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Universidad Veracruzana Facultad de Nutrición – Xalapa Manual de Prácticas de la EE de: “BIOQUÍMICA ESTRUCTURAL” Elaborado por: HILDA LETICIA GÓMEZ RIVAS Xalapa, Veracruz Junio 2017 2 INDICE Contenido INTRODUCCION .................................................................................................................. 3 JUSTIFICACION ................................................................................................................... 4 CONTENIDO ......................................................................................................................... 4 UNIDAD I Antecedentes cognitivos ...................................................................................... 4 BIBLIOGRAFIA .................................................................................................................... 5 UNIDAD I Antecedentes cognitivos ...................................................................................... 6 Practica No. 1: Reglamento del Laboratorio ...................................................................... 7 UNIDAD I Antecedentes cognitivos .................................................................................... 15 Practica No. 2: Conocimiento de material de laboratorio ................................................ 16 UNIDAD I Antecedentes cognitivos .................................................................................... 20 Practica No. 3: Preparación de soluciones........................................................................ 20 UNIDAD II Conceptos generales de la bioquímica estructural ........................................... 24 Practica No. 1: Reconocimiento de sales.......................................................................... 24 UNIDAD III ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE LAS PRINCIPALES BIOMOLÉCULAS ............................................................................................................... 28 Practica No. 1: Propiedades Generales del agua .............................................................. 28 UNIDAD III Estructura y propiedades de las principales biomoléculas.............................. 32 Practica No. 2: Reconocimiento de glúcidos .................................................................... 32 UNIDAD III ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE LAS PRINCIPALES BIOMOLÉCULAS ............................................................................................................... 39 Practica No. 3: Reconocimiento de lípidos ...................................................................... 40 Objetivo de aprendizaje ................................................................................................ 41 UNIDAD III ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE LAS PRINCIPALES BIOMOLÉCULAS ............................................................................................................... 45 Practica No. 3: Extracción de lípidos animales y determinación de ácidos grasos totales .......................................................................................................................................... 46 UNIDAD III ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE LAS PRINCIPALES BIOMOLÉCULAS ............................................................................................................... 49 Practica No. 5: Reconocimiento de proteínas ................................................................... 50 3 Reacción de biuret ............................................................................................................ 51 Reaccion de Biuret............................................................................................................ 53 UNIDAD III ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE LAS PRINCIPALES BIOMOLÉCULAS ............................................................................................................... 55 UNIDAD III ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE LAS PRINCIPALES BIOMOLÉCULAS ............................................................................................................... 59 Practica No.7: Reconocimiento de enzimas ..................................................................... 60 Practica No. 8: Obtención de enzimas .............................................................................. 65 UNIDAD III Estructura y propiedades de las principales biomoléculas.............................. 68 Practica No. 9: amilasa, catalasa, papaína y renina .......................................................... 68 INTRODUCCION Con este manual de laboratorio se desea introducir al estudiante a algunos de los procedimientos experimentales más ampliamente usados en bioquímica. Se incluyen desde prácticas básicas que inician al estudiante en el uso del laboratorio y del material y equipo, así como análisis de macromoléculas como carbohidratos, lípidos, proteínas y enzimas. El manual de Bioquímica ha sido preparado con prácticas sencillas, y representativas, que intentan explicar algunas de las propiedades de la biomoléculas y técnicas para estudiarlas. Este manual servirá de guía también a los estudiantes, para la interpretación de resultados analíticos de manera que se fomente en ellos una conciencia del hecho que un análisis bien realizado permite tomar decisiones certeras. 4 Muy pocas investigaciones han sido desarrolladas por una sola persona, la mayoría tienen al menos dos autores o más, por lo que las prácticas serán llevadas a cabo en grupos de un máximo de cuatro estudiantes. Así mismo se resaltará la importancia de un estudio previo de las prácticas por parte del estudiante, que le proporcionará la información necesaria para poder comprender los procedimientos que se seguirán durante los desarrollos de las prácticas. JUSTIFICACION El laboratorio de bioquímica es básico para la formación del nutriólogo, ya que le permite, de manera conjunta con la teoría, llevar a cabo la identificación y conocimiento de biomoléculas y nutrientes indispensable en el proceso de la alimentación y nutrición. El aprendizaje significativo que se desea en esta experiencia educativa no queda completado sin la parte práctica que, además de reafirmar los conocimientos teóricos adquiridos permite que el estudiante adquiera destrezas y se practique valores, como la responsabilidad, tolerancia, el respeto, la honestidad, la perseverancia y la disposición al trabajo individual y en equipo. Para que con estas competencias, el estudiante pueda llevar a cabo identificación de algunos factores que condicionan la incidencia y prevalencia de enfermedades relacionadas o no con la nutrición, para establecer diagnósticos responsables y éticos necesarios para la planeación, intervención y evaluación de planes alimentarios adecuados y utilizar los saberes como apoyo para resolver problemáticas de salud asociadas a la alimentación y nutrición, de manera reflexiva y socialmente comprometida con estricto apego en los principios bioéticos. CONTENIDO UNIDAD I Antecedentes cognitivos 5 Práctica No 1. Reglamento del laboratorio Práctica No 2. Conocimiento de material de laboratorio Práctica No. 3 Preparación de soluciones UNIDAD II Conceptos generales de la bioquímica estructural Práctica No 1. Reconocimiento de sales UNIDAD III Estructura y propiedades de las principales biomoléculas Práctica No 1. Reconocimiento de sales Práctica No 2. Reconocimiento de glúcidos Práctica No. 3 Extracción de lípidos animales Práctica No. 4 Reconocimiento de lípidos Práctica No. 5 Reconocimiento de proteínas Práctica No. 6 Propiedades de las proteínas y determinación del punto isoeléctrico de la albumina. Práctica No. 7 Reconocimiento de enzimas. PrácticaNo. 8 Obtención de enzimas. Práctica No. 9 Amilasa, catalasa, papaína y renina. BIBLIOGRAFIA Chang. QuÍmica, (1995), Editorial Prentice-Hall. Hispanoamericana. México D.F. Devlin, TM. (1988). Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas (Tomos I y II) (2a ed). España: Editorial Reverts, SA. Elvira G, Manual de Bioquímica. (2007). México: UAM. 6 Guyton y Hall. (1999). Tratado de fisiologia medica. (9ª. ed) México: McGraw-Hill. Harper.. (1997). Bioquímica. ( 2ª. ed). México D.F: El Manual Moderno Herrera, E. (1991).Bioquímica. Aspectos estructurales y vías metabólicas. (Vols. I y II) (2ª. ed) Madrid:Interamericana-McGraw-Hill. Higashida H, Bertha Y. (2004), Manual de Ciencias de la Salud, México:Mc Graw Hill Interamericana Lee R. , et al. (2001). Hematologia Clinica. (9ª. ed) Buenos Aires:Editorial Intermedica. Luis J. F A,. Sergio S., Sonia U., Pedro G. (2008). Manual de Practicas. México:Mc Graw Hill Santos y Esparza (1995). Manual de prácticas de química y bioquímica de alimentos. México: Universidad Autónoma de Chapingo Voet. D., Voet Judith., Bozal J. (S/F) Bioquimica: Manual de soluciones. Barcelona:Omega. UNIDAD I ANTECEDENTES COGNITIVOS http://catbiblio.uv.mx:8080/uhtbin/cgisirsi/mtAAG6qKgA/DGBUV/195400140/18/X100/XAUTHOR/Higashida+Hirose,+Bertha+Yoshiko. http://catbiblio.uv.mx:8080/uhtbin/cgisirsi/3k12IjJfsl/DGBUV/195400140/18/X245/XTITLE/Bioqu%EDmica 7 Introducción El Manejo de materiales y reactivos en el laboratorio requiere de conocimientos y habilidades por parte de los estudiantes. Existen normas que deben observarse para que además de preservar la integridad de los estudiantes, las prácticas se desarrollen en condiciones adecuadas. Por esto, el estudiante debe tener conocimiento sobre 1.- Los peligros que pueden encontrarse en un laboratorio 2.- Los accidentes comunes en un laboratorio 3.- La gravedad de los accidentes que pueden suceder en un laboratorio 4.- Riesgos de trabajo con compuestos químicos Fundamentación teórica Existen normas que deben observarse para prevenir la contaminación accidental de los reactivos y de las soluciones, así como medidas de seguridad e higiene básicas para prevenir los accidentes y evitar los riesgos de trabajo. Objetivo de aprendizaje El estudiante reconoce y recapacita sobre los peligros que se encuentran en un laboratorio de análisis químico y adopta las medidas de seguridad como hábitos durante el desarrollo de las prácticas Descripción de la práctica UNIVERSIDAD VERACRUZANA Facultad de Nutrición-Xalapa Practica No. 1: Reglamento del Laboratorio Área académica: Ciencias de la Salud Fecha de elaboración: Junio 2017 Academia: Ciencias de los Alimentos 8 REGLAS PARA EL LABORATORIO Generales 1.- El alumno deberá presentarse a cada práctica con la técnica por escrito, de no ser así, no tendrá derecho a realizar la práctica 2. El laboratorio de Bioquímicaes un lugar donde se desarrollan prácticas elegidas por el docente para confirmar y reafirmar los conocimientos teóricos impartidos en el salón de clase. 2. Cada estudiante deberá ser parte de un equipo y trabajar de manera equitativa durante el desarrollo de las prácticas. 3. Se firmará un vale y se entregará una credencial por el material que le sea asignado para su uso durante la sesión de práctica y será entregado al final de la misma, en la cantidad y estado en que se encontró. 4. Al realizar cada práctica deben seguirse las instrucciones. 5. No deberán cambiarse los reactivos de mesa, ni revolver pipetas pues esto ocasiona una pérdida de tiempo a los demás y el riesgo de contaminación del mismo. 6. Se deberá asistir a la explicación de su práctica en las horas destinadas a su laboratorio, esto evitará muchas dudas a la hora de trabajar. 7. Se asesorará y resolverán las preguntas de cada equipo durante la práctica. 8. Es importante señalar la necesidad de seguir todos los pasos indicados en cada práctica para obtener los resultados correctos de cada experimento. En todas las prácticas deberán 9 anotarse las observaciones, los resultados y las conclusiones en una libreta exclusiva para ese fin. 9. En el caso de que el experimento no resultara como está planeado, el alumno deberá investigar, consultar y agotar todas las posibilidades para lograr un desarrollo correcto. 10. De esta forma se logrará desarrollar una actitud crítica hacia la materia, un mejor aprovechamiento de clase práctica y un apoyo mayor a la clase teórica. 11. Las mesas y los lavabos, no son para tirar basura, para esto existen cestos suficientes. Evitar que las tuberías se tapen y den un mal aspecto al laboratorio. Información: 1. Localiza los dispositivos de seguridad más próximos. Estos dispositivos son elementos tales como extintores, lavaojos, ducha de seguridad, mantas antifuego, sálida de emergencia. etc. Infórmate sobre su funcionamiento. 2. Lee las etiquetas de seguridad. Las botellas de reactivos contienen pictogramas y frases que informan sobre su peligrosidad, uso correcto y las medidas a tomar en caso de ingestión, inhalación, etc. Algunos aparatos pueden contener información del mismo tipo. Lee siempre detenidamente esta información y ten en cuenta las especificaciones que se señalan en ella. 3. Infórmate sobre las medidas básicas de seguridad. El trabajo en el laboratorio exige conocer una serie de medidas básicas de seguridad que son las que intenta recoger esta guía. 4. Presta atención a las medidas específicas de seguridad. Las operaciones que se realizan en algunas prácticas requieren información específica de seguridad. Estas instrucciones son dadas por el profesor y/o recogidas en el guión de laboratorio y debes de prestarles una especial atención. 10 5. En caso de duda, consulta al profesor. Cualquier duda que tengas, consúltala con tu profesor. Recuerda que no está permitido realizar ninguna experiencia no autorizada por tu profesor. Protección: 1. Cuida tus ojos. Los ojos son particularmente susceptibles de daño permanente por productos corrosivos así como por salpicaduras de partículas. Es obligatorio usar gafas de seguridad siempre que se esté en un laboratorio donde los ojos puedan ser dañados. No lleves lentes de contacto en el laboratorio, ya que en caso de accidente, las salpicaduras de productos químicos o sus vapores pueden pasar detrás de las lentes y provocar lesiones en los ojos. 2. Cómo ir vestido en el laboratorio. El uso de bata es obligatorio en el laboratorio, ya que por mucho cuidado que se tenga al trabajar, las salpicaduras de productos químicos son inevitables. La bata será preferentemente de algodón, ya que, en caso de accidente, otros tejidos pueden adherirse a la piel, aumentando el daño. No es aconsejable llevar minifalda o pantalones cortos, ni tampoco medias, ya que las fibras sintéticas en contacto con determinados productos químicos se adhieren a la piel. Se recomienda llevar zapatos cerrados y no sandalias. Los cabellos largos suponen un riesgo que puede evitarse fácilmente recogiéndolos con una cola. 3. Usa guantes. Es recomendable usar guantes, sobre todo cuando se utilizan sustancias corrosivas o tóxicas. En ocasiones, pueden ser recomendables los guantes de un sólo uso. Trabajar con seguridad en un laboratorio 1. Normas higiénicas. 11 • No comas ni bebas en el laboratorio, ya que es posible que los alimentos o bebidas se hayan contaminado. • Lávate siempre las manos después de hacer un experimento y antes de salir del laboratorio. • Por razones higiénicas y de seguridad, está prohibido fumar en el laboratorio. • No inhales, pruebes o huelas productos químicos si no estás debidamenteinformado. Nunca acerques la nariz para inhalar directamente de un tubo de ensayo. 2. Trabaja con orden y limpieza. Recuerda que el orden es fundamental para evitar accidentes. Mantén el área de trabajo ordenada, sin libros, abrigos, bolsas, exceso de botes de productos químicos y cosas innecesarias o inútiles. Mantén las mesas y vitrinas extractoras siempre limpias. Se tienen que limpiar inmediatamente todos los productos químicos derramados. Limpia siempre perfectamente el material y aparatos después de su uso. 3. Actúa responsablemente. Trabaja sin prisas, pensando en cada momento lo que estás haciendo, y con el material y reactivos ordenados. No se debe gastar bromas, correr, jugar, empujar, etc. en el laboratorio. Un comportamiento irresponsable puede ser motivo de expulsión inmediata del laboratorio y de sanción académica. 4. Atención a lo desconocido. Está terminantemente prohibido hacer experimentos no autorizados por el profesor. No utilices ni limpies ningún frasco de reactivos que haya perdido su etiqueta. Entrégalo inmediatamente a tu profesor. No substituyas nunca, sin autorización previa del profesor, un producto químico por otro en un experimento. 12 No utilices nunca un equipo o aparato sin conocer perfectamente su funcionamiento. En caso de duda, pregunta siempre al profesor. MEDIDAS DE SEGURIDAD EN UN LABORATORIO. 1. No deben efectuarse experimentos no autorizados, a menos que estén supervisados por el docente. 2. Cualquier accidente debe ser notificado de inmediato al docente o al auxiliar del laboratorio 3. Uso indispensable de bata abotonada como medida de protección. 4. No pipetear los reactivos con la boca, puede llegar a ingerirlos. De hacerlo automáticamente quedará dado de baja de la experiencia educativa. 5. Leer cuidadosamente la etiqueta del frasco hasta estar seguro de que es el reactivo que se necesita, utilizar reactivos que estén en frascos sin etiqueta. 6. No introducir pipetas a un frasco con reactivo sin tener la certeza de que esta se encuentra limpia. 7. Después de utilizar un reactivo tener la precaución de cerrar bien el frasco. 8. Los tubos y varillas de vidrio y objetos calientes deben colocarse sobre tela de asbesto y en un lugar no muy accesible de la mesa de trabajo, para evitar quemaduras así mismo o a un compañero. 9. Los tubos de ensaye calientes, con líquido o no, deben colocarse en una gradilla de alambre o dentro de un vaso de precipitados. 10. Cuando se calientan sustancias contenidas en un tubo de ensaye, no se debe apuntar la boca del tubo al compañero o a sí mismo, ya que pueden presentarse proyecciones del líquido caliente 11. La dilución de ácidos concentrados debe hacerse de la siguiente manera: Utilizar recipientes de pared delgada. 13 12. Añadir lentamente el ácido al agua resbalándolo por las paredes del recipiente, al mismo tiempo que se agita suavemente. NUNCA AÑADIR AGUA AL ÁCIDO, ya que puede formarse vapor con violencia explosiva. 13. Si el recipiente en el que se hace la dilución se calentara demasiado, interrumpir de inmediato y continuar la operación en baño de agua o hielo. 14. No se debe probar ninguna sustancia. Si algún reactivo se ingiere por accidente, se notificará de inmediato al docente. 15. No manejar cristalería u otros objetos con las manos desnudas, si no se tiene la certeza de que están fríos. 16. No se debe oler directamente una sustancia, sino que sus vapores deben abanicarse con la mano hacia la nariz. 17. No tirar o arrojar sustancias químicas, sobre nadantes del experimento o no, al desagüe. En cada práctica se deberá preguntar al profesor sobre los productos que se pueden arrojar al desagüe para evitar la contaminación de ríos y lagunas. 18. Cuando en una reacción se desprendan gases tóxicos o se evaporen ácido, la operación deberá hacerse bajo una campana de extracción. 19. Los frascos que contengan los reactivos a emplear en la práctica deben mantenerse tapados mientras no se usen. 20. No trasladar varios objetos de vidrio al mismo tiempo. 21. No ingerir alimentos ni fumar dentro del laboratorio. 22. Se deberá mantener una adecuada disciplina durante la estancia en el laboratorio. 23. Estar atento a las instrucciones del docente. SUSTANCIAS QUE DEBEN USARSE CON PRECAUCIÓN Todas las que se utilizan en las operaciones y reacciones en el laboratorio de química son potencialmente peligrosas por los que, para evitar accidentes, deberán trabajarse con cautela y normar el comportamiento en el laboratorio por las exigencias de la seguridad personal y del grupo que se encuentre realizando una práctica. 14 Numerosas sustancias orgánicas e inorgánicas son corrosivas o se absorben fácilmente por la piel, produciendo intoxicaciones o dermatitis, por lo que se ha de evitar su contacto directo; si este ocurriera, deberá lavarse inmediatamente con abundante agua la parte afectada. RECOMENDACIONES PARA EL MANEJO DE ALGUNAS SUSTANCIAS ESPECIFICAS: Ácido Fluorhídrico (HF) Causa quemaduras de acción retardada en la piel, en contacto con las uñas causa fuertes dolores, y sólo si se atiende a tiempo se puede evitar la destrucción de los tejidos incluso el óseo. Ácido Nítrico (HNO3) Este ácido daña permanentemente los ojos en unos cuantos segundos y es sumamente corrosivo en contacto con la piel, produciendo quemaduras, mancha las manos de amarillo por acción sobre las proteínas. Ácidos Sulfúrico (H2SO4), Fosfórico (H3PO4) y Clorhídrico (HCl) Las soluciones concentradas de estos ácidos lesionan rápidamente la piel y los tejidos internos. Sus quemaduras tardan en sanar y pueden dejar cicatrices. Los accidentes más frecuentes se producen por salpicaduras y quemaduras al pipetearlos directamente con la boca. ¿QUÉ HACER EN CASO DE ACCIDENTE? En caso de accidente en el laboratorio, hay que comunicarlo inmediatamente al docente. Salpicaduras por ácidos y álcalis 15 Lavarse inmediatamente y con abundante agua la parte afectada. Si la quemadura fuera en los ojos, después de lavado, acudir al servicio medico. Si la salpicadura fuera extensa, llevar al lesionado al chorro de la regadera inmediatamente y acudir después al servicio medico. Quemaduras por objetos, líquidos o vapores calientes Aplicar pomada para quemaduras o pasta dental en la parte afectada. Es caso necesario, proteger la piel con gasa y acudir al servicio medico. Teoría: 3 h Práctica: 3 h Elaborado: Hilda Leticia Gómez Rivas Fecha de la revisión: día/mes/año Créditos: 9 Curso: Curso-Taller UNIDAD I ANTECEDENTES COGNITIVOS 16 Introducción El Manejo de materiales y reactivos en el laboratorio requiere de conocimientos y habilidades por parte de los estudiantes. Existen normas que deben observarse para que además de preservar la integridad de los estudiantes, las prácticas se desarrollen en condiciones adecuadas. Por esto, el estudiante debe tener conocimiento sobre 1.- Los peligros que pueden encontrarse en un laboratorio 2.- Los accidentes comunes en un laboratorio 3.- La gravedad de los accidentes que pueden suceder en un laboratorio 4.- Riesgos de trabajo con compuestos químicos El material de vidrio es uno de los elementos fundamentales en el laboratorio. Sus ventajas son su carácter inerte, transparencia, manejabilidad y la posibilidad de diseñar piezas a medida. Su mayor inconveniente es la fragilidad. Existen otros utensilios, en su mayoría metálicos, y que se llaman material auxiliar. A continuación indicamos las funciones de algunos de los utensilios más utilizados en el laboratorio y mostramos sus dibujos A continuación se indican las funciones de algunos de los utensilios más utilizados en el laboratorio. NOMBRE FUNCIÓN de elementosde medición Balanza de precisión Medir masas de sustancias sólidas con precisión alta Balanza electrónica Medir masas de sustancias sólidas. UNIVERSIDAD VERACRUZANA Facultad de Nutrición-Xalapa Practica No. 2: Conocimiento de material de laboratorio Área académica: Ciencias de la Salud Fecha de elaboración: Junio 2017 Academia: Ciencias de los Alimentos 17 Bureta Medir volúmenes con precisión (por ejemplo en las valoraciones). Matraz aforado Medir volúmenes exactos de disoluciones Pipetas Medir volúmenes con precisión. Probeta graduada Medir líquidos cuando no es necesaria una gran precisión Termómetro Medir temperaturas. NOMBRE FUNCIÓN de elementos de soporte Pinza de madera Sujetar tubos de ensayo calientes Pinza para matraz Sujetar el matraz Aro Metálico Es un componente importante para el montaje. Se utiliza para calentar y sujetar Nuez Sujetar aro, pinza y otros soportes similares Soporte universal Pieza básica en el montaje de los sistemas y aparatos como pinzas y anillos de metal Gradilla Apoyar tubos de ensayo Rejilla de Metal con centro de asbesto Calentar indirectamente ya que la llama del mechero se concentra en el anillo Trípode o tripié Soporte de vaso de precipitado, matraces, etc. NOMBRE FUNCIÓN de elementos varios Embudo cónico Trasvasar líquidos de un recipiente a otro. También se utiliza en operaciones de filtración. Embudo Buchner Es un embudo con la base agujereada. Se acopla por su extremo inferior mediante un corcho taladrado al matraz kitasato Encima de los orificios se coloca un papel de filtro. Se utiliza para filtrar sustancias pastosas. Matraz kitasato Es un matraz de pared gruesa, con una tubuladura lateral. En la boca se acopla, mediante un corcho agujereado el büchner, 18 y en la tubuladura, mediante una goma, la trompa de agua (o trompa de vacío). De esta forma se consigue filtrar sustancias pastosas. Embudo de decantación o de separación Se utiliza para separar líquidos inmiscibles y para efectuar extracciones. Para ello se deja en reposo, y cuando las dos fases están separadas, se va dejando caer la inferior, cerrando la llave cuando ésta ha pasado. Vidrio de reloj Cubrir recipientes, pesar, transferir sólidos y evaporar líquidos a temperatura ambiente Varilla de vidrio Mezclar o agitar sustancias Mortero Machacar y/o triturar sustancias sólidas Escobilla Limpiar el material de laboratorio Frasco lavador Enjuagar el material de laboratorio Fundamentación teórica El estudiante que conoce el material de laboratorio y su funcionamiento realizará más fácil, rápido y con seguridad cada práctica. Objetivo de aprendizaje El estudiante identifica y maneja adecuadamente el material básico del laboratorio de bioquímica. Descripción de la práctica 1.- Pedir al encargado del almacén una muestra de cada uno de los materiales disponibles en el laboratorio. 2.- Contar el número de objetos totales y dividirlo entre el número de equipos. Seleccionar por equipo el material en la cantidad en que le ha sido asignado. 19 3.- Discutir durante 20 min. sobre el uso de cada uno de los materiales seleccionados, preparándose para una explicación al resto de los equipos.. 4.- Cada equipo deberá explicar sus conclusiones sobre cada material. 5.- Separar el material por funciones 5.- Elaborar una tabla con los nombres y aplicaciones de cada uno de los materiales estudiados. Teoría: 3 h Práctica: 3 h Elaborado: Hilda Leticia Gómez Rivas Fecha de la revisión: día/mes/año Créditos: 9 Curso: Curso-Taller 20 UNIDAD I ANTECEDENTES COGNITIVOS Introducción Las sustancias homogéneas se clasifican en sustancias puras (las que poseen una composición definida, sin importar su cantidad y constituyen los elementos y los compuestos), y en mezclas homogéneas (son las llamadas soluciones que, si bien son homogéneas, poseen composiciones variables). Este sistema de clasificación es esencial por permitir reconocer con facilidad si una materia homogénea es una sustancia pura o una solución. Las soluciones resultan de la mezcla de varias sustancias puras diferentes, cuya unión no produce un cambio químico (no hay reacción), sino solo un cambio físico (las sustancias no pierden su identidad, y por tanto, sus propiedades). Las soluciones poseen composiciones variables de acuerdo a las necesidades de uso. Los componentes de una solución son el soluto y el solvente. El soluto se encuentra en menor cantidad dentro de la solución y es la fase de menor proporción. Es la sustancia que se disuelve hasta un tamaño de magnitud atómico, molecular o iónico de (10-8 a 10-7 cm). El solvente es la sustancia que disuelve al soluto, se encuentra en mayor cantidad y es la fase de mayor proporción. Las soluciones pueden presentarse en los tres estados ordinarios de la materia: Sólido, líquido y gaseoso, pudiéndose encontrar el soluto y el solvente en cualquiera de estos tres estados Las soluciones en las cuales el agua es el solvente se denominan soluciones acuosas. Las soluciones acuosas son comunes en la naturaleza y de suma importancia en todos los procesos UNIVERSIDAD VERACRUZANA Facultad de Nutrición-Xalapa Practica No. 3: Preparación de soluciones Área académica: Ciencias de la Salud Fecha de elaboración: Junio 2017 Academia: Ciencias de los alimentos 21 vitales, áreas científicas y diversidad de procesos industriales. Los fluidos corporales de todas las formas de vida son soluciones acuosas. Fundamentación teórica Una solución porcentual se define como la cantidad en gramos de soluto contenido en 100 g de solución. La normalidad (N) Expresa la concentración de una solución en equivalentes-gramo de soluto por litro de solución. Equivalente-gramo es la cantidad de sustancia que reacciona con 1,008g de hidrogeno, es decir, con un átomo-gramo de este elemento. El número de equivalentes- gramo de una sustancia depende de si esta corresponde a un ácido, un hidróxido (base) o a una sal.5 Objetivo de aprendizaje El estudiante usará reactivos sólidos y líquidos para preparar soluciones con diferente concentración. Descripción de la práctica Preparación de 50 ml de una solución de Cloruro de Sodio al 10% m/v 1.- Calcula los gramos de Cloruro de Sodio (soluto) que requieren para preparar la solución. 2.- Pesar los gramos calculados en un vidrio reloj. 3.- Diluya el soluto con una mínima porción de agua destilada en un vaso de precipitado 4.- Trasvasa la mezcla a un balón aforado de 50 ml, afore y mezcle por inmersión Preparación de 50 ml de una solución de Acido Acético al 10% v/v 1.- Calcula el volumen en ml de Acido Acético (soluto) 2.- Mida con una pipeta el volumen calculado 3.- Trasvasa a un balón aforado de 50 ml, previamente debe tener agua destilada, afore y agite por inmersión 22 Preparación de 100 ml de una solución de Hidróxido de sodio 0,1 N a partir del Reactivo Sólido Puro 1.- Calcula la masa en gramos de NaOH necesarios para preparar la solución 2.- Pesar los gramos calculados en un vidrio reloj. 3.- Diluya el soluto con una mínima porción de agua destilada en un vaso de precipitado. 4.- Trasvasa la mezcla a un balón aforado de 100 ml afore y agita por inmersión. MATERIALES MATERIALES REACTIVOS EQUIPOS Vaso de precipitado de 100 ml Cloruro de Sodio Balanza Vidrio reloj Hidróxido de Sodio Propipeta Espátula Ácido Acético Agitador de vidrio Sacarosa Matraz volumétrico de 50 y 100 ml Agua destilada Pipetas graduadas de 1 y 5 ml Cálculos para la preparación de una solución 23 Teoría: 3 h Práctica: 3 h Elaborado: Hilda Leticia Gómez Rivas Fecha de larevisión: día/mes/año Créditos: 9 Curso: Curso-Taller 24 UNIDAD II CONCEPTOS GENERALES DE LA BIOQUÍMICA ESTRUCTURAL Introducción Las biomoléculas inorgánicas son moléculas sencillas que poseen poca energía ya que tienen pocos átomos y, por tanto, pocos enlaces. El agua y las sales minerales son moléculas inorgánicas que forman parte de los seres vivos y desempeñan en ellos unas funciones que son fundamentales para la vida. Las sales minerales son imprescindibles para que un ser vivo pueda llevar a cabo sus funciones vitales con normalidad pese a encontrarse en proporciones muy pequeñas. Las sales minerales producen los gradientes osmóticos y eléctricos que regulan los procesos vitales: Permiten que la membrana celular mantenga su permeabilidad selectiva y sin ellas no se puede transmitir el impulso nervioso, no se contraen los músculos, ni late el corazón. Hay sales minerales sólidas que forman estructuras esqueléticas (conchas, caparazones, huesos…) Fundamentación teórica En la materia viva se encuentran diversas sales minerales, las cuales se pueden presentar en forma de aniones (Cloruro, Fosfatos, entre otros) y cationes (Calcio entre otros). Un ejemplo de esto es la leche, la cual si se somete la leche a un proceso de coagulación se obtiene el suero (fracción líquida) en el que quedan las sales, dentro de las cuáles se pueden contar el calcio, cloruros y fosfatos. Las reacciones que se llevan a cabo en esta práctica para identificar las sales son las siguientes: Cloruros: UNIVERSIDAD VERACRUZANA Facultad de Nutrición-Xalapa Practica No. 1: Reconocimiento de sales Área académica: Ciencias de la Salud Fecha de elaboración: Junio 2017 Academia: Ciencias de los Alimentos 25 Los cloruros en contacto con una solución de nitrato de plata forman cloruro de plata, que da lugar a un precipitado blanco de aspecto lechoso. Fosfatos Los fosfatos en presencia de molibdato amónico, forman un precipitado amarillo de fosfomolibdato amónico. Calcio El calcio al reaccionar con el oxalato amónico forma un precipitado blanco cristalino de oxalato amónico. Objetivo de aprendizaje • Demostrar que en la composición de la materia viva se encuentran presentes diversas sales minerales. • Conocer el proceso de la coagulación de la leche, como técnica para poder obtener el suero (fracción líquida) en el que quedan las sales presentes. Descripción de la práctica Para determinar la presencia de sales es interesante utilizar el suero de leche. 1. Colocar en un vaso de precipitado unos 250 ml. de leche. 2. Añadir unas gotas de ácido acético y esperar unos minutos. Figura 1 3. Al producirse el "cuajado" filtrar por papel, para obtener el suero. Figura 2 4. Recoger el filtrado en un matraz o probeta. Figura 3 26 Figura 1 Figura 2 Figura 3 Realización de las reacciones. 1.- Preparar una gradilla con tres tubos de ensayo. 2.- En cada tubo de ensayo poner unos 3ml. de suero de leche. Figura 4 3.- Numerar los tubos con 1, 2 y 3. Figura 5 Figura 5 Figura 6 4.- Al tubo de ensayo número 1, añadir 1ml. de solución de nitrato de plata. 5.- Al tubo de ensayo número 2, añadir 2ml. de solución de molibdato amónico al 1%, tratado con ácido nítrico concentrado en cantidad suficiente para que el ácido molíbdico que se forma se redisuelva. Calentar el tubo al baño María. 6.- Al tubo de ensayo número 3 unas 10 gotas de solución de oxalato amónico al 1%. Interpretación de resultados 27 Ensayo Resultado positivo Cloruros Precipitado blanco de aspecto lechoso Fosfatos Precipitado amarillo Calcio Precipitado blanco cristalino MATERIALES MATERIAL MATERIAL BIOLÓGICO REACTIVOS Vaso de precipitado Matraz o probeta Embudos con papel de filtro Gradilla con tubos de ensayo Pinzas para calentar tubos Mechero Leche Ácido acético Ácido nítrico Solución molibdato amónico al 1% Solución de nitrato de plata al 1%. Solución de oxalato amónico al 1% Teoría: 3 h Práctica: 3 h Elaborado: Hilda Leticia Gómez Rivas Fecha de la revisión: día/mes/año Créditos: 9 Curso: Curso-Taller 28 UNIDAD III ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE LAS PRINCIPALES BIOMOLÉCULAS Introducción Una de las propiedades más importantes de una disolución acuosa es su concentración en ion hidrógeno (H+ o H3O+), que en general se expresa en términos del pH = −log[H+] . El ion H+ ejerce un gran efecto sobre la solubilidad de muchas especies inorgánicas y orgánicas, sobre la naturaleza de especies y complejos iónicos presentes en una disolución, y sobre la velocidad de muchas reacciones químicas llevadas a cabo en este medio. En general, la alteración artificial del pH de cualquier ecosistema (por lluvia ácida, o vertido de contaminantes, por ejemplo) es altamente perjudicial para los seres vivos que lo habitan. De hecho, la gran mayoría de los medios biológicos contienen reguladores de pH (tampones) en su composición. La acidez o basicidad de una sustancia le proporciona determinadas características que son visibles cuando esta entra en contacto con un medio acuoso u otra sustancia. Conocer estas características es de suma importancia. El pH es uno de los conceptos más importantes en química y todas sus áreas relacionadas: se sabe por ejemplo, que muchas reacciones químicas requieren de un pH determinado para poderse llevar a cabo. En la bioquímica es vital, ya que el medio celular, y en general el medio de un ser vivo, necesita determinadas condiciones para que la vida sea posible. Se sabe que una pequeña variación del pH en la sangre, por ejemplo, puede llevar a la muerte a una persona. Los microorganismos solo se desarrollan a ciertos pH. Otros ejemplos son el pH de la piel que sirve como protector contra enfermedades, el pH en la boca, que juega un importante papel en la salud. UNIVERSIDAD VERACRUZANA Facultad de Nutrición-Xalapa Practica No. 1: Propiedades Generales del agua Área académica: Ciencias de la Salud Fecha de elaboración: Junio 2017 Academia: Ciencias de los alimentos 29 Fundamentación teórica Cuando se desea determinar la concentración de un ácido o una base en una disolución, éstos se hacen reaccionar con una base o un ácido patrón, respectivamente, cuya concentración es conocida con precisión. En el punto de equivalencia se produce un cambio brusco del pH, que se puede determinar empleando un indicador, o bien un potenciómetro. Cuando la reacción se produce entre un ácido o una base fuertes, el pH correspondiente al punto de equivalencia será 7. Si un ácido débil se valora con una base fuerte, el pH del punto de equivalencia es mayor que 7. Por el contrario, si una base débil se valora con un ácido fuerte, el pH del punto de equivalencia es menor que 7. Objetivo de aprendizaje El estudiante elaborará soluciones con diferentes concentraciones y medirá su pH Descripción de la práctica Método: a) Preparación de soluciones ácidas y básicas 1.- En un vaso de precipitados de 200 ml , colocar aproximadamente 100 ml de solución de HCl 0.1 M y medir su pH en el potenciómetro. 2.- Colocar 10 ml de solución 0.1 M de HCl en un matraz volumétrico de 100 ml y diluir a la marca con agua destilada. Tomar alrededor de 100 ml de la solución y colocarlos en un vaso de precipitados de 200 ml y medir el pH. 3.- Repetir la operación anterior hasta la quinta dilución y medir el pH a las distintas diluciones. 4.- Hacer de la misma manera con el NaOH 0.1 M para calcular el pH de las distintas soluciones preparadas de base fuerte. 30 5.- Elaborar un cuadro de resultados con las soluciones de ácido fuerte, que contenga: número de dilución, concentración molardel ácido en las distintas diluciones, pH real y pH calculado. 6.- Graficar los resultados en el programa Excel, donde se encuentre el pH en función de la concentración molar del HCl. 7.- Elaborar un cuadro de resultados con las soluciones de base fuerte, que contenga: número de dilución, concentración molar de la base en las distintas diluciones, pH real, pH calculado, así como pOH calculado. 6.- Encontrar la cantidad en gramos que se necesita para preparar las siguientes cantidades: a) 1000 ml de HCl 1 M b) 1000 ml de HCl 0.1 M c) 1000 ml de HCl 0.001 M d) 1000 ml de HCl 0.2 M e) 1000 ml de HCl 0.5 M 7.- Encontrar la [H+] de las siguientes soluciones: a) HCl 0.001 M b) HCl 0.02 M c) 500 ml de HCl 0.5 M b) Preparación de indicador derivado de fruta o planta 1.-Colocar una porción de su muestra de fruta o planta en un mortero y añada 2.3 ml de alcohol isopropílico. 2.-Triturar la planta hasta observar la formación de un extracto coloreado. Si quiere más volumen del extracto añada un poco más de alcohol. 3.- Colocar una placa de porcelana sobre una hoja de papel blanco y rotule el papel con números asignados a cada una de las soluciones elaboradas, separando las soluciones ácidas de las básicas. 4.- Llenar hasta la mitad los espacios cóncavos de la placa de porcelana con las soluciones ácidas y básicas correspondientes. 31 5.- Añadir a cada muestra dos gotas del extracto. Mezclar bien utilizando un palillo. 6.- Anotar el color obtenido con el extracto para cada solución y compararlo con el extracto original. 7.- Sacar una fotografía que muestre el sistema estudiado. MATERIALES MATERIAL Y EQUIPO MATERIAL BIOLÓGICO REACTIVOS 2 vasos de precipitados de 400 ml Indicador de repollo violeta (jugo de arándano) Solución de H3PO4 0.1 M 1 agitador de vidrio Flores, tallos, hojas o frutas de colores rojizos, azules o violetas Solución de CH3COOH 0.1 M 1 pipeta graduada de 5 ml Solución de NaOH 0.1 M 1 probeta de 100 ml Placas de porcelana Pipetas Pasteur o goteros largos Mortero 10 Palillos Potenciómetro Teoría: 3 h Práctica: 3 h Elaborado: Hilda Leticia Gómez Rivas Fecha de la revisión: día/mes/año Créditos: 9 Curso: Curso-Taller 32 UNIDAD III ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE LAS PRINCIPALES BIOMOLÉCULAS Introducción Los glúcidos o Carbohidratos son biomoléculas constituidas por C, H, y O (a veces tienen N, S, o P). El nombre de glúcido deriva de la palabra "glucosa" que proviene del vocablo griego glykys que significa dulce, aunque solamente lo son algunos monosacáridos y disacáridos. Su fórmula general suele ser (CH2O)n Los carbohidratos son compuestos de gran importancia para los seres vivos. Las unidades básicas de los carbohidratos son los monosacáridos, los cuales no hidrolizables en unidades más pequeñas. La glucosa es el combustible principal para la mayoría de los organismos. Los polisacáridos, constituidos por cadenas de monosacáridos, desempeñan dos funciones biológicas principales: almacenar energía metabólica y aportar elementos estructurales a la célula. Monosacáridos como la glucosa y sus derivados, son piezas fundamentales en muchas rutas metabólicas esenciales para la obtención de energía. La glucosa actúa en el organismo como combustible energético de uso inmediato, mientras polisacáridos y grasas son biomoléculas de reserva que deben ser catabolizadas antes de su aprovechamiento como fuentes de energía. Fundamentación teórica Se basa en el carácter reductor de los monosacáridos y de la mayoría de los disacáridos (excepto la sacarosa). Si el glúcido que se investiga es reductor, se oxidará dando lugar a la UNIVERSIDAD VERACRUZANA Facultad de Nutrición-Xalapa Practica No. 2: Reconocimiento de glúcidos Área académica: Ciencias de la Salud Fecha de elaboración: Junio 2017 Academia: 33 reducción del sulfato de cobre (II), de color azul, a óxido de cobre (I), de color rojo- anaranjado. La coloración producida por el Lugol (disolución de yodo y yoduro potásico) se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la molécula de almidón. El polisacárido almidón se colorea de azul-violeta en presencia de yodo, debido no a una reacción química, sino a la formación de un complejo por la fijación del yodo en la superficie de la molécula del almidón, fijación que sólo tiene lugar en frío. Objetivo de aprendizaje • EI estudiante identificara la diferencia entre un monosacarido, disacárido y polisacárido.. • E l estudiante realizara la hidrólisis del enlace de un disacárido • El estudiante será capaz de recocer la solubilidad de los glúcidos a través de diversos solventes organicos Descripción de la práctica Monosacáridos Solubilidad en agua. Con una espátula colocar una pequeña cantidad de glucosa en un tubo de ensaye pequeño que contenga 1 ml de agua destilada, y agite. Anote sus observaciones Prueba de Benedict. 1.- En un tubo de ensaye pequeño poner 2 o 3 gotas de la solución anterior y 1 ml del reactivo de Benedict. 2.- Calentar el tubo con el mechero de Bunsen. Interpretación de resultados: Color Concentracion de (g/100ml) Azul 0/100ml (negativo) 34 Azul verdoso 0.3 g/100ml Verde Oliva 1 g/100ml Azul café 1.5 g/100ml Rojo ladrillo 2 g/100ml o mas Reacción de fehling: 1.- Tomar la muestra que se quiera analizar (normalmente una cantidad de 3 ml.) 2.- Añadir 1 ml. de Fehling A y 1 ml. de Fehling B. El líquido del tubo de ensayo adquirirá un fuerte color azul. 3.- Calentar el tubo al baño María o directamente en un mechero de Laboratorio. Interpretación de resultados La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo-ladrillo. La reacción será negativa si la muestra queda azul, o cambia a un tono azul-verdoso. Reacción del Lugol: 1.- Poner en un tubo de ensayo unos 3 ml. del glúcido a investigar. 2.- Añadir unas gotas de lugol. Interpretación de resultados: Si la disolución del tubo de ensayo se torna de color azul-violeta, la reacción es positiva. javascript:feling() javascript:felingneg() 35 II. Disacáridos 1. Disolver una gota de miel de abeja en un tubo de ensaye pequeño que contenga 1 ml de agua destilada. Añadir 1 o 2 gotas de esta solución a 1 o 2 del reactivo de Benedict, y calentar. Anotar las observaciones. 2. Con una espátula agregar una pequeña cantidad de azúcar común en un tubo de ensaye que contenga 1 ml de agua, agitar para que se disuelva y efectuar la prueba de Benedict como en los casos anteriores. Anotar las observaciones. 3. Preparar una solución de azúcar común como en el paso anterior, y agregar dos gotas de ácido clorhídrico concentrado; calentar en baño maría durante 10 minutos y neutralizar con una solución saturada de carbonato de sodio. Usar papel indicador, agregar 1 ml del reactivo de Benedict y calientar de nuevo. Anotar las observaciones y compararlas con las del paso 2. III. Almidón Solubilidad 1. En un vaso de precipitados de 100 ml colocar 25 ml de agua destilada y calentar hasta ebullición. a) Con una varilla de vidrio mezclar en un tubo de ensaye pequeño aproximadamente 0.25 g de almidón, con unas cuantas gotas de agua fría, hasta formar una pasta. b) Verter la pasta al agua hirviendo, agitando con la varilla de vidrio. c) Anotar las observaciones. 2. En un tubo de ensaye añadir unas cuantas gotas de la mezcla de almidón y agua, y efectuar la prueba de Benedict. Anotar las observaciones. 36 Transformación del almidón en dextrina 1. Con una espátula colocar una pequeña cantidad de almidón en una cápsula de porcelana. Calentar lentamente mientras agita con una varilla de vidrio. El calentamiento debe ser lento y leve para no quemar el almidón.Cuando el almidón adquiera un ligero color café, continuar calentando solamente durante 1 o 2 minutos más, y enfriar 2. Con una espátula pasar una pequeña cantidad del residuo a un tubo de ensaye pequeño, y añadir 2 mI de agua destilada. Después agregar 2 o 3 gotas de solución de yodo. Anotar observaciones. Una vez que se tenga el tubo de ensayo con el almidón y el lugol, que habrá dado una coloración violeta, calientar el tubo a la llama y dejarlo enfriar. Anota las observaciones Volver a calentar y enfriar y anotar las observaciones Investigación de azucares reductores 1.- Poner las muestras de glúcidos en los tubos de ensayo. Pueden prepararse soluciones al 1% aproximadamente. Figura 1. 2.- Realizar la Prueba de Fehling como se indica al principio de página. Figura 2. 3.- Después de calentar observar los resultados. Figura 3. 4.- Estos resultados indican que los azúcares: glucosa, maltosa y lactosa tienen carácter reductor. 37 Figura 1 Figura 2 Figura 3 Investigación de azucares no reductores Como se veía en la experiencia 1 la sacarosa daba la reacción de Fehling negativa (Figura 4) por no presentar grupos hemiacetálicos libres. Ahora bien, en presencia del ácido clorhídrico (HCl) y en caliente, la sacarosa se hidroliza descomponiéndose en los dos monosacáridos que la forman (glucosa y fructosa). Procedimiento: 1.- Tomar una muestra de sacarosa y añadir unas 10 gotas de ácido clorhídrico al 10%. 2.- Calentar a la llama del mechero durante un par de minutos. 3.- Dejar enfriar y realizar la Prueba de Fehling. 4.- Observar el resultado (Figura 5). Interpretación de resultados: La reacción positiva indica que se ha conseguido romper el enlace O-glucosídico de la sacarosa. (Se recomienda antes de aplicar la reacción de Fehling, neutralizar con bicarbonato, ya que la reación de Fehling da un mejor resultado en un medio que no sea ácido.) 38 Figura 4 Figura 5 Investigación de polisacaridos Figura 6 Figura 7 Procedimiento 1.- Colocar en una gradilla muestras de distintos glúcidos. Figura 6 2.- Añadir 5 gotas de Lugol en cada uno de los tubos de ensayo. 3.- Observar los resultados. Figura 7. 4.- Con este método puede identificarse el almidón. Materiales: Material Reactivos Tubos de ensayo maltosa gradilla sacarosa vaso para calentar Lugol 39 mechero Cloroformo Gradilla Metanol Parrilla de calentamiento Reactivo de Fehling A y Fehling B Vaso de precipitado HCl diluido y bicarbonato. Hexano Etanol Agua glucosa lactosa almidón. Preparación de reactivos: Reactivo de Benedict; requiere: citrato de sodio [NaOOC-CH-CH2-COONa], carbonato de sodio anhidro (Na2COa) y sulfato de cobre 11 (CUSO4) Preparación: Citrato de sodio 21.5 g mas Carbonato de sodio anhidro 12.5 g en 75 ml de agua destilada, añadiéndole una solución de 4.15 g de sulfato de cobre II en 25 ml de agua destilada Teoría: 3 h Práctica: 3 h Elaborado: Hilda Leticia Gómez Rivas Fecha de la revisión: día/mes/año Créditos: 9 Curso: Curso-Taller UNIDAD III ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE LAS PRINCIPALES BIOMOLÉCULAS 40 Introducción Los lípidos o grasas son un grupo heterogéneo de sustancias orgánicas que se encuentran en los organismos vivos. Los lípidos están formados por carbono, hidrógeno y oxígeno, aunque en proporciones distintas a como estos componentes aparecen en los azúcares. Se distinguen de otros tipos de compuestos orgánicos porque no son solubles en agua (hidrosolubles) sino en disolventes orgánicos (alcohol, éter). Entre los lípidos más importantes se hallan los fosfolípidos, componentes mayoritarios de la membrana de la célula. Los fosfolípidos limitan el paso de agua y compuestos hidrosolubles a través de la membrana celular, permitiendo así a la célula mantener un reparto desigual de estas sustancias entre el exterior y el interior. Fundamentación teórica Saponificación Las grasas reaccionan en caliente con el hidróxido sódico o potásico descomponiéndose en los dos elementos que la forman: glicerina y los ácidos grasos. Estos se combinan con los iones sodio o potasio del hidróxido para dar jabones, que son en definitiva las sales sódicas o potásicas de los ácidos grasos. La reacción es la siguiente: UNIVERSIDAD VERACRUZANA Facultad de Nutrición-Xalapa Practica No. 3: Reconocimiento de lípidos Área académica: Ciencias de la Salud Fecha de elaboración: Junio 2017 Academia: Ciencias de los Alimentos 41 Solubilidad Las grasas son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en pequeñísimas gotitas formando una "emulsión" de aspecto lechoso, que es transitoria, pues desaparece en reposo, por reagrupación de las gotitas de grasa en una capa que por su menor densidad se sitúa sobre la de agua. Por el contrario, las grasas son solubles en los llamados disolventes orgánicos como el éter, benceno, xilol, cloroformo, etc. Objetivo de aprendizaje El estudiante pondrá de manifiesto ciertas propiedades de los lípidos, algunas de las cuales pueden servir para su identificación. Descripción Práctica Saponificación 1.- Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite vegetal y 2ml de una solución de hidróxido sódico al 20%. 2.- Agitar enérgicamente y colocar el tubo al baño María de 20 a 30 minutos. Interpretación de resultados: Transcurrido este tiempo, se puede observar en el tubo tres capas: la inferior clara, que contiene la solución de sosa sobrante junto con la glicerina formada; la superior amarilla de aceite no utilizado, 42 y la intermedia, de aspecto grumoso, que es el jabón formado. Nota: Cuando ya se ha visto como se forma el jabón, se puede ir colocando en un vaso de precipitado el contenido de los tubos de ensayo, se remueve bien y se deja calentar hasta que se haga un buen trozo de jabón. Tinción Las grasas se colorean en rojo anaranjado por el colorante denominado Sudan III. 1.- Disponer en una gradilla dos tubos de ensayo, colocando en ambos 2ml de aceite. 2.- Añadir a uno, 4 o 5 gotas de solución alcohólica de Sudán III. Al otro tubo añadir 4-5 gotas de tinta roja. Agitar ambos tubos y dejar reposar. Interpretación de resultados: Se observará en el tubo al que se le añadió Sudán, que todo el aceite aparece teñido. En cambio en el frasco al que se añadió tinta roja, la tinta se habrá ido al fondo y el aceita aparecerá sin teñir. 43 Solubilidad 1. Tomar dos tubos de ensayo y poner en cada uno de ellos 2-3 ml de agua y en el otro 2-3ml de éter u otro disolvente orgánico. 2. Añadir a cada tubo 1ml de aceite y agitar fuertemente. Observar la formación de gotitas o micelas y dejar en reposo. Se verá como el aceite se ha disuelto en el éter y en cambio no lo hace en el agua, y el aceite subirá debido a su menor densidad. Solubilidad de lípidos 1. Colocar en una gradilla 5 tubos de ensaye medianos y numerarlos del uno al cinco; poner en cada tubo de ensaye una porción muy pequeña de manteca de res, añadir 44 respectivamente a cada tubo 5ml.de agua destilada, 5ml. De etanol a temperatura ambiente 5ml. y agítelo. Anotar las observaciones. 2. Colocar en una gradilla 4 tubos de ensaye medianos y enumeremos; en cada uno de ellos verter un ml de glicerina y añádale respectivamente a cada tubo 5ml de los siguientes solventes: agua, éter, alcohol etílico, y cloroformo. Anotar las observaciones. Prueba para insaturacion de lipidos 1.- En una gradilla colocar 4 tubos de ensaye secos. 2.- En cada uno de ellos poner respectivamente una pequeña cantidad de aceite de algodón común, manteca de puerco, manteca de cerdoy mantequilla, 3.- Agregar a cada tubo la cantidad mínima de cloroformo para disolver la muestra. 4.- Añadir a cada tubo, gota a gota y agitando, la solución de yodo de Hubl, hasta observar cambios. Oxidacion y descomposicion de lipidos Prueba de kreis 1. Disponer de dos tubos de ensaye secos; en el primero verter 2ml de aceite de algodón fresco, y en el segundo 2ml de aceite de algodón muy rancio. A cada tubo añadir 1ml de ácido clorhídrico concentrado, tapar con un tapón de hule y agite durante 30segundos. 2. A cada tubo añadir 2ml de solución de floroglucinol en éter etílico, y agitar 3. Añadir a cada tubo 5ml de éter etílico y agitar de nuevo con precaución. 4. Taparlos e invertirlos permitiendo que se separen capas. 5. Comparar los dos tubos. Anotar e interpretar las observaciones. Materiales 45 Materiales Material biológico Reactivos Baño María. Manteca Vegetal Glicerina Vaso de precipitado con agua Aceite de algodón Solución de Sudán III en frasco cuentagotas Gradillas con tubos de ensayo Mantequilla Solución de Hidróxido sódico al 20%. Mechero. Manteca de cerdo Éter o cloroformo. Aceite rancio Solución de floroglucinol en éter etílico Tinta roja en frasco cuentagotas etanol solución de yodo de Hubl Ácido clorhídrico concentrado Nota: Para preparar la solución de yodo de Hubl disolver 1.36 g de cristales de yodo en 25 ml de etanol comercial. Disolver 1.5 g de cloruro de mercurio II en 25 ml de etanol comercial. Mezclar las dos soluciones y filtrar si es necesario. Conservar la solución en frasco gotero ámbar. Teoría: 3 h Práctica: 3 h Elaborado: Hilda Leticia Gómez Rivas Fecha de la revisión: día/mes/año Créditos: 9 Curso: Curso-Taller UNIDAD III ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE LAS PRINCIPALES BIOMOLÉCULAS 46 Introducción Los lípidos son aquellas moléculas orgánicas, presentes en el tejido de los animales y las plantas, los cuales pueden ser separados o aislados con solventes de baja polaridad tales como: tetracloruro de carbono, cloroformo, éter de petróleo, éter etílico, benceno, tolueno, mezclas de benceno o tolueno y etanol en proporción 2:1. Se encuentran en la madera dentro de las sustancias extraíbles en disolventes poco polares. Los depósitos adiposos de los animales contienen principalmente grasas neutras, esto es esteres de glicerol con tres moléculas de ácido graso. En cambujo con la salvedad de tejido adiposo, casi todas las células poseen mucho menos grasas y consisten en Fosfolípidos y colesterol. Las grasas neutras o glicéridos representan la forma más común de los lípidos y forman parte en su mayoría de las grasas habituales como los aceites y las mantecas. Químicamente son los esteres resultantes de la esterificación del trialcohol glicerol con tres moléculas de ácidos grasos. Los ácidos grasos unidos al glicerol confieren sus características a la grasa con numero par de carbono ya que el que los contienen número impar, como el fórmico y otros solo existen a titulo excepcional y de manera fugas eh ciertos pasos del metabolismo intermedio. Fundamentación teórica Los lípidos son biomoléculas insolubles en agua y solubles en solventes orgánicos, lo que representa la principal propiedad para su extracción y cuantificación. UNIVERSIDAD VERACRUZANA Facultad de Nutrición-Xalapa Practica No. 3: Extracción de lípidos animales y determinación de ácidos grasos totales Área académica: Ciencias de la Salud Fecha de elaboración: Junio 2017 Academia: Ciencias de los Alimentos 47 Objetivo de aprendizaje Reconocer la presencia de los lípidos en el organismo mediante su extracción con un solvente y determinar los ácidos grasos totales de un hígado de pollo. Descripción de la práctica 1. Pesar alrededor de 5 gramos de hígado de pollo y anotar el peso 2. Pesar en la balanza analítica la misma cantidad de sulfato de sodio anhídrido que el hígado, se mezclan ambos y se tritura en el mortero hasta obtener una mezcla delgada y fina. 3. Colocar esta mezcla en el matraz de balón de fondo plano y empezar a agregar el éter en porciones de 5 a 7 ml , y agitar, fuertemente, hasta obtener un líquido de color amarillo intenso, que indica la presencia de los lípidos. 4. El líquido extraído de la mezcla del hígado con el éter se recolectará por medio de decantación en una probeta. 5. El paso anterior se repite hasta que la coloración del líquido en extracción sea muy tenue y la probeta alcance un promedio de 25 a 30 ml de este extracto. 6. Una vez obtenido el extracto de lípidos se desecha la mezcla del sulfato de sodio con el hígado. 1. Pipetear 5 ml de extracto de lípidos en un matraz de 125 ml, añadir 10 ml de KOH sol. alcoholica al 0.1 N y 3 gotas de fenolftaleína, realizar 2 problemas. 2. En otro matraz, colocar 5 ml de eter y 10 ml de KOH 0.1 N y 3 gotas de fenolftaleína. Este constituirá el blanco para realizar los cálculos correspondientes. 3. Agitar los matraces y colocarlos a bario María durante 30 min. 4. Pasado este tiempo se titulan los dos matraces con HCI al 0.1 N 5. Se hacen los respectivos cálculos. (ml de HCI blanco-HCI de problema)x N x225 x aforo x 100 A = _________________________;________________________ Alícuota x gramos de hígado. 48 MATERIALES MATERIAL Y EQUIPO MATERIAL BIOLÓGICO REACTIVOS 1 probeta de 50ml Hígado de pollo 5gr. Eter etílico (aproximadamente de 25 a 30 m l) 2 pipetas de 5ml Sulfato de sodio anhídrido (Aproximadamente de 10 a 15 g .) 3 pipetas d e l ml KOH a 0.1 N 1 agitador fenolftaleina 0.04 % 1 matraz de balón de fondo piano HCI 0.1 N 1 mortero con pistilo 1 vaso de pp. 250ml 1 probeta de 50 ml 1 Balanza granataria 1 Parilla 2 matraces de 125ml 1 soporte 1 embudo 2 hojas de papel filtro 30 cm de papel parafilm Soporte universal Pinzas para bureta Baño María Parrilla eléctrica 3 matraz Erlenmeyer 49 Teoría: 3 h Práctica: 3 h Elaborado: Hilda Leticia Gómez Rivas Fecha de la revisión: día/mes/año Créditos: 9 Curso: Curso-Taller UNIDAD III ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE LAS PRINCIPALES BIOMOLÉCULAS 50 Introducción Las proteínas son biomóleculas formadas básicamente por carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno. Pueden además contener azufre y en algunos tipos de proteínas, fósforo, hierro, magnesio y cobre entre otros elementos. Pueden considerarse polímeros de unas pequeñas moléculas que reciben el nombre de aminoácidos y serían por tanto los monómeros. Los aminoácidos están unidos mediante enlaces peptidicos Fundamentación teórica Coagulación de proteinas Las proteínas, debido al gran tamaño de sus moléculas, forman con el agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formación de coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70:C o al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc. La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización por los agentes indicados, que al actuar sobre la proteina la desordenan por la destrumlión de su estructura terciaria y cuaternaria . UNIVERSIDAD VERACRUZANA Facultad de Nutrición-Xalapa Practica No. 5: Reconocimiento de proteínas Área académica: Ciencias de la Salud Fecha de elaboración: Junio 2017 Academia: Ciencias de los Alimentos http://interbiologia.virtualave.net/molecula/protamin.html 51 Reacciones coloreadas Reacción xantoproteica Es debida a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo, cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado. La prueba daresultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos bencénicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali vira a un color anaranjado oscuro. Reacción de biuret La producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (- CO- NH -)que se destruye al liberarse los aminoácidos. Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada biuret, de fórmula: que en contacto con una solución de sulfato cúprico diluida, da una coloración violeta característica. Reacción de aminoácidos azufrados Se pone de manifiesto por la formación de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta reacción en la separación mediante un álcali, del azufre de los aminoácidos, el cual al reaccionar con una solución de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo. Objetivo de aprendizaje • El estudiante identificara los diversos tipos de proteínas en alimentos a través de la reacción de Biuret. 52 • El estudiante identificara las reacciones de proteínas y los diferentes tipos de reacciones para identificarlas. • El estudiante identificara la solubilidad de las proteínas. • El estudiante identificara la coagulación de proteínas Descripción de la práctica Solubilidad 1.- Tomar 4 tubos de ensaye y márquelos A, B, C, y D; en cada uno de ellos colocar aproximadamente 1 ml, de clara de un huevo fresco. 2.- A cada tubo añadir respectivamente 5 ml de: agua fría, agua caliente, y solución de hidróxido de sodio al 25%, y agitar. Anotar las observaciones sobre la solubilidad de la albúmina de huevo Coagulación de proteínas Para ver la coagulación de las proteínas se puede utilizar clara de huevo, para conseguir más volumen puede prepararse para toda la clase una dilución de clara de huevo en agua, de forma que quede una mezcla aún espesa. 1.- Colocar en un tubo de ensayo una pequeña cantidad de clara de huevo. 2.- Añadir 5 gotas de ácido acético y calentar el tubo a la llama del mechero. Reacciones coloreadas Reacción xantoproteica 53 1.- Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 ml. de solución problema (clara de huevo ). 2.- Añadir 1 ml. de HNO3 concentrado. 3.- Calentar al baño maría a 100: C.. 4.- Enfriar en agua fría 5.- Añadir gota a gota una disolución de sosa al 40%. Reaccion de Biuret 1.- Tomar un tubo de ensayo y poner unos 3 ml. de albúmina de huevo. 2.- Añadir 2ml. de solución de hidróxido sódico al 20%. 3.- Agregar 4 ó 5 gotas de solución de sulfato cúprico diluida al 1%. Interpretación de resultados: En un resultado positivo debe aparecer una coloración violeta-rosácea característica. Reacción de aminoácidos azufrados 1.- Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 ml. de albúmina de huevo (clara de huevo). 2.- Añadir 2 ml. de solución de hidróxido sódico al 20%. 3.- Añadir 10 gotas de solución de acetato de plomo al 5%. 54 4.- Calentar el tubo hasta ebullición. Interpretación de resultados: Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de plomo, utilizándose el azufre de los aminoácidos, lo que nos sirve para identificar proteínas que tienen en su composición aminoácidos con azufre. Prueba de Ninhidrina 1.- En un tubo de ensaye, verter 3 ml de la solución A y 5 ml de una solución de nihidrina al 0.1 % 2.- Calentar hasta ebullición y enfriar. Anotar las observaciones Materiales Mechero Materiales Material biológico Reactivos Gradilla Suero fisiológico solución de cloruro de mercurio II al 10% Pipetas Clara de huevo Acetato de plomo 5% Soluciones de Fehling Agua oxigenada Tubos de ensayo Acido acetico Sulfato cuprico 1% Hidroxido de sodio 20% 55 solución de ninhidrina al 0.1% solución saturada de cloruro de sodio Baño María solución de cloruro de mercurio II al 10% solución de ferrocianuro de potasio al 10% alcohol etílico Agua oxigenada Ac. nitrico Hidroxido de sodio 40% ácido acético Solución de hidróxido de sodio al 1.0, al 0.1 Teoría: 3 h Práctica: 3 h Elaborado: Hilda Leticia Gómez Rivas Fecha de la revisión: día/mes/año Créditos: 9 Curso: Curso-Taller UNIDAD III ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE LAS PRINCIPALES BIOMOLÉCULAS 56 Introducción Las proteínas son polímeros de aminoácidos enlazados por uniones peptídicas con un peso molecular aproximado que oscila entre 5000 a 1xl06. Algunas proteínas son solubles en agua, otras necesitan como solvente una solución salina diluida, y hay algunas otras, que son insolubles en cualquier sistema acuoso. Cada proteína posee un tipo de distribución de cargas único a lo largo de su estructura debido a que cada proteína posee una secuencia única de aminoácidos que la caracteriza y a su composición en grupos amino, carboxilo y radicales que conforman los aminoácidos esos aminoácidos. Las propiedades ácidas o básicas de una proteína están condicionadas por el medio que le rodea, lo que origina que sus grupos funcionales puedan encontrarse como aniones o como cationes. Por tanto, si una proteína se encuentra solubilizada en un medio muy básico, es mucho más probable que el grupo amino se encuentre como catión amonio y que el grupo carboxilo no forme el anión carboxilato ; en caso de un medio muy acido, sería mucho más probable la formación del anión carboxilato y la existencia del grupo amino de esa manera. La proteína plasmática más abundante es la albumina. Esta proteína tiene un punto isoeléctrico de 4.8 y por lo tanto una considerable carga negativa. Las dos funciones principales de la albumina son el transporte de pequeñas moléculas a través de plasma y el líquido extracelular y el suministro de presión osmótica dentro del capilar. Fundamentación teórica UNIVERSIDAD VERACRUZANA Facultad de Nutrición-Xalapa Practica No. 6: Propiedades de las proteínas y determinación del punto isoeléctrico de la albumina Área académica: Ciencias de la Salud Fecha de elaboración: Junio 2017 Academia: Ciencias de los Alimentos 57 Las proteínas son moléculas sensibles a altas temperaturas y a pH extremos. La solubilidad de una proteína disminuye notablemente cuando el pH de la solución alcanza el punto isoléctrico de la proteína. Objetivo de aprendizaje El estudiante observará el efecto del pH y la temperatura sobre la solubilidad de las proteínas, y determinará el punto isoeléctrico de la albúmina. Descripción de la práctica Propiedades de las proteínas 1.- Colocar en tubos de ensayo las muestras de proteínas colocando por separado similar cantidad de agua y de etanol, para probar su solubilidad en ambos disolventes. 2. - Calentar las soluciones y observar su solubilidad. 3. - Anotar las observaciones. 4. - Colocar en tubos de ensayo cada una de las proteínas. 5. - Calentar directamente las proteínas. 6. - Anotar las observaciones. 7. - Preparar una solución de ovoalbúmina (clara de huevo), agitando una parte de la proteína con 5 ml de agua fría. La solución queda algo turbia por la globulina soluble. 8. - Tomar 2 ml de la solución y añadir HCI al 2 % gota a gota. 9. - Anotar las observaciones. 10. - Tomar 2 ml de la solución de ovoalbúmina y añadir etanol en cantidad suficiente para provocar la precipitación. La albumina coagulada no puede disolverse debido a que ha quedado desnaturalizada. 11. - Anotar las observaciones. DETERMINACION DEL PUNTO ISOELECTRICO DE LA ALBUMINA 1.- Preparar una serie de tubos como se indica en la siguiente tabla: TUBOS (ml) 58 REACTIVOS 1 2 3 4 5 6 7 Acetato desodio 1 1 1 1 1 1 1 Ácido acético 0.1 N --- 0.05 0.25 4 4 --- --- Ácido acético 1N --- --- --- --- --- 1.6 6.4 Hidróxido de sodio 1N --- 0.05 --- --- --- --- --- Agua destilada --- 6.95 6.95 6 3 3 5.4 pH Observado 2. - Ya preparada la serie agregar a cada tubo 3 ml de solución de albumina en cloruro de potasio al 0.1 M agitando en seguida. 3. - Medir pH en cada tubo. 4. - Observar la precipitación máxima y reportar ese punto isoeléctrico. MATERIALES MATERIALES Y EQUIPO MATERIAL BIOLÓGICO REACTIVOS 8 tubos de ensayo Ovoalbúmina al 10% (clara de huevo) Etanol Pinzas para tubo de ensayo Caseína 50 ml de hidróxido de sodio 1N Una gradilla Gelatina 100 ml de ácido acético 1N Mechero Huevo 100 ml de ácido acético al 0.1N 2 Pipetas de 1 ml Cucharada de leche en polvo (NIDO) 100 ml de acetato de sodio 0.1N 2 Pipetas de 2 ml 300 ml de cloruro de potasio 0.1M al 10 % 2 Pipetas de 5 ml Ácido clorhídrico 2 % 2 Pipetas de 10 ml Agua destilada Papel indicador de pH 59 1 Vaso de precipitado de 50 ml Teoría: 3 h Práctica: 3 h Elaborado: Hilda Leticia Gómez Rivas Fecha de la revisión: día/mes/año Créditos: 9 Curso: Curso-Taller UNIDAD III ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE LAS PRINCIPALES BIOMOLÉCULAS 60 Introducción Las enzimas son cualquiera de las numerosas sustancias orgánicas especializadas compuestas por polímeros de aminoácidos, que actúan como catalizadores en el metabolismo de los seres vivos. Con su acción, regulan la velocidad de muchas reacciones químicas implicadas en este proceso. El nombre de enzima, que fue propuesto en 1867 por el fisiólogo alemán Wilhelm Kühne (1837-1900), deriva de la frase griega en zymç, que significa 'en fermento'. En la actualidad los tipos de enzimas identificados son más de 700. Reconocimiento de la catalasa La catalasa es una enzima que se encuentra en las células de los tejidos animales y vegetales. La función de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el metabolimo celular, se forma una molécula tóxica que es el peróxido de hidrógeno, H2O2 (agua oxigenada). Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y oxígeno, por lo que se soluciona el problema. La reacción de la catalasa sobre el H2O2, es la siguiente: La existencia de catalasa en los tejidos animales, se aprovecha para utilizar el agua oxigenada como desinfectante cuando se echa sobre una herida. Como muchas de las bacterias patógenas son anaerobias (no pueden vivir con oxígeno), mueren con el desprendimiento de oxígeno que se produce cuando la catalasa de los tejidos actúa sobre el agua oxigenada. Reconocimiento de la catalasa La catalasa es una enzima que se encuentra en las células de los tejidos animales y vegetales. UNIVERSIDAD VERACRUZANA Facultad de Nutrición-Xalapa Practica No.7: Reconocimiento de enzimas Área académica: Ciencias de la Salud Fecha de elaboración: Junio 2017 Academia: Ciencias de los Alimentos 61 La función de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el metabolimo celular, se forma una molécula tóxica que es el peróxido de hidrógeno, H2O2 (agua oxigenada). Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y oxígeno, por lo que se soluciona el problema. La reacción de la catalasa sobre el H2O2, es la siguiente: La existencia de catalasa en los tejidos animales, se aprovecha para utilizar el agua oxigenada como desinfectante cuando se echa sobre una herida. Como muchas de las bacterias patógenas son anaerobias (no pueden vivir con oxígeno), mueren con el desprendimiento de oxígeno que se produce cuando la catalasa de los tejidos actúa sobre el agua oxigenada. Fundamentación teórica Las enzimas son proteínas y por tantos se destruyen (desnaturalizan) con el calor y con los cambios de pH. Cuando se produce la desnaturalización, la enzima deja de ser activa y no cumple su función. La amilasa o ptialina, presente en la saliva. actúa sobre el polisacárido almidón, hidrolizando el enlace O-glicosídico, por lo que el almidón se terminará por transformar en unidades de glucosa. La catalasa actúa sobre el peróxido de hidrógeno (H2O2 agua oxigenada) descomponiéndolo en H2O y O2, con desprendimiento de energía en forma de calor. Esta enzima está presente en todos los tejidos animales y vegetales. Objetivo de aprendizaje El estudiante observará la presencia de catalasa en una muestra biológica y comprobará su actividad. El estudiante comprobara la acción de la temperatura sobre la actividad de las enzimas. 62 El estudiante comprobara la acción hidrolítica de la amilasa Descripción de la práctica Reconocimiento de catalasa. 1.- Colocar en un tubo de ensayo unos trocitos de hígado. 2.- Añadir 5 mililitros de agua oxigenada. Interpretación de resultados: Se observará un intenso burbujeo debido al desprendimiento de oxígeno. Figura 1 (Observa la reacción A) Figura 1 En esta fotografía puede verse el resultado de la reacción. Se debe repetir esta experiencia con muestras de distintos tejidos animales y vegetales. Puede ser interesante ir observando la mayor o menor actividad, según el tejido con el que se realice la experiencia. Desnaturalización de proteínas 1.- Colocar en un tubo de ensayo varios trocitos de hígado. 2.- Añadir agua para hervir la muestra. Hervir durante unos minutos. 3.- Después de este tiempo, retirar el agua sobrante. 4.- Añadir el agua oxigenada. Figura 2 63 5.- Observar el resultado. Figura 2 Hidrólisis del almidón 1.- Poner en una gradilla cuatro tubos de ensayo, numerados del 1 al 4. 2.- Añadir en cada tubo 5 mililitros de una solución diluida de almidón. 3.- A los tubos 3 y 4 añadir una pequeña cantidad de saliva. Figura 3 Figura 3 4.- En el tubo 1, realizar la Reacción de Fehling.Figura 4 5.- En el tubo 2, realizar la Reacción de Lugol. Figura 5 Interpretación de resultados: Los resultados son los esperados para un polisacárido como el almidón. Figura 4 Figura 5 Los tubos 3 y 4 que contienen el almidón, al que le hemos echado la saliva, ponerlos en un vaso de precipitados al baño María, controlando la temperatura del agua para que no hierva, ya que lo que intentamos, es que la Figura 7 Figura 8 64 Figura 6 enzima de la saliva trabaje a unos 37: C. Dejarlo unos 15 minutos Figura 6 A continuación realizar las siguientes reacciones: 1.- En el tubo número 3, realizar la Reacción de Fehling. Figura 7. 2.- En el tubo número 4, realizar la Prueba del Lugol. Figura 8 Interpretación de resultados: El resultado positivo obtenido en el tubo de ensayo 3, indica que no hay ya almidón, porque la amilasa de la saliva ha hidrolizado el almidón transformándolo en glucosa, por eso la reacción de Fehling es ahora positiva. - De una manera similar, se puede interpretar el resultado del tubo de ensayo 4, ahora da la reacción de polisacáridos negativa, ya que el almidón( polisacárido) se ha hidrolizado. Fotografía 1 Fotografía 2 En la fotografía número 1,, colocando la saliva en el tubo que contenía la muestra de almidón. En la fotografía número 2, se observa el tubo después de hacerle la Prueba de Fehling, y como se puede ver, no hay duda de que la saliva tiene una gran cantidad de amilasa, a juzgar por los resultados. Material Material Material biológico Reactivos Gradilla Trocitos de hígado Solución de lugol 65 Pipetas Trocitos de tomate Agua oxigenada Soluciones de Fehling Almidón Baño María Tubos de ensayo Agua oxigenada Mechero Teoría: 3 h Práctica:
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