Tarea3_A

Vista previa del material en texto

DETERMINACIÓN 
DE LA ACTIVIDAD
DE CATALASA
ASIGNATURA
BIOQUIMICA CLINICA 
ENZIMATICA
16 DE FEBRERO, 2023
ARACELI
LABOURDETTE
CALDERÓN
 
 
 
 
 
 
 
 
Principio 
ESTIMACIÓN DE LA 
CATALASA 
(Sinha, 1972) 
La catalasa provoca la rápida descomposición del peróxido de hidrógeno en 
agua. 
 
H2O2CATH2O + O2 
 
El método se basa en el hecho de que el dicromato en ácido acético se 
reduce a acetato crómico cuando se calienta en presencia de H2O2 con la 
formación de ácido perclórico como intermediario inestable. El acetato crómico así 
producido se mide colorimétricamente a 610 nm. Dado que el dicromato no tiene 
absorbencia en esta región, la presencia del compuesto en la mezcla de ensayo 
no interfiere con la determinación colorimétrica del acetato crómico. Se deja que la 
preparación de catalasa desdoble H2O2 durante diferentes períodos de tiempo. 
La reacción se detiene a intervalos de tiempo específicos mediante la adición de 
dicromato / mezcla acética y el H2O2 restante se determina midiendo 
colorimétricamente el acetato crómico después de calentar la reacción. 
 
Reactivos 
 
1. Tampón fosfato 0,01 M, pH 7,0 
2. 0,2 M Peróxido de hidrógeno 
3. Solución madre de dicromato / ácido acético: Mezcla de dicromato potásico al 5% 
con ácido acético glacial (1:3 en volumen). 
4. Solución de trabajo de dicromato / ácido acético: El caldo se diluyó a 1:5 con 
agua para hacer la solución de trabajo de dicromato / ácido acético. 
 
Procedimiento 
 
La mezcla de ensayo contenía 0,5 ml de H2Om. 1,0 ml de tampón y 0,4 ml de 
agua. Se añadieron 0,2 ml de enzima para iniciar la reacción. Se añadieron 2,0 
ml del reactivo dicromato / ácido acético después de 0,30,60,90 segundos de 
incubación. Al tubo de control se le añadió la enzima después de añadir el 
reactivo ácido. A continuación, los tubos se calentaron durante 10 minutos y el 
color desarrollado se leyó a 610 nm. 
La actividad de la catalasa se expresó como ymol de H2o 2 descompuesto 
/ min/mg de proteína. 
 
 
 
 
 
 
 
Material y equipo necesario para poder realizar una curva de calibración 
 
• balanza analítica 
• termómetro 
• picnómetro 
• agua destilada o desionizada 
• Vasos de precipitados 
• Tubos de ensayo 
• Embudos de vidrio 
• Fuente de catalasa 
• Cronómetro 
 
https://net-interlab.es/balanza-analitica/