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1 UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTÍN DE AREQUIPA FACULTAD DE INGENIERÍA DE PROCESOS ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL “REMEDIACIÓN DE SUELOS CONTAMINADOS CON PLOMO (Pb) MEDIANTE EL EMPLEO DE GIRASOL (Helianthus annuus) Y ESTIÉRCOL DE LOMBRIZ ROJA (Eisenia foetida) EN CONDICIONES CONTROLADAS ” Tesis presentada por la Bachiller SHADAI EMILY FEBRES FLORES Para optar el título profesional de INGENIERA AMBIENTAL. Asesor: Dr. Guido Juan Sarmiento Sarmiento AREQUIPA - PERÚ 2019 2 JURADO DICTAMINADOR Luis Alberto Alvarez Soto Presidente Juan Manuel Jara Gonzales Juan Carlos Licona Paniagua Integrante Secretario 3 AGRADECIMIENTOS Agradezco a Dios por bendecirme con la vida, por guiarme a lo largo de mi existencia, ser el ente donde me sostuve cuando quise renunciar, por darme la fortaleza en aquellos momentos de dificultad y de debilidad. Gracias a mis padres: John y Matilde; por ser los principales promotores de mis sueños, por confiar y creer en mi, en mis expectativas, por los consejos, valores y principios que me han inculcado. Agradezco a todos los docentes de la Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental de la Universidad Nacional San Agustín Arequipa, por haber compartido sus conocimientos a lo largo de la preparación de mi profesión, de manera especial, al Ing. Guido Sarmiento, asesor del proyecto de tesis quien ha guiado con su paciencia, y su rectitud como docente. DEDICATORIA La presente tesis es dedicada principalmente a Dios, por ser el inspirador y el principal proveedor de fuerza para continuar en este proceso de obtener uno de los anhelos más deseados. A mis padres, por su amor, trabajo y sacrificio en todos estos años, gracias a ustedes he logrado llegar hasta aquí y convertirme en lo que soy. Es un orgullo y privilegio ser su hija. A mis hermanos, tías y abuelos por estar siempre presentes, acompañandome y por el apoyo moral, que me brindaron a lo largo de esta etapa. A todas las personas que me han apoyado y han hecho que el desarrollo de la presente tesis se realice con éxito. 4 ÍNDICE CONTENIDO: PAGINA: RELACIÓN DE CUADROS 6 RELACIÓN DE FIGURAS 8 RESUMEN 10 ABSTRACT 12 CAPITULO I: GENERALIDADES 14 INTRODUCCIÓN 14 ANTECEDENTES 15 HIPÓTESIS 18 OBJETIVOS 18 CAPITULO II: REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA 19 2.1 CONTAMINACIÓN DE SUELOS 19 2.1.1 Generalidades 19 2.1.2 Contaminación por elementos pesados 20 2.1.3 Contaminación de suelos por plomo 22 2.1.4 Contaminación por plomo en el cuerpo humano 25 2.2 REMEDIACIÓN DE SUELOS CONTAMINADOS 30 2.2.1 Generalidades 30 2.2.2 Tecnologías de remediación de suelos contaminados 31 2.2.3 Fitorremediación de suelos contaminados 33 2.2.4 Biorremediación de suelos contaminados 37 5 CAPITULO III: MATERIAL Y METODOS 40 3.1 DESCRIPCION DE LAS CONDICIONES EXPERIMENTALES 40 3.2 SECUENCIA DE LA INVESTIGACIÓN 41 3.3 MATERIALES 42 3.4 MÉTODO 43 3.5 TRATAMIENTOS Y DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN 45 3.5.1 Tratamientos estudiados en la investigación 45 3.5.2 Diseño experimental y análisis estadístico 46 3.5.3 Disposición de tratamientos 47 3.6 EVALUACIONES 48 3.6.1 Previo al proceso de remediación 48 3.6.2 Durante el proceso de remediación 49 CAPITULO IV: RESULTADOS Y DISCUSION 52 4.1 PREVIO AL PROCESO DE REMEDIACIÓN 52 4.1.1 Germinación de semillas de girasol 52 4.1.2 Fitotoxicidad en semillas de girasol 53 4.1.3 Análisis de suelo 56 4.1.4 Análisis de estiércol de lombriz 58 4.1 DURANTE EL PROCESO DE REMEDIACIÓN 59 4.1.1 Determinación de plomo no remediado y remediado en el suelo 59 4.2.2 Determinación de plomo en drenaje 65 4.2.3 Plomo en plantas de girasol; factor de bioconcentración y traslocación de plomo 67 6 4.2.4 Tamaño de plantas de girasol (parte aérea) 73 4.2.5 Tamaño de raíces de girasol 75 4.2.6 pH del suelo 78 4.2.7 Análisis edafológico final del suelo 80 CAPITULO V: CONCLUSIONES 82 CAPITULO VI: RECOMENDACIONES 83 CAPITULO VII: BIBLIOGRAFIA 84 ANEXOS 89 7 RELACIÓN DE CUADROS Cuadros: Página Cuadro 1: Tratamientos propuestos para la investigación. Arequipa. 2019. 45 Cuadro 2: Estructura del ANVA. 47 Cuadro 3: Resultados de la prueba de germinación de semillas de girasol. Arequipa. 2019. 53 Cuadro 4: Resultados de la prueba de fitotoxicidad en semillas de girasol por aplicación de 35 ppm de plomo. Arequipa. 2019. 54 Cuadro 5: Resultados de la prueba de fitotoxicidad en semillas de girasol por aplicación de 70 ppm de plomo. Arequipa. 2019. 54 Cuadro 6: Resultados de la prueba de fitotoxicidad en semillas de girasol por aplicación de 105 ppm de plomo. Arequipa. 2019. 55 Cuadro 7: Resultados de análisis de suelo empleado en el proceso de remediación. Arequipa. 2019. 56 Cuadro 8: Resultados de estiércol de lombriz empleado en el proceso de remediación. Arequipa. 2019. 59 Cuadro 9: Resultados del contenido de plomo no remediado (ppm) en el suelo al final del proceso de remediación. Arequipa. 2019. 60 Cuadro 10: Resultados del contenido de plomo remediado (ppm) en el suelo al final del proceso de remediación. Arequipa. 2019. 61 Cuadro 11: Resultados de eficiencia de remediación de plomo para cada tratamiento evaluado al final del proceso de remediación. Arequipa. 2019. 61 Cuadro 12: Resultados del contenido de plomo (ppm) en el drenaje recolectado al final del proceso de remediación. Arequipa. 2019. 66 Cuadro 13: Resultados del contenido de plomo (ppm) en plantas de girasol de los tratamientos T1 y T3 evaluado a 70 días de la instalación de la investigación. Arequipa. 2019. 67 8 Cuadro 14: Resultados del contenido de plomo (ppm) en plantas de girasol de los tratamientos T1 y T3 evaluado a 90 días de la instalación de la investigación. Arequipa. 2019. 67 Cuadro 15: Resultados del factor de bioconcentración (FB) de la parte aérea de plantas de girasol para los tratamientos T1 y T3 evaluado a 100 días de la instalación de la investigación. Arequipa. 2019. 70 Cuadro 16: Resultados del factor de bioconcentración (FB) de raices de plantas de girasol para los tratamientos T1 y T3 evaluado a 100 días de la instalación de la investigación. Arequipa. 2019. 70 Cuadro 17: Resultados del factor de traslocación (FT) en plantas de girasol para los tratamientos T1 y T3 evaluado a 100 días de la instalación de la investigación. Arequipa. 2019. 71 Cuadro 18: Tamaño de plantas de girasol (cm) a 30 días de la instalación de la investigación para los tratamientos T1 y T3. Arequipa. 2019. 73 Cuadro 19: Tamaño de plantas de girasol (cm) a 70 días de la instalación de la investigación para los tratamientos T1 y T3. Arequipa. 2019. 73 Cuadro 20: Tamaño de plantas de girasol (cm) a 100 días de la instalación de la investigación para los tratamientos T1 y T3. Arequipa. 2019. 74 Cuadro 21: Tamaño de raíces de plantas de girasol (cm) a 100 días de la instalación de la investigación para los tratamientos T1 y T3. Arequipa. 2019. 76 Cuadro 22: Resultados de pH del suelo al final del proceso de remediación. Arequipa. 2019. 79 Cuadro 23: Análisis edafológico final del suelo correspondiente al tratamiento T2 luego del proceso de remediación. Arequipa. 2019. 81 9 RELACIÓN DE FIGURAS Figuras: Página Figura 1: Compartimentalización de los metales pesados en el suelo (Fuente: López Arias & Grau Corbí, 2004; citado por Diez, 2008). 22 Figura 2: Ciclo biogeoquímico del Plomo (Fuente: Autor desconocido) 27 Figura 3: Toxicocinética del Plomo (Fuente: Autor desconocido) 29 Figura 4: Vías de exposicióny distribución del plomo en el organismo humano (Fuente: Valdivia, 2005) 30 Figura 5: Clasificación de tecnologías de remediación de sitios contaminados. (Fuente: Alcaino,2012) 32 Figura 6: Principales tecnologías de remediación aplicada en suelos clasificado según el tipo de tratamiento. (Fuente: Alcaino, 2012) 33 Figura 7: Mecanismos involucrados en la tecnología de la fitorremediación (Fuente:Tangahu et al, 2011; citado por Martinez, 2018). 35 Figura 8: Descripción de tratamientos estudiados en la investigación. Arequipa. 2019. 46 Figura 9: disposición de tratamientos estudiados en la investigación. Arequipa. 2019. 47 Figura 10: Resultados del proceso de remediación de suelos contaminados con plomo por cada tratamiento evaluado. Arequipa.2019. 63 Figura 11: Porcentaje de plomo remediado y no remediado (final) por cada tratamiento evaluado. Arequipa.2019. 65 Figura 12: Evolución del tamaño de plantas de girasol (parte aérea) expresado en centímetros durante el proceso de remediación para los tratamientos T1 y T3. 75 Figura 13: Tamaño de plantas de girasol (parte aérea) y de raíces evaluado al final del proceso del proceso de remediación para los tratamientos T1 y T3. 77 Figura 14: Modelo de correlación lineal entre el plomo remediado y el pH del suelo. 80 10 RESUMEN La contaminación por plomo es un problema ambiental que debe ser gestionado ambientalmente mediante tecnologías de remediación adecuadas a fin de reducir su impacto negativo en los componentes ambientales, especialmente en el recurso suelo. Los objetivos de la investigación fueron determinar el tratamiento más efectivo en la remediación de suelos contaminados con plomo (Pb); determinar la concentración de plomo (Pb) en el suelo y sus principales propiedades edáficas en el mejor tratamiento y precisar el comportamiento de la planta de girasol en el proceso de remediación. Para la ejecución del estudio se recopilo el material necesario y se instaló en ambientes del invernadero de propagación de plantas cultivadas de la Facultad de Agronomía de la UNSA, en Arequipa, Perú. Las condiciones de cuidado y tratamiento fueron controladas, a fin de contar con resultados comparativos de acuerdo con los análisis ejecutados a lo largo de la invetsigación. Para el desarrollo de la investigación, se evaluaron 4 tratamientos, los que consistieron en: - Tratamiento T1: Suelo contaminado con Pb + estiércol de lombriz + girasol; - Tratamiento T2: Suelo contaminado con Pb + estiércol de lombriz; - Tratamiento T3: Suelo contaminado con Pb + girasol; - Tratamiento T4: Suelo contaminado con Pb. Del análisis, procesamiento de datos y gestión de resultados, se obtuvo que el tratamiento T2 logró la mayor remoción de plomo del suelo contaminado con una eficiencia del 81,21 %. 11 Este resultado presenta diferencia estadística significativa en relación a los tratamientos T1, T4 y T3. Aunque todos los tratamientos remediaron el plomo (Pb) por debajo del ECA nacional (Estándares de Calidad Ambiental) para suelos agrícolas (70 ppm Pb). El T2 logró remediar el nivel inicial de plomo (Pb) de 121,05 ppm hasta 22,75 ppm logrando una remoción de 98,30 ppm; este tratamiento también incrementó el contenido de la materia orgánica, la capacidad de intercambio catiónico, pH y los niveles de N, P y K en el suelo sometido al proceso de remediación. Considerando el factor de traslocación de plomo (FT), la planta de girasol en presencia de estiércol de lombriz (T1: Suelo contaminado con Pb + estiércol de lombriz + girasol) se comportan como planta exclusora (FT < 1) favoreciendo el mecanismo de estabilización de plomo (Pb); sin embargo, en ausencia de estiércol de lombriz (T3: Suelo contaminado con Pb + girasol) se comporta como planta acumuladora (FT >1) favoreciendo el mecanismo de fitoextracción de plomo (Pb). Cada uno de los tratamientos aplicados han sido analizados en las mismas condiciones, con el objeto de determinar el tratamiento con mayor eficiencia y presentar resultados óptimos y comparables. Palabras clave: Remediación; plomo (Pb), girasol, estiércol de lombriz. 12 ABSTRACT Lead contamination is an environmental problem that must be managed environmentally through appropriate remediation technologies in order to reduce its negative impact on environmental components, especially on the soil resource. The objectives of the research were to determine the most effective treatment in the remediation of soils contaminated with lead (Pb); determine the concentration of lead (Pb) in the soil and its main edaphic properties in the best treatment and specify the behavior of the sunflower plant in the remediation process. For the execution of the study, the necessary material was collected and installed in the greenhouse for the propagation of cultivated plants of the Faculty of Agronomy of the UNSA, in Arequipa, Peru. The conditions of care and treatment were controlled, in order to have comparative results according to the analyzes carried out throughout the investigation. For the development of the research, 4 treatments were evaluated, which consisted of: - Treatment T1: Soil contaminated with Pb + earthworm manure + sunflower; - Treatment T2: Soil contaminated with Pb + worm manure; - Treatment T3: Soil contaminated with Pb + sunflower; - Treatment T4: Soil contaminated with Pb. From the analysis, data processing and results management, it was obtained that the T2 treatment achieved the highest removal of lead from the contaminated soil with an efficiency of 81.21%. 13 This result presents a statistically significant difference in relation to treatments T1, T4 and T3. Although all treatments remedied lead (Pb) below the national ECA (Environmental Quality Standards) for agricultural soils (70 ppm Pb). The T2 managed to remedy the initial level of lead (Pb) from 121.05 ppm to 22.75 ppm, achieving a removal of 98.30 ppm; This treatment also increased the content of organic matter, the cation exchange capacity, pH and the levels of N, P and K in the soil subjected to the remediation process. Considering the lead translocation factor (FT), the sunflower plant in the presence of worm manure (T1: Soil contaminated with Pb + earthworm manure + sunflower) behave as an exclusion plant (FT <1) favoring the stabilization mechanism lead (Pb); However, in the absence of worm manure (T3: Soil contaminated with Pb + sunflower) it behaves as an accumulator plant (FT> 1) favoring the mechanism of lead phytoextraction (Pb). Each of the applied treatments have been analyzed under the same conditions, in order to determine the treatment with greater efficiency and present optimal and comparable results. Keywords: Remediation; lead, sunflower, worm manure. 14 CAPÍTULO I GENERALIDADES INTRODUCCIÓN Actualmente en varias ciudades de Latinoamérica entre ellas Arequipa, el desarrollo de actividades industriales así como la gran actividad del parque automotor debido al uso de gasolina de bajo octanaje con contenido de plomo emiten gases tóxicos que polucionan la atmósfera; estos gases con partículas de plomo se precipitan en los suelos generando un problema potencial de contaminación con plomo el mismo que debe ser gestionado ambientalmente mediante tecnologías de remediación adecuadas a fin de reducir el impacto negativo en las propiedades del recurso suelo y su entorno. El plomo es un elemento que se concentra en el suelo y que en niveles por encima de los E.C.A. (Estándares de calidad ambiental) se convierten en perjudiciales para este recurso logrando su degradación con diversos impactos negativos en el entorno. La principal vía de biodisponibilidad son el suelo y el polvo, donde se concentra y por medio del cual ingresa a los organismos. La mala gestión de actividades y procesos que generan materialescon plomo ha sido causante de numerosos problemas ambientales en todo el mundo; sin embargo, no todo el plomo del suelo presenta el mismo grado de movilidad o biodisponibilidad. La distribución química del plomo en el suelo depende del pH, de la mineralogía, textura, materia orgánica, así como de la naturaleza de los compuestos de plomo contaminantes. 15 El problema de contaminación por plomo se biomagnifica cuando este precipita en suelos agrícolas debido a que podría contaminar las especies vegetales cultivadas con riesgos en la salud de la población que consume alimentos procedentes de dichos terrenos. La investigación se justifica debido a que el interés de la presente investigación es desarrollar tecnologías de remediación efectivas y además accesibles a las condiciones de nuestro país con el propósito de atenuar el impacto negativo de la concentración de plomo en suelos con aptitud agrícola; en este contexto la fitorremediación con especies vegetales cultivables como el girasol y el uso de estiércol de lombriz se convierten en una alternativa viable a ser estudiada con el propósito de definir su eficiencia remediadora en condiciones controladas. ANTECEDENTES Estudios anteriores realizados, presentan la ejecución de diferentes pruebas relacionadas a la remediación de suelos contaminados con metales pesados, mediante el empleo de diferentes especies biológicas. Ibarra et al (2017); reportan una investigación realizada con el objetivo de reducir la cantidad de plomo en los suelos contaminados por medio de la planta de girasol Helianthus annuus L, para crecer, absorber y acumular metales pesados como el plomo en sus tejidos, se instaló el proyecto en un lugar adecuado, que duró 60 días. Se utilizó el diseño estadístico completamente al azar, con tres repeticiones. Las muestras de suelos fueron tomadas en los relaves de la Unidad Minera Graciela del sector Corcona con acondicionadores: humus de lombriz, aserrín y sustrato (suelo contaminado); y como planta fitoextractora, el girasol Helianthus annuus L. 16 Los resultados arrojaron que la aplicación de Suelo contaminado más aserrín obtuvo un mayor crecimiento en altura. Además, el tratamiento de suelo contaminado más humus extrajo y acumulo mayor cantidad de metal pesado Pb, en comparación con los demás tratamientos. Esto confirma que la planta de girasol es un buen fitoextractor por haber acumulado plomo de 1116.67mgPb/Kg de suelo. Chico – Ruiz, et al (2012); seleccionó plántulas de “girasol” con características semejantes, se transplantaron a macetas de tecnopor de 1,5 kg de capacidad y cada una contenía 50% de arena gruesa y 50% de arena fina. En cada maceta se colocaron 3 plántulas y en total fueron 20 plantas por tratamiento. Las plántulas de 20 días de crecimiento fueron sometidas a los siguientes tratamientos: 100 µM Pb/L, 200 µM Pb/L, 300 µM Pb/L, 400 µM Pb/L, 500 µM Pb/L. Al término del experimento, las plantas fueron separadas en parte aérea y radicular y se procesaron para determinar la concentración de plomo en estos tejidos. Además, se tomaron medidas de longitud de raíz (en centímetros), tallo (en centímetros), peso fresco (en gramos) y peso seco (en gramos) de la raíz y el tallo, respectivamente. Cada alteración morfológica fue anotada (clorosis, quemaduras, deformación de hojas, etc). Se concluye que la longitud de la raíz no se ve afectada por la concentración de plomo y la mayor concentración se da en las raíces secundarias y son capaces de tolerar concentraciones de 500 mg/l de plomo. López, et al (2006); publicó un trabajo de investigación con el objetivo de recuperar un suelo contaminado con plomo (Pb), en cuatro áreas de 1.25 m-3 de suelo con 750 mg de Pb por kg-1 de suelo y cuatro con 1000 mg kg-1 de plomo (Pb), se agregaron 10.4 mg L-1 de agua de ácidos fúlvicos extraídos de una composta (AFM), 0.6 mL L-1 de K-tionic (K) (ácidos fúlvicos comerciales) y 1 mg L-1 de DTPA (agente quelatante sintético) y se sembraron 41 plantas/m-2 de girasol ornamental (GO) del híbrido “sunbrigth”. 17 Se midió la altura de planta (AP), el diámetro del tallo (DT), diámetro externo (DEC) e interno del capítulo floral (DIC), días a cosecha (DC) y la cantidad de plomo en la planta (tejido vegetal de tallo, follaje y capítulo). No hay efecto estadístico significativo de los tratamientos en la AP y el DT, mientras que en el DEC, DIC y DC, el efecto estadístico fue altamente significativo y al adicionar los AFM al suelo contaminado con 1000 mg de Pb por kg-1 de suelo, el girasol extrajo 1.3 kg de Pb ha-1, lo que representó 85.7 % más que el girasol producido en el suelo contaminado con 750 mg de Pb por kg-1 de suelo y la aplicación del K (0.7 kg de Pb ha-1). Con el uso de los AFM y el GO, es posible recuperar suelos contaminados con plomo, pero en función del tiempo. Vargas (2013); evaluó la capacidad fitoextractora del girasol al inocularlo con Rizophagus intraradices, que fueron sembradas en macetas con una mezcla de suelo y agrolita v/v 1:1, contaminado artificialmente con 0, 400, 800 y 1000 mg·kg-1 de Pb y 0, 37, 60 y 120 mg·kg-1 de Cd. Para cada tratamiento se colocaron, bajo condiciones de invernadero, 2 semillas por maceta con 5 repeticiones. La germinación promedio del girasol fue de 56 al 64% en Pb y del 48 al 60% en Cd, el porcentaje de colonización micorrízica fue del 50 al 76% en Cd y del 42 al 60% en Pb. Las concentraciones de Pb y Cd en raíz, parte aérea y flor, se determinaron en un espectrofotómetro de absorción atómica. Los resultados demuestran que la adición de micorrizas arbusculares presentó diferencias estadísticas significativas (α< 0.005) con respecto al tratamiento no micorrizado de Pb en las distintas partes de la planta. En el caso del Cd no se presentan diferencias estadísticas significativas para ninguna parte de la planta. Estos resultados demuestran que el girasol tiene capacidad fitoextractora para el Pb, y en presencia de Cd presenta malformaciones a nivel de flor. La semilla de girasol tiene la capacidad de germinar a elevadas concentraciones de Pb y Cd, la adición de micorrizas arbusculares es una alternativa biológica en la fitoextracción de suelos contaminados por Pb. 18 HIPÓTESIS La hipótesis planteada para la investigación fue: “La utilización de girasol (Helianthus annuus) y estiércol de lombriz (Eisenia foetida) como una alternativa de remediación permitirá disminuir el nivel de plomo en suelos contaminados por este elemento”. OBJETIVOS: Los objetivos: General y específicos planteados en la investigación fueron: GENERAL: Evaluar la capacidad remediadora del girasol (Helianthus annuus) y estiércol de lombriz (Eisenia foetida) en suelos contaminados con plomo. ESPECIFICOS: - Determinar el tratamiento más efectivo en la remediación de suelos contaminados con plomo. - Determinar la concentración de plomo en el suelo y sus principales propiedades edáficas luego del proceso de remediación en el mejor tratamiento. - Precisar el comportamiento de la planta de girasol en el proceso de remediación del suelo contaminado con plomo. 19 CAPÍTULO II REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA 2.1 CONTAMINACIÓN DE SUELOS 2.1.1 Generalidades El suelo se forma por la interacción de los sistemas atmósfera, hidrósfera y biósfera sobre la superficie de la geósfera, ocupa la interfase entre la geósfera y los demás sistemas, en la llamada zona crítica (Galán, Romero; 2008), la parte más dinámica de la superficie de la tierra. La meteorización química y mecánica de las rocas y la influencia de ciertos procesos microbiológicos producen el suelo. La meteorización está controlada esencialmente por la energía solar, que regula el ciclo del agua y alimenta los sistemas vivientes, y por circunstancias locales favorables (como la topografía) y propiedades intrínsecas de las rocas (permeabilidad, alterabilidad). Despuésde un largo periodo de meteorización, y bajo condiciones climáticas estables, el suelo puede alcanzar su equilibrio. Pero cuando uno de los parámetros del sistema varía, el equilibrio se rompe. La interacción con el hombre, un componente singular de la biosfera, puede romper también el equilibrio, debido a su uso (agricultura, industria, minería, ganadería, etc.). Este tipo de modificación negativa del suelo se denomina normalmente degradación (Galán, Romero; 2008). La presencia en los suelos de concentraciones nocivas de algunos elementos químicos y compuestos (contaminantes) es un tipo especial de degradación que se denomina contaminación. 20 El contaminante está siempre en concentraciones mayores de las habituales (anomalías) y en general tiene un efecto adverso sobre algunos organismos. Por su origen puede ser geogénico o antropogénico. Los primeros pueden proceder de la propia roca madre en la que se formó el suelo, de la actividad volcánica o del lixiviado de mineralizaciones. Por el contrario, los antropogénicos se producen por los residuos peligrosos derivados de actividades industriales, agrícolas, mineras, etc. y de los residuos sólidos urbanos. Desde un punto de vista legal, los contaminantes antropogénicos son los verdaderos contaminantes (Galán, Romero; 2008). 2.1.2 Contaminación por elementos pesados Se consideran como metales pesados el plomo cadmio, cromo, mercurio, zinc, cobre, plata y arsénico, constituyen un grupo de gran importancia, ya que algunos son esenciales para las células, pero en altas concentraciones pueden resultar tóxicos para los seres vivos, tales como humanos, organismos del suelo, plantas y animales (Sierra, 2006). Los metales pesados contribuyen fuertemente a la contaminación ambiental, la cantidad de metales disponibles en el suelo está en función del pH, el contenido de arcillas, contenido de materia orgánica, la capacidad de intercambio catiónico y otras propiedades que las hacen únicas en términos de manejo de la contaminación (Sierra, 2006). Los metales tienden a acumularse en la superficie del suelo quedando accesibles al consumo de las raíces de los cultivos (Puga et al. 2006); las plantas cultivadas en suelos contaminados absorben en general más oligoelementos y la concentración de éstos en los tejidos vegetales está a menudo directamente relacionada con su abundancia en los suelos, y especialmente en la solución húmeda (Puga et al. 2006). 21 Puga et al. (2006) menciona que excesivas concentraciones de metales en el suelo podrían impactar la calidad de los alimentos, la seguridad de la producción de cultivos y la salud del medio ambiente, ya que estos se mueven a través de la cadena alimenticia vía consumo de plantas por animales y estos a su vez por humanos. Los contaminantes pueden abandonar un suelo por volatilización, disolución, lixiviado o erosión, y pasar a los organismos cuando pueden ser asimilables (bioasimilables), lo que normalmente ocurre cuando se encuentran en forma más o menos soluble. En concreto, la posibilidad de que un elemento (contaminante o no) quede libre y pase a disolución en un suelo se llama disponibilidad. La biodisponibilidad sería el grado de libertad en que se encuentra un elemento o compuesto de una fuente potencial para ser capturado por un organismo (ingerido o adsorbido) (Galán, Romero, 2008). Normalmente sólo una fracción pequeña de una sustancia potencialmente contaminante de un medio es biodisponible. Su efecto suele ser negativo, pero también puede ser indiferente para un organismo específico (Galán, Romero, 2008). En general, los metales pesados incorporados al suelo pueden seguir cuatro diferentes vías: quedan retenidos en el suelo, ya sea disueltos en la fase acuosa del suelo, ocupando sitios de intercambio o específicamente adsorbidos sobre constituyentes inorgánicos del suelo, asociados con la materia orgánica del suelo y/o precipitados como sólidos puros o mixtos; pueden ser absorbidos por las plantas y así incorporarse a las cadenas tróficas; pasan a la atmósfera por volatilización y se movilizan a las aguas superficiales o subterráneas (Sierra, 2006). 22 Figura 1: Compartimentalización de los metales pesados en el suelo (Fuente: López Arias & Grau Corbí, 2004; citado por Diez, 2008). Los factores que influyen en la movilización de metales pesados en el suelo son características del suelo: pH, potencial redox, composición iónica de la solución del suelo, capacidad de intercambio (catiónico y/o aniónico), presencia de carbonatos, materia orgánica, textura, entre otras. La naturaleza de la contaminación y el origen de los metales y formas de deposición y condiciones medio ambientales producen acidificación, cambios en las condiciones redox, variación de temperatura y humedad en los suelos (Peña, Beltrán; 2012) 2.1.3 Contaminación de suelos por plomo El plomo es un contaminante mayor en el ambiente y que genera gran preocupación para la salud humana y los ecosistemas debido a que por peso molecular tiende acumularse en suelos, sedimentos y cuerpos de agua en forma rápida (Chávez, 2014) y a permanecer en el ambiente como un contaminante atmosférico. 23 El suelo es contaminado con plomo principalmente por depósito de partículas del aire y por agua contaminada por actividades industriales, asimismo, el desgate de las pinturas con plomo de las casas contaminan los suelos; los plaguicidas con contenido de plomo (arseniato de plomo), contaminan los suelos, especialmente los suelos agrícolas. Las concentraciones normales en el suelo no contaminado están entre 5 – 25 mg/kg. En áreas contaminadas se pueden encontrar en el suelo concentraciones de hasta 8 g/kg. A distancias de 1 hasta 25 metros de las vías de tránsito más importantes, las concentraciones de plomo en los suelos pueden llegar hasta los 2 000 mg/kg. En los suelos colindantes a fundiciones se han medido concentraciones de plomo tan altas como 60 000 mg/kg. En los suelos urbanos, el plomo se encuentra como una mezcla de polvo, restos de pintura y partículas atmosféricas con plomo que se sedimentan en el suelo. Puesto que el plomo no se disipa, se biodegrada o decae, cuando se deposita en el suelo puede ser una fuente de exposición a largo plazo. El plomo queda inmóvil en el componente orgánico del suelo, quedando retenido en las capas superiores (2 cm – 5 cm) de los suelos no alterados o en las capas más profundas cuando se ha removido (Robles; 2009) El plomo (Pb) se considera un contaminante ecotoxicológico ya que su uso provoca contaminación ambiental y exposición en humanos. La principal vía de biodisponibilidad son el suelo y el polvo, donde se concentra y por medio del cual ingresa a los organismos. El manejo inadecuado de materiales con plomo ha sido causante de numerosos problemas ambientales en todo el mundo; sin embargo, no todo el plomo del suelo presenta el mismo grado de movilidad o biodisponibilidad. La distribución química del plomo en el suelo depende del pH, de la mineralogía, textura, materia orgánica, así como de la naturaleza de los compuestos de plomo contaminantes. El suelo es uno de los mayores reservorios en los cuales se acumula la contaminación ambiental (Sierra, 2006). 24 Más del 90% de la contaminación ambiental producida es retenida en las partículas de suelo y cerca del 9% es interceptada en los sedimentos acuáticos. Particularmente, la contaminación de un suelo contaminado con Pb es de preocupación ya que éste presenta un alto tiempo de residencia en el suelo, estableciéndose un equilibrio dinámico con la hidrosfera, atmósfera y biosfera y de esta forma alterando el ecosistema, incluyendo al ser humano (Sierra, 2006). En el suelo, el plomo se encuentra principalmente en forma de Pb+2, también es conocido su estado de oxidación +4. No realiza un papel esencial en las plantas; la absorción, encaso de presentarse, es de un modo pasivo, la tasa de absorción se reduce al aumentar el pH (PbCO3 es insoluble) y por bajas temperaturas. El Pb a pesar de ser soluble en el suelo, es absorbido principalmente por los pelos de las raíces, y es almacenado en un grado considerable en las paredes celulares, esta absorción varía significativamente en relación con la concentración presente en los suelos, así como por las varias formas en que el Pb se presenta. La absorción vegetal de este metal se da principalmente por la vía estomática. En suelos contaminados por plomo, este generalmente se localiza en la zona más superficial debido a que en esta zona se acumula la materia orgánica con la cual forma quelatos (Callirgos, 2014). Es importante señalar que el plomo presente en el aire se deposita en los suelos; el plomo está presente en diversas actividades industriales ya sea como componente de la materia prima, como en el caso de las industrias de baterías, antidetonantes para gasolina, municiones y pigmentos para pintura o como parte de los subproductos del proceso, como es el caso de la imprenta y de soldadura; algunos cultivos cercanos a zonas de alto tránsito de vehículos pueden acumular plomo atmosférico (Oriundo, Robles; 2009). 25 2.1.4 Contaminación por plomo en el cuerpo humano El plomo es un contaminante de la atmósfera, hidrósfera y la edafósfera, llega a los suelos a partir de residuos industriales, de la minería, de la deposición atmosférica y a partir de la roca madre, si presenta este compuesto; el suelo puede inmovilizarlo gracias a la materia orgánica y la arcilla, pero si hay pH acido el Pb es móvil y será tomado por las plantas. El Pb entra en el cuerpo humano por ingestión directa, por inhalación de polvo o por la cadena alimentaria. En el organismo se acumula principalmente en el tejido óseo, pero también en el hígado, medula renal y eritrocitos. Su principal vía de eliminación es la orina, aunque también lo hará por las heces, sudor, leche materna. La intoxicación por este metal afecta al sistema hematopoyético produciendo anemia, al SNC produciendo encefalopatías y en casos extremos puede producir la muerte (Barrio, 2008). La manera en la que ingresa este metal al cuerpo, en el caso de los humanos, es por medio de diversas vías tales como la inhalación de aire con partículas de plomo o el consumo de agua y alimentos contaminados. Según estudios, se ha determinado que los síntomas de una exposición a plomo varían desde ligeros dolores de cabeza, irritabilidad y dolor abdominal hasta síntomas relacionados con el sistema nervioso (Chávez, 2014). Lo más preocupante es que los efectos de la exposición al plomo son visibles tanto a largo como a corto plazo, y no es necesaria la exposición a muy elevadas concentraciones para presentar síntomas. Así, por ejemplo, se ha demostrado que una larga exposición a metales pesados en bajas concentraciones tiene una relación a la generación de tumoraciones cancerígenas, siendo el cáncer al pulmón y al estómago los más reportados (Chávez, 2014). 26 Es muy mencionada la disminución de la capacidad intelectual en niños debido a la exposición prolongada a plomo (Chávez, 2014), así como desordenes neuropsiquiátricos como deficiencia de atención y comportamiento antisocial (Chávez, 2014). Así mismo, se ha asociado la reducción de la capacidad reproductiva a la exposición a plomo (Chávez, 2014), así como otras enfermedades del tipo cardiovascular en adultos (Chávez, 2014). La intoxicación por plomo se conocía antiguamente con el nombre de “Saturnismo” y en la actualidad por “Plumbosis”. La Conferencia Americana de Higienistas Industriales (ACGIH) ha clasificado a los compuestos de Pb2+ como productos cancerígenos para los humanos. Estos compuestos entran en el cuerpo humano o bien por vía respiratoria o bien por la ingesta de agua o alimentos. De todo el plomo que se inhala se absorbe entre el 30 y el 50%, y entre el 5 y el 15% del que se ingiere. Las cantidades absorbidas dependen de diferentes factores, tamaño de las partículas, edad de la persona y estado nutricional de la misma, entre otros. El plomo que no se absorbe se elimina por la orina, los excrementos, el sudor, los cabellos y la leche materna. Una vez absorbido éste puede tardar más de 20 años en ser eliminado y si se supera una cierta cantidad nunca se elimina totalmente, por lo que degenera en una enfermedad crónica que puede llevar al paciente a terminar en coma y al final morir. Los síntomas principales cuando hay una intoxicación son: dolor de cabeza, náuseas, cansancio, dolor articular que pueden ir acompañadas de vómitos, estreñimiento y gusto metálico. Al ser unos síntomas muy corrientes a veces es difícil diagnosticar la enfermedad. 27 Figura 2: Ciclo biogeoquímico del Plomo (Fuente: Autor desconocido) Vías de absorción: El plomo puede ingresar al organismo por tres vías: • Respiratoria. • Digestiva. • Dérmica o cutánea El plomo inorgánico solo puede acceder por las dos primeras y no puede ser metabolizado por el organismo, mientras que el plomo orgánico puede penetrar por cualquiera. Por la piel la entrada del plomo inorgánico es mínima, pero el plomo orgánico pasa a través de los folículos pilosos, glándulas sebáceas y sudoríparas directo al torrente sanguíneo. 28 El plomo que se absorbe por vía respiratoria es cercano al 40 % depositado en los pulmones, se encuentra en sangre circulándose alrededor de 50 h, pasándose un porcentaje a tejidos, o es eliminado (Fig. 2), aunque cierta cantidad de absorción puede llevarse a cabo en las vías aéreas superiores, la porción más relevante tiene lugar en las vías respiratorias inferiores, a nivel de alvéolo, a través de la circulación pulmonar. El grado de absorción de esta vía depende de la concentración ambiental, del tiempo de exposición, de la forma física de la porción de polvo o tamaño de la partícula respirable, es por lo general inferior a 5 µm, y de factores personales como la edad, la frecuencia y volumen respiratorio. En cuanto a la vía digestiva se refiere, cuando las partículas de polvo son ingeridas directo a través de las manos, alimentos, bebidas o cigarrillos que proviene de la contaminación ambiental, el plomo se fija en la saliva y se traga, seguido por el tracto digestivo y se debe al ingreso por la comida, bebidas o la tierra; es estimado que los niños de 2 a 3 años ingieren alrededor de 100 mg de tierra por día. Esta vía depende del estado físico y químico del metal, el transito gastrointestinal, la edad, estado fisiológico, estado nutricional, deficiencias de los niveles de calcio, hierro, fósforo o zinc, si existe niveles altos de grasa en la dieta, la absorción puede ser mayor, ingesta inadecuada de calorías, presencia de estómago vacío o ayuno prolongado y factores genéticos del individuo. Como se ilustra de forma general en la Figura 3, la exposición al plomo tiene lugar a través de tres rutas principales: puede ser inhalado y absorbido por completo a través del sistema respiratorio; puede ser ingerido y absorbido por el tracto gastrointestinal o puede ser por absorción percutánea que se genera al tener contacto con la piel (Nordberg, 2001). 29 Figura 3: Toxicocinética del Plomo (Fuente: Autor desconocido) Una vez en el cuerpo, el plomo no se metaboliza, sino que se absorbe activamente, pero la velocidad de absorción depende de su forma, tamaño, las características fisiológicas de la persona expuesta (edad y estado nutricional) e higiene; es decir, hay mayor absorción de plomo cuando la partícula es pequeña, si la persona presenta deficiencia de hierro o calcio, si hay ingesta de grasa o calorías, si está en condiciones de ayuno y si se trata de un niño (Valdivia, 2005). 30 Figura 4: Vías de exposición y distribución del plomo en el organismo humano (Fuente: Valdivia, 2005) 2.2REMEDIACIÓN DE SUELOS CONTAMINADOS 2.2.1 Generalidades La remediación de un sitio contaminado es la ejecución de las acciones a las que se someten los sitios contaminados para eliminar o reducir los contaminantes hasta un nivel seguro para la salud y el ambiente o prevenir su dispersión en el ambiente sin modificarlos, de conformidad con lo que establece el marco jurídico vigente. En este sentido puede decirse que son todas las acciones que tienen la finalidad de lograr la “limpieza” de un sitio que presenta residuos peligrosos o suelos contaminados, también pueden ser acciones que estén encaminadas a reducir los riesgos o evitar la exposición de las personas a los contaminantes. 31 Esto último puede ocurrir cuando la resolución de un problema de contaminación es tan compleja y los costos de la eliminación de los contaminantes tan altos que no es posible efectuar la remediación. En esos casos se opta cuando no existe otra alternativa viable por realizar acciones que eviten la exposición de los seres humanos a los contaminantes (Sedas, Ruíz; 2012). Las opciones de remediación para sitios contaminados dependen de cuatro consideraciones generales: a) El tipo de contaminante y sus características físicas y químicas determinan si un sitio requiere ser remediado y la manera en la que el contaminante debe tratarse; b) La localización y las características del sitio, así como el uso del suelo, c) Las características naturales de los suelos, sedimentos y cuerpos de agua, y d) Las capacidades de las tecnologías de remediación (Mallea, 2010). 2.2.2 Tecnologías de remediación de suelos contaminados En la actualidad se dispone de un amplio abanico de tecnologías de recuperación de suelos contaminados con metales pesados, algunas de aplicación habitual y otras todavía en fase experimental. Todas ellas están diseñadas para aislar o eliminar las sustancias contaminantes alterando su estructura química mediante procesos generalmente fisicoquímicos, térmicos o biológicos (Diez, 2008). Existe una gran variedad de tecnologías de remediación, las cuales se pueden clasificar bajo distintos criterios: objetivo de la remediación, lugar en que se aplica el proceso de remediación y tipo de tratamiento utilizado. Además de los criterios anteriores, también pueden clasificarse en base al grado de desarrollo técnico en el que se encuentran (Alcaino, 2012). 32 Figura 5: Clasificación de tecnologías de remediación de sitios contaminados. (Fuente: Alcaino,2012) En términos generales las tecnologías de remediación de suelos y/o aguas subterráneas abarcan todas aquellas operaciones que tienen por objetivo reducir la toxicidad, movilidad o concentración del contaminante presente en el medio, mediante la alteración de la composición de la sustancia peligrosa o del medio, a través de acciones químicas, físicas o biológicas. La elección de cada tecnología depende de las características del suelo y del contaminante, de la eficacia esperada y por supuesto de la factibilidad técnico-económica y el tiempo requerido para su ejecución (Alcaino, 2012). 33 Figura 6: Principales tecnologías de remediación aplicada en suelos clasificado según el tipo de tratamiento. (Fuente: Alcaino, 2012) 2.2.3 Fitorremediación de suelos contaminados La fitorremediación es un proceso que utiliza plantas para remover, transferir, estabilizar, concentrar y/o destruir contaminantes (orgánicos e inorgánicos) en suelos, lodos y sedimentos, y puede aplicarse tanto in situ como ex situ. Los mecanismos de fitorremediación incluyen la rizodegradación, la fitoextracción, la fitodegradación y la fitoestabilización (Callirgos, 2014). En contraste con otras tecnologías, es poco costosa, estéticamente agradable y requiere de pocos recursos (Callirgos, 2014). 34 En estudios recientes se ha demostrado que la fitorremediación es una solución prometedora para la limpieza de sitios contaminados por una variedad de metales, aunque también tiene una serie de limitaciones (SSierra, 2006), además, es un proceso de descontaminación que involucra el empleo de plantas que pueden remover, transferir, estabilizar, descomponer y/o degradar contaminantes de suelo, sedimentos y agua, como solventes, plaguicidas, hidrocarburos poliaromáticos, metales pesados, explosivos, elementos radiactivos, fertilizantes, para hacerlos más biodisponibles para la planta (Sierra, 2006). Las plantas pueden efectuar el proceso de fitorremediación mediante los siguientes mecanismos: (Chávez, 2014). - Fitoextracción: uso de plantas acumuladoras de elementos tóxicos o compuestos orgánicos para retirarlos del suelo mediante su absorción y concentración en las partes cosechables. - Fitoestabilización: uso de plantas para reducir la biodisponibilidad de los contaminantes en el entorno, alterando su composición a formas más estables. - Fitoinmovilización: uso de las raíces de las plantas para la fijación o inmovilización de los contaminantes en el suelo. Junto con la técnica anterior se les denomina de contención. - Fitovolatilización: uso de plantas para eliminar los contaminantes del medio mediante su volatilización. - Fitodegradación: uso de plantas y microorganismos asociados para degradar contaminantes orgánicos. - Rizofiltración: uso de raíces para absorber y adsorber contaminantes del agua y de otros efluentes acuosos. 35 El girasol (Helianthus annuus L.) es la especie que absorbe los metales pesados en mayor cantidad acumulándose más en sus raíces que en sus brotes si se cosecha la biomasa entera de la planta, por lo que se considera una planta hiperacumuladora favorable en la fitoextracción de Cd, Zn, Pb y elementos radiactivos (Sierra, 2006). Figura 7: Mecanismos involucrados en la tecnología de la fitorremediación (Fuente:Tangahu et al, 2011; citado por Martinez, 2018). Según Martinez (2018) explican que existen ciertos factores que permiten conocer la capacidad que tienen las plantas para absorber y traslocar metales del suelo a la parte aérea, estos son: a) Factor de bioconcentración (BCF). También conocido como Índice de bioconcentración (BF), Coeficiente de absorción biológica (BAC), Coeficiente de transferencia (TC), Factor de concentración (Cf) o Coeficiente de bioacumulación (BAC); se utiliza para medir la capacidad de captación de un metal por una planta (raíz y parte aérea) con relación a su concentración en el suelo. 36 Para las plantas, el BCF se utiliza como una medida de la eficiencia de acumulación de metales en biomasa, donde valores mayores a 1 indican que las especies son potencialmente hiperacumuladora (Martinez, 2018) y aquellas especies exclusoras poseen BCF menores que 1, tanto menor es cuanto mayor es su capacidad de exclusión. Existen dos factores de bioconcentración que mencionamos a continuación: - Factor de bioconcentración en la raíz de la planta: También conocida como Factor de concentración biológica (BCF) o Root accumulation factor (RAF). Se calcula como la relación entre la concentración de metales en la raíz de la planta respecto a la concentración de metales en el suelo. - Factor de bioconcentración en la parte aérea de la planta: Conocida como Factor de bioacumulación (BAF), Coeficiente de acumulación biológica (BAC), Factor de remediación (RC) o Shoot accumulation factor (SAF). Es la proporción del elemento contenido en la parte aérea de la planta con respecto al suelo. b) Factor de traslocación (TF). Es el cociente entre la concentración del metal en los órganos aéreos y raíz. Factores de translocación mayores a 1 sugieren gran capacidad para transportar metales desde las raíces a los vástagos, explicada en su mayor parte por eficientes sistemas de transporte de metales y, probablemente, por secuestro de metales en las vacuolas de las hojas y en el apoplasto. Las plantas hiperacumuladorasse caracterizan por una relación concentración de metal parte aérea / concentración de metal raíz, mayor a 1. 37 En cambio, las plantas no acumuladoras tienen una más alta concentración de metal en raíces que en hojas y tallos. Un valor del Factor de Traslocación mayor a 1 indica una eficiente translocación del metal a brotes, por lo que la planta puede usarse con fines de fitoextracción. Si, por el contrario, dicho valor es menor a 1, la translocación del metal es baja, por lo que éste es retenido principalmente en las raíces y puede usarse para fitoestabilización. 2.2.4 Bioremediación de suelos contaminados El concepto de biorremediación se utiliza para describir una variedad de sistemas que utilizan organismos vivos (plantas, hongos, bacterias, entre otros) para remover (extraer), degradar (biodegradar), o transformar (biotransformar) compuestos orgánicos tóxicos en productos metabólicos menos tóxicos o inócuos (Velázco, Volke, 2008). La Biorremediación es cualquier proceso que utiliza organismos vivos como microorganismos, hongos y plantas, por medio de agentes o compuestos derivados de cualquiera de ellos, para retornar un medio ambiente alterado por contaminantes a su condición natural ya sea en el suelo o en las aguas (Ramirez; 2012). La Biorremediación en suelos es empleada para atacar o sustraer agentes contaminantes específicos del suelo, se realiza por medio de degradación o transformación de diferentes compuestos nocivos en otros de menor toxicidad o materia orgánica en descomposición. Estas degradaciones o cambios ocurren usualmente en la naturaleza y una adecuada manipulación de los sistemas biológicos puede aumentar la velocidad de cambio o degradación (Trujillo, Ramirez; 2012). 38 La EPA define biorremediación como la manipulación de sistemas biológicos para efectuar cambios en el ambiente. La biorremediación surge como una rama de la biotecnología que busca resolver los problemas de contaminación mediante el diseño de microorganismos capaces de degradar compuestos que provocan desequilibrios en el medio ambiente (Bonilla, 2013). El proceso de biorremediación dependiendo del medio que se utilice para la descontaminación del suelo puede clasificarse en: • Fitorremediación: Uso de plantas verdes para remover, contener o neutralizar compuestos orgánicos y metales pesados. • Biorremediación animal: Uso de animales que tienen la capacidad de desarrollarse en medios altamente contaminados. • Biorremediación microbiana: Uso de bacterias acumuladoras como hongos, algas, cianobacterias y actinomicetos (Bonilla, 2013). Entre las ventajas que presenta la biorremediación sobre los métodos fisicoquímicos tradicionales para el tratamiento de sitios contaminados, se encuentran: 1. Disminución del costo de operación. 2. Los contaminantes son destruidos o transformados y normalmente no se requiere de un tratamiento adicional. 3. La remediación se puede llevar a cabo en el mismo lugar (in situ) o ex situ en biorreactores (Bonilla, 2013). 39 La importancia de agregar humus de lombriz en un proceso de biorremediación de suelos contaminados con plomo radica principalmente a que actúa como acondicionador de suelos para facilitar la extracción del contaminante. La afirmación descrita líneas arriba, se sustenta en los resultados obtenidos por Buendía et al (2014) quienes encontraron que en el suelo donde no se agregó ningún acondicionador, los resultados de extracción de plomo por plantas de girasol fueron similares con los suelos tratados con aserrín de bolaina y suelos tratados con perlita, debido probablemente a que no hubo influencia de acondicionadores orgánicos, puesto que esta materia orgánica de alguna manera puede bloquear la disponibilidad del plomo en el suelo o tener una influencia por efecto de mineralización y facilitar la pérdida del Pb por lixiviación. Asimismo, de la ejecución de esta investigación, en el suelo contaminado donde se adicionó solo humus de lombriz, la fitoextraccion de plomo fue la más baja, debido a que la materia orgánica tuvo influencias bloqueadoras de la disponibilidad de Pb en el suelo. Sin embargo, cuando a los tratamientos se les añadió humus de lombriz más aserrín de bolaina o humus de lombriz más perlita, la extracción del plomo fue mayor (26,99 y 26,90 ppm respectivamente). De lo descrito, se puede considerar que la biorremediación es una tecnología óptima para la recuperación de suelos impactados, su uso cada vez, es tema de mayor investigación y aplicación en el Perú y diferentes partes del mundo. 40 CAPÍTULO III MATERIAL Y METODOS 3.1 DESCRIPCIÓN DE LAS CONDICIONES EXPERIMENTALES - Localización: La investigación se desarrolló en el invernadero de propagación de plantas cultivadas de la Facultad de Agronomía de la UNSA. Con la siguiente ubicación: Ubicación política: Departamento: Arequipa Provincia: Arequipa Distrito: Arequipa Coordenadas UTM : Zona: 19 Este: 229246. Norte: 8185249 Altitud: 2360 m.s.n.m. - Tipo de investigación: El tipo de investigación es experimental; al respecto Rojas (2002) indica que el método experimental llamado también de comprobación de hipótesis causales; es un método de investigación donde se aplica estímulos (X) a “sujetos o unidades experimentales (UE)”; se observa la reacción (Y) y se registra el resultado u observación (O); se establecen la relación causa-efecto. Anexo 1 (Análisis de Varianza) 41 - Alcance de la investigación: La investigación se realizó en condiciones controladas y se empleó suelos de terrenos con aptitud agrícola siendo necesario validar la mejor tecnología resultante en la investigación en condiciones in situ para remediar suelos contaminados con plomo. 3.2 SECUENCIA DE LA INVESTIGACIÓN: La presente investigación tuvo la siguiente secuencia: SI NO Recopilación de información Acopio de insumos y materiales Desarrollo prueba de germinación y fitotoxicidad ¿Germinaron las semillas? Instalación de experimento e incorporación de tratamientos Evaluaciones en suelo y planta fitoremediadora Envío muestras laboratorio Análisis resultados laboratorio de muestras: suelo y planta Sistematización y análisis de datos Interpretación, discusión de resultados Presentación de informe final 42 3.3 MATERIALES Materiales para prueba de germinación - Bandejas de plástico - Algodón - Semillas de girasol - Aspersores - H2O destilada - Nitrato de plomo: Pb (NO3)2. - Solución de 35 ppm de Plomo - Solución de 70 ppm de Plomo - Solución de 105 ppm de Plomo - Cámara fotográfica - Cuaderno de apuntes - Lapiceros Materiales para experimentación en invernadero - Pala - Saco - GPS - Cámara fotográfica - Papel 43 - Plumón - Humus (Estiércol de lombriz) - Suelo - Semilla de Girasol - Solución de 105 ppm de Plomo - Balanza - Regadera - Maceteros - Depósitos para colección de agua de riego - Probeta - Cinta Métrica - Regla - Agua 3.4 MÉTODO • En condiciones controladas (Invernadero): - Previamente se realizó una prueba de viabilidad de semilla de girasol; también una prueba de fitotoxicidad de plomo para plántulas de girasol. - La prueba de fitotoxicidad de plomo consistió en el siguiente procedimiento: • En bandejas de plástico se colocó 10 semillas de girasol al cual se aplicó paulatinamente disoluciones de Pb (NO3)2 como fuente de plomo (105 ppm; 70 ppm; 35 ppm). 44 • Los niveles de plomo utilizados están relacionados con los Estándares de calidad ambiental para suelos agrícolas establecidos en la normativa peruana (D.S. Nro 011-2017-MINAM). • Se verificó la germinación de plántulas de girasol para definir la dosis de Pb a ser considerada para la investigación principal.- Para la instalación del presente trabajo en invernadero se empleó 12 depósitos (baldes - maceteros) con 5 kg de suelo agrícola cada uno; todos los tratamientos fueron contaminados con diluciones con plomo en forma de nitrato de plomo Pb(NO3)2 en las dosis resultante de la prueba de fitotoxicidad (105 ppm Pb). - El suelo expuesto a remediación se recolectó en terrenos cercanos a una zona de la vía de evitamiento de Arequipa (Coordenadas UTM WGS-84; Norte: 8188920; Este: 223859) muy cercano a la pista de tránsito vehicular. - La dilución con contenido de plomo (105 ppm Pb) se aplicó mediante el riego y luego se sembró semillas de girasol para evaluar su eficiencia fitorremediadora a través del análisis foliar correspondiente. - La incorporación de estiércol de lombriz en los tratamientos fue en un nivel equivalente a 0,25 kg por cada uno (5 % en base a peso de suelo agrícola). - Durante el desarrollo de la investigación se aplicó riego localizado a cada macetero para que la plántula de girasol pueda ejercer su acción remediadora. - En cada tratamiento se instaló un recipiente para colectar lixiviados del drenaje. 45 • En laboratorio: - Se realizó un análisis de suelos previo a la instalación de tratamientos (Plomo total; Materia orgánica, pH, salinidad, CIC, textura, N, P, K). - Durante el experimento se realizaron determinaciones de plomo en el suelo y la planta de girasol. 3.5 TRATAMIENTOS Y DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN 3.5.1 Tratamientos estudiados en la investigación: Cuadro 1: Tratamientos propuestos para la investigación. Arequipa. 2019. TRATAMIENTOS DESCRIPCIÓN* CÓDIGO DE IDENTIFICACIÓN T1 Suelo contaminado con Pb + estiércol de lombriz + girasol SPbELG T2 Suelo contaminado con Pb + estiércol de lombriz SPbEL T3 Suelo contaminado con Pb + girasol SPbG T4 Suelo contaminado con Pb SPb 46 DESCRIPCIÓN DE TRATAMIENTOS: - SC : Suelo contaminado: 5 kg. Suelo + 105 ppm Pb - EL : Estiércol de lombriz: 0,25 kg - G : Girasol: 3 semillas. Figura 8: Descripción de tratamientos estudiados en la investigación. Arequipa. 2019. 3.5.2 Diseño experimental y análisis estadístico: - El diseño estadístico a utilizado en este presente trabajo fue un DCA (Diseño Completo al Azar), con 3 repeticiones por tratamiento. - También se realizó determinaciones sobre coeficiente de regresión, coeficiente de intersección y coeficiente de determinación para las variables dependientes e independientes. (Anexo 1 - Análisis de Varianza) Variables dependientes: Niveles de Plomo en suelo. Variables independientes: Especie vegetal fitorremediadora (Girasol) y estiércol de lombriz. Variables Ambientales: Suelo: materia orgánica, pH, salinidad, CIC, textura, N, P, K. 47 - Cuadro 2: Estructura del ANVA. (Anexo 1 – Análisis de Varianza) 3.5.3 Disposición de tratamientos Figura 9: disposición de tratamientos estudiados en la investigación. Arequipa.2019. Factores de variabilidad Grados de libertad Repeticiones 2 Tratamiento 3 Error 6 Total 11 48 3.6 EVALUACIONES 3.6.1 Previo al proceso de remediación: - Prueba de germinación de semillas: Se realizó en el Laboratorio de gestión agroambiental de la Facultad de Agronomía – UNSA para determinar la viabilidad de las semillas de girasol, se colocó 10 semillas de girasol sobre una bandeja con papel absorbente y se regó con agua, se evaluó 3 repeticiones; fue registrado el número de semillas germinadas al periodo de 10 días y los resultados se expresan en porcentaje de semillas germinadas. - Prueba de fitotoxicidad en semillas: Se efectuó en el Laboratorio de gestión agroambiental de la Facultad de Agronomía - UNSA a fin de verificar la toxicidad de semillas de girasol al ser regadas con soluciones de Pb equivalente a 35 ppm; 70 ppm y 105 ppm siendo el propósito definir la concentración de Pb más apropiada para agregar a los tratamientos de invernadero. - Se colocó 10 semillas de girasol sobre una bandeja con papel absorbente y se regó con disoluciones de plomo respectivas, se evaluó 3 repeticiones por cada concentración de Pb aplicado; se registró el número de semillas germinadas al periodo de 10 días y los resultados se expresan en porcentaje de semillas germinadas. Además, se precisa que en la evaluación a los 15 días todas las semillas germinaron en las tres soluciones de plomo. 49 - Análisis de suelo: Para la determinación de Pb, la muestra representativa fue enviada al Laboratorio de Investigación y Servicios (LABINVSERV) de la UNSA; la detección de plomo se efectuó mediante el método de absorción atómica; en cambio para determinar las propiedades complementarias otra muestra se envió al Laboratorio de análisis de suelos, aguas y semillas de la Estación experimental agraria (EEA -INIA) – Arequipa. - Análisis de estiércol de lombriz: Este análisis se realizó en el Laboratorio de análisis de suelos, aguas y semillas de la Estación experimental agraria (EEA -INIA) – Arequipa en una muestra representativa de estiércol de lombriz (“Humus de lombriz”). 3.6.2 Durante el proceso de remediación: - Determinación de plomo en el suelo: La determinación de plomo en el suelo se realizó en el Laboratorio de Investigación y Servicios (LABINVSERV) de la UNSA mediante el método de absorción atómica; para su análisis se tomó una muestra de suelo de cada tratamiento y por cada repetición al final del proceso de remediación los datos se expresan en partes por millón (ppm) y corresponden al PLOMO NO REMEDIADO (remanente que queda en el suelo luego del proceso de remediación). También se calculó el valor de PLOMO REMEDIADO en ppm (Plomo remediado = Plomo inicial – plomo no remediado). 50 - Determinación de plomo en drenaje: La determinación de plomo en el drenaje recolectado se realizó en el Laboratorio de Investigación y Servicios (LABINVSERV) de la UNSA mediante el método de absorción atómica; su análisis se efectuó uno por cada tratamiento en muestras recolectadas al final del proceso de remediación los datos se expresan en partes por millón (ppm). - Determinación de plomo en la planta de girasol: Se determinó en una muestra de toda la planta de girasol en los tratamientos que incluyen plantas de girasol (T1 y T3) esta evaluación se desarrolló en dos momentos a 70 días y 90 días la instalación de la investigación. - También se realizó el análisis de plomo en otras muestras separadas de raíces y parte aérea (tallos y hojas) de girasol al final de proceso de remediación (100 días de la instalación). El análisis se realizó en el Laboratorio de Investigación y Servicios (LABINVSERV) de la UNSA mediante el método de absorción atómica los datos se expresan en partes por millón (ppm). - A partir de los datos obtenidos en el anterior ítem, se calculó el FACTOR DE BIOCONCENTRACIÓN que resulta de la relación que existe entre el contenido de plomo en las raíces así como en la parte área de la planta de girasol respecto al contenido Pb del suelo. Mientras que el FACTOR DE TRASLOCACIÓN se calculó de la relación entre el contenido de Pb en parte aérea respecto al contenido de las raíces de la planta de girasol. 51 El estudio culminó a los 100 días de la instalación del experimento a este periodo de tiempo la planta de girasol aun no desarrolló la inflorescencia. - Determinación del tamaño de planta de girasol: Los registros se tomaron a 30, 70 y 100 días de la instalación del experimento (siembra) en los tratamientos que incluyen plantas de girasol (T1 y T3) los resultados se expresan en centímetros y resultan de medir desde el cuello de planta hasta el ápice de crecimiento (punta de crecimiento). - Determinación del tamaño de raíz de girasol: Se evaluó a 100 días de la instalación delexperimento (siembra) en los tratamientos que incluyen plantas de girasol (T1 y T3) los resultados se expresan en centímetros; al ser una raíz tipo pivotante se midió desde el cuello de planta hasta la parte más profunda o punta de crecimiento radicular. - Análisis de pH de suelo: Este análisis se realizó mediante un potenciómetro digital (Hanna instruments: pH/EC/TDS; modelo: HI98129) en muestras de cada unidad experimental; los datos se tomaron luego de pesar 100 gr de muestra de suelo y adicionar 100 ml de agua destilada para dejarlas en reposo durante 5 minutos y proceder a la lectura correspondiente. - Análisis edafológico completo de suelo: Este análisis se realizó solo para el tratamiento T2 por ser el más eficiente en la remediación de plomo. El análisis se realizó en el Laboratorio de análisis de suelos, aguas y semillas de la Estación experimental agraria (EEA -INIA) – Arequipa. 52 CAPÍTULO IV RESULTADOS Y DISCUSIÓN 4.1 PREVIO AL PROCESO DE REMEDIACIÓN 4.1.1 Germinación de semillas de girasol: El cuadro 3 presenta resultados de la prueba de germinación de semillas de girasol realizado previo al proceso de remediación de suelos contaminados con plomo,el objetivo de esta prueba fue determinar la viabilidad de la semilla para germinar y continuar con la sucesión natural de etapas del crecimiento y desarrollo de la planta. Los resultados obtenidos indican que la semilla de girasol empleada en la investigación tiene buen poder de germinación que asegura su viabilidad una vez sembrada. La germinación se inicia con la entrada de agua en la semilla (imbibición) y finaliza con el comienzo de la elongación de la radícula, en condiciones de laboratorio la posterior rotura de las cubiertas seminales por la radícula es el hecho que se utiliza para considerar que la germinación ha tenido lugar (Pita, Pérez, 1998). Este criterio fue tomado en cuenta para establecer el logro de la germinación en plantas de girasol el mismo que ocurrio a 10 días de haber instalado la prueba de germinación. 53 Cuadro 3: Resultados de la prueba de germinación de semillas de girasol. Arequipa. 2019. Repeticiones Número de semillas germinadas (Unid) Porcentaje de germinación (%) R1 10 100 % R2 9 90 % R3 10 100 % Promedio 9.6 96.7 % Desviación estándar 0.471 - 4.1.2 Fitotoxicidad en semillas de girasol Los cuadros 4, 5 y 6 ofrecen resultados de la prueba de fitotoxicidad realizado en semillas de girasol esta prueba tuvo como propósito determinar la tolerancia de las semillas de girasol al ser tratadas con 3 niveles de plomo ( 35, 70 y 105 ppm respectivamente); la tolerancia a estos niveles de plomo aplicados se determinó mediante la capacidad de las semillas para germinar. Los resultados muestran que las semillas de girasol sometidos a la prueba de fitotoxicidad presentan buen porcentaje de germinación inclusive en el nivel mas elevado de plomo (105 ppm) logrando un 90% de germinación valorado a 10 días. 54 Cuadro 4: Resultados de la prueba de fitotoxicidad en semillas de girasol por aplicación de 35 ppm de plomo. Arequipa. 2019. Repeticiones Número de semillas germinadas con 35 ppm de Pb (Unid) Porcentaje de germinación (%) R1 9 90 % R2 8 80 % R3 9 90 % Promedio 8.7 86.6 % Desviación estándar 0.471 - Cuadro 5: Resultados de la prueba de fitotoxicidad en semillas de girasol por aplicación de 70 ppm de plomo. Arequipa. 2019. Repeticiones Número de semillas germinadas con 70 ppm de Pb (Unid) Porcentaje de germinación (%) R1 8 80 % R2 9 90 % R3 9 90 % Promedio 8.7 86.6 % Desviación estándar 0.471 - 55 Cuadro 6: Resultados de la prueba de fitotoxicidad en semillas de girasol por aplicación de 105 ppm de plomo. Arequipa. 2019. Repeticiones Número de semillas germinadas con 105 ppm de Pb (Unid) Porcentaje de germinación (%) R1 9 90 % R2 8 80 % R3 10 100 % Promedio 9 90 % Desviación estándar 0.816 - A los 15 días en todos los casos se logró un 100 % de germinación; estos resultados permitieron elegir la dosis de plomo a aplicar (105 ppm de Pb) a fin de ser sometido a un proceso de remediación tal como se planteó en la investigación. En resumen, en la prueba de fitotoxicidad de semillas de girasol se demostró que estas semillas pueden tolerar inclusive una concentración de 105 ppm de Pb no afectando su germinación. Al respecto Chico - Ruiz et al (2012) reportan que algunas especies pertenecientes a las Asteraceas toleran altos niveles de metales pesados en comparación con otros grupos taxonómicos y se les ha propuesto como especies fitorremediadoras siendo la más importante Helianthus annuus (girasol), la cual posee una facilidad de manejo en su cultivo y se adapta fácilmente a un amplio intervalo en la variación de temperatura; señalan que las raíces de girasol son capaces de tolerar concentraciones de 500 mg/l de plomo. 56 Los mecanismos de fitotoxicidad por plomo se relacionan con cambios en la permeabilidad de las membranas celulares, reacciones de grupos sulfihidrilo (- SH) con cationes y con la afinidad para reaccionar con grupos fosfato y grupos activos de ADP o ATP. Este autor afirma que la toxicidad que causa el plomo hacia una especie de planta varía en función de su genotipo, así como de las condiciones experimentales a las que éstas son sometidas (Chico – Ruiz et al, 2012). 4.1.3 Análisis de suelo Según el reporte de análisis de suelo mostrado en el cuadro 7; el suelo utilizado en la investigación presenta un contenido de plomo total de 16,05 ppm como valor de fondo a este valor se le agregó mediante una solución una cantidad de 105 ppm que sumado al valor de fondo hacen una concentración de plomo de 121,05 ppm que supera el ECA nacional establecido para suelos de zonas agrícolas que es de 70 ppm (DS No011-2017-MINAM). Cuadro 7: Resultados de análisis de suelo empleado en el proceso de remediación. Arequipa. 2019. DETERMINACIÓN UNIDADES VALOR Pb total ppm 16.05 Textura - Franco arenoso Materia orgánica % 3.91 pH - 6.78 C.E. mS/cm 0.23 CIC meq/100 gr 9.720 N % 0.20 P ppm 130.17 K ppm 212.48 57 Según el análisis el suelo es de textura franco-arenosa que podría facilitar la lixiviación de elementos contenidos en el suelo en caso sea descontrolado y exagerado el volumen de agua aplicado para el riego de la planta de girasol. La presencia de materia orgánica es moderada se requiere incorporaciones mayores de fuentes de materia orgánica para viabilizar un proceso de remediación efectiva de plomo en estos suelos por lo que se optó por aplicaciones asociadas de estiércol de lombriz (“Humus de lombriz”) en alguno de los tratamientos a fin de verificar su eficiencia de remediación de plomo. El pH inicial del suelo es 6.78 (casi cercano a la neutralidad); el suelo no presenta problemas de salinidad; la capacidad de intercambio catiónico (CIC) es deficiente. Los niveles de nitrógeno son deficientes, en cambio los valores de fósforo y potasio están relativamente moderados para asegurar un buen crecimiento de la planta fitorremediadora (girasol). Sobre las propiedades del suelo y su relación con la contaminación por elementos pesados Galán et al (2008) señalan que el suelo actúa en general como una barrera protectora de otros medios más sensibles (hidrológicos y biológicos), filtrando, descomponiendo, neutralizando o almacenando contaminantes y evitando en gran parte su biodisponibilidad, esta capacidad depuradora de un suelo depende de los contenidos en materia orgánica, carbonatos y oxihidróxidos de hierro y manganeso, de la proporción y tipo de minerales de la arcilla, de la capacidad de cambio catiónico del suelo, del pH y Eh, textura, permeabilidad y actividad microbiana; por tanto, para cada situación, el poder depurador de un suelo tiene un límite, cuando se superan esos límitespara una o varias sustancias, el suelo funciona como contaminado y es fuente de contaminantes. 58 4.1.4 Análisis de estiércol de lombriz Según datos ofrecidos en el cuadro 8, el estiércol de lombriz (“humus de lombriz”) empleado en la investigación ofrece un buen contenido de materia orgánica (20,63 %) que seguramente debió favorecer el proceso de remediación de plomo en el suelo; además muestra una relación baja entre carbono y nitrógeno valor que determina una facilidad en el proceso subsecuente de humificación del medio. Debe precisarse que en esta investigación el estiércol de lombriz es utilizado como una fuente de materia orgánica para mejorar la remediación de plomo del suelo. La materia orgánica humificada en el suelo puede adsorber y/o retener elementos pesados en el complejo arcillo húmico de esta manera limitar su lixiviación hacia estratos inferiores donde podría contaminar aguas del subterráneas. La materia orgánica procedente del estiércol de lombriz; es uno de los constituyentes del suelo con mayor capacidad de intercambio catiónico debido a la carga negativa de su superficie generada por grupos funcionales de tipo fenólico, carboxílico y alcohólico; por ello, tiene gran incidencia en la reactividad del suelo y, por tanto, en las propiedades químicas (Rábago, 2011); la complejidad química de los compuestos orgánicos hace muy difícil identificar el mecanismo de interacción con los metales pesados (Rábago, 2011). La capacidad de intercambio catiónico que presenta el humus de lombriz es elevada (54,738 meq/100gr) y está relacionado directamente al buen contenido de materia orgánica que posee el estiércol de lombriz, la capacidad de intercambio catiónico favorece el movimiento de iones entre la solución suelo y el complejo arcillo húmico, esta condición favorece el intercambio de elementos pesados y viabiliza el proceso de remediación. 59 También el estiércol de lombriz contiene buenos aportes de nutrientes (N, P, K) en beneficio de la planta remediadora, pero presenta alta salinidad que es perjudicial para girasol. Cuadro 8: Resultados de estiércol de lombriz empleado en el proceso de remediación. Arequipa. 2019. DETERMINACIÓN UNIDADES VALOR Materia orgánica % 20.63 C/N - 10/1 pH - 7.94 C.E. mS/cm 20.13 CIC meq/100 gr 54.738 N % 1.46 P ppm 1720.00 K ppm 15433.94 4.2 DURANTE EL PROCESO DE REMEDIACIÓN 4.2.1 Determinación de plomo no remediado y remediado en el suelo: Se determinó el efecto de la remediación de suelos contaminados con plomo mediante el empleo de girasol y estiércol de lombriz en condiciones controladas; los registros del nivel de plomo remediado y no remediado correspondiente a cada tratamiento se presentan en los anexos. El análisis de varianza para estas evaluaciones reporta diferencias estadísticas significativas entre tratamientos para plomo remediado y plomo no remediado. 60 El coeficiente de variabilidad para plomo no remediado (plomo al final del proceso de remediación) es de 7,16 %; mientras que el coeficiente de variabilidad para plomo remediado fue de 2,20 % estos coeficientes de variabilidad son admisibles para investigaciones en condiciones controladas debido a que asignan representatividad a los registros obtenidos. El cuadro 9 reporta una diferencia estadística significativa entre tratamientos al ser sometidos a la prueba de tukey, se evidencia que el tratamiento T2 presenta el menor nivel de plomo no remediado (plomo en el suelo luego del proceso de remediación); este comportamiento concuerda con el valor de plomo remediado el mismo que según el cuadro 10 es mayor para el tratamiento T2 por lo que se deduce que este tratamiento respondió mejor comparativamente respecto a los demás tratamientos Cuadro 9: Resultados del contenido de plomo no remediado (ppm) en el suelo al final del proceso de remediación. Arequipa. 2019. TRAT. DESCRIPCIÓN R1 (ppm) R2 (ppm) R3 (ppm) PROMEDIO (ppm) T1 Suelo contaminado con Pb + estiércol de lombriz + girasol 28.37 32.02 26.56 28.98 A* T2 Suelo contaminado con Pb + estiércol de lombriz 21.82 24.09 22.34 22.75 B* T3 Suelo contaminado con Pb + girasol 33.39 31.22 31.03 31.88 A* T4 Suelo contaminado con Pb 32.55 27.78 29.90 30.08 A* * Según la prueba de Tukey (0.05), letras similares refieren que entre estos datos no existe diferencia estadística significativa. 61 Cuadro 10: Resultados del contenido de plomo remediado (ppm) en el suelo al final del proceso de remediación. Arequipa. 2019. TRAT. DESCRIPCIÓN R1 (ppm) R2 (ppm) R3 (ppm) PROMEDIO (ppm) T1 Suelo contaminado con Pb + estiércol de lombriz + girasol 92.68 89.03 94.49 92.07 B* T2 Suelo contaminado con Pb + estiércol de lombriz 99.23 96.96 98.71 98.30 A* T3 Suelo contaminado con Pb + girasol 87.66 89.83 90.02 89.17 B* T4 Suelo contaminado con Pb 88.5 93.27 91.15 90.97 B* * Según la prueba de Tukey (0.05), letras similares refieren que entre estos datos no existe diferencia estadística significativa. Cuadro 11: Resultados de eficiencia de remediación de plomo para cada tratamiento evaluado al final del proceso de remediación. Arequipa. 2019. TRAT. Pb INICIAL (ppm) Pb NO REMEDIADO (ppm) Pb REMEDIADO (ppm) % Pb NO REMEDIADO (%) % Pb REMEDIADO (%) T1 121.05 28.98 ppm 92.07 ppm 23.94 % 76.06 % T2 121.05 22.75 ppm 98.30 ppm 18.79 % 81.21 % T3 121.05 31.88 ppm 89.17 ppm 26.34 % 73.66 % T4 121.05 30.08 ppm 90.97 ppm 24.85 % 75.15% 62 Interpretación Análisis de Varianza: Se aplicó el análisis de varianza en el cual, nos indica que el valor Fc (11.38) es mayor al nivel de significancia (0.05) esto quiere decir que al menos uno de los tratamientos es diferente. (Ver Anexo – Análisis de la Varianza) Según la prueba de significación de Tukey (0,05) el tratamiento T2 (Suelo contaminado con Pb + estiércol de lombriz) logró la mayor remoción de plomo del suelo contaminado con una eficiencia del 81.21 % este resultado presenta diferencia estadística significativa en relación a T1, T4 y T3. También la prueba de Tuckey demuestra que entre los resultados de remoción de plomo logrados por T1, T4 y T3 no existe diferencia estadística significativa. Aunque debe resaltarse que todos los tratamientos remediaron el plomo del suelo contaminado por debajo del ECA nacional para suelos agrícolas. Resultados similares son reportados por Vargas (2017) quien llegó a la conclusión que el tratamiento donde se añadió humus fue donde hubo mayor porcentaje de remoción de plomo de suelo y también mayor concentración de plomo en sus tejidos aéreos y con respecto a los indicadores de control se evidencio que el pH y la capacidad de intercambio catiónico guardan más relación con la disminución de plomo del suelo. El tratamiento T1 (suelo contaminado con Pb + estiércol de lombriz + girasol) no fue efectivo en la remoción de plomo del suelo contaminado en comparación con el T2 porque el estiércol de lombriz tuvo una salinidad alta (20,13 mS/cm) que seguramente afectó el desempeño de esta planta que en otras investigaciones resulta ser el mejor tratamiento. La siguiente figura muestra la concentración inicial de plomo, la concentración final y la remoción de plomo correspondiente a cada tratamiento evaluado en la investigación. 63 Figura 10: Resultados del proceso de remediación de suelos contaminados con plomo por cada tratamiento evaluado. Arequipa.2019. Los tratamientos que incluyen plantas de girasol (T1 y T3) si bien lograron reducir el nivel de plomo en el suelo no superaron las expectativas porque fueron afectados por la alta salinidad del medio, al respecto varios autores señalan que es una especie vegetal semi tolerante a la salinidad la mayoría de variedades puede tolerar hasta 6 mS /cm de salinidad; una salinidad por encima de estos valores para el
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