TEMA 25 EVALUACION DE LA INMUNIDAD

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RESUMEN DE INMUNOLOGÍA TEMA 25 
EVALUACION DE LA INMUNIDAD 
 
1. GENERALIDADES 
La Evaluación Diagnóstica del Sistema Inmunitario ha evolucionado 
rápidamente: 
– El desarrollo del conocimiento sobre las enfermedades inducidas por 
microorganismos. 
– Ampliado el campo de aplicación a una amplia variedad de patologías 
involucradas con mecanismos inmunitarios 
– Desarrollos de nuevos métodos de inmunoensayo e 
Inmunodiagnóstico. 
– Nuevas y actualizadas interpretaciones clínicas de los procedimientos 
inmunológicos. 
Evaluar el estado inmunitario requiere poseer información autorizada sobre los 
mejores métodos disponibles, para conducir específicas pruebas 
inmunológicas. 
– Se requieren métodos de laboratorio diseñados para medir las 
respuestas específicas en los pacientes, como trastornos por 
autoinmunidad, estados de hipersensibilidad inmediata y demorada, y 
estados de malignidad. 
– Humorales 
– Celulares 
Clasificación: Según la información que aportan. 
Cuantitativas: 
Precisan con exactitud la concentración absoluta por ml., del elemento que 
interesa investigar. Aporta una medición numérica de datos y análisis 
estadísticos con el fin de establecer pautas de comportamiento, probar teorías. 
Permite analizar las mediciones utilizando métodos estadísticos y se extraen 
conclusiones, diagnósticos o investigación. 
Cualitativas: 
Solo indican la presencia o ausencia del elemento de interés que se está 
analizando. El enfoque cualitativo se originó con Max weber (1864-1920) quién 
introdujo el término “Verstehen” (entender), reconociendo que además de la 
descripción y medición de variables, deben considerarse los significados 
subjetivos y la comprensión del contexto en el que ocurre el fenómeno 
Semicuantitativas: 
Indican la presencia del elemento de interés en concentraciones relativas, 
unidades o títulos de actividad. Aportan una medición por rangos de niveles 
aproximados de anticuerpos o los que detecten. 
Se entiende por métodos de evaluación de riesgo, aquellos que, no llegando al 
detalle y rigor de una evaluación cuantitativa de riesgo, suponen un avance hacia 
ello desde métodos cualitativos, en el sentido que son métodos que dan como 
resultado una clasificación relativa del riesgo asociado a la confiabilidad de los 
métodos diagnósticos. 
Confiabilidad de los métodos diagnósticos 
Depende de varios factores: 
Precisión del Método de Medida: 
Grado de concordancia de los resultados entre sí, después de haber medido una 
misma cantidad varias veces en las mismas condiciones. 
Exactitud: 
Grado de concordancia de las mediciones con el valor verdadero de la 
característica que se quiere medir; es decir proximidad de los datos del valor 
real. 
Sensibilidad diagnóstica: 
Capacidad de la prueba de dar un resultado positivo cuando la persona analizada 
tiene la enfermedad. 
Sensibilidad analítica: 
Se refiere a la capacidad de la prueba de identificar correctamente a los 
enfermos que forman parte de una población. 
Especificidad: 
Representa la capacidad de la prueba para identificar correctamente en una 
población a las personas que no tienen la enfermedad. 
Valor predictivo positivo: 
Representa la probabilidad de que el paciente tenga la enfermedad al obtenerse 
un resultado positivo en la prueba. 
Valor predictivo negativo: 
Representa la probabilidad de que el paciente no tenga la enfermedad al 
obtenerse un resultado negativo en la prueba. 
Características de las pruebas Inmuno serológicas 
Precisión: 
Reproducibilidad o Repetitividad. 
Es el grado de coincidencia entre los resultados cuantitativos obtenidos de 
repetidos análisis llevados a cabo sobre una misma muestra, 
independientemente del verdadero valor de la sustancia medida. Cuanto 
menores sean las diferencias entre los resultados obtenidos con ensayos 
repetidos, mayor será la precisión del método. 
Exactitud: 
Se refiere a la magnitud de la discrepancia entre el resultado de una prueba 
cuantitativa y la verdadera cantidad de la sustancia que se está midiendo. Cuanto 
menor sea la diferencia entre el valor obtenido para una sustancia y su verdadero 
valor, mayor será la exactitud del método utilizado para medirla. 
Sensibilidad: 
Capacidad de un método para detectar muy bajas concentraciones de una 
sustancia. Capacidad de un método de producir un resultado positivo cuando el 
verdadero estado de la muestra es positivo. 
Especificidad: 
Capacidad de un método para producir un resultado negativo cuando el 
verdadero estado de la muestra es negativo. 
Umbral de Significación Clínica 
En muchos análisis inmunológicos existe una concentración finita de un 
componente, por debajo del cual las concentraciones no tienen valor para 
evaluar el estado clínico del paciente. Un nivel de concentración de un 
componente por debajo del cual no hay significación clínica. En consecuencia, 
no hay necesidad de buscar un método con un límite de detección inferior al 
requerido para la significación clínica. Se puede establecer un “Umbral de 
Significación” para el componente de interés. 
Valor de predicción de una prueba 
VP= Es una estimación sobre la probabilidad de que exista la enfermedad 
considerando el resultado de la Prueba 
VP POSITIVO= Una fracción de las pruebas con resultados anormales que 
representan que se padece la enfermedad. 
VP NEGATIVO= Es la fraccion de las pruebas con resultados normales que 
representan la ausencia de enfermedad. 
2. PRUEBAS DE INMUNOHEMÓLISIS 
El Principio metodológico se basa en la liberacion o no de la Hb. De eritrocitos 
por interaccion con anticuerpo especifico hacia determinantes antigenicos 
situados en su superficie, debido a la accion del complemento. Utiliza antigenos, 
anticuerpos y eritrocitos. 
Su Utilidad Clínica se basa en usarlo como un método de evaluacion, para 
poder identificar: Integridad del sistema del complemento. Ausencia o 
disminucion componentes del sistema del complemento. Determinacion de ags. 
O acs. Por interpretacion de lisis o integridad de eritrocitos.´ 
Modalidades 
 Complemento hemolitico total (CH50) 
 Via alterna hemolitica (VA-CH50) 
 Fijacion de complemento 
 Inhibicion de la inmunohemolisis 
PRUEBA PRINCIPIO METODOLÓGICO UTILIDAD CLÍNICA 
Complemento 
Hemolítico Total 
(CH50) 
Determinacion de la cantidad de 
suero del paciente necesaria para 
producir lisis del 50% de los 
eritrocitos presentes en una 
suspension debidamente 
estandarizada y optimamente 
sensibilizados, en condiciones 
rigurosamente controladas de PH, 
fuerza ionica, optimas y temperatura 
de 37º c durante 30 minutos de 
incubacion en un volumen de 
reaccion de 2 ml. 
Funcionalidad, activación 
o integridad del sistema 
del complemento. 
Ausencia genética de 
componentes. 
Algunas deficiencias 
adquiridas. 
Sitemas de ensayo 
incompletos 
suplementados con 
muestra del paciente. 
Vía alterna 
hemolítica 
(VA-CH50) 
Propiedad de eritrocitos de conejo no 
sensibilizados de activar la via 
alterna del complemento, 
dependiente de un componente de 
membrana. 
Funcionalidad, activación 
o integridad de la vía 
alterna del complemento. 
Ausencia genética de 
componentes. 
Algunas deficiencias 
adquiridas 
Fijación del 
Complemento 
Los complejos Ag:Ac formados 
durante una reaccion fijan el 
complemento, e impiden que ese 
mismo complemento sea fijado por 
el sitema hemolisina:eritrocito o 
sistema hemolitico. 
Deteccion de Ags. Y Acs. 
Asociados a infecciones y 
enfermedades infecciosas 
y parasitarias. 
Inhibición de la 
Inmunohemólisis 
Es la propiedad que tiene un 
anticuerpo especifico de combinarse 
a un factor hemolitico conocido e 
inhibir la propiedad hemolitica del 
mismo. 
Diagnostico de infecciones 
post-streptococcicas como 
la carditis reumatica y 
glomerulonefritis aguda . 
Valores referenciales 
hasta 166-250 u todd. 
 
3. ELISA 
Es un procedimiento diágnostico que utiliza un Ag o Ac ligado a una enzimapara 
detectar Ag o Ac de una muestra biológica. 
En general, se fija uno de los componentes de la reacción Ag/Ac a un soporte 
sólido, colocando luego ese sistema en contacto con la muestra biológica en fase 
fluída, que contiene el reactivo complementario. 
En el Inmuno ensayo enzimático ligado a enzima (ELISA) se usan fosfatasas 
alcalina sy peroxidasa, para generar reacciones inmunohistoquímicas con los 
compuestos, en el caso de las fosfatasas alcalnas al reducir al p-Nitrofenilfosfato 
a p-Nitrofelinolato genera una pigmentación amarilla característica, mientras que 
en el caso de la reduccion producida por la enzima peroxidasa reduce al peroxido 
de hidrogeno a agua mas oxigeno, a esto le sumamos un cromógeno alfa-
felilendiamina (un agente que otorga color) a ese grupo auxócromo (el reducido) 
que genera esa coloración narajna característica. 
Modalidades diagnósticas´ 
Modo indirecto 
Pasos 
1. Ag conocido es acoplado a la fase sólida. 
2. Suero problema para indagar la presencia de esos anticuerpos 
específicos. 
3. Conjugado: Acs Anti Ig Unida a una enzima. 
4. Sustrato de la enzima evidencia la posibilidad de la reacción. 
Aplicación 
Determina la presencia de Ac específicos a un Ag conocido. 
Modo doble anticuerpo 
Pasos 
1. Ac específico conocido acoplado a fase sólida. 
2. Suero problema con Ag a determinar. 
3. Conjugado: Ac específico se une a la enzima. 
4. Reacción sustrato-enzima para evidenciar la reacción. 
Aplicación 
Identifica Ag presentes en un suero problema. 
Modo competitivo 
Pasos 
1. Ac específicos acoplados en fase sólida A y B. 
2. A se le añade Ag problema marcada con una Enzima. 
3. B se le añade Ag problema + muestra problema marcada con una 
Enzima. 
4. Ve se compite y forma el sustrato de la enzima. 
Aplicación 
Identificar Ag 
Modo Anti IgM 
Pasos 
1. Ac anti IgM acoplado en fase sólida. 
2. Suero problema IgM TOTAL. 
3. Antígeno específico para identificar IgM. 
4. Conjugado: Ac específico unido a una enzima. 
5. Sustrato enzimático en respuesta revela la reacción. 
Aplicación 
Revela Anti-IgM 
Utilidad clínica 
PRUEBAS FUNCIÓN EJEMPLOS 
ELISA Indirecta Investigar presencia de Acs 
en suero 
Demostrar Acs de: 
Parásitos 
Bacterias 
Virus 
ELISA Anti-IgM Investigar presencia de 
Infecciones recientes por 
IgM 
Demostrar IgM reciente: 
Dengue 
Toxoplasmosis 
ELISA Doble Ac Invertigar presencia de Ags 
en suero 
Demostrar Ags de: 
Superficie para Hepatitis B 
Hormonas 
IgE 
Drogas 
 
Ventajas del uso de ELISA 
 La reacción puede leerse a simple vista color e intensidad. 
 No se emplean isotopos radiactivos, menor complejidad técnica. 
 Extremadamente alta sensibilidad, especificidad y reproducibilidad 
semejante a RIA. 
 Puede detectar Ag. directamente en tejidos. 
 Alta versatilidad técnica. 
 Muy poco riesgo biológico 
 
4. Pruebas de inmunofluorescencia 
Son reacciones Ag:Ac que se hacen visibles por la incorporaciones de un 
colorante de índole fluorescente que no modifica la especificidad del Ac. Es una 
técnica citoquímica o histoquímica que permite la detección y localización de Ag 
y de Ac fijados a tejidos o sobre partículas que pueden ser visualizadas 
microscópicamente mediante la utilización de un conjugado. 
La fluorescencia es una propiedad de las sustancias de emitir un espectro de luz 
visible por radiación, de energía inferior al ser iluminados con radiación de luz de 
onda corta. El fenómeno es instantáneo y una vez que el agente no recibe la 
iluminación excitante deja de brillar. 
Fluorocromo: 
Sustancia con la capacidad de emitir fluorescencia, emisión que es muy sensible 
al medio físico químico en el cual se encuentra la muestra. Los más utilizados en 
los laboratorios son la Fluoresceína y la Tetramil rodamina. 
Conjugado: 
Es el fluorocromo + Ac específico, un trazador sensible con reactividad 
inmunológica intacta. 
Tipos 
PRUEBA MODO DE EMPLEO REACCIÓN UTILIDAD CLÍNICA 
IF Directa 1. Se emplea el 
conjugado 
(explicado arriba) 
2. La muestra a 
analizar se 
extiende en un 
porta-objetos, 
depositando 
encima el Ac. 
Marcado. Se lavan 
los Acs. No fijados 
y se observa al 
microscopio de 
fluorescencia. 
Los Acs. 
Fluorescentes 
fijados sobre el 
Ag. lo hacen 
visible. 
Identificación de Poblaciones y 
Subpoblaciones de Linfocitos T y B. 
Detección de componentes del 
Complemento en tejidos. 
Detección de microorganismos en 
tejidos o cultivos. 
Identificación de Antígenos 
Específicos de: 
Tumores 
Trasplante 
Histocompatibilidad 
Identificación de depósitos de 
proteínas en tejidos en 
enfermedades renales y piel. 
IF Indirecta 1. Los Ags. 
(microorganismos, 
células, tejidos) 
conocidos se 
extienden sobre un 
porta-objetos. 
2. Se deposita 
encima suero 
problema que 
puede contener los 
Acs. 
Desconocidos. 
La reacción 
Ag.:Ac. Se 
revela por la 
adición de 
suero anti-
inmunoglobulin
a (anti-IgG o 
anti-IgM) 
marcados. 
Demostración de anticuerpos en 
casos de: Sífilis, Toxoplasmosis, 
etc. 
Detección de Acs. Anti-nucleares, 
anti-mitocondrias, anti-músculo liso, 
etc. 
Demostración de la clase de Acs. 
IgG o IgM 
Titulación en diluciones de suero 
problema. 
Solo requiere de un conjugado para 
detectar muchos anticuerpos. 
 
5. Reacciones de precipitación 
Las reacciones de precipitación son un tipo común de reacciones en disolución 
acuosa que se caracterizan por la formación de un producto insoluble o 
precipitado. Un precipitado es un sólido insoluble que se separa de la disolución. 
Reacciones donde se evidencia un precipitado visible, cuando reacciona un Ag 
soluble (precipitógeno) y su Ac correspondiente (precipitina). Se puede realizar 
en forma cualitativa, semicuantitativas o cuantitativa. Son reacciones poco 
sensibles. No todos los Acs son precipitantes. Los más eficaces pertenecen a 
las IgG. 
Factores importantes: electrolitos, pH, temperatura y concentraciones relativas 
del Ag y el Ac. 
Utilidad: Detectan Ac o Ag en una muestra biológica. 
 
Modalidades de Reacción 
Medio Líquido: 
 
Medio Semisólido: 
PRUEBA CONCEPTO UTILIDAD 
Inmunodifusión 
Doble 
Se crean pozos sobre una placa de gel y 
se coloca el Ag en uno y el Ac en otro. 
De esta manera, se difunden radialmente 
y en el punto donde están en 
concentraciones óptimas se forman 
bandas de precipitación. 
Es considerado el 
proceso estándar para la 
detección de Antígenos 
Nucleares Extraíbles. 
Inmunodifusión 
Radial 
La inmunodifusión radial es una técnica 
de análisis inmunológico de tipo 
cuantitativo. A diferencia de muchas 
técnicas de precipitación en gel y líquido 
que detectan cualitativamente el 
antígeno, el RID es una técnica 
cuantitativa sensible que se usa a 
menudo clínicamente para detectar 
niveles de proteínas sanguíneas en 
pacientes. 
Se utiliza para detectar la 
cantidad de anticuerpos 
IgG, IgM e IgA que hay en 
el suero de un individuo. 
Inmuno-
electroforesis 
En la inmunoelectroforesis, las proteínas 
se separan por primera vez mediante 
electroforesis en gel de agarosa 
horizontal sobre la base de sus 
diferentes relaciones de carga a masa. El 
gel con las proteínas separadas 
(antígenos) se retira entonces del campo 
eléctrico y los anticuerpos para las 
proteínas se introducen en canales 
estrechos paralelos a los antígenos 
separados. Se produce la difusión de 
Se utiliza en el examen de 
ciertas anomalías del 
suero, especialmente 
aquellas que implican 
inmunoglobulinas, 
proteína de orina, líquido 
cefalorraquídeo, fluidos 
pleurales y otros fluidos 
corporales. Puede usarse 
para monitorizar 
purificaciones de Ags y/o 
ambos anticuerpos antigénicos y, en un 
locus particular, se alcanza el punto de 
equivalencia que da como resultado la 
precipitación. 
Acs, detectar impurezas, 
analizar antígenos 
solubles de tejidos 
vegetales y animales y 
extractos microbianos. 
 
6. Reacciones de aglutinación 
Fenómeno observado cuando se mezclan antígenos particulados ensuspensión con un suero que contiene anticuerpos frente a los determinantes 
de superficie de dichas partículas. 
Los antígenos más frecuentemente implicados son Bacterias y Eritrocitos. 
El resultado de la unión Ag-Ac es la formación de agregados que aumentan de 
tamaño y tienden a sedimentar en el fondo del tubo. 
 
Características 
 Reacción bastante sensible, detecta pequeñas cantidades de Ag y Ac, pero 
es menos especifica que la Precipitación. 
 Los inmunosueros frente Ags. Complejos (bacterias o células), contienen 
una mezcla de Acs. Heterogéneos a determinantes superficiales. La 
reacción es por consiguiente el resultado de una serie de diversos sistemas 
Ag-Ac. 
 Los Ags. particulados se mantienen en suspensión por repulsión 
electronegativa superficial. Los Acs. Al reaccionar vencen la repulsión por 
aporte de cargas electropositiva. 
 Los IgM son aglutinantes mas eficaces por mayor volumen y carga 
electropositiva. 
 La Reacción de Aglutinación en sus diferentes modalidades, se usa 
ampliamente en el diagnóstico serológico de enfermedades Infecciosas e 
inmunología clínica. 
 No se presta a estudios cuantitativos exactos, dadas la complejidad de los 
Ags. Y la heterogeneidad de los Anticuerpos Implicados. 
 La Reac. Aglut. necesita presencia de electrolitos, está influida por el pH, la 
temperatura y las condiciones fisicoquímicas del medio. 
 La agitación facilita la formación de agregados aumentando la velocidad de 
reacción. 
Prueba de Coombs 
Directa: GR del feto o recién nacido mezclado con suero de Coombs 
Indirecta: con suero de la embarazada adicionada con GRrh+ 
mezclada con suero de Coombs 
 
7. Pruebas de Neutralización 
La interacción de anticuerpos con enzimas, toxinas, o virus, cuyo resultado es 
respectivamente la pérdida de actividad biológica, toxicidad, infecciosidad o 
actividad enzimática, respectivamente. La actividad neutralizante de un 
antisuero puede ser expresada como una cinética de neutralización, índice de 
neutralización o constante de velocidad (K). 
 
Tipos de neutralización 
 
TIPO CONCEPTO UTILIDAD 
Viral + específica de las 
reacciones Ac-virus 
Modalidades: 
Diluciones seriadas de 
suero, virus constante 
Reducción de placas (50% 
de reducción) 
Tasa de inactivación viral 
por acs.(cinética) k = 
constante 
Ser protección de 
animales inoculados con 
virus. 
Inhibición del e.c.p. viral. 
Identificación (cualitativa) 
Agente viral aislado con antisuero de referencia 
Respuesta inmune a muchos agentes virales 
Estado inmunidad a muchas infecciones virales 
Infecciones virales en humanos o animales. 
 
Cuantificar (más significativa y útil) 
Estado de inmunidad de una población dada 
Niveles de acs. Nt. En sangre de pacientes 
Desarrollo de inmunidad en un paciente 
Potencia neutralizante de sueros inmunes 
Evaluación de respuesta A vacunas antivirales 
Cinetica de nt. Viral 
Bacteriana Neutralización enzimática. 
Evidenciar acs. 
Antienzimas 
Antihialuronidasa 
Antiestreptoquinasa 
ADN-b 
Titulacion de 
antietreptolisinas (ASO) 
Prueba de schick (difteria) 
Nt. Toxina en 
Piel de conejo o 
cobayo 
Cultivo de tejidos 
Ratones (tetanos) 
Estudios inmunocompetencia 
(inmunodeficiencias) 
Infección reciente por estreptococos a b 
hemolítico 
Ayuda diagnostico fiebre reumática y 
glomerulonefritis aguda. 
Valoración de potencia de antitoxinas 
 
Inhibición de inmunohemólisis 
 Principio metodológico 
 Es la propiedad que tiene un anticuerpo especifico de combinarse a un 
factor hemolítico conocido e inhibir la propiedad hemolítica del mismo. 
 Utilidad clínica 
 Diagnóstico de infecciones post-estreptocócicas como la carditis reumática 
y glomerulonefritis aguda. 
 Valores referenciales hasta 166-250 u todd. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Se refiere a la medición de anticuerpos anti-estreptococo betahemolíticos del tipo 
A. Esta bacteria produce una enzima llamada estreptolisina O, que puede 
destruir los hematíes por lo que el cuerpo reacciona contra ella produciendo 
anticuerpos específicos antiestreptolisina O haciendo hemólisis. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Es un examen de sangre para buscar anticuerpos contra una sustancia 
(proteína) producida por el estreptococo del grupo A. Se forma un coagulo si es 
positiva la prueba. 
 
8. Pruebas de Respuesta Inmune Celular 
Conjunto de métodos que evalúan la respuesta inmune celular. 
Cualitativos: Orientados a medir la funcionalidad de los linfocitos. 
Cuantitativos: Finalidad hacer recuentos de linfocitos. 
Exploración 
1. Se inyectan 3 Ags de los 4 mencionados. 
2. Paciente debe dar + por lo menos a un Ag. 
3. Pacientes con deterioro de la función celular, no hay respuesta celular. 
4. Anergia cutánea, ausencia de respuesta cuando se inyecta un 
determinado Ag. 
¿Qué hacer en caso de que el paciente de negativo a los Ags usados? 
Paciente da negativo (-) a los Ags utilizados se recomienda hacer una 
Sensibilización activa con DNCB (Inmunomoduladores) donde: 
1. Sensibilizar previamente con DNCB en el día 0. 
2. Luego aplicar dosis de reto, diferentes discos impregnados con 
diferentes concentraciones de DNCB en el día 14. 
3. Lectura al día 16, 18 y 20. 
4. Positividad: Eritema e induración. 
5. Si respuesta es negativa se repite el desafío al día 30 
El DNCB induce una reacción porque al combinarse con las proteínas de 
la piel adquiere inmunogenecidad. 
INDICE CD4 / CD8 RECUENTO DE LFT Y LFB 
Valor referencial o normal: 1,5-2. Cada LFT debe ebe tener por lo 
menos 3 glóbulos rojos. 
Índice medido como una prueba 
aislada no revela nada. 
Importante para seguir la evolución 
de una enfermedad. 
Separación de linfocitos por gradiente 
de Ficoll/Hypaque. Recuento también 
se puede hacer mediante Acs 
monoclonales fluorescentes anti-
linfocitos T (por ej:anti-cd3, 
Citometría de flujo). 
Aumentado en diabetes mellitus tipo I 
insulino- dependiente, Lupus 
eritematoso sistémico sin 
enfermedad renal. 
Disminuido en SIDA – VIH. 
Aumento de la cantidad de células T 
puede deberse a: Cáncer de los 
glóbulos blancos llamado LLA 
Disminución drástica del número de 
linfocitos conduce a repetidas 
infecciones por bacterias, virus, 
hongos y parásitos. 
 
Antígenos: 
Requieren de sensibilización previa. 
Activadores oligoclonales. 
Activación específica. 
 
Ags utilizados: 
PPD. 
Cándida albicans,(extracto). 
Toxoide tetánico. 
Estreptolisina O. 
Evaluación de respuesta linfoproliferativa 
Síntesis de ADN, la más sensible: 
Al medio de cultivo donde están los linfocitos del paciente, se le añade timidina 
H3 A medida que la célula prolifera va incorporando timidina y luego se mide la 
radioactividad incorporada al ADN. Se debe montar un control (tubo sin 
mitógenos o activador de respuesta, inducen a la división celular y activas 
policlonales inespecíficas, no necesitan de una sensibilización previa para 
inducir una proliferación). 
Reporte: Índice de estimulación.