Histologia

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BIENVENIDOS
Introducción al estudio de la 
Histología y Morfología Celular
Prof. Nataly Gaerste
Unidad I. Introducción al estudio de la 
Histología y Morfología Celular
Objetivo General: Especificar las herramientas que utiliza la histología para el estudio ultraestructural de tejidos y de la célula como unidad morfológica y funcional del organismo
Contenido: • Histología. Concepto y aplicaciones Científicas y clínicas. 
 Técnica Histológica. Etapas en la preparación de tejidos para su estudio al microscopio óptico y electrónico.
 Histoquímica y Citoquímica
Microscopía. Tipos de Microscopios y aplicación. Microscopio óptico: partes y funcionamiento. Microscopio electrónico: de transmisión y de barrido.
Histología
Es la rama de la biología encargada del análisis microscópico de la anatomía celular y tisular de los tejidos biológicos. 
Marcello Malpighi es reconocido como el fundador de la Histología 
 Las primeras investigaciones histológicas se hicieron en el siglo XVII gracias a la invención del microscopio óptico por Antonio Van Leeuwenhoek 
 Es el estudio de la forma y la estructura de los organismos vivos organizados
¿Qué es la Anatomía?
Anatomía Macroscópica
Anatomía Microscópica
¿Qué es la Citología? o Biología Celular es una disciplina académica que se encarga del estudio de las células en cuanto a lo que respecta a las propiedades, estructura, funciones, organelos, su interacción con el ambiente y su ciclo vital. 
Órgano: unidad funcional mayor compuesto por distintos tipos de tejido
Sistema de Órganos: conjunto de órganos con funciones relacionadas
Tejido: agrupación de células con la misma función
Célula: Unidad morfológica y funcional de todo ser vivo. Es el elemento de menor tamaño que puede considerarse vivo.(Cel. Epiteliales cilindricas altas)
Bioquímica
Fisiología
Anatomía
Clínica
Genética
Patología
Histología
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Segundo nivel
Tercer nivel
Cuarto nivel
Quinto nivel
Técnica Histológica
Obtención de la muestra.
Las necropsias o autopsia 
Las biopsias 
Las piezas operadas. 
Animales de experimentación
Humanos
Necropsias: Se obtienen piezas de un cadáver. Para histología normal es necesario que se trate de un cadáver fresco y que no haya sido atacado por ninguna lesión, por lo menos el órgano que se quiere estudiar.
Biopsias: son trozos de tejido que se obtienen de un sujeto con vida con el objeto de estudiarlos al microscopio y efectuar un diagnostico histopatológico.
Piezas operadas: los tejidos han sido extraídos de las intervenciones quirúrgicas, generalmente tumores u órganos inflamados, también pueden darnos material de investigación.
Preparación Histológica de los tejidos
1- Obtención de la muestra
Fragmentos de tejido, de origen humano o animal.
Preparación Histológica de los tejidos
2-Fijación
Métodos
Químico: por inmersión 
Físico: por congelación
Formalina: solución acuosa de formaldehído al 37%
Preparación Histológica de los tejidos
 3-Deshidratación
	Se extrae el agua del tejido, utilizando para ello una serie de baños crecientes de alcohol.
Preparar al tejido para su encuentro con el medio de inclusión
TOMADO DE: Histología y Embriología del ser humano. Eynard-Valentich-Rovasio.
Preparación Histológica de los tejidos
4.- Aclaramiento: proceso por el cual se consigue la sustitución del agente deshidratante por una sustancia miscible (mezclable) con el medio de inclusión. (Xilol)
Preparación Histológica de los tejidos
5.-Infiltración (Impregnación o Inclusión) 
 Proceso que tiene por objeto “rellenar o infiltrar” completamente la muestra histológica con el medio que se va a usar para la imbibición (absorción) del tejido. (Baños sucesivos de parafina fundida)
Preparación Histológica de los tejidos
6.- Encastramiento del tejido y confección de los bloques: consiste en la obtención de un bloque sólido de tejido más medio de inclusión, mediante el enfriamiento lento a 10-15ºC: El bloque sólido se llama TACO.
TOMADO DE: Histología y Embriología del ser humano. Eynard-Valentich-Rovasio.
Preparación Histológica de los tejidos
7-Orientación de la pieza
Para realizar el corte del tejido se monta el taco en el microtomo y se obtienen cortes sumamente delgados (5-10 micrómetros).
Micro: pequeño / Tomo: corte
1 milímetro = 1000 micrómetros
Preparación Histológica de los tejidos
8- Montaje: los cortes se colocan sobre láminas portaobjetos cubiertos previamente con capa de albúmina o gelatina
Preparación Histológica de los tejidos
9- Aclaramiento: Extracción de la parafina con xilol (Desparafinación).
10.- Rehidratación: desplazar el xilol por agua. Alcohol con agua en concentraciones decrecientes
11.- Tinción o Coloración: con colorantes histológicos en su mayoría en solución acuosa
TÉCNICA HISTOLÓGICA O DE LA PARAFINA
FOTOGRAFÍAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGÍA. DPTO CS. MORFOLÓGICAS Y FORENSES.
Mx. Fijada en Formol al 10%
Gasa e identificación de la Mx.
TÉCNICA HISTOLÓGICA O DE LA PARAFINA
FOTOGRAFÍAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGÍA. DPTO CS. MORFOLÓGICAS Y FORENSES.
Corte del tejido (hoja de Bisturí)
Tejido Fijado
TÉCNICA HISTOLÓGICA O DE LA PARAFINA
FOTOGRAFÍAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGÍA. DPTO CS. MORFOLÓGICAS Y FORENSES.
Corte del tejido (hoja de Bisturí)
Tejido Fijado
TÉCNICA HISTOLÓGICA O DE LA PARAFINA
FOTOGRAFÍAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGÍA. DPTO CS. MORFOLÓGICAS Y FORENSES.
Batería de Deshidratación
Batería de Aclaramiento
TÉCNICA HISTOLÓGICA O DE LA PARAFINA
FOTOGRAFÍAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGÍA. DPTO CS. MORFOLÓGICAS Y FORENSES.
TÉCNICA HISTOLÓGICA O DE LA PARAFINA
FOTOGRAFÍAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGÍA. DPTO CS. MORFOLÓGICAS Y FORENSES.
Estufa
Inclusión en parafina fundida
TÉCNICA HISTOLÓGICA O DE LA PARAFINA
FOTOGRAFÍAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGÍA. DPTO CS. MORFOLÓGICAS Y FORENSES.
Estufa, con el tejido a ser incluido
TÉCNICA HISTOLÓGICA O DE LA PARAFINA
FOTOGRAFÍAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGÍA. DPTO CS. MORFOLÓGICAS Y FORENSES.
Cajas de papel para preparar el bloque
TÉCNICA HISTOLÓGICA O DE LA PARAFINA
FOTOGRAFÍAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGÍA. DPTO CS. MORFOLÓGICAS Y FORENSES.
Preparación del Bloque
TÉCNICA HISTOLÓGICA O DE LA PARAFINA
FOTOGRAFÍAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGÍA. DPTO CS. MORFOLÓGICAS Y FORENSES.
Tejido incluido en parafina
TÉCNICA HISTOLÓGICA O DE LA PARAFINA
FOTOGRAFÍAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGÍA. DPTO CS. MORFOLÓGICAS Y FORENSES.
Bloque terminado
TÉCNICA HISTOLÓGICA O DE LA PARAFINA
FOTOGRAFÍAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGÍA. DPTO CS. MORFOLÓGICAS Y FORENSES.
Microtomo
TÉCNICA HISTOLÓGICA O DE LA PARAFINA
FOTOGRAFÍAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGÍA. DPTO CS. MORFOLÓGICAS Y FORENSES.
Corte del tejido en el Microtomo
Bloque de Tejido
Cuchilla del Microtomo
TÉCNICA HISTOLÓGICA O DE LA PARAFINA
FOTOGRAFÍAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGÍA. DPTO CS. MORFOLÓGICAS Y FORENSES.
Tejido Cortado
Bloque de Tejido
Tejido Cortado
TÉCNICA HISTOLÓGICA O DE LA PARAFINA
FOTOGRAFÍAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGÍA. DPTO CS. MORFOLÓGICAS Y FORENSES.
Tejido Cortado en el Baño de flotación
Tejido Cortado
TÉCNICA HISTOLÓGICA O DE LA PARAFINA
FOTOGRAFÍAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGÍA. DPTO CS. MORFOLÓGICAS Y FORENSES.
Montaje del tejido en el portaobjeto para su desparafinación
Lámina Portaobjeto
Tejido
Biopsias por congelación
Para identificar hallazgos intraoperatorios inesperados, saber si se ha extirpado toda la masa patológica y si el borde de la resección quirúrgica está libre de tejido enfermo
• Se congelan fragmentos de tejido usando anhídrido carbónico comprimido o un líquido frío (isopentano) a una temp de -50ºC
• Corte del tejido congelado en un criostato (cámara refrigerada que contiene un microtomo)
• Montaje del corte en un portaobjetos 
• Tinción del corte: HE, azul de metileno y PAS
El proceso puede tardar 10 minutos y el resultado se comunica al cirujano inmediatamente
Investigar:diferencias entre microtomo y ultramicrotomo
Histoquímica y Citoquímica
 Procedimientos que proporcionan información detallada sobre la actividad química que tiene lugar en células y tejidos.
Colorante o anticuerpo marcado
Componente celular o actividad enzimática
Producto coloreado
Composición química de las muestras histológicas
 La composición química de un tejido preparado para la coloración de rutina es muy diferente a la del tejido vivo.
 Los componentes que quedan después de la fijación son moléculas de gran tamaño que no se disuelven con facilidad, entre ellos:
 Nucleoproteínas
 Proteínas intracelulares del citoesqueleto
 Proteínas extracelulares
 Complejos fosfolìpidos-proteínas
Composición química de las muestras histológicas
Los solventes disuelven los lípidos neutros
Las macromoléculas que se pierden durante la 
fijación de rutina son: Glucógeno, Proteoglucanos 
y glucosaminoglucanos
Los componentes solubles, los iones y las 
moléculas pequeñas también desaparecen 
durante la preparación de las muestras incluídas 
en parafina: glucosa, sodio,cloro y sustancias 
similares
Estos iones y pequeñas moléculas solubles no 
constituyen elementos morfogénicos hísticos sino 
que participan en los procesos de síntesis o en 
las reacciones celulares.
Colorantes usados en Microscopia óptica
Fundamento: Radica en la propiedad que
tienen todos los tejidos para incorporar y 
fijar de modo variable diversas sustancias 
coloreadas. Según su afinidad tisular:
Colorantes básicos
Colorantes ácidos
Colorantes neutros
Colorantes metacromáticos
Colorantes indiferentes
Colorantes Básicos: poseen una carga global positiva (catiónicos), 
reaccionan con los componentes aniónicos de las células. Ej.Hematoxilina
Colorantes Ácidos: poseen una carga global negativa (aniónicos), reaccionan con los componentes catiónicos de las células. Ej. Eosina
Sección de un glomérulo de un riñón de mamífero teñido con hematoxilina-eosina. Los núcleos aparecen de color violáceo (hemtoxilina) y el citoplasma de color rosado (eosina). 
Colorantes neutros: su carga global es neutra. Propiedad de colorear junta o separadamente diversas estructuras. Ej. Giemsa
Colorantes Indiferentes:
no poseen carácter ácido, básico o salino definido. 
Colorean mediante impregnación. Ejm: Plata
Fibras Reticulares
Ganglio de rata
Coloraciones más utilizadas
Coloración Hematoxilina-Eosina (H.E): 
Utiliza dos tipos de colorantes. La 
hematoxilina que es un colorante 
básico, colorea los componentes 
ácidos de la célula (núcleo) de color 
morado; y la eosina que es un 
colorante ácido se une a estructuras 
básicas de la célula (citoplasma) 
otorgándole una tonalidad rosada
Testículo
Coloración con PAS (ácido periódico-Shiff): se usa para determinar la presencia de macromoléculas ricas en glúcidos como glucógeno, glucoproteínas y glucosaminoglucanos. Se observa color fucsia al microscopio óptico.
(Coloración Histoquímica)
Hígado. Glucógeno
Coloración con Azán: (tricrómica): se obtiene tres colores diferentes: Azul oscuro en los núcleos de la célula; rojo en el músculo, queratina y citoplasma celular, y azul claro en el mucinógeno y colágeno, o sea en el tejido conjuntivo
Coloración con metales: actúan impregnando a ciertos componentes celulares. Se usan para demostrar aparato de golgi, y las neurofibrillas.Ej: sales de plata, tetraóxido de osmio.
Tejido colágeno
Corte transversal de nervio, la mielina (en negro) coloreada con tetróxido de osmio. 
Coloración con hematoxilina férrica: útil para estudiar detalles celulares finos. Ej. Las fibras elásticas y las mitocondrias presentes en el citoplasma de ciertas células
 
Tricrómico de Cajal y Gallego: implica el uso de tres colorantes. Para demostración diferencial y selectiva de las fibras colágenas y del músculo.
Raíz de cebolla
Tejido conectivo denso de color azul y el músculo estriado esquelético de color rojo oscuro. 
La ocreína y la fucsina resorcina: son colorantes para fibras elásticas. Se observan entre bordeau y castaño oscuro.
Elementos celulares que presentan basofilia, que representan los estructuras ácidas y se ven de color morado al microscopio óptico
 Heterocromatina y nucléolos del núcleo
 Algunos componentes citoplasmáticos
 Material extracelular
Elementos celulares que presentan acidofilia, que representan las estructuras básicas y se ven de color rosado al microscopio óptico
La mayoría de los filamentos citoplasmáticos
La mayoría de los componentes membranosos intracelulares
La mayoría de las fibras extracelulares
Microscopía
Microscopio
Instrumento que amplifica una imagen y permite la 
observación de mayores detalles de los posibles a 
simple vista.
M. Óptico
compuesto
Campo claro
Campo oscuro
Contraste de fase
Fluorescencia
Luz U.V.
M. Electrónico
Transmisión (MET)
Barrido (MEB)
La Luz como onda
En una onda electromagnética, por ejemplo, el campo eléctrico cambia en intensidad de manera cíclica así: 
• Cada ciclo de la onda se repite en intervalos separados por una longitud de onda
• La frecuencia mide el número de estos ciclos que ocurren cada segundo.
• En la luz, la longitud de onda determina el color de la luz (por ejemplo la longitud de onda correspondiente al color verde es de 550 nanómetros) 
EL ESPECTRO ÓPTICO
La luz blanca está compuesta de ondas de diversas frecuencias. Cuando un rayo de luz blanca pasa por un prisma se separa en sus componentes de acuerdo a la longitud de onda así: 
AUMENTO
Es la relación entre el tamaño de la imagen y el del objeto en medidas lineales
El Aumento de un microscopio es:
Am= A lente objetivo x A Lente ocular
Ej: 	Ocular: 10X
	Objetivo: 40X
¿Cuanto es el aumento del microscopio?
Microscopía
Microscopía
Poder de resolución
Es la capacidad de producir imágenes separadas de objetos que están muy cerca uno de otro. Numéricamente equivale a d o distancia mínima entre dos objetos distinguibles.
Ojo humano: d= 0.2 mm
 Depende de:
Apertura numérica (An) del sistema óptico (objetivo y condensador)
Longitud de onda de la luz incidente ()
	
Microscopio óptico de Campo Claro
Usa Luz Visible. D = 0.2 um.(micrométro)
La luz atraviesa el objeto examinado y el 
objetivo capta la luz directa proveniente
de la fuente luminosa
Utilidad: Académico, Diagnóstico clínico
 (Lab. Bioanálisis, Patológico), Investigación.
Componentes Principales:
 Fuente Luminosa
 Lente Condensadora: para enfocar el haz de luz a la altura de la muestra
- Platina: sobre la que se coloca la muestra.
- Lente Objetivo: para recoger la luz que ha atravesado la muestra
- Lente ocular: a través de la cual se puede examinar directamente la imagen formada por la lente objetivo
MICROSCOPÍA
PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO
Mecánicas
Cabezal
Brazo
Revolver
Platina
Carro
Tornillos macrométrico y micrométrico
Base
Ópticas
Lámpara
Condensador/Diafragma
Objetivos
Oculares
Examen de un Preparado Histológico con el Microscopio Óptico
Los artefactos o artificios son elementos que 
representan un error en el proceso de preparación (partículas de polvo, fragmentos de vidrio, agregados de colorante, filamentos de gasa etc.)
OTROS SISTEMAS ÓPTICOS
• Microscopio de Contraste de Fase: Aprovecha las pequeñas diferencias en el índice de refracción que hay en diferentes partes de una muestra de células o tejidos. - 
Las partes oscuras corresponden a las regiones densas y las partes claras corresponde a las regiones menos densas
Utilidad: permite observar las células 
en acción y estudiar los movimientos 
implicados en procesos como la mitosis 
o la migración celular. Estudiar cortes
semifinos no teñidos
Microscopio de Campo Oscuro
La lente objetivo no capta la luz directa proveniente de la fuente luminosa
El principio se consigue con un condensador específico que permite transmitir la luz de forma circular, dejando el centro oscuro. 
 Con esto se logra que el fondo de la muestra aparezca negro y los especimenes brillantes.
Utilidad:En la práctica clínica para 
la detección de cristales en la orina
y la identificación de espiroquetas 
Microscopio de Fluorescencia
Aprovecha la capacidad de algunas moléculas de fluorescer bajo la luz UV
Utilidad: Detección de moléculas con autofluorescencia como la vitamina A y algunos neurotransmisores (fluorescencia natural)
 En técnicas de inmunocitoquímica (fluorescencia secundaria), 
- En la investigación del trayecto de fibras nerviosas
Microscopio de Luz ultravioleta (UV)
Utiliza lentes de cuarzo con una fuente de luz ultravioleta.
 La imagen depende de la absorción de la luz UV por las moléculas de la muestra.
La muestra no puede inspeccionarse directamente a través del ocular porque la luz UV no es visible y lesiona el ojo.
Utilidad: Detectar ácidos nucleicos, en 
especial las purinas y pirimidinas. Detectar 
proteínas que tienen ciertos aminoácidos
en la práctica clínica para evaluar el grado
de ploidia en cortes de tumores
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
Representa un gran adelanto respecto a la microscopía óptica ya que:
• La longitud de onda del haz de electrones es 2000 veces 
menor que la del haz de luz, por lo que aumenta la 
resolución por un factor de 10³
Los electrones no pueden atravesar el vidrio, por lo que 
deben remplazarse por bobinas o lentes electromagnéticas
Existen dos tipos: MET y el MEB
 Microscopio Electrónico de Transmisión
Utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz
La fuente es un filamento de tungsteno 
calentado que emite electrones
El haz de electrones atraviesa una
serie de lentes electromagnéticas que 
Cumplen la misma función que las lentes 
cristal de un microscopio óptico
La imagen final se observa en una pantalla 
fosforescente
Microscopio electrónico de barrido
- El haz de electrones no atraviesa la muestra sino que explora (barre) su superficie.
- Forma una imagen de tipo tridimensional en un tubo de rayos catódicos de alta resolución.
GRACIAS
INVESTIGAR
1-La célula: Concepto, función, tipos (procariotas y eucriotas), tamaños y formas y organizaciones celulares.
2-Citoplasma: Organelas membranosas: Membrana plasmática o Plasmalema: Modelos
3-Movilización de sustancias, receptores. Transporte vesicular. Exocitosis y endocitosis.
4-Endosomas, lisosomas, retículo endoplasmático liso y rugoso, aparato de Golgi, mitocondrias, peroxisomas. 
INVESTIGAR
5-Organelas No membranosas: (citoesqueleto) Microtúbulos, Microfilamentos, filamentos intermedios, centriolos y centros organizadores de microtúbulos, cuerpos basales.Citosol. Inclusiones citoplasmáticas:
INVESTIGAR