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FLAVONOIDES Alejandro Martínez M., Químico M. Sc., Doctor en Ciencias, Facultad de Química Farmacéutica, Universidad de Antioquia Medellín, Septiembre 2005 Alejandro Martínez M. 2 Presentación En la larga historia de la ciencia muchas personas, ideas y sueños han ido aportando su grano de arena en la búsqueda de la comprensión de la naturaleza y el mismo misterio enigmático de la vida. Muchos de ellos han pasado de ser despreciados y después alabados y ensalzados. Esto también ha ocurrido con el caso de las sustancias naturales. En la actualidad es bastante publicado en los medios de comunicación, en particular por la prensa y la televisión, el hallazgo de nuevas sustancias naturales, que resaltan como panaceas para la cura de enfermedades como el cáncer, o para el adelgazamiento, etc. Muchas son buenas pero muchas también entran ó ya hacen parte de la lista negra de las indeseables como los alcaloides tóxicos y que generan dependencia (cocaína, heroína, etc.). Casi podría hacerse un escalafón de las sustancias buenas (la clorofila, fundamental para la vida de las plantas e indirectamente para todos los demás seres vivos del planeta; la hemoglobina, una molécula con una bella estructura arquitectónica y que participa en un proceso simple pero fundamental para los mamíferos: la respiración; las penicilinas y su importante acción contra los microenemigos; la artemisinina de los chinos y su utilidad para el tratamiento de la malaria severa; los ácidos nucleicos y su importante aporte para el desarrollo evolutivo de la vida, etc.). En el caso de las sustancias malas1, que son muy pocas, están entre otras: los alcaloides que generan dependencia (cocaína, heroína, etc.), las sustancias que generan cianuro (como son los glicósidos cianogénicos presentes en diferentes plantas). Sin embargo, esta discriminación entre sustancias malas y sustancias buenas, se acaba cuando se considera es su utilidad. De acuerdo con esto, hyy tres clases de sustancias naturales: Unas con una utilidad reconocida y demostrada, otras con una utilidad potencial y otras poco útiles ó inclusive peligrosas. Dentro de estas tres categorías se podrían hacer diferentes listados, dependiendo de la persona que las haga. Por ejemplo, para un botánico resultan más útiles aquellas sustancias que le permiten desarrollar su trabajo de clasificación, mientras para un químico farmacéutico resultan más útiles otras sustancias (poco o nada interesantes 1 Es de anotar que no necesariamente son sustancias malas en el sentido estricto de la palabra, sino que el calificativo de malas se refiere al uso que se les ha dado. Alejandro Martínez M. 3 para el botánico) que le sirven para producir medicamentos, y para un agrónomo pueden ser más interesantes las sustancias que tienen mayor valor nutritivo y agrícola. Con el propósito de convencer a estos y otros profesionales, y a usted amigo lector, a continuación trataré de presentar un grupo de sustancias que a medida que vaya avanzando en la lectura, notará que no son tan desconocidas, sino que tal vez anteriormente no se las habían presentado, y al final espero convencerlo de que resultan no solo unas sustancias buenas, sino útiles, muy bellas y bastante románticas, sino también que resulta saludable en nuestra alimentación consumir más repollo morado que blanco, menos remolacha, más vino rojo, más alimentos derivados de soya, etc. En buena parte de esta obra se utiliza un lenguaje especializado, esto con el fin de que además de divulgar al público en general algunos aspectos de estas sustancias, esta pueda servir de apoyo a profesionales y estudiantes relacionados con el conocimiento y aprovechamiento de los productos naturales, en especial a profesionales químicos, químicos farmacéuticos, biólogos y médicos. Expreso mis agradecimientos a La Universidad de Antioquia donde he aprendido y se me ha apoyado para elaborar este tipo de documentos, a los estudiantes de la asignatura de Farmacognosia y Fitoquímica, que con sus opiniones y valiosos aportes han contribuido para la elaboración de este y otros documentos, Alejandro Martínez M., Medellín, Septiembre de 2005 Alejandro Martínez M. 4 1. Introducción Las plantas mediante el proceso de la fotosíntesis producen las sustancias necesarias para todos los ciclos vitales de la naturaleza. Mediante intrincados y cada vez más conocidos mecanismos bioquímicos se constituyen en verdaderas factorías químicas de carbohidratos, proteínas, grasas, vitaminas y oligoelementos como el hierro y el magnesio; y adicionalmente mantienen la atmósfera rica en oxígeno y deficiente en dióxido de carbono, permitiéndonos respirar. Son la base de la cadena alimenticia que soporta todas las demás formas de vida en nuestro planeta. En la actualidad, gracias a la visión ecologista que se ha dado a las nuevas generaciones de personas, existe una tendencia a mantener y conservar las especies de plantas mediante la conservación de los bosques, las selvas, los parques naturales, los estuarios marinos, los humedales, etc. Para toda persona indistintamente de su profesión u oficio, no hay duda de que las plantas son importantes para la vida. Pero además de producir sustancias como los carbohidratos, las proteínas y las grasas, que los investigadores han denominado METABOLITOS PRIMARIOS, dado que se encuentran en prácticamente todas las formas de vida y cumplen funciones básicas para la misma, existen otras que no se encuentran tan distribuidas y que se hallan restringidas solo a ciertas especies, géneros o familias como son los alcaloides, las saponinas esteroides, los aceites esenciales, los terpenoides, etc., a los cuales se les denomina METABOLITOS SECUNDARIOS. Dentro de este último grupo están los FLAVONOIDES, unas sustancias bautizadas así porque las primeras que se lograron aislar eran de color amarillo, pero que como más adelante veremos las hay incoloras ó con otros colores diferentes del amarillo como son el rojo, el violeta y el azul. A continuación se presentará una breve reseña histórica y una definición química de los flavonoides, luego se hablará de su origen biológico, algunos aspectos sobre su aislamiento y caracterización, y finalmente se destacará su utilidad real y potencial para ayudar a preservar nuestra salud. Alejandro Martínez M. 5 2. A manera de historia Los flavonoides son un gran grupo de sustancias vegetales que fueron descubiertas por el premio Nobel en Bioquímica Dr. Albert Szent-Gyorgi, quien les denominó como "vitamina P". El Dr. Szent-Gyorgi descubrió que los flavonoides favorecen la función de la vitamina C, mejorando su absorción y protegiéndola de la oxidación. Los flavonoides comprenden varias clases de sustancias naturales, entre las cuales están muchas de las que les confieren colores amarillo, naranja, rojo, violeta y azul, a muchas flores, hojas y frutos, especialmente. Cuando usted amigo lector está observando una rosa roja, además de disfrutar la gracia artística de su diseño, está disfrutando de su color, ese color es debido a los flavonoides; cuando observe una fresa jugosa, una uva roja ó morada, una flor amarilla, usted está observando ni más ni menos a sustancias flavonoides. Esos colores que disfruta nuestro cerebro al percibirlos son en su gran mayoría debidos a los flavonoides. Entonces, usted ahora puede comprender que esas aparentemente desconocidas sustancias han estado presentes en buena parte de su vida, y también en buena parte de la historia de la humanidad. Desde el comienzo de la humanidad, en el mismo paraíso terrenal de Adán y Eva, allí ya estaban los flavonoides engalanando con sus colores ese idílico jardín celestial, y hasta en la jugosa manzana de color rojo con la que nuestra madre Eva sedujo a nuestroabuelo Adán, los flavonoides estaban participando de nuestro pecado original. En todas partes de la historia de la humanidad los flavonoides han sido testigos y actores de muchas desgracias, momentos heroicos, alegrías, etc. Al leer a los antiguos filósofos, poetas y escritores, se pone de manifiesto que en el enamoramiento de la mujer siempre han participado las flores de agradable aroma y de hermosos colores, esto quiere decir sin más preámbulos que no ha existido mujer alguna sobre la tierra que no haya sucumbido ante la presencia de los flavonoides de unas bonitas rosas rojas, un ramo de violetas o un pensamiento. No hay nada que más agrade a una mujer que las flores, parece ser que ellas tienen una percepción cerebral más desarrollada que nosotros hacia este tipo de sustancias. Alejandro Martínez M. 6 Las casas y palacios más bellos han sido no los que ostentan grandes desarrollos arquitectónicos, sino los que poseen los más variados, coloridos y exóticos jardines. En este sentido, los flavonoides han sido privilegiados al ocupar los sitios más importantes para un rey, un noble ó un plebeyo. Si se mira bien una flor es tan bella en un palacio como en un comedor humilde. Los flavonoides han sido testigos indirectos de momentos como el 20 de Julio de 1810, cuando en la entonces ciudad de Santafé de Bogotá (Colombia), una riña entre un español y un criollo por un florero, sirvió de punto de partida para que se diese el grito de independencia. Aunque los flavonoides de las flores que iban a adornar este florero nunca lo llegaron a tocar, allí estaban listos para cambiar la historia de un país. Los flavonoides siempre han estado de alguna manera en sitios privilegiados, y bien podrían ufanarse de ello. Para las plantas además del encantador adorno que dan a su ropaje, les sirven de cosmético. Las plantas como todo lo bello son vanidosas. Estas sustancias además de cambiar de colores y adornar las plantas durante toda su vida, son un maquillaje sutil para protegerse de los rayos solares dañinos. Sí, las plantas usan flavonoides para eliminar ciertas radiaciones indeseables y filtrar otras que junto con las clorofilas trabajan en llave en el proceso de la fotosíntesis. Los flavonoides han estado en todas las mesas y comedores desde los primeros hombres y animales en el planeta. En mesas de reyes y plebeyos. Quién no se ha quedado mirando algún momento una mesa revestida y adornada con uvas rojas y verdes, con fresas, con moras, con manzanas, con bananos, con jugosas sandías. Pero ellos no solo están en hermosas flores y agradables frutas, están en alimentos de pobres y ricos como las verduras. Aunque no los vemos con sus festivos colores porque sus parientes más famosas como son las clorofilas con su manto verde las opacan, pero si nuestra visión lograse filtrar y eliminar el color verde que apreciamos cuando miramos una planta verde, sin duda podríamos reconocerlos. Sí amigo lector, esta es otra buena razón para preferir las comidas a base de vegetales, las espinacas además de hierro contienen vitaminas y flavonoides. Los jugos de Alejandro Martínez M. 7 frutas como moras, fresas, uvas negras o rojas, cerezas, etc., todos contienen flavonoides, y los hemos consumido casi a diario, y más adelante trataré de mostrar lo bueno que es consumir flavonoides para mantener nuestra salud, y hasta donde he leído, para prevenir y tratar varias enfermedades, y espero convencerlo de que esas bebidas con colorantes y saborizantes artificiales no son tan saludables como las bebidas naturales con flavonoides. A continuación se presentan algunos aspectos químicos y biológicos de los flavonoides, los cuales le sugiero al lector que si tiene inconvenientes en la comprensión del lenguaje científico pase al numeral 4, donde se hace énfasis en la utilidad potencial de los flavonoides para el mantenimiento de la salud y para la prevención de algunas enfermedades (página 37, numeral 10). 3. Aspectos químicos Para los químicos los flavonoides tienen una estructura química muy definida como se muestra en la figura 1. Puede observarse que de manera general son moléculas que tienen dos anillos bencénicos (ó aromáticos, para los químicos orgánicos) unidos a través de una cadena de tres átomos de carbono, puesto que cada anillo bencénico tiene 6 átomos de carbono, los autores los denominan simplemente como compuestos C6C3C6. La Figura 2 muestra la estructura química de uno de los flavonoides más comunes: La quercetina. Figura 1. Estructura básica de los flavonoides Alejandro Martínez M. 8 Figura 2. Estructura química de uno de los flavonoides más comúnmente hallados en la naturaleza, la quercetina. Nótese en color rojo la estructura básica de los flavonoides. La Figura 2 muestra una de las maneras más utilizadas por los químicos para representar las moléculas de los flavonoides en dos dimensiones, sin embargo existen otras maneras de representarlas de manera más real, esto es en tres dimensiones como se ilustra por ejemplo en la Figura 3. Figura 3. Estructura química en tres dimensiones del flavonoide quercetina. Representación en esferas: átomos de carbono de color gris, átomos de oxígeno en color rojo y átomos de hidrógeno en color blanco Para su estudio sistemático los más de 4000 flavonoides naturales se han clasificado en varias clases de acuerdo con las variantes estructurales que presenta la cadena central C3 (Figura 4). De acuerdo con esto los flavonoides se clasifican en varios grupos: Chalconas, O OH OH OH O HO OH Alejandro Martínez M. 9 flavonas, flavonoles, flavanonas, flavanonoles, antocianidinas, catequinas, epicatequinas, auronas, isoflavonoides, pterocarpanos, rotenoides, etc. O O H O O OH H FLAVANONAS FLAVANONOLES Alejandro Martínez M. 10 O OH O OH (+)-CATEQUINAS (-)-EPICATEQUINAS O O ISOFLAVONAS O O 1 2 3 4 5 6 6a 7 8 9 10 11 11a PTEROCARPANOS O O O 1 2 3 4 5 6 6a 7 8 9 10 11 12 12a ROTENOIDES Figura 4. Estructuras básicas de varias clases de flavonoides La mayoría de flavonoides poseen nombres triviales con la terminación INA u OL. Estos nombres les han sido asignados por los investigadores que los han ido descubriendo uno a uno en la naturaleza. Por ejemplo la acacetina (Figura 5) se identificó por primera vez en una planta del género Acacia y se clasifica como una flavona. La quercetina es un flavonol identificado inicialmente en una planta del género Quercus. La naringenina es una flavanona aislada inicialmente en la naranja. El eriodictiol es una flavanona y se aisló inicialmente en una planta del género Eriodictyon. Sin embargo, esta clase de nombres no es muy útil cuando se requiere información sistemática de estas sustancias, por lo cual los químicos han convenido llamarlos con nombres que representen su estructura química. Así por ejemplo la Alejandro Martínez M. 11 acacetina corresponde a la 5,7-dihidroxi-4'-metoxiflavona; la quercetina al 5,7,3',4'- tetrahidroxiflavonol; la naringenina a la 5,7,4'-trihidroxiflavanona, etc. Hasta ahora hemos visto aspectos relacionados con la estructura simple de los flavonoides, sin embargo dentro de las plantas los estudios han mostrado que estas sustancias se encuentran la mayoría de las veces, ligados a moléculas de carbohidratos. A este tipo de combinación núcleo flavonoide básico + una o varias unidades de carbohidratos, se les denomina GLICOSIDOS, y cuando no tienen ligadas moléculas de carbohidratos se las denomina AGLICONAS FLAVONOIDES. Por ejemplo los que mencionamos anteriormente (acacetina, eriodictiol, quercetina, naringenina, etc.) son agliconas flavonoides. Un ejemplo de glicósido es la vitexina que corresponde al 8-C-β-D- glucopiranósido de apigenina. Como puede intuirse, la nomenclaturade los glicósidos es más compleja que la de las agliconas. En las figuras y tablas siguientes se presentan varios ejemplos de diferentes clases de flavonoides naturales y algunas de las fuentes vegetales más conocidas. a. Ejemplos de flavonas O O R1 R2 R3 R4 R5 Alejandro Martínez M. 12 NOMBRE TRIVIAL R1 R2 R3 R4 R5 Fuente Crisina - - OH - OH Populus Baicaleína - - OH OH OH Scutellaria Apigenina - OH OH - OH Petroselinum Acacetina - OMe OH - OH Robinia Escutelareína - OH OH OH OH Scutellaria Hispidulina - OMe OH OH OH Ambrosia Luteolina OH OH OH - OH Reseda Crisoeriol OMe OH OH - OH Eriodictyon Diosmetina OH OMe OH - OH Diosma b. Ejemplos de flavonoles: O O R1 R2 R3 R4 R5 OH R6 Alejandro Martínez M. 13 NOMBRE TRIVIAL R1 R2 R3 R4 R5 R6 Fuente Galangina - - OH - OH - Alpinia Fisetina OH OH - - OH - Rhus Kaemferol - OH OH - OH - Delphinium Herbacetina - OH OH - OH OH Gossypium Quercetina OH OH OH - OH - Quercus Ramnetina OH OH OH - OMe - Rhamnus Quercetagetina OH OH OH OH OH - Tagetes Gossipetina OMe OH OH - OH OH Gossypium Isorramnetina OH OMe OH - OH - Cheiranthus c. Ejemplos de antocianidinas: O R1 R2 R3 R5 R4 R6 X- Alejandro Martínez M. 14 NOMBRE TRIVIAL R1 R2 R3 R4 R5 R6 Fuente Apigenidina - OH OH - OH - Rechsteineria Luteolinidina OH OH OH - OH - Rechsteineria Pelargonidina - OH OH OH OH - Pelargonium Cianidina OH OH OH OH OH - Centaurea Peonidina OMe OH OH OH OH - Paeonia Delfinidina OH OH OH OH OH OH Delphinium Petunidina OMe OH OH OH OH OH Petunia Malvidina OMe OH OMe OH OH OHe Malva d. Ejemplos de flavanonas: O O R1 R2 R3 R4 R5 Alejandro Martínez M. 15 NOMBRE TRIVIAL R1 R2 R3 R4 R5 Fuente Pinocembrina - - OH - OH Pinus Liquiritigenina - OH - - OH Glycyrrhiza Naringenina - OH OH - OH Prunus Sakuranetina - OH OH - OMe Prunus Eriodictiol OH OH OH - OH Eriodictyon Hesperetina OH OMe OH - OH Prunus 4. Distribución y estado natural Los flavonoides se encuentran ampliamente distribuidos en las plantas verdes (especialmente las angiospermas), y sólo algunos pocos se han detectado en hongos y algas. Se han encontrado en las diferentes partes de las plantas, especialmente en las partes aéreas; y se les encuentra en forma libre (también llamados agliconas flavonoides), como glicósidos (la mayoría de las veces), como sulfatos y algunas veces como dímeros1 y polímeros2. Los glicósidos pueden ser de dos clases: con los carbohidratos ligados a través de átomos de oxígeno (enlace hemiacetal) es decir como O-glicósidos; o con los carbohidratos ligados a través de enlaces C-C, es decir como C-glicósidos. De todas estas formas naturales, los O- glicósidos son los más comunes de hallar. Las antocianinas por su parte se encuentran como sales principalmente en flores, frutos y tejidos con coloraciones que van del rojo hasta el violeta y el azul3. Muy pocas veces se encuentran varias clases de flavonoides en un mismo tejido vegetal, sin embargo de las raíces de Lonchocarpus subglauscescens (leguminosas) se aislaron varias flavonas, flavonoles, isoflavonas, rotenoides, chalconas y flavanoles4. 5. Propiedades físicas Las propiedades físicas dependen de la clase de flavonoide considerado y su forma (libre, glicósido ó sulfato). Por ejemplo las flavonas, flavonoles y auronas, debido al sistema conjugado son compuestos sólidos con colores que comprenden desde el amarillo muy tenue hasta el rojo. Las antocianidinas son de colores rojo intenso, morado, violeta y azul. Las Alejandro Martínez M. 16 flavanonas y flavanonoles debido al carbono quiral C-2 presentan el fenómeno de la rotación óptica. Los glicósidos son en general sólidos amorfos, mientras que las agliconas y los altamente metoxilados son cristalinos. La solubilidad depende de la forma en que se encuentren y el número y clase de sustituyentes presentes. Los glicósidos, las antocianidinas y los sulfatos son solubles en agua y alcohol. Las agliconas flavonoides altamente hidroxiladas son solubles en alcohol (etanol, metanol y n-butanol), mientras que las poco hidroxiladas lo son en solventes como éter etílico, acetato de etilo y acetona. Las agliconas flavonoides altamente metoxiladas son solubles en solventes menos polares como el éter de petróleo y el cloroformo. Los flavonoides con hidroxilos fenólicos son solubles en soluciones alcalinas, pero algunos altamente hidroxilados se descomponen por acción de las bases fuertes, un hecho que permite reconocerlos y diferenciarlos de otros, y que hace años se utilizó para su elucidación estructural. Los glicósidos flavonoides son sólidos amorfos que se funden con descomposición, mientras que las correspondientes agliconas son sólidos cristalinos. 6. Biogénesis Como se mencionó anteriormente los flavonoides son metabolitos secundarios vegetales de origen biosintético mixto: el anillo A proviene de la ruta de la malonilcoenzima A y el anillo B y la cadena C3 provienen de la ruta del ácido shikímico. Un tricétido se cicliza y se condensa con una molécula de ácido p-cumárico. La enolización del ciclo proveniente de la ruta de la malonilCoA da origen al anillo aromático A en las chalconas y flavanonas. Estas a su vez son los precursores de las demás clases de flavonoides. Es importante recalcar que este proceso de biosíntesis sustenta el hecho de que en la mayoría de flavonoides el anillo A sea meta-oxigenado, es decir como es característico de los anillos aromáticos originados por la vía de la malonilCoA; y por otro lado, el anillo B proveniente de la ruta del ácido shikímico, generalmente es orto-oxigenado. Para el caso de la biogénesis de los isoflavonoides tales como las isoflavonas, pterocarpanos y rotenoides, los experimentos realizados por diversos investigadores sugieren que hay un proceso de migración 2,3. Por ejemplo se ha demostrado que la (2S)-naringenina (una Alejandro Martínez M. 17 flavanona) es convertida por una isoflavonasintasa de la soya (Glycine max) en genisteína (una isoflavona): OHO OH OH O OHO OH O OH Isoflavonasintasa 2 3 (2S)-Naringenina Genisteína Alejandro Martínez M. 18 OH O HO CH3 O OHO O AcetilCoA Acido shikimico OHO O H OH O HO OH O O O OH OH O OHHO OH CHALCONA O OHO OH OH (-)-FLAVANONA 7. Métodos experimentales de análisis a. Extracción y aislamiento Los flavonoides en general se extraen de muestras secas y molidas. La muestra se desengrasa inicialmente con éter de petróleo ó n-hexano, y el marco se extrae con etanol puro o del 70%. Este último es recomendado para garantizar la extracción de los más polares. El extracto obtenido se evapora con calentamiento no superior a los 50°C y se le hacen particiones sucesivas con éter etílico, acetato de etilo y n-butanol. Los flavonoides apolares quedan en la fase etérea, los medianamente polares en la fase acetato de etilo y los más polares en el n-butanol. Cada una de estas tres fracciones se puede analizar por Alejandro Martínez M. 19 cromatografía en capa fina (CCF) y HPLC en fase reversa. Para el análisis por CCF de las agliconas se pueden utilizar mezclas n-hexano/acetato de etilo y cloroformo/acetato de etilo en diferentes proporciones, por ejemplo la mezcla cloroformo/acetato de etilo 60:40 utilizada por Wagner y col. para el análisis de drogas vegetales5. Para el análisis de glicósidos flavonoides Wagner y col. utilizan una mezcla acetato de etilo/ácido fórmico/ácido acético/agua 100:11:11:27. Para el análisis por HPLC de los glicósidos pueden utilizarse columnas RP-18, detectando a 254 nm y eluyendo con mezclasácido acético al 2% acuoso/acetonitrilo en diferentes proporciones. El ácido acético previene la formación de picos asimétricos en el cromatograma. Para el análisis cuantitativo HPLC de las agliconas también se usan columnas RP-18, detección a 254 nm y elución con mezclas de acetonitrilo/agua con ácido acético al 1%6,7. Para el caso de flavonas metoxiladas y glicósidos de flavanonas en plantas del género Citrus se puede consultar el trabajo de Mouly y col. 8 Las antocianinas se pueden extraer de tejidos frescos (p. ej. pétalos) por maceración con un solvente ácido como por ejemplo la mezcla metanol-ácido acético-agua (MAW) (11:1:5) ó la mezcla MFW, es decir metanol/ácido fórmico/agua por ejemplo 10:1:9. El extracto obtenido se concentra y se somete a cromatografía en papel unidimensional eluyendo con la mezcla t-BuOH:AcOH:H2O (3:1:1). En estas condiciones las antocianinas presentan Rf bajo y se pueden separar de otros tipos de flavonoides como los glicósidos de flavonoles los cuales presentan un Rf alto. Una vez eluído del papel el extracto con las antocianinas se puede purificar a través de un cartucho RP-8 eluyendo con AcOH al 7% acuoso y con AcOH al 7% metanólico. También se pueden analizar por cromatografía en capa fina con placas de celulosa y eluyendo con la mezcla HCl conc./ácido fórmico/agua 19.0/39.6/41.49. Las antocianinas se pueden separar a escala analítica por HPLC [(columna RP-18, 25 cm de long., 5 µm); eluente: una mezcla 1:1 de A (H3PO4 al 1.5% acuoso) y B (H2O:MeCN:AcOH:H3PO4 107:50:40:3) a un flujo de 0.8 ml/min; detectando a 352 y 530 nm]. A nivel preparativo puede usarse una columna RP-18 de 25 cm de long., los mismos solventes citados arriba pero en una proporción 43:57 respectivamente, a un flujo de 2 Alejandro Martínez M. 20 ml/min y detectando a 440 nm. A las fracciones obtenidas luego de concentrarlas al vacío, se les puede eliminar el ácido fosfórico pasándolas a través de un cartucho RP-8 lavando con AcOH al 8% acuoso. Luego, las antocianinas se eluyen con AcOH al 8% metanólico, se concentran a sequedad y se liofilizan para obtener los compuestos puros para su caracterización química10. Existen métodos para estabilizar las antocianinas en micelias 11 . Para la extracción y aislamiento de flavonoides sulfatados puede consultarse el artículo de Chulia et al.12 Para la resolución de mezclas enantioméricas de flavanonas se utiliza actualmente la HPLC con fases estacionarias quirales13. 8. Métodos de identificación a. Ensayos de coloración Los flavonoides se pueden reconocer experimentalmente mediante diferentes ensayos de coloración. A continuación se describen un ensayo general de reconocimiento como es el ensayo de Shinoda, y otros ensayos más específicos para varias clases de flavonoides. • Ensayo de Shinoda Los flavonoides con el núcleo benzopirona (p. ej. flavonas, flavonoles, flavanonas, etc.) producen coloraciones rojizas cuando a sus disoluciones acuosas o alcohólicas se les adiciona magnesio seguido de HCl concentrado. Aunque no se conoce el mecanismo de esta prueba, es muy utilizada para reconocer esta clase de compuestos. • Ensayo con Zn/HCl Al remplazar el Mg por el Zn en el procedimiento del ensayo de Shinoda, solamente los dihidroflavonoles (o flavononoles) producen coloraciones rojo-violeta. Las flavanonas y flavanoles no producen color o producen coloraciones rosadas débiles. Alejandro Martínez M. 21 • Ensayo de Pacheco El sólido flavonoide se calienta sobre una llama con unos pocos cristales de AcONa y 0.1 ml de anhídrido acético. Luego con 0.1 ml de HCl conc. Los dihidroflavonoles producen un color rojo característico. Las flavonas, chalconas, auronas, flavonoles y flavanonas dan una respuesta negativa. • Ensayo del estroncio-amoniaco Este ensayo se utiliza para distinguir entre flavonas y flavonoles-3-O-sustituídos 5,6- dihidroxilados y 5-hidroxil-6-metoxilados 14 . • Reconocimiento de antocianinas Las antocianinas se comportan como indicadores ácido-base debido al proceso: O + OGli OH OH HO OGli OH- H+ catión de cianina (pH =3, rojo) OH OGli OGli HO O O Base de la cianina (pH=8.5, violeta) H+ OH- O - OGli OGli HO O O Anión de la cianina (pH=11, azul) A pH ácido presentan coloraciones rojas, violetas y moradas; mientras que a pH alcalino presentan coloraciones verdes y azules15. Con esta prueba se pueden diferenciar entre las antocianinas y las betacianinas (pigmentos nitrogenados de colores rojos y violeta de plantas del orden Centrosperma, como p. ej. los pigmentos de la remolacha Beta vulgaris, Fam. quenopodiáceas y también presentes en otras plantas como la Phytolacca americana, Fam. Fitolacáceas16) b. Espectroscopía ultravioleta-visible Los espectros UV de los flavonoides en metanol presentan bandas características debidas a los sistemas conjugados de los anillos aromáticos. Alejandro Martínez M. 22 Las flavonas y flavonoles muestran dos bandas definidas: La banda I, de mayor longitud de onda en el rango 300-390 nm asociada con la funcionalidad cinamoílo, y la banda II, entre 250-280 nm debida al anillo aromático A (funcionalidad benzoílo), aunque a veces se observan otras bandas de absorción. La posición de la banda I depende del tipo de flavonoide: las flavonas la muestran en 310-350 nm, los flavonoles 3-O-sustituidos en 330- 360 nm, y los flavonoles en 350-385 nm. La presencia de hidroxilos fenólicos en diferentes posiciones de la molécula puede establecerse estudiando el comportamiento del espectro UV metanólico al añadirle los denominados reactivos de desplazamiento: metóxido de sodio (NaOMe), acetato de sodio (NaOAc), cloruro de aluminio (AlCl3) con y sin HCl, y ácido bórico (H3BO3). El NaOMe es una base fuerte que ioniza los hidroxilos fenólicos presentes en la molécula y particularmente permite reconocer la existencia de grupos hidroxilo en 3 y 4'. Las flavonas 4'-hidroxiladas y los flavonoles 3-O-sustituidos presentan desplazamiento batocrómico de 45-65 nm para la banda I al añadir NaOMe, y la intensidad de la banda no decrece. Los flavonoles (ó 3-hidroxiflavonas) sin hidroxilo en 4', también presentan el mismo desplazamiento batocrómico de 45-65 nm, pero la intensidad de la banda se ve disminuida. En los flavonoles 3,4'-dihidroxilados, orto-dihidroxilados y diorto-trihidroxilados, el espectro se descompone en pocos minutos luego de añadir el NaOMe. La aparición de una banda alrededor de 330 nm (banda III) es característica de flavonas 7-hidroxiladas17. El NaOAc es una base más débil que el NaOMe, y ioniza solo los hidroxilos fenólicos más ácidos: 3, 4' y 7. La ionización del hidroxilo en 7 afecta la banda II y por lo tanto el NaOAc es un reactivo útil para determinar la presencia de dicho hidroxilo. Si al añadir el NaOAc se observa un desplazamiento batocrómico de 5-20 nm en la banda II se trata de una flavona o flavonol 7-hidroxilado. Las flavanonas 5-hidroxiladas presentan un desplazamiento batocrómico de 35 nm. Los flavononoles (sin 5-OH) presentan un desplazamiento batocrómico de 60 nm. Sin embargo, Heinz y col. han reportado que se debe tener precaución en la obtención del espectro con NaOAc18. Alejandro Martínez M. 23 El H3BO3 en medio alcalino forma quelatos con hidroxilos fenólicos en posición relativa orto: O R O HO HO OH H3BO3 (exc.) OH- -O B -O O R O O O OH La formación del quelato produce desplazamiento batocrómico en la banda I. Si el desplazamiento es de 12-36 nm se trata de un flavonoide (flavona, flavonol, aurona o chalcona) orto-dihidroxilado en el anillo B, pero si el desplazamiento batocrómico es menor es un flavonoide orto-dihidroxilado en el anillo A. Las isoflavonas, flavanonas y flavononoles orto-dihidroxiladas en el anillo A muestran desplazamiento batocrómico de 10- 15 nm pero en la bandaII. El AlCl3 anhidro también forma quelatos con flavonoides orto-dihidroxilados, 3- hidroxilados y 5-hidroxilados19. En el caso de los orto-dihidroxilados el quelato es inestable a pH ácido, mientras que los quelatos formados con 3- y/o 5-hidroxilados son estables: Por lo anterior, si al determinar el espectro con AlCl3 y HCl se mantiene un desplazamiento batocrómico de 35-55 nm en la banda I (comparando con el espectro metanólico) se trata de una flavona o un flavonol 5-hidroxilado. Si el desplazamiento es de 17-20 nm se puede tratar de una flavona o un flavonol 5-hidroxilado y 6-oxigenado. Si el desplazamiento es de 50-60 nm se trata de una flavona o un flavonol 3-hidroxilado (con o sin 5-OH). O O HO OH OH OH AlCl3 O O HO O O O Al Al Cl Cl Cl O O HO OH OH O Al Cl Cl HCl Alejandro Martínez M. 24 En el caso de flavonoides (flavonas y flavonoles) orto-dihidroxilados en el anillo B (sin 3- OH ni 5-OH) al añadir el cloruro de aluminio se obtiene un desplazamiento batocrómico de la banda I de 30-40 nm, el cual se pierde al añadir el HCl. Los orto-dihidroxilados en A (sin 3-OH ni 5-OH) muestran un desplazamiento de la misma banda de 20-25 nm, el cual se pierde también al añadir el HCl. Otros flavonoides como las flavanonas, isoflavonas y flavanonoles presentan desplazamientos batocrómicos pero en la banda II. Las auronas, chalconas y antocianidinas también presentan desplazamientos batocrómicos en la banda I20,21. Los datos espectrales UV de varios flavonoides se dan en el trabajo de Jay y col.22 c. Espectrometría de Resonancia Magnetica Nuclear El espectro de RMN-1H de los flavonoides permite reconocer características estructurales importantes. Un resumen de los δ para los tipos de protones más comúnmente hallados se presenta en la tabla 7. Alejandro Martínez M. 25 Tabla 7. Desplazamientos químicos de varias clases de protones presentes en los flavonoides δ (ppm) Tipos de protones 0.0 Tetrametilsilano 0.0-0.5 Trimetilsililo 1.0-1.2 Metilo de la ramnosa (doblete ancho) 1.7 Metilos del grupo isopentenilo 1.9-2.0 Metilos de acetatos alifáticos (de azúcares) 2.2-2.4 Metilos de acetatos aromáticos 2.7-3.1 H-3 de flavanonas (multiplete) 3.0-4.8 Protones de azúcares 3.5 Metileno del grupo isopentenilo 3.7-4.1 Metoxilos aromáticos 4.1-4.6 Protones 2 y 3 de isoflavanonas 4.2-6.0 Protón 1 de azúcares, protón 2 de flavanonoles y flavanonas (doble doblete) 5.4 Protón 2 de flavanonoles y flavanonas (dd) 5.9-6.0 Metiléndioxi 6.0-6.8 Protones 3, 6 y 8 de flavonas 6.8-8.0 Protones aromáticos del anillo B 7.5-8.0 Protón 2 de isoflavonas 8.9 Protón 4 de antocianinas 12.0-14.0 Protón del hidroxilo 5 Las antocianinas23 se pueden reconocer en sus espectros RMN-1H por la señal en δ 8.9 (s, H-4) 24 y las señales características de otros protones aromáticos como en los glicósidos de la delfinidina25: Alejandro Martínez M. 26 O+ OR2 OH OH OH HO OR1 H H H H H R1, R2: Carbohidratos 7.7s 7.7s 7.0d, 2 Hz 6.9d, 2Hz 8.9s Las flavanonas se reconocen por las señales dd en δ 5.4 (H-2, J=13 y 2-3 Hz), 3.1 (H-3 trans, J=13 y 2-3 Hz) y 2.8 (H-3 cis, J=17 y 2-3 Hz)26. Las isoflavanonas se pueden reconocer por RMN-1H por las señales: δ 4.1 (H-2a, dd, J=5 y 8 Hz), 4.5 (H-2b, dd, J=5 y 12 Hz) y 4.6 (H-3, dd, J=8 y 12 Hz)27. Los protones de los grupos hidroxilos generalmente no se observan en los espectros cuando estos se determinan en solventes próticos, sin embargo existen métodos para observarlos no solo en los flavonoides sino en cualquier producto natural 28 . Veáse a manera ejemplo el espectro de la flavanona: Alejandro Martínez M. 27 En el espectro de RMN-13C se pueden reconocer varios tipos de carbonos, en la Tabla 8 se presentan los rangos de desplazamiento químico para varios de ellos. Tabla 8. Desplazamientos químicos de varios tipos de carbonos de flavonoides δ (ppm) Tipos de carbonos 18 C-6 de ramnosa 30 C-4 de flavan-3-oles29 42-46 C-3 de flavanonas30,31 56-61 Metoxilos32 60-80 C-OH de carbohidratos 70-75 C-3 de flavanonoles 80 C-2 de flavanonas33 85 C-2 de flavanonoles 100-115 C-3 de flavonas, C-1 de carbohidratos, C-10 de flavonas 5-hidroxiladas 115-128 aromáticos con H 130-140 aromáticos sulfatados 145 C-3 de flavonoles, C-5 de flavonas 5-hidroxiladas, C-3 y C-4 de antocianinas34 150-165 C aromáticos hidroxilados y metoxilados, C-1a de flavonas, C-2 de antocianinas, C-2 de flavonas, C-4' oxigenado, C-9 de flavonas 175-178 carbonilo C-4 sin OH en C-5 en flavonas, C-4 de flavonoles 182 carbonilo C-4 con OH en C-5 de flavonas35 190-196 carbonilo C-4 de flavanonas36 197-200 carbonilo C-4 de flavanonoles Alejandro Martínez M. 28 Es posible también diferenciar entre un C-glicósido flavonoide y un O-glicósido flavonoide. En los O-glicósidos, el C-1 resuena alrededor de 100 ppm para los carbohidratos más comunes, mientras que en los C-glicósidos resuena alrededor de 75 ppm. Por otro lado, en los C-glicósidos el carbono de la aglicona ligado al carbohidrato resuena alrededor de 10 ppm a campo más bajo de su valor normal (sin sustituyente)37. Recientemente, se ha publicado el estudio de 70 espectros de RMN- 13 C de flavonas polioxigenadas, y los autores aplican el análisis de estos espectros a la asignación de las señales de los carbonos del anillo A 38 . Para otras colecciones de espectros consultar los artículos de Markham y col. 39 A manera de ejemplo se presenta a continuación el espectro RMN- 13 C de la flavanona: d. Espectrometría de masas Las agliconas flavonoides presentan fragmentos característicos en su espectro de masas de impacto electrónico IE40. Por ejemplo, las flavonas y flavonoles presentan generalmente los fragmentos M+., [M-H]+, y [M-CO]+. uno o varios de los fragmentos A1+., [A1+H]+, B1+. y B2+ los que se originan por rompimientos Retro-Diels-Alder: Alejandro Martínez M. 29 O OR5 R7 R4' R3 O R4' B2+ R4' R3 O R5 R7 O + A1+ B1+ Las flavonas e isoflavonas generalmente muestran los fragmentos A1+., [A1+H]+, B1+. y B2+. Los flavonoles muestran [A1+H]+ y B2+; además el fragmento [M-CHO]+. Las 3- metoxiflavonas muestran A1+., [A1+H]+ y B1+.. Además se observa el fragmento [M-CO- Me]+. Las flavanonas muestran A1+., [A1+H]+, [B1+2H]+. y los fragmentos [M-anillo B]+ y B3+.: O OR5 R7 R4' M+. O R5 R7 OH [M-B]+ R4' B3+. Los flavanonoles muestran A1+. y los fragmentos siguientes: Alejandro Martínez M. 30 O OR5 R7 R4' OH M+. R4' OH R4' OH + CH2 R4' B4+. B5+. B6+ Las chalconas tienden a producir fragmentos originados por ruptura a cada lado del carbonilo: OR5 R7 R4' R5 R7 R4' [M-28]+. OR5 R7 R5 R7 A2+ [A2-28] + O R4' R4' B7+. [B7-28]+. Las 2'-hidroxichalconas pueden isomerizarse a flavanonas y generar los fragmentos característicos de estas. En general las agliconas flavonoides con uno o varios grupos metoxilo presentan el fragmento [M-Me]+ , el cual es especialmente intenso en flavonoides 6- y 8-metoxilados. En los flavonoides 2'-hidroxilados también se aprecia a veces el fragmento [M-OH]+, mientras que los 2'-metoxilados presentan el fragmento [M-OMe]+. Alejandro Martínez M. 31 El fragmento [M-agua]+ es común en flavonoles, flavan-3,4-dioles y C-glicósidos. El fragmento [M-55]+ o [M-56]+. indica la presencia de un sustituyente isopentenilo. Son ejemplos de este tipo de fragmentaciones en el caso de tricina, jaceosidina y eupafolina, aisladas de Artemisia vulgaris. 41 Es importante anotar que algunos autores como Goudard y col. reportaron que es posible diferenciar 5-hidroxi-, 6,7-dimetoxi-, 7,8-dimetoxi-, 5,6,7-trimetoxi- o 5,7,8- trimetoxiflavonas con base en las intensidades relativas de los iones M y M-1542. La tabla 9 resume los fragmentoscaracterísticos de agliconas de flavonas y flavonoles y su interpretación respecto al número de sustituyentes hidroxilos y metoxilos en los anillos A y B: Tabla 9. Valores m/z de fragmentos obtenidos a partir de rupturas de las moléculas de flavonas y flavonoles m/z Número de sustituyentes en el ANILLO A43 Número de sustituyentes en el ANILLO B44 OH H OMe OH H OMe 105 - - - 0 5 0 120 0 4 0 - - - 121 0 4 0 1 4 0 135 - - - 0 4 1 136 1 3 0 2 3 0 150 0 3 1 - - - 151 0 3 1 1 3 1 152 2 2 0 - - - 153 2 2 0 3 2 0 165 - - - 0 3 2 166 1 2 1 - - - 167 1 2 1 2 2 1 168 3 1 0 - - - 169 3 1 0 4 1 0 180 0 2 2 - - - Alejandro Martínez M. 32 181 0 2 2 1 2 2 182 2 1 1 - - - 183 2 1 1 3 1 1 184 4 0 0 - - - 185 4 0 0 5 0 0 195 - - - 0 2 3 196 1 1 2 - - - 197 1 1 2 2 1 2 198 3 0 1 - - - 199 3 0 1 4 0 1 210 0 1 3 - - - 211 0 1 3 1 1 3 212 2 0 2 - - - 213 2 0 2 3 0 2 226 1 0 3 - - - 227 1 0 3 2 0 3 240 0 0 4 - - - 241 0 0 4 1 0 4 255 - - - 0 0 5 Para los glicósidos y flavonoides sulfatados, aunque anteriormente se obtenían los espectros de masas a partir de sus derivados permetilados45,46,47 y trimetilsililéteres48,49, más recientemente se utiliza la Espectrometría de masas FAB50. Por ejemplo el espectro de masas FAB permite reconocer los flavonoides sulfatados ya que presentan además del ión pseudomolecular (M+H en modo positivo, ó M-H en modo negativo), pérdidas sucesivas de 80, 160, 240, etc. unidades de masa debidas a la pérdida de 1, 2, 3 ó más grupos sulfato. Por ejemplo, el espectro FAB del siguiente compuesto, muestra los fragmentos m/z 505 (M-H), 425 (M-HSO3) y 345 (M-2HSO3) 51: Alejandro Martínez M. 33 O O O O H O O M e M e O O M e S O 3 H S O 3 H 3,3'-disulfato de gossipetina-7,8-dimetiléter Para el caso de los glicósidos flavonoides el espectro de masas FAB permite determinar el número de unidades y la clase de carbohidratos ligados, por ejemplo52: O O OH OMe HO O Glu Glu Li+ m/z 675 m/z 513 m/z 345 Actualmente se utilizan técnicas como la Espectrometría de masas de Ionización Electrospray (sigla en inglés: ESI-MS), con la cual se pueden analizar flavonoides presentes en bajas concentraciones en diferentes muestras 53 . A manera de ilustración se presentan a continuación los espectros de masas IE de la quercetina y la flavanona: Alejandro Martínez M. 34 e. Difractometría de Rayos-X La asignación de la estereoquímica y la determinación de la estructura espacial de algunos flavonoides se ha realizado mediante los estudios de los espectros de Difracción de Rayos- X. Un ejemplo es el 12aβ-hidroxidalpanol, un rotenoide aislado de las partes aéreas de Amorpha fruticosa (leguminosas) y que es citotóxico a seis líneas celulares de cáncer humano54. Alejandro Martínez M. 35 O O O HO H OH O OMe OMe H f. Espectroscopia infrarrojo Aunque el espectro infrarrojo de los flavonoides no se usa mucho actualmente, a manera de ilustración se presentan a continuación los espectros infrarrojo de la quercetina y la flavanona: Alejandro Martínez M. 36 g. Hidrólisis55 Los O-glicósidos flavonoides se pueden hidrolizar en presencia de ácidos para liberar los carbohidratos ligados y la correspondiente aglicona flavonoide. En general se utiliza HCl 2N: metanol 1:1 reflujando durante 1 hora. Los O-glucurónidos flavonoides requieren condiciones más fuertes para su hidrólisis y ésta se realiza con HCl 2N reflujando a 100°C durante 2 horas. Los C-glicósidos no se hidrolizan en estas condiciones pero pueden sufrir el reordenamiento de Wessely-Moser, como en el caso de la vitexina: O OH O Glu HO OH O OH O HO OH Glu Vitexina Isovitexina H+ En condiciones alcalinas fuertes (p. ej. reflujo con NaOH 2N, 100°C, 1 hora) el núcleo flavonoide se rompe liberando sustancias de menor peso molecular: Alejandro Martínez M. 37 O OH OOH HO NaOH 2M 100°C, 60 min N2 OH OH HO + OH R (R=CH2OH o COOH) El análisis cromatográfico y espectral de estos productos de degradación ha sido utilizado para confirmar la asignación de la estructura del flavonoide. 9. Interconversión de los flavonoides Existen varios procedimientos experimentales para interconvertir un flavonoide en otro, generalmente con el fin de facilitar su identificación. Por ejemplo, las flavanonas pueden convertirse en flavonas con diclorodicianobenzoquinona/dioxano o con Se2O/Ac2O. Los dihidroflavonoles a flavonoles con AcOK/AcOH/I2. Las isoflavanonas a isoflavonas con Se2O/Ac2O o SeO2/alcohol amílico. Las proantocianidinas (o leucoantocianidinas) a antocianidinas por ebullición en n-butanol con 5% de HCl concentrado durante 1-2 horas. 10. Utilidad de los flavonoides Como se mencionó anteriormente, sin saberlo le humanidad ha consumido casi a diario esta clase de sustancias, pero como muchas otras que son conocidas para los científicos permanecen desconocidas para el ciudadano común. Como el objetivo de este texto es llegar no sólo al auditorio académico-científico, sino también a ese ciudadano común, a continuación trataré de usar un lenguaje de comprensión general, y para mostrar la utilidad de los flavonoides hablaré de sus beneficios para la salud, muy especialmente lo relacionado en las investigaciones más recientemente publicadas. b. Los flavonoides y el hígado Recientemente ha crecido mucho el interés y el uso de varias drogas naturales como hepatoprotectores, esto es como protectores del hígado. Una de las más mencionadas y comercializadas es el gingko. La droga la constituyen las hojas de Gingko biloba Alejandro Martínez M. 38 (Gingkoaceae) un arbusto ornamental de origen asiático. Estas contienen flavonoides, biflavonoides, proantocianidinas y otros. El extracto de gingko actúa al nivel circulatorio. Inhibe la agregación plaquetaria56, aunque contiene una concentración baja de 4'-O- metilpiridoxina, una sustancia neurotóxica57. c. Los flavonoides y la arteriosclerosis La arteriosclerosis es el endurecimiento progresivo de las venas y arterias por acumulación de sustancias grasas, por lo tanto afecta la presión arterial y puede llevar a la muerte. Uno de los medios más utilizados para su tratamiento es el manejo de dietas rigurosas y deficientes en grasas y carbohidratos. Sin embargo, existen investigaciones recientes que demuestran que las personas que consumen habitualmente bebidas como los vinos tintos y el té verde, se ven beneficiados por el hecho de que son menos propensos a ataques cardíacos y prevenir la arteriosclerosis. A continuación se resumen algunas de las acciones benéficas de los flavonoidespara nuestro organismo y nuestra salud: Los flavonoides son importantes para la salud de los vasos sanguíneos. Regulan la permeabilidad del capilar, por eso detienen el flujo de proteínas y células de sangre, pero permiten el flujo de oxígeno, dióxido del carbono y otros nutrientes. Muchos flavonoides incrementan la fortaleza de los vasos capilares, previniéndolos de cerrarse fácilmente. Esto es en parte debido a que ciertos flavonoides tienen una acción similar a la de la vitamina C. Esto puede ayudar a proteger los vasos sanguíneos contra las infecciones y las enfermedades. Los flavonoides también puede relajar el músculo liso del sistema cardiovascular, disminuyendo así la presión de la sangre. Esto también mejora la circulación en el propio corazón. Los flavonoides son antioxidantes y también pueden prevenir la oxidación del colesterol LDL, previniendo el aumento de placa arterioesclerótica. También pueden detener Alejandro Martínez M. 39 el agrupamientode las plateletas de sangre, reduciendo la coagulación de la sangre y el daño de los vasos sanguíneos. • Efectos Anti-inflamatorios Los farmacólogos son personas profesionales en los medicamentos y quienes estudian todos los procesos que ocurren en nuestro organismo cuando ingerimos o se nos inyecta un medicamento, para ellos las sustancias que son fundamentales en los medicamentos las clasifican de acuerdo a su acción, por ejemplo hay medicamentos antimicrobianos, anticancerígenos, antinicóticos, antigripales, etc. Una de estas clases son las sustancias antiinflamatorias, que como su nombre lo indica sirven para desinflamar. A los flavonoides se les ha asociado con la acción antiinflamatoria, y es de las más estudiadas. Existen varios ejemplos que demuestran con evidencia experimental entre ellos están por ejemplo: Algunos dímeros flavonoides (biflavonoides) como el diinsininol58, isoflavanquinonas59, etc. En Colombia varias plantas medicinales han sido aprobadas por el Ministerio de Salud como antiinflamatorias, entre ellas están: Flores de Arnica: Las flores de Arnica montana (Asteraceae) contienen quercetrina-3-O- glucósido, luteolina-7-O-glucósido y kaemferol-3-O-glucósido entre otros. Esta droga es de venta libre en Colombia y se usa como antiinflamatorio de uso externo60,61. Flores de Caléndula: Las flores de Calendula officinalis (Asteraceae) contienen glicósidos de iso-ramnetina y quercetina. En nuestro país es una droga de venta libre usada como antiinflamatoria y regeneradora del epitelio62, y fue aprobada por el Minsterio de Salud para su uso medicinal como antiinflamatorio y cicatrizante 63 . El extracto alcohólico mostró efecto positivo en el tratamiento de úlceras varicosas y lesiones en la piel 64 . Existen en Colombia otras plantas que aunque no están aprobadas por el Ministerio de Salud, sí se han usado como antiinflamatorios, como el caso el caso del Chuchugüasí. Esta corresponde a la corteza de Maytenus aelevis (Celastraceae), que contiene proantocianidinas con actividad antiinflamatoria (artritis)65. Alejandro Martínez M. 40 Las propiedades anti-inflamatorias de los flavonoides se deben a su acción antioxidante y a su habilidad de actuar contra los histaminas y otros mediadores de inflamación, como las prostaglandinas y los leucotrienos. Otros efectos66 • Sistema cardiovascular Los flavonoides son importantes para mantener sanos los conductos sanguíneos. Regulan la permeabilidad capilar. Muchos de ellos incrementan la resistencia de los capilares evitando que se plieguen o aplanen. Esto es debido en parte a que ciertos flavonoides mejoran la acción de la vitamina-C. Estos efectos ayudan a proteger contra infecciones y enfermedades de los vasos sanguíneos. Los flavonoides también ejercen una acción relajante del músculo liso del sistema cardiovascular, lo que lleva a la disminución de la presión sanguínea. Esta acción mejora también la circulación del mismo corazón. Por su efecto autoxidante y pueden evitar la oxidación del colesterol LDL, lo que a su vez previene la formación de la denominada placa arterioesclerótica. También pueden evitar la acumulación excesiva de las plateletas, evitando así el daño de los vasos sanguíneos y la coagulación de la sangre. • Acción antiinflamatoria Como se anotó anteriormente, a los flavonoides se les ha asociado principalmente con su acción farmacológica. Esta es debida a sus efectos antioxidantes y a su capacidad de actuar contra las histaminas y otros mediadores de los procesos inflamatorios como son las prostaglandinas y los leucotrienos. Aunque los flavonoides tienen muchas propiedades comunes a muchos de ellos, algunos de ellos tienen propiedades específicas. Algunos tienen actividad estrogénica mientras otros inhiben el crecimiento de tumores. • Absorción Los flavonoides se absorben fácilmente desde el instestino, y los metabolitos y excesos se excretan en la orina. Alejandro Martínez M. 41 • Fuentes dietarias más comunes Los flavonoides se encuentran en la pulpa comestible de frutos como los cítricos, cerezas, uvas, albaricoques, grosellas negras, etc. La pimienta verde, el brocoli, las cebollas y los tomates son buenas fuentes vegetales, como también el trigo sarraceno. El té verde y el vino tinto también contienen varios flavonoides. Muchas plantas aromáticas también contienen flavonoides, y en ellas estos contribuyen a sus efectos terapéuticos. Entre estas se incluyen el gingko, espino, cardo, etc. • Deficiencia No existen hasta ahora estudios experimentales que demuestren que en las personas puedan existir deficiencias en cuanto a la ingestión de los flavonoides y se cree que la mayoría de la gente consume en su dieta alimenticia la cantidad requerida. Es posible también que mucha gente, especialmente las personas que consumen menos alimentos de origen vegetal no consuman lo suficiente para mantener una salud óptima. Por lo anterior, no existen recomendaciones dietarias respecto al consumo de los flavonoides, sin embargo en el comercio se consiguen algunos suplementos de diferentes tipos y dosis. Los extractos de corteza de pino y de semillas de uvas son fuentes de proantocianidinas. La proporción de estos flavonoides, como otros nutrientes, varía de una especie vegetal a otra. Ambas fuentes pueden utilizarse de manera alterna, pero el extracto de semillas de uvas contiene un mayor porcentaje de proantocianidinas (92-95%), mientras que los extractos de corteza de pino contienen 80 a 85% de tales compuestos. Además las semillas de uvas contienen flavonoides que se encuentran también presentes en el té verde, el cual como se muestra adelante también es benéfico para la salud. • Efectos tóxicos No se han reportado hasta ahora efectos tóxicos cuando se consumen relativamente grandes cantidades de flavonoides. Alejandro Martínez M. 42 • Usos terapeúticos de los suplementos Mejoramiento de la acción de la vitamina C Los flavonoides como los presentes en los cítricos, a menudo se administran junto con la vitamina C, por ejemplo para el tratamiento de resfriados, hemorragias, úlceras, etc. También tienen acción antiviral. Desórdenes cardiovasculares Debido a sus propiedades antioxidantes, los flavonoides protegen contra enfermedades del corazón, lo que explica la denominada “paradoja francesa”. Esta se refiere al hecho de que como los franceses consumen dietas más ricas en grasas saturadas, y tienen mayores niveles de colesterol y presión arterial más alta que por ejemplo los norteamericanos, tienen 2.5 veces menos incidencias de enfermedades coronarias. El vino tinto es una buena fuente de flavonoides y muchas personas han sugerido que el amplio consumo de vino tinto por parte de los franceses, los protege de enfermedad coronaria. Existen varios estudios que demuestran que el consumo diario de uno ó dos vasos de vino tinto, protegen contra el infarto cardíaco y parece probable que precisamente el vino tinto es más efectivo que el vino blanco, lo que de alguna manera descarta que la acción benéfica sea debida al alcohol. Una investigación que involucró a 805 hombres de 65 a 84 años de edad en 1985, y con un seguimiento clínico durante 5 años, demostró que de ellos, los que más consumieron té, cebolla y manzanas, presentaron menos incidencia de riesgo de ataques cardíacos, que los que consumieron menores cantidades de tales vegetales. El consumo de dietas ricas en flavonoides al parecer también protege contra el riesgo de paro cardíaco. Algunos estudios demuestras que el consumo de dietas ricas en flavonoides, especialmente quercetina, y más de 3 tazas de té negro al día, presentaron hasta un 75% de menor riesgo, comparados con aquellos que ingirieron menores cantidades. El té negro Los flavonoides son útiles el el tratamiento de la hipertensión arterialdebido a su efecto fortificante y tonificante en los vasos capilares. También en desórdenes circulatorios de la Alejandro Martínez M. 43 retina y el ojo. Son particularmente útiles en el tratamiento de problemas de las venas y capilares tales como las venas varicosas, insuficiencia venosa (disminución de la capacidad de retorno de la sangres desde las piernas hasta el corazón), y problemas en los ojos tales como la retinopatía originada por la diabetes. • Té verde El té verde contiene varias sustancias polifenólicas que tienen efectos benéficos, incluyendo la protección contra enfermedades del corazón. Además se ha demostrado que disminuye los niveles de colesterol, por ejemplo en una investigación realizada en Japón, donde se consume habitualmente. • Cáncer Los flavonoides también ayudan a proteger contra el cáncer. Muchas investigaciones han demostrado que varios flavonoides pueden inhibir la proliferación de células cancerosas. En una investigación en el estado de Iowa, EE.UU., se encontró que de 35000 mujeres post- menopaúsicas, aquellas que bebieron habitualmente más de dos tazas de té al día, el 32% presentó menos probabilidad de desarrollar cáncer de boca, esófago, estómago, colon y recto, y el 60% menor probabilidad de desarrollar cáncer del tracto urinario. La cebolla es también rica en el contenido de flavonoides y hay estudios que demuestran que hombres y mujeres que consumen habitualmente la cebolla presentaron menor riesgo de cáncer estomacal. • Té verde Diferentes preparaciones y extractos de té verde han mostrado inhibición de la formación y el crecimiento de tumores en animales de laboratorio. La evidencia de este efecto protector ha sido obtenida para el caso de cánceres del tracto digestivo y de seno. Sin embargo se encontró que cuando se consume algún tipo de bebida alcohólica se disminuye el efecto protector. Alejandro Martínez M. 44 • Alergias y autoinmunidad Además de sus efectos antioxidantes, la capacidad de los flavonoides para afectar enzimas involucradas en la producción de sustancias antiinflamatorias significa que son útiles para el tratamiento de asma, alergias, artritis, etc. • Quercetina La quercetina ha mostrado efectos antiinflamatorios. La inflamación es mediada parcialmente por la liberación de histamina. La quercetina puede estabilizar las membranas de las células que liberan la histamina, reduciendo su liberación. También afectan la síntesis de leucotrienos. La quercetina también inhibe la enzima que convierte glucosa en sorbitol, un compuesto que está relacionado con las complicaciones diabéticas, incluyendo las cataratas. Varios compuestos químicamente relacionados con la quercetina han mostrado que inhiben la formación de cataratas en animales diabéticos. La quercetina también mejora la secreción de insulina y protege las células pancreáticas del daño por radicales libres. También existen estudios que demuestran su acción benéfica en el tratamiento de tumores en próstata 67 • Soya La soya contiene un tipo de flavonoides denominados como isoflavonas. Estas a su vez se las refiere como fitoestrógenos, debido a que tienen propiedades estrogénicas y antiestrogénicas. Cuando los niveles circulantes de estrógenos son altos, como en el caso de las mujeres premenopaúsicas, estos compuestos pueden ligar receptores estrogénicos y bloquear la acción de la hormona. En cambio, cuando los niveles de estrógenos son bajos, como en el caso de las mujeres post-menopaúsicas los fitoestrógenos actúan estrogénicamente. Los compuestos fitoestrogénicos de la soya incluyen la genisteína y la daidzeína 68 . Las evidencias obtenidas a partir de experimentos de biología celular y molecular, experimentos con animales, y ensayos clínicos con humanos, sugieren que los fitoestrógenos pueden ayudar a prevenir enfermedades cardiovasculares, cáncer, osteoporosis y síntomas de la menopausia. Los estudios epidemiológicos sugieren que las tasas de estas enfermedades son más bajas entre poblaciones que consumen dietas ricas en vegetales, particularmente en culturas como la China y la Japonesa, las cuales consumen Alejandro Martínez M. 45 habitualmente productos a partir de soya. Además la soya contiene los fitoesteroles, los cuales han demostrado que disminuyen el colesterol sanguíneo, posiblemente por un mecanismo competitivo con el colesterol dietario. Los productos de la soya también pueden reducir la oxidación del colesterol LDL e inhibir el acumulamiento excesivo de las plateletas, dos procesos que disminuyen el proceso arterioesclerótico. Además mejoran el funcionamiento de las arterias. El consumo de soya también disminuye el riesgo de cáncer, particularmente los dependientes de hormonas como el de seno y el de próstata. También se ha encontrado relación entre el alto consumo de productos a base de soya y la menor incidencia de síntomas menopaúsicos y osteoporosis, por ejemplo en mujeres japonesas. En el caso del cáncer de próstata, existe controversia sobre su efecto benéfico, pues existen autores que asocian los isoflavonoides con la promoción de tumores. • Otros estudios Los flavonoides se han aislado de muchas drogas vegetales debido a que son productos naturales muy comunes. Su presencia en una droga vegetal no necesariamente explica sus propiedades farmacológicas. Se les ha atribuido una cantidad de propiedades farmacológicas, incluyendo actividades inhibidoras de enzimas (hidrolasas, ciclooxigenasas 69 , fosfatasa alcalina, cAMP fosfodiesterasas, ATP-asas, liasas, hidroxilasas, transferasas, oxidoreductasas y kinasas)70, antiinflamatoria 71 , anticancerígena, antibacterial y antiviral. La crisina se encuentra en el álamo (Populus sp.) y en la cereza salvaje (Prunus sp.), la apigenina en el perejil, el kaemferol en el sen, y la liquiritigenina en el regaliz. La rutina presente en la cáscara de los cítricos fue alguna vez considerada como la vitamina P, pero actualmente no se le reconoce como tal. El uso de la rutina para el tratamiento de la fragilidad capilar es motivo de controversia, pero sin embargo es utilizada para el tratamiento de la hipertensión y en geriatría. Las flores de saúco (Sambucus niger), usadas para el tratamiento de resfriados, influenza y reumatismo, contienen varios glicósidos flavonoides. Una cantidad de isoflavonas (derivados de la 3-fenil-γ-cromona) posee actividad estrogénica 72 y producen esterilidad en las ovejas que consumen trébol. La silibina y la silimarina son flavolignanos constituyentes del cardosanto (Silybum marianum) el cual se Alejandro Martínez M. 46 utiliza ampliamente en Alemania para la protección del hígado73. La quercetina y la rutina tienen efectos anticancerígenos potenciales. También existen algunas evidencias que los consumidores de vinos rojos y vinotinto presentan baja mortalidad por enfermedad coronaria 74 , y que ello se debe a los compuestos fenólicos presentes, entre los cuales están los flavonoides catequina, epicatequina y quercetina75. Las procianidinas presentes en las uvas tienen uso potencial en isquemias cardíacas76. Esto a llevado a que en Francia se elabore un producto denominado la "Paradoja francesa", al cual se le atribuyen propiedades benéficas para el tratamiento y prevención de enfermedades cardiovasculares 77 . La soya contiene isoflavonoides antiestrogénicos 78 y antimutagénicos 79 . Artemisia vulgaris contiene flavonoides estrogénicos 80 . El Maytenus aquifolium, denominada "espinheira-santa" en Brasil, donde es utilizada para dolencias estomacales, tiene acción contra úlceras en ensayos con ratones 81 . También se han reportado flavonoides que inhiben la agregación plaquetaria, con acción vasodilatadora (naringenina, eriodictyol y luteolina)82, con acción antiarrítmica83, chalconas con acción antimicótica, antibacteriana, citotóxica y antimitótica84,85,la 3- ramnosilquercetina presenta actividad antidiarréica86, y antialérgica 8788, flavonoles con actividad antiespasmolítica89, isoflavonas y flavanonas antimicóticas, isoflavanos y flavanonas antimicrobianos 90 y flavanos con actividad leishmanicida91. Varios glicósidos del kaemferol, la quercetina y la miricetina inhiben la infección por el virus VIH-1 92 . Flavonoides como la quercetina, flavona, catequina y crisina parecen desempeñar un papel importante contra la acción de la morfina 93 . Las antocianinas por sus características se han sugerido como colorantes de alimentos94. Además se ha informado el uso potencial de ciertos flavonoides en cosméticos 95 . Otras clases de flavonoides como los denominados rotenoides tienen uso como insecticidas 96 . Alejandro Martínez M. 47 11. Relación Estructura-Actividad Biológica (REA) Existen diferentes reportes en los que se presentan estudios de diferentes clases de flavonoides respecto a su estructura química y su actividad biológica. Por ejemplo en el caso de su acción antialérgica, Matsuda y col.2, encontraron que son requisitos los siguientes: (1) El enlace doble 2-3 de las flavonas y flavonoles es esencial para la actividad antialérgica. (2) Los 3- y 7-O-glicósidos tienen menor actividad. (3) Entre más grupos hidroxilos existan en las posiciones 3’, 4’, 5, 6 y 7, la actividad es más fuerte. (4) Los flavonoles tipo pirogalol (3’,4’,5’ –trihidroxilados), presentan menor actividad que los tipo pirogalol (4’-hidroxilados) o catecol (3’,4’-dihidroxilados). (5) Las actividades de las flavonas son más fuertes que las de los flavonoles. (6) En los flavonoles 3-O-metilados se sdisminuye la actividad. (7) Varias flavonas y flavonoles con grupos metoxilos en 4’ y en 7, no siguen las reglas 3, 4 y 5. Otro trabajo, de Zhang y col., estudió la REA entre varios flavonoides y el cáncer de seno. Estos autores encontraron que el enlace doble entre C-2 y C-3, el anillo B ligado al C-2, el grupo hidroxilo en C-5, la no hidroxilación en C-3 y la presencia de sustituyentes apolares en C-6, C-7, C-8 ó C-4’, son carácterísticas estructurales importantes para la interacción entre los flavonoides y la BCRP (breast cancer resistance protein)3. En cuanto a la acción antioxidante de los flavonoides, se ha propuesto que el enlace doble C-2 C-3, el carbonilo C-4, y los hidroxilos en C-3 y C-5, son esenciales para la acción antioxidante de los flavonoides4. Existen otros estudios sobre REA de los flavonoides, como el de Alves y col., quienes evaluaron la REA entre varios flavonides naturales y sintéticos, con actividad contra el virus del sida5. 2 Matsuda, H., et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry 10 (2002) 3123 –3128 3 Zhang, S., et al., Biochemical Pharmacology 70 (2005) 627–639. 4 Lien, E. J., et al., Free Radic. Biol. Med. 26 (1999) 285-294. 5 Alves, C. N., et al., J. Mol. Struct. (Theochem), 541 (2001) 81-88. Alejandro Martínez M. 48 También se ha estudiado la REA entre flavonoides tipo antocianina como inhibidores de la xantina-oxidasa, la cual desempeña un papel importante en el metabolismo del ácido úrico, y los problemas fisiológicos asociados a este como la gota. Estos trabajos han permitido proponer por ejemplo que la presencia de hidroxilo en C-5 y/o en C-7, y el anillo B sin sustituyentes son requisitos para que tengan acción inhibidora de la enzima6. 12. Función Biológica Aunque todavía no se conoce exactamente el papel que desempeñan los flavonoides en los vegetales, se tienen algunas evidencias experimentales que sugieren que cumplen una o varias de las siguientes funciones: a) Su capacidad de absorber ciertas radiaciones ultravioleta, los convierte en filtros solares para proteger los tejidos vegetales de radiaciones dañinas, y además se ha sugerido que participan en el proceso de la fotosíntesis. b) Sus variados colores y su presencia en tejidos como los de las flores, sugieren que participan en procesos como la reproducción favoreciendo la atracción de insectos polinizadores. c) Las diferentes actividades biológicas halladas para algunos de los flavonoides (antimicrobiana, antimicótica, etc.) y las evidencias experimentales de que algunos aumentan la resistencia de ciertas plantas contra diferentes infecciones y enfermedades vegetales (es decir que actúan como fitoalexinas97), sugieren que estas sustancias también son un mecanismo químico de defensa vegetal. d) La capacidad inhibidora de ciertas hormonas vegetales presentada por algunos flavonoides sugiere que actúan como reguladores del crecimiento vegetal. 6 Amic, D., et al., J. Chem. Inf. Comput. Sci. 38 (1998) 815-818. Alejandro Martínez M. 49 13. Metabolismo La mayoría de flavonoides son degradados en condiciones alcalinas fuertes rompiéndose el anillo C. Por esta razón resultan no tóxicos para el hombre y los mamíferos pues son degradados en las condiciones alcalinas a nivel del intestino. Por ejemplo la quercetina es degradada según el siguiente esquema: O OH OH OH OOH HO pH alcalino OH OH OHO OH OOH HO OH+ OMe OH OHO OH OHO -CO2 OH OH HO 14. Algunas drogas vegetales que contienen flavonoides98 • Flores de Acacia Las flores de Robinia pseudoacacia (Fabaceae) contienen robinina. • Flores de Manzanilla Romana Las flores de Anthemis nobilis (Asteraceae) contienen apigenina-7-O-glucósido y luteolina- 7-O-glucósido. • Flores de Cactus Las flores de Cereus grandiflorus (Cactaceae) contienen glicósidos de iso-ramnetina y rutina. Para el análisis HPLC de la rutina se puede consultar el artículo de Dimov y col.99 Alejandro Martínez M. 50 • Flores de Caléndula Las flores de Calendula officinalis (Asteraceae) contienen glicósidos de iso-ramnetina y quercetina. En nuestro país es una droga de venta libre usada como antiinflamatoria y regeneradora del epitelio100. El extracto alcohólico mostró efecto positivo en el tratamiento de úlceras varicosas y lesiones en la piel 101 . • Espino La droga la constituyen las hojas, flores y frutos de Crataegus sp. (Rosaceae). Contiene glicósidos de quercetina y apigenina102. • Tusílago Alejandro Martínez M. 51 Las flores de Tussilago farfara (Asteraceae) contienen glicósidos de quercetina. • Manzanilla Chiquita Las flores de Matricaria chamomilla (Asteraceae) contienen quercimeritrina, glicósidos de apigenina, luteolina y patuletina. Esta es una planta medicinal aprobada en Colombia y se usa como carminativa y digestiva103,104. • Primavera Las flores de Primula sp. (Primulaceae) contienen glicósidos de quercetina, gossipetina y kaemferol. En Colombia tiene uso ornamental. • Endrino Las flores de Prunus spinosa (Rosaceae) contienen glicósidos de quercetina y kaemferol. • Saúco Las flores de Sambucus niger (Caprifoliaceae) contienen glicósidos de quercetina, rutina, hiperósido, etc. Esta planta está aprobada en Colombia y se utiliza como expectorante. La especie relacionada Sambucus canadensis ha mostrado uso potencial contra el virus de la influenza 105 . Alejandro Martínez M. 52 • Reina de los prados Las flores de Filipendula ulmaria (Rosaceae) contienen espiracósido, hiperósido y avicularina. • Pié de gato Las flores de Helichrysum arenarium (Asteraceae) contienen glicósidos de naringenina, kaemferol, apigenina y luteolina. • Tilo Las flores de Tilia sp. (Tiliaceae) contienen glicósidos de quercetina, kaemferol y miricetina. La especie medicinal está aceptada en Colombia corresponde a Tilia sylvestris y sus hojas se utilizan como sedante menor. Para el análisis HPLC de los glicósidos flavonoides del tilo se puede consultar el trabajo de Pietta y col.106 • Abedul Las hojasde Betula sp. (Betulaceae) contienen glicósidos de quercetina y miricetina. Alejandro Martínez M. 53 • Nogal Las hojas de Juglans regia (Juglandaceae) contienen hiperósido y otros glicósidos flavonoides. En Colombia es de venta libre la Juglans cinerea (nogal blanco), cuyas hojas se usan como antidiarréico. • Bodas de Plata Corresponde a la Potentilla anserina (Rosaceae) que contiene glicósidos de quercetina y miricetina. • Cola de caballo Las partes aéreas de Equisetum arvense (Equisetaceae) contienen glicósidos de luteolina, isoquercitrina y equisetrina107. • Herniaria La Herniaria sp. (Caryophyllaceae) contiene rutina y narcisina. Alejandro Martínez M. 54 • Infusión madre La Leonorus cardiaca (Lamiaceae) contiene rutina. • Ruda La Ruta graveolens (Rutaceae) contiene rutina. • Retama Sarothamnus scoparius (Fabaceae) contiene escoparina y vitexina. • Verónica Veronica officinalis (Scrophulariaceae) contiene luteolina-7-O-glucósido y rutina. • Bastoncillo dorado Solidago virgaurea (Asteraceae) contiene glicósidos de quercetina y kaemferol. Alejandro Martínez M. 55 • Pensamiento Corresponde a Viola tricolor (Violaceae). Contiene glicósidos de quercetina. Es una planta medicinal aceptada en Colombia. Sus hojas y flores se usan como antitusivo. • Sofora Las yemas de Sophora japonica (Fabaceae) contienen rutina (ca. 20%). • Naranja amarga El pericarpio del fruto de Citrus aurantium (Rutaceae) contiene eriocitrina, rutina, naringenina, naringina, etc. En Colombia el fruto se usa como laxante. • Cáscara de limón Además del aceite esencial el cual ha sido utilizado en la elaboración de diferentes fragancias y saborizantes, el pericarpio del fruto de Citrus limon (Rutaceae) contiene hesperidósido el cual se utiliza en el tratamiento de hemorroides. Otros flavonoides con actividad antioxidante también ha sido aislados 108 • Cáscara de cidra El pericarpio del fruto de Citrus medica (Rutaceae) contiene eriocitrina, rutina, etc. • Yerbasanta Corresponde a Eriodictyon glutinosum (Hydrophyllaceae). Contiene homoeridictiol, eriodictiol, etc. • Ortosifonis Las hojas de Orthosiphon spicatus (Lamiaceae) contienen sinensetina, escutelareína y eupatorina. El extracto acuoso de Orthosiphon stamineus, Lamiaceae, usado tradicionalmente en Malasia para el tratamiento de diabetes, mostró actividad hipoglicémica en ratas 109 . Alejandro Martínez M. 56 • Cardo de María Los frutos de Sylibum marianum (Asteraceae) contienen flavolignanos, silibina, silicristina, silidianina, silimarina, etc. La silimarina es hepatoprotector y se utiliza en el tratamiento de trastornos digestivos funcionales110, ase dice también que protege el hígado de personas que consumen drogas sicotrópicas 111 . Además la silimarina inhibe la hipercolesterolemia en ratas 112 . Otros estudios reportan que los flavolignanos potencian la acción de sustancias antimicrobianas 113 . Para el análisis por CG-EM de sus componentes fenólicos se puede consultar el trabajo de Galetti y col.114 • Trigo sarraceno Las flores de Fagopyrum sculentum (Polygonaceae) son de venta libre en Colombia y se usan contra la fragilidad capilar. • Eucalipto Alejandro Martínez M. 57 • Gingko Los extractos de Gingko biloba, han mostrado efectos benéficos en el tratamiento de insuficiencia cerebrovascular y problemas de la circulación periférica. La actividad farmacológica se ha atribuido a trilactonas terpénicas y glicósidos flavonoles. Sin embargo, algunos alquilfenoles (ácidos gingkólicos, cardanoles y cardoles) se han identificado como constituyentes peligrosos en los extractos de Gingko. Estos compuestos además de que tienen propiedades alergénicas, poseen también actividades mutagénica y cancerígena, por lo tanto no pueden estar presentes en concentraciones mayores de 5 ppm, según las farmacopeas americana y europea7. • Lespedeza Corresponde a la Lespedeza capitata (Leguminosae). El extracto alcohólico se usa como estimulante de la eliminación renal. • Pycnogenol El pycnogenol es un extracto de la corteza del pino marino francés Pinus maritima Lamk. (Pináceas), que contiene bioflavonoides, catequina, ácidos fenólicos y procianidinas (también denominadas leucoantocianidinas). Entre sus efectos están la inhibición de la agregación plaquetaria y la inhibición de formación de trombos. Es comparativamente más activo contra 7 Fuzzati, N., Pace, R., Villa, F., Fitoterapia 74 247-256 (2003). Alejandro Martínez M. 58 los radicales libres, que el té verde y el gingko. Existen estudios sobre su acción benéfica en pacientes con insuficiencia venosa crónica, con manifestaciones como las venas várices 115 . • Fuentes de antocianinas Las antocianinas debido a sus propiedades como verdaderos pigmentos vegetales y a que son fácilmente degradados en el intestino, se utilizan principalmente como colorantes de medicamentos y alimentos. Se extraen de plantas comestibles como las uvas negras (Vitis vinifera, Ampelidaceae)116, la mora, la fresa, el repollo morado, el pericarpio del rábano rojo 117 , el grosellero negro (Ribes nigrum, Saxifragaceae), etc. Las antocianinas de los frutos y hojas del arándano, Vaccinium myrtillus L., Ericaceae, presentan propiedades vasoprotectoras y contra desórdenes oftalmológicos, y se vende el extracto con el nombre comercial de Myrtocyan118. Las flores de albahaca Ocimum basilicum, contienen varias antocianinas 119 . 15. Algunas plantas colombianas que contienen flavonoides Dentro de la muy poco estudiada flora colombiana existen numerosas plantas que tienen uso medicinal popular y que contienen flavonoides, especialmente de plantas de las familias ericáceas, euforbiáceas y compuestas (p. ej. el género Eupatorium es uno de los más Alejandro Martínez M. 59 estudiados a nivel mundial por su uso medicinal120). A continuación se mencionan algunas de ellas121. • Arnica Corresponde al Senecio formosus de la familia Compositae. Se usa contra el reumatismo, como sudorífica, para la depuración de la sangre y antisifilítica, pero contiene alcaloides lo cual la hace tóxica. • Cerraja Corresponde a Sonchus oleraceus de la familia Compositae. Se usa su infusión en enfermedades del hígado, como diurética, depuradora de la sangre, en trastornos biliares, como laxante y antiespasmódica. • Botón de oro Corresponde a Spilanthes oppositifolia de la familia Compositae. Su decocción se usa contra enfermedades del hígado, manchas en la piel y como dentífrico. Las flores como analgésico. García-Barriga anota que se usa contra la diabetes122. • Flor de muerto Corresponde a Tagetes erecta de la familia Compositae. Su decocción se usa como antihelmíntico y emenagogo. La infusión de las flores y hojas se utiliza para el lavado de orzuelos y ojos infectados. • Chaparro Corresponde a la Curatella americana de la familia Dilleniaceae. Las hojas contienen la avicularina y son usadas como sustituto del papel de lija. Se usa contra la artritis, la diabetes y para disolver los cálculos biliares123. Alejandro Martínez M. 60 • Ñame El color violeta de los tubérculos de la Dioscorea trifida de la familia Dioscoreaceae, son debidos a antocianinas del tipo malvidina. • Angucho Corresponde a la Befaria aestuans de la familia Ericaceae. La infusión de sus flores se usa como expectorante. • Uva caimarona Corresponde a Cavendishia bracteata de la familia Ericaceae. Sus frutos son comestibles. La decocción de las hojas se usa como astringente y contra el reumatismo. • Uva de páramo Corresponde a la Gaylussacia buxifolia de la familia Ericaceae. Los frutos son de color morado debido a antocianinas.
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