2016-TP-3-LIPIDOS

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Química Biológica I T.P. Lípidos 
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Trabajo Práctico 3: LÍPIDOS 
 
 
OBJETIVOS: 
 
-Poner de manifiesto ciertas propiedades de lípidos. 
-Comprobar la presencia de los lípidos complejos en cerebro de vaca luego de extracción con 
diferente solvente y posterior fraccionamiento de los extractos. 
 
FUNDAMENTOS: 
 
Los lípidos, son un grupo heterogéneo de compuestos, de naturaleza anfipática, es decir que 
contienen regiones hidrofóbicas y regiones hidrofílicas. La mayor parte de los lípidos 
abundantes en la naturaleza (triacilgliceroles), están formados por ácidos grasos de cadenas 
hidrocarbonadas pares, saturados o insaturados. Los lípidos llevan a cabo múltiples funciones 
en el organismo, como: almacenamiento de energía, de transporte, cumplir funciones 
hormonales, actuar como vitaminas, formar parte de las membranas celulares confiriéndoles 
la propiedad de permeabilidad selectiva, al permitir el paso o no de algunas sustancias y en 
determinada dirección, así como la conducción nerviosa y el transporte activo como la bomba 
de Na
+
/K
+
. A diferencia de los carbohidratos, proteínas y ácidos nucleicos, no forman 
polímeros, son más bien moléculas pequeñas que presentan una fuerte tendencia a asociarse 
mediante fuerzas no covalentes. Algunas de las propiedades de los lípidos pueden ser usadas 
para su reconocimiento, ya que pueden reaccionar con una variedad de agentes originándose 
productos coloreados, desprendimiento de vapores, formación de jabones, entre otros. 
El tejido adiposo está constituido principalmente por las grasas neutras, pero el cerebro 
contiene relativamente pocas, los constituyentes lipídicos de estos tejidos son los lípidos 
complejos como: fosfolípidos y colesterol. 
Basados en la solubilidad de los lípidos en solventes orgánicos, es posible extraer y purificar 
lípidos del cerebro por sucesivas extracciones con diferente solvente y posterior 
fraccionamiento de los extractos para obtener fracciones ricas en: esteroles, 
glicerofosfolípidos y esfingolípidos. El esquema se basa en los siguientes hechos: 
• Los esteroles son solubles en acetona, al contrario de lo que sucede con otros lípidos 
complejos. 
• Algunos glicerofosfolípidos, como las lecitinas, la fosfatidiletanolamina y la 
fosfatidilserina, son solubles el éter e insolubles en acetona. 
 
 
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• Los glucósidos de esfingosina se disuelven en alcohol caliente y son insolubles en 
acetona y éter. 
Los productos finales de este experimento son sustancias de una pureza relativa y serán 
identificados una vez efectuadas las extracciones. 
 
PARTE EXPERIMENTAL 
 
I - Extracción de lípidos 
Pesar 20 g de cerebro triturarlo en mortero y secarlo parcialmente en un vaso de precipitado. 
Agregar 50 ml de alcohol etílico, llevar a ebullición y mantenerlo por 3 minutos, luego filtrar 
por gasa. El filtrado se concentra en manta calefactora hasta unos 30 ml y se agregan luego 25 
ml de éter de petróleo, agitar y separar en ampolla de decantación. 
 
Se obtienen dos fracciones: 
Fracción superior A: etérea, que tendrá disueltos lecitina, cefalina, grasas, colesterol y restos 
de esfingomielina y cerebrósidos. 
 
Fracción inferior B: alcohólica que tendrá disueltos esfingomielina y cerebrósidos. 
 
Fracción A: concentrar en baño María a mitad de volumen inicial y agregar 25 ml de acetona: 
se observará un precipitado que corresponde principalmente a fosfolípidos, quedando en 
solución el colesterol y las grasas. Separar por centrifugación obteniendo un sobrenadante C y 
un precipitado D. 
Sobrenadante C: separar en dos fracciones, en una reconocer grasas y en la otra extraer el 
colesterol con 10 ml de éter, separar en ampolla de decantación y reconocer el colesterol. 
Precipitado D: reconocer lecitina y cefalina como fosfolípidos. 
Fracción B: reconocer cerebrósidos. 
 
II - Reacciones de reconocimiento 
 
1 - Reconocimiento de grasas: 
Es una prueba para identificar ácidos grasos, por lo tanto, general para los lípidos que los 
contengan. Los jabones se define químicamente como, las sales metálicas de los ácidos grasos 
superiores. 
Prueba de saponificación 
 
Calor 
NaOH 
 
 
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Se separan las grasas por saponificación, para esto se coloca 1 ml de la muestra, 1 ml de 
etanol y 0,5 ml de hidróxido de sodio al 40%. Calentar suavemente. Agregar unas gotas de 
ácido sulfúrico. La presencia de enturbiamiento indica liberación de ácidos grasos. 
 
2 - Reconocimiento de colesterol: reacción de Liebermann –Burchard. 
 
El colesterol reacciona con anhídrido acético y ácido sulfúrico concentrado. Se produce una 
pérdida de agua y una protonización del colesterol. Se constituyen en medio anhidro 
polímeros de hidrocarburos no saturados de intenso color verde azulado. 
Secar la muestra sobre manta calefactora. Resuspender en 2 ml de cloroformo. 
En un tubo de ensayo mezclar 1 ml de anhídrido acético y 1 ml de cloroformo. Enfriar a 0°C 
en baño de hielo. Agregar al tubo los 2 ml de la muestra y colocar en hielo. Agregar por las 
paredes 1 gota de ácido sulfúrico cc. Enfriar y observar. Una coloración verde azulada en la 
fase superior indica la presencia de grupo esteroide, colesterol en nuestro caso. 
 
3 - Reconocimiento de cerebrósidos: 
 
Mediante la reacción de Molish para hidratos de carbono. (Ver TP H de Carbono). 
 
4 - Reconocimiento de fosfolípidos: lecitina y cefalina mediante la determinación de la 
presencia de fósforo. 
 
 
La reacción se basa en que el fosfato inorgánico, en medio ácido, con el molibdato (reactivo 
1) da fosfomolibdato, color amarillo, que es reducido luego por el ácido ascórbico (reactivo 2) 
a azul de molibdeno, color azul verdoso. El reactivo 3 (arsenito/citrato) se combina con el 
exceso de molibdato impidiendo su reacción posterior con fosfatos liberados de ésteres 
lábiles, lo que se aprovecha cuando se quiere determinar fosfato inorgánico libre en presencia 
de, por ejemplo, fosfolípidos (que no es nuestro caso). 
 
 
Muestra soluble de ppdo D 1 ml 
Reactivo 1 0,5 ml 
Mezclar y esperar 30 segundos. 
Reactivo 2 0,5 ml 
Mezclar y esperar 30 segundos. 
Reactivo 3 0,75 ml 
 
Mezclar. Luego de 10 minutos la presencia de color azul demuestra la presencia de fosfato 
unido a lecitina y cefalina en el tejido. Se debe dejar a 37 ºC. Se debe dejar 10 minutos a 37 
ºC. 
 
 
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 Ebullición 
 Filtrar 
 
 
 
 Reducir volumen a la mitad 
 Agregar éter de petróleo, decantar 
 
 Identificación de Reacción de MolishCerebrosidos (+: interfase fucsia) 
 
 
 Reducir volumen a la mitad 
 Agregar acetona 
 
 
 
 Identificación de fosfolípido Determinación de 
 (Lecitina y Cefalina) la presencia de Fosforo 
 (+: Presencia de color azul). 
 
 
 
 
 
 
 
 
Identificación de colesterol identificación de ácidos grasos 
 
Reacción de Liberman-Burchard Saponificación 
(+: Fase inferior clorofórmica roja, 
Fase superior acida verde azulada). Reconocimiento de ácidos grasos libres Con H2SO4 
 (+: Presencia de turbidez). 
 
 
 
 
X g. de Cerebro y x ml 
de alcohol etílico 
HOMOGENATO 
 FILTRADO 
FRACCION B 
(Fase alcohólica) 
 
FRACCION A 
(Fase etérea) 
PRECIPITADO D 
SOBRENADANTE C