Biologia de los microorganismos (531)

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348 G E N Ó M I C A , G E N É T I C A Y V I R O L O G Í A
del plásmido, además de Xgal, para probar la actividad �-galac-
tosidasa. Las colonias azules contendrán el plásmido sin nin-
gún DNA foráneo insertado (es decir, el plásmido simplemente 
circularizado sin ningún DNA foráneo), mientras que las colo-
nias que sean blancas contendrán el plásmido con DNA foráneo 
insertado y se seleccionarán para análisis posteriores (véase la 
Figura 11.20b para un ejemplo relacionado del sistema de selec-
ción colorimétrico blanco/azul).
Otros vectores plasmídicos
Se han desarrollado muchos vectores posteriores que tienen 
algunas características similares a las del pUC19 indicadas más 
arriba y además otras características útiles. Por ejemplo, algu-
nos vectores se han desarrollado especialmente para clonar pro-
ductos de DNA sintetizados por la polimerasa Taq mediante 
una PCR (Sección 11.3). La actividad enzimática de la polime-
rasa Taq añade un residuo de adenina independiente del molde 
en el extremo 3′ de los productos de la reacción de PCR. Se 
comercializan vectores linearizados que contienen extremos 
prominentes de residuos de timina que permiten el aparea-
miento de bases con el producto de la PCR y la ligación poste-
rior mediante la DNA ligasa (Figura 11.15).
Se han diseñado otros vectores para seleccionar directamente 
vectores recombinantes mediante la viabilidad celular, en lugar 
de cribado. Por ejemplo, es posible diseñar un vector con un 
MCS que contenga un gen tóxico. Cuando no se inserta DNA 
foráneo en el MCS que interrumpa el gen que codifica la toxina, 
el vector codifica una proteína letal en la célula hospedadora. 
Por tanto, solo pueden crecer las células que contengan el plás-
mido recombinante, en el que el gen se ha inactivado. 
La clonación con vectores plasmídicos es versátil y se utiliza 
mucho en ingeniería genética, especialmente cuando el fragmento 
que se desea clonar es relativamente pequeño. A menudo tam-
bién, se utilizan plásmidos como vectores de clonación si se desea 
la expresión del gen clonado, ya que los elementos reguladores se 
pueden manipular en el plásmido para obtener la expresión de los 
genes clonados en condiciones específicas (Sección 11.9).
MINIRREVISIÓN
 Explique por qué en clonación es necesario utilizar una enzima 
de restricción que corte el vector en un solo sitio.
 ¿Qué es un sitio de clonación múltiple o MCS?
 ¿Qué es la inactivación por inserción?
ligados en esa posición por la DNA-ligasa. Esto interrumpe el 
gen lacZ, un fenómeno llamado inactivación por inserción que 
puede utilizarse para detectar la presencia de DNA foráneo en 
el vector. Cuando se añade al medio el reactivo incoloro Xgal, 
la �-galactosidasa lo escinde y genera un producto azul. Así, la 
célula que contiene el vector sin DNA clonado forma colonias 
azules, mientras que las células con el vector con un inserto 
de DNA clonado no sintetizan �-galactosidasa y, por tanto, son 
blancas. 
Tras la ligación del DNA, los plásmidos resultantes son trans-
formados en células de E. coli. Las colonias se seleccionan en 
medios que contengan ampicilina, para seleccionar la presencia 
Vector
AmpR
MCS
DNA foráneo
Vector abierto
Vector recircularizado sin inserto Vector con inserto
Transformantes
blancos
(β-galactosidasa
inactiva)
Transformantes
azules
(β-galactosidasa
activa)
lacZ′
Daniel Nickrent and
David Clark
1. Digestión con enzima
de restricción
2. Unión con
DNA ligasa
3. Transformación en Escherichia
coli y selección en placas de
ampicilina con Xgal
Sitios de restricción compatibles ( )
Figura 11.14 Clonación en el vector plasmídico pUC19. El vector de
clonación y el DNA foráneo se abren por corte con una enzima de restricción 
compatible en las posiciones indicadas por las flechas. La inserción del DNA 
inactiva la �-galactosidasa y permite el cribado colorimétrico para detectar 
la presencia del inserto. La foto inferior muestra las colonias de Escherichia 
coli en una placa con Xgal. La enzima �-galactosidasa puede cortar el Xgal, 
normalmente incoloro, para formar un producto azul. AmpR indica el gen que 
codifica la resistencia a la ampicilina.
Unión 
con 
DNA 
ligasa
Vector 
recombinante 
con lacZ 
interrumpido
A
Producto
de PCR
AmpR
lacZ
A T
AT
T
TA
Figura 11.15 Vector para productos de PCR. El vector de clonación
linealizado contiene residuos de timina sobresalientes que se aparean con los 
residuos de adenina presentes en el extremo 3′ del producto de PCR generado 
por la Taq polimerasa. La unión de estos dos fragmentos de DNA producirá 
un plásmido circular con el gen lacZ interrumpido. AmpR indica el gen que 
codifica la resistencia a la ampicilina.
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