la inducción y el día del sacrificio. Las ratas con niveles de glucosa en sangre
superiores a 300 mg/dl se consideraron diabéticas.
2. Tratamiento con vitamina C y E
- La vitamina C se administró (150 mg/kg/día) a los grupos Cvc y Dvc. Se
disolvió la vitamina C en agua y se administró en lugar de beber agua. La
solución se rellenó diariamente.
- La vitamina E se administró (300 mg/kg/día) por sonda a los grupos Cve y
Dve.
La administración de las vitaminas se inició 1 semana después de la confirmación del
estado diabético y continuó durante 21 días hasta el sacrificio.
3. Recogida de muestras
Veintiocho días después de la inducción, los animales fueron anestesiados con
ketamina y xilazina (60 y 20 mg/kg). Se extirparon las glándulas parótida (PA) y
submandibular (SM), se limpiaron de los tejidos adherentes y se sumergió en
nitrógeno líquido para su congelación inmediata.
Las muestras se almacenaron a -80 °C hasta su uso. Se recogieron muestras de sangre
del corazón en tubos con EDTA (15 %), centrifugados a 1540 × g durante 10 minutos,
y las muestras de suero se utilizaron para los análisis.
4. Análisis de muestras
Los niveles séricos de ácido ascórbico se cuantificaron espectrofotométricamente a
760 nm mediante el método del reactivo Folin-Fenol utilizando ácido ascórbico como
estándar. Los niveles de tocoferol se analizaron basándose en el coeficiente de
absorción molar del complejo de fosfomolibdeno y cantidades conocidas de tocoferol.
Se utilizaron kits comerciales RANSOD, RANSEL, GR y TAS para analizar la
actividad glandular de las enzimas SOD, GPx, glutatión reductasa (GR) y estado
antioxidante total (TAS). La actividad de CAT glandular se determinó mediante la
descomposición de H2O2 a 240 nm.
Las concentraciones de peróxido de hidrógeno se determinaron midiendo la
absorbancia a 465 nm de la reacción del homogeneizado de la glándula con
peroxidasa de rábano picante. Se utilizó una curva estándar de H2O2 para los
cálculos. El anión superóxido se analizó reduciendo el nitroazul de tetrazolio en
formazán, cuya absorbancia se midió a 525 nm.
La cuantificación de MDA se obtuvo mediante HPLC con una columna C18 (15 cm x
4,6 mm x 3 µm) y una precolumna C18. La fase móvil era KH2PO4 0,03 M: metanol
(65:35) y el caudal era 0,6 ml / min. Se creó una curva MDA estándar y se usó para
calcular los resultados. Las concentraciones de proteína total se determinaron en base
a la reacción de Cu + con el reactivo de Folin-Ciocalteu usando albúmina de suero
bovino como estándar. Se utilizó un espectrofotómetro DU 800 para todos los análisis
espectrofotométricos.
Conclusiones
Los niveles de vitamina C y E se redujeron en el grupo D. La vitamina C disminuyó los
niveles de O2− en la glándula salival de las ratas diabéticas. La vitamina E aumentó la
concentración de O2− en la glándula AP de los animales diabéticos. En la glándula SM del
grupo diabético, el MDA, el SOD, el GPx y el TAS aumentaron. Dve presentó una actividad
reducida de SOD y un aumento de GR, GPx y MDA. Dve aumentó los niveles de GPx, Gr y
TAS. En la glándula AP, MDA, SOD, CAT, GPx, GR y TAS fueron similares en C y D. TAS,
SOD, CAT, GPx y GR aumentaron en Dvc. La suplementación con vitamina E resultó en un
aumento de los niveles de MDA y CAT y una reducción de la actividad de SOD.
Por lo que se puede concluir que la suplementación con vitamina C mejoró la actividad
antioxidante y el estrés oxidativo en las glándulas SM de los animales diabéticos. El uso de
esta vitamina puede ser un enfoque importante para restaurar las alteraciones metabólicas en
las glándulas SM en presencia de diabetes. La vitamina E actuó como prooxidante en las
glándulas salivales AP de animales diabéticos.
Referencias Bibliográficas
1. Ibuki FK, Bergamaschi CT, da Silva Pedrosa M, Nogueira FN. Effect of vitamin C
and E on oxidative stress and antioxidant system in the salivary glands of
STZ-induced diabetic rats. Arch Oral Biol. 2020;116(104765):104765.