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Factores que influyen en la eficiencia del buchón de agua (Pontedería crassipes, Mart) en la extracción de materia orgánica usando el método de posicionamiento ex situ en ecosistemas acuáticos Laura S. Moreno 1 Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia ECOLOGIA PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Los ecosistemas acuáticos de la ciudad de Tunja se han visto seriamente afectados debido a contaminantes tales como la acumulación de materia orgánica, la cual puede afectar la calidad del agua y la biodiversidad, así como su sostenibilidad. El buchón de agua (Pontedería crassipes) es una planta acuática que se ha utilizado en recientes investigaciones en algunas regiones, como una opción para mitigar los problemas debido al potencial fitorremediador que se le atribuye por sus características fisiológicas (Guevara et al. 2015); como el veloz crecimiento y reproducción; ya que, a medida que el agua fluye a través de las raíces y las hojas, la planta absorbe y acumula nutrientes y contaminantes presentes en el agua, como metales pesados y compuestos orgánicos (Jafari, 2010). La investigación se llevará a cabo en ecosistemas acuáticos de la ciudad de Tunja, Colombia durante un período de seis meses; esto permite capturar cambios estacionales y evaluar la eficiencia del buchón de agua a lo largo del tiempo. Se deben identificar y medir variables independientes como la concentración de materia orgánica en el agua antes y después de la aplicación del buchón de agua, el crecimiento y estadio de la planta y en general los factores bióticos y abióticos del ecosistema. Es importante considerar los impactos ambientales que puedan surgir, como resultado de la presencia y el crecimiento del buchón de agua en el ecosistema. Si el buchón de agua demuestra ser eficiente, esto podría tener implicaciones positivas para la gestión de los ecosistemas acuáticos en Tunja y la posible reducción de la contaminación por materia orgánica. Preguntas que pueden surgir y resolverse con la Investigación: - ¿Cómo varía la eficiencia del buchón de agua (Pontedería crassipes) en la extracción de materia orgánica en función de las condiciones ambientales en ecosistemas acuáticos? - ¿Cuál es el impacto de la densidad de población de buchón de agua en la extracción de materia orgánica? - ¿Cómo afecta la calidad del agua, incluida la concentración de nutrientes, a la eficiencia del buchón de agua en la extracción de materia orgánica? - ¿Existen diferencias estacionales significativas en la eficiencia del buchón de agua en la extracción de materia orgánica? - ¿Cuál es el potencial del buchón de agua como una herramienta de gestión de la calidad del agua en ecosistemas acuáticos? - ¿Son más eficientes para la extracción de materia orgánica las colonias adultas de buchón de agua (Pontedería crassipes) o las jóvenes? ANTECEDENTES En cuanto al buchón de agua P. crassipes, se han desarrollado varios estudios desde el siglo pasado con el fin de describir su biología floral y reproductiva, lo cual es importante para comprender su funcionamiento y cómo esto puede relacionarse con la productividad. Como ejemplo se encuentra el propuesto por Mulcahy (1975), quien describe cómo esta planta exhibe dos formas florales en el sistema distílico y tres formas florales en el sistema tristílico. Estas formas florales tienen una correlación entre el tamaño del polen y la longitud de los estambres, y su reproducción es principalmente asexual. Mulcahy menciono que su alta capacidad de reproducción vegetativa, a través de estolones y brotes laterales, le permite colonizar rápidamente cuerpos de agua y generar densas poblaciones, lo que resulta en una alta productividad de biomasa en condiciones favorables. Además, esta planta es conocida por su capacidad para acumular y extraer nutrientes y contaminantes del agua, como nitrógeno, fósforo y metales pesados. Su sistema de polinización cruzada, mediante polinización distílica o tristílica, promueve la diversidad genética y la adaptabilidad, lo que puede influir en su éxito en diferentes entornos. Si bien con respecto a la fitorremediación con buchón de agua se encuentra información reciente sobre su uso como fitorremediador, muchas de las investigaciones concluyen en una falta de profundización en la investigación. Desde estudios algo antiguos como el realizado por Reddy (1983) ya se empezaba a estudiar la productividad del buchón de agua midiendo las tasas de crecimiento y absorción de nutrientes de la planta en sistemas de acuicultura en microcosmos. La productividad neta se midió en términos de biomasa seca por metro cuadrado por día y se realizaron estudios durante un período de 12 semanas, dividiendo el tiempo en dos períodos con diferentes temperaturas ambientales promedio. Se utilizaron diferentes fuentes de nitrógeno (NH4+, NO3-, urea y efluente de digestor de metano) para determinar su efecto en la productividad y se agregaron cantidades iguales de cada fuente de nitrógeno a los sistemas de acuicultura. La investigación encontró que la productividad del buchón de agua varía según la fuente de nitrógeno utilizada, siendo más alta con NH4+ y NO3- en comparación con urea y efluente de digestor de metano; además, esta afecta la distribución de fósforo en la planta. Estos hallazgos resaltan la necesidad de considerar la fuente de nitrógeno para optimizar la eliminación de nutrientes contaminantes del agua. En la última década, estudios como el realizado por Jafari (2010) discutió los beneficios de su uso y como Pontedería crassipes puede ayudar a reducir la carga de nutrientes en el agua, ya que utiliza nitrógeno y fósforo para su crecimiento, lo que puede ayudar a prevenir la eutrofización en cuerpos de agua. Por otro lado, investigaciones como la realizada por Hurtado (2010) proponen y aplican una metodología en el tratamiento de P. crassipes con diferentes concentraciones de cromo. Donde se prepararon acuarios con capacidad para 25 litros y se llenaron con agua corriente y se agregó dicromato de potasio en varias concentraciones para obtener tratamientos con 30, 60 y 90 ppm de cromo. Cada concentración tuvo cinco repeticiones y se incluyó un control. Se evaluó el crecimiento de la planta en los tratamientos poniendo 11 plantas sanas en cada acuario con los tratamientos de cromo. Luego de ocho días se tomó una muestra de material vegetal para realizar un análisis químico y determinar la cantidad de cromo absorbido por las plantas, y se observó que tenían una capacidad acumulativa de cromo. El estudio encontró que las plantas toleraban concentraciones de hasta 2000 mg de cromo sin mostrar síntomas visibles de toxicidad. Si bien, aunque la gestión y control biológico de P. crassipes se ha dado utilizando gorgojos y carpas forrajeras; Guevara (2015) recomienda limitar su uso a humedales artificiales para evitar su propagación en ecosistemas naturales; puesto que, se enfatiza la necesidad de investigar más a fondo los aspectos técnicos y los métodos adecuados para su aplicación en la fitorremediación de manera responsable y con un impacto mínimo en los ecosistemas Por otro lado, Domínguez (2016) aplico el buchón de agua como fito-extractor de mercurio en un estudio en una mina de Antioquia, en la cual; se llevaron a cabo tres visitas mensuales y se midieron varios parámetros fisicoquímicos tanto in-situ como ex-situ siguiendo normas específicas. Se compararon muestras patrón y problema para evaluar el impacto ambiental y eficacia, pero no los factores que influyen de la fitorremediación con P. crassipes en el humedal. Se usó grava como sustrato y P. crassipes como planta. Hubo tres periodos de adaptación con agua potable y residual. El humedal se operó por 7 meses, tomando muestras a intervalos y comparando con estándares ambientales colombiano. Aunque no se logró obtener un agua residual que cumpliera con los límites máximos permisibles para el mercurio en efluentes industriales del sector minería según la normatividad colombiana, se puede afirmar que se lograron disminuciones considerablesde los parámetros analizados y superiores con otros resultados publicados en la literatura. Contextualizando esta investigación en Colombia, más específicamente en la capital; en un estudio más reciente sobre la aplicación de P. crassipes a la fitorremediación Malagon (2022), al igual que en estudios anteriores; concluyo que la mayor biomasa resulta en una mayor remoción de materia orgánica. Aproximadamente 19,53 mg O2 L-1/g por unidad de Buchón para el día 31; el modelo de crecimiento mostro un crecimiento inicial exponencial que se estabilizaba a medida que los recursos se agotan (capacidad máxima de carga K). La curva sigmoidea se desplazó más rápido para el grupo experimental (30 días) que para el grupo de control (165 días), debido al estrés y la competencia intraespecífica. JUSTIFICACIÓN Esta investigación posee una justificación de tipo práctica debido a que, los estudios relacionados con el buchón de agua (Pontederia crassipes) se han enfocado en su erradicación por su capacidad invasiva y daños ambientales que produce. Recientemente se les ha dado una nueva perspectiva a sus características y potencial como especie fitorremediadora en el manejo de aguas residuales; demostrando que la biomasa resultante de su rápida reproducción y las grandes colonias que forma, puede ser aprovechada. Aunque se han realizado estudios sobre el uso de esta planta como Fito-extractor de materia orgánica, metales pesados y mercurio, empleando la metodología de posicionamiento ex-situ de sus colonias, con resultados positivos en embalses artificiales; aún no se han estudiado a profundidad los factores bióticos o abióticos que influyen en la eficiencia de este método entre otros. El presente estudio se realiza con la intención de investigar la influencia de estos factores y su contribución a la optimización del rendimiento y costo económico de dicha metodología, mejorando la calidad del agua, beneficiando a las comunidades que dependen de esta y convirtiéndose en una práctica sostenible que pueda ser usada como método establecido en planes de manejo ambiental y plantas de tratamiento como medida de restauración inicial. OBJETIVO GENERAL - Evaluar la eficiencia del buchón de agua Pontederia crassipes en la extracción de materia orgánica usando el método de posicionamiento ex-situ en ecosistemas acuáticos. OBJETIVOS ESPECÍFICOS - Identificar los factores bióticos y abióticos y su influencia en la extracción de materia orgánica del buchón de agua en ecosistemas acuáticos. - Determinar cómo varía la eficiencia del buchón de agua en la extracción de materia orgánica en función de las condiciones ambientales, como temperatura, pH y luminosidad, en ecosistemas acuáticos. - Establecer la relación entre la densidad poblacional del buchón de agua Pontedería crassipes y su eficiencia de extracción. - Estimar las concentraciones de nutrientes esenciales que afectan la eficiencia del buchón de agua en la extracción de materia orgánica. - Comparar la eficiencia de la extracción de materia orgánica entre colonias adultas y jóvenes de buchón de agua. HIPÓTESIS La presente hipótesis es de tipo, relaciones de causalidad ya que propone como hipótesis nula que; factores como las condiciones ambientales, la edad de la colonia de buchón de agua, la concentración de nutrientes en el agua y su densidad poblacional (variables independientes) influyen en la eficiencia del buchón de agua (variable dependiente), lo que a su vez afecta la cantidad y velocidad de extracción de materia orgánica. Estos factores reducen la aplicabilidad de la metodología de posicionamiento ex-situ como método de recuperación en ecosistemas acuáticos naturales. Como hipótesis alterna se tiene que estos factores bióticos MARCO TEÓRICO Características de pontederia crassipes En cuanto a las características de esta especie, Valderrama (2005) mencionó, que es una planta acuática macrófita flotante de la familia de las Pontederiáceas; que flotan sostenidas por rizomas esponjosos con las raíces libres; alcanzan hasta un metro de altura, tiene hojas en rosetas ascendentes a extendidas, y su fruto es una cápsula que libera aproximadamente 12000 semillas; poseen Pecíolos cortos y bulbosos. Sus flores son azules a celestes y florecen una vez al año. Además, la biomasa de P. crassipes puede duplicarse en pocas semanas a través de reproducción vegetativa, lo que genera la aparición de abundantes colonias flotadoras. En un estudio realizado por León (2009) en ecuador, se especificó como, esta planta posee una raíz que alberga una comunidad activa de microorganismos que descomponen sustancias contaminantes del agua; en humedales que tengan la profundidad adecuada para garantizar un contacto completo entre las raíces y el agua residual. En este proceso, los contaminantes son extraídos por las raíces de la planta y llevados y liberados como gases a través de las hojas y el sistema superior de la planta. Esta se origina en el curso de agua de la cuenca del Amazonas, en América del Sur. La principal característica morfológica es que son consideradas malas hierbas, que pueden obstruir en poco tiempo una vía fluvial o lacustre (Much Santos, 2008).Poseen un sistema de raíces, que pueden tener microorganismos asociados a ellas que favorece la acción depuradora de las plantas acuáticas. (Hidalgo et al, 2005). Habita en cuerpos de agua dulce localizados a latitudes de 40°N y 45°S. La alta salinidad y temperaturas menores de 0°C afectan su crecimiento. Sin embargo, cuerpos de agua eutrofizados con niveles altos de nitrógeno, fósforo, potasio o contaminadas con metales pesados no limitan su crecimiento. (Robles, 2009). Fitorremediación El término fitorremediación se refiere a una tecnología sustentable que se basa en el uso de plantas para reducir la concentración, o peligrosidad de contaminantes orgánicos e inorgánicos de suelos, sedimentos, agua, y aire; a partir de procesos bioquímicos realizados por plantas y microorganismos asociados a su sistema radicular conduciendo a la reducción, mineralización, degradación, volatilización y estabilización de estos. (López et al. 2004). Esta planta además, desempeña un rol importante para la comunidad de fitoplancton, zooplancton y los peces en los ecosistemas de agua dulce al proporcionar complejidad del hábitat debido a sus raíces, refugio y zonas de alimentación (Nguyen et al., 2015) En cuanto a P. crassipes, según la definición anterior; sus características y necesidades de nutrientes la hacen una planta propicia como agente fitorremediador; por lo cual se han desarrollado estudios como el propuesto por Poma (2014), donde se determinó que una dosis óptima de nutrientes y un pH de 5 favorecieron la viabilidad de la planta y la solubilidad de los metales. Los resultados mostraron porcentajes de absorción del 16,56% para Cd y del 15,6% para Hg después de 7 días. Estos hallazgos demuestran el potencial del buchón de agua como agente fitorremediador para la extracción de contaminantes metálicos del agua y compuestos peligrosos para la salud como el mercurio. Fitoextracción En un estudio realizado por Domínguez (2016) se usó el buchón de agua como Fito-extractor de mercurio en una mina de Antioquia; se llevaron a cabo tres visitas mensuales y se midieron varios parámetros fisicoquímicos tanto in-situ como ex-situ siguiendo normas específicas. Se usó grava como sustrato y P. crassipes como planta. Hubo tres periodos de adaptación con agua potable y residual, el humedal se operó por 7 meses tomando muestras y comparando con estándares ambientales. Aunque no se logró obtener un agua residual que cumpliera con los límites máximos permisibles para el mercurio, se puede afirmar que se lograron disminuciones considerables de los parámetros analizados y superiores con otros resultados publicados en la literatura; al igual que ejemplifica su capacidad adaptativa al mostrar cómo al aumentar la concentración del metal esta no solo no presenta signos de toxicidad, sino que absorbe mayor cantidad del compuesto. Gomez (2010) realizóun estudio sobre el tratamiento de aguas residuales, comparando la efectividad entre el buchón y la lenteja de agua en la fitoextraccion. Para esto, se instalaron dos reactores para cada planta, donde se recibieron las aguas residuales. El buchón de agua, obtuvo un mejor desempeño en la eliminación de sólidos disueltos totales en comparación con la lenteja de agua; esto debido a que su sistema radicular es más denso. En términos de la DBO5, se observó una mejora del 20% en la eliminación de contaminantes por parte del buchón de agua en comparación con la lenteja de agua. En un estudio realizado por Gomez (2020), donde se evaluó el efecto del proceso de fitorremediación con P. crassipes en agua cianurada mediante cromatografía de gases; Se extrajo el aceite esencial de la planta utilizando hidrodestilación asistida por microondas y se analizó mediante cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas. Estas técnicas son esenciales para identificar y cuantificar los componentes volátiles en mezclas complejas, como los aceites esenciales de plantas. Ley de Frick La ley de Frick representa el proceso de quimio absorción de metales pesados en la celulosa vegetal (Javanbakht, 2019). El ajuste y calibración de los sistemas de tratamiento continuo podrían acoplarse en función de las cargas contaminantes y del caudal, simulando el desempeño para diseñar procesos ideales, utilizando modelos matemáticos. El modelo de difusión de Fick (Kf) se ha utilizado con éxito para calibrar la carga de entrada y cumplir con los estándares de descarga, siendo el principal parámetro para modelar y definir los diseños de sistemas de tratamiento. Las capacidades de adsorción de biomasa se modelan con la constante (Ks), sirve para el ajuste y calibración del lecho adsorbente junto con la densidad de partículas (Suzaki, 2017). Degradación de materia orgánica En Colombia, Londoño (2009), describió la demanda biológica de oxígeno (DBO5), como un parámetro que indica la cantidad de oxígeno consumido por ciertas poblaciones microbianas presentes en el sistema radicular de varias plantas acuáticas inhibiendo sus procesos fotosintéticos, al degradar la materia orgánica. Esta puede ser, restos de plantas y animales, exudados de raíces y productos del metabolismo de ciertos organismos; de una muestra líquida. Rodríguez (2010) realizó un estudio comparativo de tratamiento de aguas residuales domésticas usando buchón de agua y Lemna minor o lenteja de agua, una planta acuática flotante. En el estudio, la eliminación de contaminantes del agua residual se vio influenciada por la variabilidad de la DBO5 en el agua de entrada, con picos máximos y mínimos. El buchón demostró una mejor adaptación en la eliminación de materia orgánica en el humedal; la cámara pre-sedimentadora contribuye a eliminar la DBO particulada por sedimentación y filtración, gracias a la influencia de la grava y las raíces de las plantas. La conversión del sustrato en los humedales se da de forma aerobia en las raíces de las plantas y se ve afectada por la temperatura del agua en el sistema. Sin embargo, a pesar de los anteriores hallazgos, en un estudio realizado por Delgado (2020) en Arequipa, Perú; se concluyó que, el tratamiento de las aguas residuales con Buchón de agua no fue muy eficiente en la depuración de materia orgánica, pero para metales y para aniones es un buen depurador; y se recomienda que para optimizar el tratamiento de aguas residuales industriales se apliquen métodos electroquímicos. Condiciones propicias sugeridas de factores abióticos En un estudio realizado por Paredes (2015) sobre la optimización de fitorremediación de mercurio con P. crassipes empleando humedales de flujo continuo. Entre los factore abióticos importantes para la eficiencia de la absorción de esta especie sobre los contaminates; este obtuvo como dosis óptima 150ppm de nitrato de potasio, sabiendo que son las raíces las que ejercen el efecto fitodepurador, ya que a esta concentración las plantas alcanzaron un mayor tamaño de sus raíces. De igual forma, se cree que su mecanismo de acción es a través de la formación de complejos entre el metal con los aminoácidos dentro de la célula, previa adsorción de los metales a través de las raíces (Metcalf, 1995). Según Romero (1994), Para asegurar una eficiencia adecuada se debe promover una profundidad apropiada de penetración de las raíces de la planta que asegure un contacto completo del agua residual con el Jacinto. Una laguna de jacintos que trate un efluente secundario permite obtener concentraciones de nitrógeno y fósforo menores a 5 mg/L. Por otro lado, en una investigación realizada por Malagón (2022) se encontró que en la unidad de muestreo in situ, se observó competencia intra e interespecífica por espacio y oferta de luz fotosintéticamente activa. Y algunos otros recursos necesarios para el crecimiento, señalando que el aumento de la biomasa está siendo condicionado por múltiples factores. Lo anterior refuerza la idea de estudiar a fondo estos factores y su relación con la eficiencia de la extracción ya que esto podría conducir a una optimización de esta aplicación que se le ha dado a esta especie. De igual forma, Gomez (2020) encontró que la degradación del cianuro depende de la temperatura (20-40 °C) y el pH (óptimo 6-9), ya que P. crassipes elimina el cianuro en efluentes mineros, siendo tóxico a concentraciones de 5-50 mg de CN/L. A concentraciones de 5.8 y 10 mg/L, el cianuro se eliminó en 23-32 horas. Eichhornia crassipes mostró capacidad para metabolizar el cianuro. Estanques artificiales Aunque el uso del buchón de agua para filtrar aguas residuales ha sido ampliamente estudiado; no es una práctica que se dé comúnmente. La creación de estanques artificiales como metodología, aunque es la que más suele usarse cuando se habla de fitorremediación con buchón de agua, aún debe probarse a escalas mayores. Fernández (2005) describió ciertos factores importantes para la formación de estos estanques en Madrid; como lo son, el uso de grava en el fondo como sustrato de enraizamiento de las plantas y un flujo de agua que puede ser superficial, sub-superficial o el flujo que se usa para plantas flotantes como el buchón de agua. En cuanto a los sistemas con especies flotantes, Núñez (2013) describió como estos suelen ser humedales artificiales de menos de 2 metros de profundidad, donde el flujo de agua residual ya ha sido anteriormente tratado para luego circular a través de las especies flotantes de buchón de agua, que previamente crecen en el embalse de forma natural. Estos sistemas suelen usarse para sedimentación de sólidos, tratamiento como fertilizante para especies vegetales que serán sembradas y depuración de contaminantes a través de las raíces. METODOLOGÍA ÁREA DE ESTUDIO Figura 1. Embalse la playa, Tuta (Boyacá). E1. Estación zona rivereña. E2. Estación zona media. E3. Estación represa salida de aguas. Tomado de: (Rodríguez et al, 2014). El embalse La Playa es una formación artificial construida en 1996 con la finalidad de regular las crecientes e inundaciones del cauce, se ubica políticamente en los municipios de Combita y Tuta en el departamento de Boyacá, veredas Río de piedras, Resguardo, Agua Blanca-Tuta, y Combita, en el centro-oriente de Colombia, hace parte de la cuenca alta del río Chicamocha sobre el río Jordán. Se encuentra a una altitud de 2588 m.s.n.m y un área de 1.28 km2 aproximadamente; presenta una precipitación anual promedio de 1205 mm, con un régimen de lluvias bimodal con dos épocas húmedas (marzo-mayo; septiembre-octubre) y dos épocas secas (junio-agosto; diciembre-marzo). Las aguas de este estanque usualmente se usaban como reservorio para ganadería y agricultura; pero debido a que también reciben drenaje y residuos provenientes de la desembocadura del rio chulo, lo cual a lo largo de los años han convertido esta zona en un foco de invasiones, malos olores, proliferación de zancudos y especies invasoras como el buchón de agua el cual al día de hoy ha invadido lamayor parte del are comprendida por el embalse debido a su veloz reproducción y difícil erradicación. Fase de campo La presente investigación es de tipo aplicada con enfoque cuantitativo con un estudio de tipo longitudinal. El muestreo se realizará de forma aleatoria en el embalse la playa debido a que actualmente presenta una problemática de contaminación que ha propiciado la propagación de la especie invasora buchón de agua; macrofita objeto de estudio de esta investigación. Con ayuda de canoas y recipientes plásticos se obtendrá la biomasa, recolectando una población de 50 especímenes pertenecientes a alguna colonia joven (sin frutos) y 50 especímenes pertenecientes a alguna colonia adulta (con frutos) de esta macrofita se deben tomar plantas de todo el humedal para asegurar la aleatorización. De igual forma, se tomarán muestras de agua del embalse al azar de 1 metro cubico para estandarizar, estas al igual que las macrofitas recolectadas se preservarán en un envase plástico portable con agua proveniente del embalse hasta su traslado al laboratorio de la universidad. Luego, se usará la metodología aplicada por Sayago (2021), para el tratamiento de la biomasa de las 80 plantas tomadas de todas las zonas del humedal, como control se tomarán 10 plantas jóvenes y 10 plantas adultas de estas dos muestras, y serán adaptadas en tanques con agua del embalse como control del experimento para así medir los parámetros presentes en su medio normal y medir su eficiencia de extracción como individuo vivo. Luego, todas las demás plantas restantes de estas colonias serán limpiadas con agua destilada separando la raíz del tallo y las hojas, conservando todas las partes de la planta. Luego se secarán a 70 °C durante 48 h para eliminar la humedad y se triturarán la biomasa pulverizada será tamizada. Fase de laboratorio Medición de nutrientes Para la medición de nutrientes se realizarán pruebas de espectrofotometría de absorción atómica monitorizando los cambios en la absorbancia de nutrientes y bioelementos presentes en el agua como; el nitrógeno, cadmio, magnesio, hierro (540 nm), amoniaco, calcio (llama de aire/gas natural a 1.500°C y detección de la absorbancia a 423 nm), fosforo (azul de molibdeno, que posee un máximo de absorción de 690 nm), sodio y potasio (llama de aire y propano a 1925°C, emisión a 589 nm para sodio y 768 nm para potasio); y para la medición de cromo, todos los procedimientos para su determinación, para agua y sustratos, se realizaran implementando APHA (Procedimiento de la Asociación Americana de Salud Pública), para pruebas estándar (métodos estándar para el examen de agua y aguas residuales). Se medirán los nutrientes presentes en todas las muestras de agua antes de introducir las plantas completas y las plantas trituradas al agua. Medición de pH Para la medición de pH, esta se realizará antes de introducir las plantas y biomasa triturada y después de introducir las plantas y biomasa triturada a las muestras de agua una vez a la semana durante seis meses con ayuda de un pHmetro. Medición de temperatura e intensidad de luz Para la medición de la temperatura, esta se realizará con ayuda de un termómetro se realizará antes de introducir las plantas y biomasa triturada y después de introducir las plantas y biomasa triturada a las muestras de agua una vez a la semana durante seis meses. Para la medición de la intensidad de luz esta se realizará al igual que la metodología para el pH mencionada anteriormente, pero usando un fotómetro. Tratamiento de P. crassipes y evaluación de factores Unidad Experimental: La unidad experimental serán los 100 individuos del buchón de agua. Factores: en total son 15 factores, que serán aplicados a las muestras los cuales será; Temperatura, pH, Cadmio, Sodio, Potasio, Magnesio, Nitrógeno, Hierro, Amoníaco, Calcio, Fósforo, Cromo, DBO5 (Demanda Bioquímica de Oxígeno) intensidad de luz, y edad de la planta Niveles: Cada factor tendrá 2 niveles: alto y bajo. Los niveles específicos dependerán del rango de variación de cada factor. Variable de Respuesta: La variable de respuesta es la "cantidad de materia orgánica extraída por el buchón de agua al cabo de una semana". Diseño Experimental: Diseño factorial 2^15 (o diseño fraccional si el número de experimentos es demasiado grande): Debido a la cantidad de factores (15), se puede utilizar un diseño factorial completo. Esto permitirá estudiar los efectos principales y de interacción de los factores. Muestreo y Bloqueo: Dividiré los 100 individuos de buchón de agua en grupos más pequeños, denominados bloques, que son representativos de las condiciones iniciales. Dentro de cada bloque, aplicare las combinaciones de los factores. Replicación: Realizare al menos tres réplicas de cada combinación de factores dentro de cada bloque. Esto proporcionará una replicación adecuada para cada condición y reducirá la variabilidad no deseada. Variables de control: Mantén constantes aquellas variables que no son factores de interés, como la concentración de otros contaminantes o las características del hábitat donde se encuentra el buchón de agua. Medición de la eutrofización En los tratamientos se evaluarán los cambios semanales durante seis meses y para la medición del DBO5 que será la medición utilizada para evaluar la eutrofización, se medirá el contenido de clorofila de algas en la columna de agua. De igual forma también se medirá la eficiencia de extracción de materia orgánica usado por Lecca & Lizama (2014), con la demanda biológica de oxígeno (DBO5), la cual se mide transcurridos cinco días de reacción; introduciendo un volumen definido de la muestra líquida en un recipiente oscuro con un agitador magnético, se introducen algunas lentejas de carbonato de sodio, se sella con un sensor piezoeléctrico y se introduce el recipiente en una estufa refrigerada a 20°C. Medición del tiempo de exposición del flujo de agua al tratamiento Para la medición del caudal se hará un muestreo cada 100 ml con un caudal de 20ml/min, en donde para observar el tiempo de exposición este se empezará a medir cada día desde que se introduce la planta y comienza el biotratamiento. Medición de tratamiento continuo y eficiencia del buchón de agua en la extracción de materia orgánica Para el tratamiento continuo en distintos tanques del agua recolectada determinando mediante modelación matemática la constante de difusión de Fick (Kf), con base en esta constante de Fick se establecerá el rendimiento del biotratamiento y la intrapartícula. constante de difusión (Ks). Evaluando la cantidad de materia orgánica inicial y comparándola con la cantidad de materia orgánica final en términos de tiempo y concentración en ml en el agua o según la unidad del factor a evaluar. Análisis estadístico Realizar análisis de varianza (ANOVA) y análisis de regresión múltiple para identificar la importancia de los factores y sus interacciones en la cantidad de materia orgánica extraída por el buchón. REFERENCIAS Delgado Onofre, G. F. (2020). 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