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Anális is molecular del genoma | 415
• El desarrollo de conceptos y técnicas dentro de la
Ingeniería Genética ha permitido una aproximación
molecular al estudio de muchos procesos biológicos
relacionados con la estructura y función de los genes,
posibilitando su aislamiento, el estudio de sus caracte-
rísticas y el manejo de los mismos.
• Las técnicas de clonación posibilitan la multiplicación
de un gen o secuencia de ADN determinada, obteniendo
cantidades suficientes para su análisis.
• En la constitución de la Ingeniería Genética ha tenido un
papel muy importante el aislamiento y la caracterización
de una serie de enzimas degradativas (endonucleasas de
restricción), biosintéticas (ADN polimerasas, ARN poli-
merasas, ADN ligasas, transcriptasa inversa, etc.) y de
modificación de ácidos nucleicos (fosfatasas, polinucleó-
tido quinasas, etc.), que junto a los métodos químicos de
síntesis de oligonucleótidos ha permitido el desarrollo de
una tecnología muy poderosa para el análisis de los genes.
• La digestión de una muestra de ADN con endonuclea-
sas de restricción seguida de electroforesis en geles de
agarosa permite obtener una colección de fragmentos
de ADN ordenados de acuerdo con su tamaño.
• La técnica de Southern permite transferir e inmovilizar
los fragmentos generados desde el gel a una membrana,
donde se puede determinar la presencia de un determina-
do gen o secuencia mediante hibridación con una molé-
cula de ADN o ARN marcada que se utiliza como sonda.
• La unión de un fragmento determinado de ADN (inser-
to) a otra molécula de ADN con capacidad de autorre-
plicación (vector) permite obtener un ADN recombi-
nante que introducido en células hospedadoras, puede
dar lugar a la amplificación del ADN recombinante.
• El inserto puede proceder de la fragmentación de una
muestra de ADN genómico o ser un ADNc obtenido del
ARNm mediante la transcriptasa inversa.
• Los vectores para clonar ADN pueden ser plásmidos,
virus, o una combinación de ambos (para fragmentos
pequeños), y cromosomas artificiales de bacterias o de
levaduras (para fragmentos mayores).
• La clonación en bacterias de todos los fragmentos deri-
vados de una población de ARNm (ADNc) o de un
ADN genómico da lugar a la formación de una genote-
ca, o colección de bacterias que en su conjunto poseen
los clones de todos los fragmentos.
• El método automatizado de Sanger permite determinar
la secuencia de un ácido nucleico de forma rápida y pre-
cisa.
• La técnica de reacción en cadena de la polimerasa
(PCR) permite la amplificación de un fragmento de
ADN con gran sensibilidad, precisión y sencillez.
• La PCR es de gran utilidad en biomedicina, ya que per-
mite identificar y detectar mutaciones, y en genética
forense ya que sirve para establecer polimorfismos de
ADN.
RESUMEN
23 Capitulo 23 8/4/05 11:43 Página 415
	BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR (...)
	CONTENIDO
	PARTE II: BIOLOGÍA Y PATOLOGÍA MOLECULAR
	SECCIÓN V GENOMA, PATOLOGÍA MOLECULAR Y TERAPIA GÉNICA
	23 ANÁLISIS MOLECULAR DEL GENOMA
	RESUMEN