Clase Mycobacterium

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Grupo de especies entre los que están agentes de 
enfermedades como tuberculosis y paratuberculosis 
animales (zoonosis) 
 
 Procesos específicamente humanos, frecuentemente 
mortales como tuberculosis y lepra 
 
 
 Enfermedades de máxima importancia sanitaria que 
ocasionan pérdidas económicas en todo el mundo. 
 Clase Actinobacteria, orden Mycobacteriales, familia 
Mycobacteriaceae, incluye más de 30 especies, de las 
que no menos de 20 tienen capacidad patógena. 
 
 La segunda edición del Bergey´s Manual of Systematic 
Bacteriology ubica a el género, junto con Actinomyces, 
Micrococcus, Corynebacterium, Nocardia, 
Propionibacterium y Streptomyces en la Sección XXIII del 
Volúmen 4 (gram positivos con alto contenido de G+C) 
 
 La especie tipo del género es Mycobacterium tuberculosis 
conocida como bacilo de Koch 
 
 Está relacionado con los géneros Nocardia y Rhodococcus 
y los tres tienen pared celular similar 
Taxonomía 
CUADRO 
VADILLO 
 Son bacilos delgados que varían en tamaño (0,2-0,6x 1,0-
10,0µm). Algunas veces como filamentos 
 
 Su longitud varía mucho según la especie y según se trate 
de frotis de tejido o de cultivo 
 
 Citoquímicamente gram positivos pero su PC contiene gran 
cantidad de ácidos micólicos, que dificultan la tinción de 
gram 
 
 Paredes celulares ricas en lípidos apareciendo a veces una 
silueta (negativos o formas fantasmas) 
Morfología 
 Son ácido alcohol resistentes, sus lípidos se unen a carbol 
fucsina, que no puede ser removida por el decolorante ácido 
alcohol Ziehl- Neelsen (ZN), coloración rojo intensa sobre 
fondo azul 
 
 Técnica fluorescente rodamina- auramina de Truant 
 
 Suelen teñirse de forma irregular (en forma de cuentas) 
 
 Carecen de esporos, flagelos, fimbrias o cápsulas 
 
 Algunas especies cromógenos, producen pigmentos 
carotenoides (clasificación de Runyon) 
Morfología 
 
 En 1959, Runyon agrupó las especias del género en base a 
la pigmentación, morfología de colonia y tasa de 
crecimiento. 
 
 Escotocromógenas: producen pigmento amarrillo-naranja, 
siendo incubados ya sea en luz o en oscuridad (II de 
Runyon) 
 Fotocromógenos: solo al ser cultivados en exposición a la luz 
(grupo I de Runyon) 
 No cromógenas: no producen pigmento (III Runyon) 
 
 Estos tres grupos forman parte de las micobacterias atípicas 
que son agentes potenciales de lesiones localizadas en el 
humano y animales 
Grupos de Runyon 
 Mycobacterias de crecimiento rápido: requieren menos de 7 días 
(grupo IV de Ruyon) 
 
 Mycobacterias específicas no cultivables en medios inertes (M. 
leprae) 
Grupos de Runyon 
 
 Las fuentes más habituales para las micobacterias 
patógenas son los animales vivos infectados 
 
 Los patógenos obligados son excretados por 
animales y sobreviven en el ambiente por períodos 
largos 
 
 Las vías de eliminación preferentes por las distintas 
especies varían 
 M. bovis: vía respiratoria, heces, leche, orina y semen 
 M avium y M. paratuberculosis: por las heces 
 M. tuberculosis: vía respiratoria 
Hábitat 
A pesar que presentan especificidad de hospedador 
pueden afectar otras especies 
 
 M. bovis rumiantes (ovino es muy resistente) también al 
humano, gato, perro y suinos que conviven con bovinos 
son afectados con frecuencia 
 
 M. avium afecta principalmente aves pero también 
cerdos y animales de zoológico 
 
 M. tuberculosis (bacilo humano) se aisla con relativa 
frecuencia en perros, bovinos y aves 
 
 La especie equina es muy resistente 
a las micobacterias 
Hábitat 
 Las micobacterias ambientales pueden mantenerse 
viables en suelo y en heces secas 
 
 Las atípicas están dispersas en el suelo, pastura y agua, 
algunas son comensales en animales y los infectan pero 
no son un recurso importante de infección para otros 
animales 
 Principal factor de patogenicidad es la densa pared celular 
rica en lípidos que les permite sobrevivir en ambientes 
hostiles (célula o el medio ambiente). 
 
 Lípidos intervienen en virulencia 
 Derivados de ftiocerol: protegen a las micobacterias de la 
acción de las enzimas del hospedador, permitiéndoles vivir 
incluso dentro de los fagolisosomas 
 
 Factor cordón: en la capa externa de la pared celular, con 
propiedades leucotóxicas, de inhibición de quimiotactismo 
leucocitario e inducción de respuestas granulomatosas 
 
 Sulfolípidos y fosfolípidos: fosfatidil inositol-manósido que 
inhibe la fusión fagolisosómica en el fagocito 
Poder patógeno 
 Lipoarabinomanano (LAM) equivalente al LPS que reduce el 
poder estimulante de la función fagocítica de los macrófagos 
 
Poder patógeno 
 En animales no expuestos previamente 
 
 La multiplicación local sobrepasa el poder de la fagocitosis 
y permite le replicación, células infectadas llegan a 
nódulos linfáticos y de allí al ducto torácico con 
diseminación general. 
 
 Después de la primera semana se activan los macrófagos 
a atacar, la agregación de macrófagos contribuye a la 
formación de un tubérculo, una capa fibrosa envuelve la 
lesión, necrosis caseosa en el centro y puede calcificarse o 
llegar a licuefacción 
Granulomas 
 M. bovis (complejo M. tuberculosis): mamíferos 
 
 Comprende varias especies de micobacterias : M. 
tuberculosis, M. africanun tipo I y II, M. bovis, M. bovis BCG, 
M. bovis subsp. caprae y M. microti. 
 
 Son muy variadas y se caracterizan por producir lesiones 
granulomatosas. 
 
 Tuberculosis bovina: pérdida de condición corporal, tos y 
pirexia intermitente, se compromete el tejido mamario con 
endurecimiento de cuartos y aumento de nódulos 
supramamarios. 
 
 Mastitis tuberculosa facilita la diseminación de la 
enfermedad. 
Micobacterias de importancia en 
veterinaria 
Micobacterias de importancia en 
veterinaria 
 Complejo M. avium: 
 
 Incluye M. avium y M. intracellulare 
 
 Produce granulomas. 
 
 Emaciación, examen postmorten se ve 
lesiones granulomatosas en hígado, 
bazo, huesos e intestino 
 
Micobacterias de importancia en 
veterinaria 
 M. avium subsp. paratuberculosis: paratuberculosis, intestinal 
muy contagiosa de los rumiantes, que se caracteriza por 
curso crónico y caquetizante con enteritis proliferativa y 
diarreas incoercibles. 
 
 M. lepraemurium: agente causal de lepra murina y felina. 
proceso granulomatoso de la piel y tejido subcutáneo, 
 
 Formación de nódulos suaves localizados en cabeza y 
extremidades que no suele afectar el estado general del 
animal, pueden infectarse. 
M. lepraemurium 
M. avium subsp. 
paratuberculosis: 
 Animales vivos: leche, material de biopsias, líquidos 
aspirados, lavados bronquiales o heces en caso de 
paratuberculosis. 
 
 Necropsia: lesiones compatibles, nódulos linfáticos 
retrofaríngeos u otros en animales sin lesione 
aparentes, ganglio yeyunal en paratuberculosis. 
 
 Pueden conservarse frescas o congeladas para 
análisis microbiológicos y en formol al 10% para 
estudios anatomopatológicos. 
Toma de muestras 
 Tinción de Ziehl- Neelsen o fluorescente de Truant con 
rodamina o auramina con frotis de extensiones de 
exudados o excreciones de animales vivos o material 
de necropsia 
 
 La observación de un solo bacilo ácido alcohol 
resistente es indicio de tuberculosis en presencia de 
síntomas o lesiones sospechosas. 
 
 En tinción de gram se observan bacilos gram positivos 
muy débilmente teñidos por el cristal violeta 
Microscopía directa 
 El método de tinción de Ziehl- Neelsen permite 
diferencia micobacteria de otras bacterias 
 
 Diferenciación de micobacterias patógenas se da por 
características de cultivo, pruebas bioquímicas, 
inoculación animal, análisis cromatoráfico, y técnicas 
moleculares. 
 
 Las asociadas a infecciones oportunistas pueden ser 
diferenciadas en base a la producciónde pigmento, 
y la temperatura optima de crecimiento 
Caracterización 
 Para trabajar con material sospechoso a micobacterias se 
debe utilizar cabina de seguridad por precaución 
 
 Las características de crecimiento lento de este género 
obliga a emplear técnicas de descontaminación (gran 
cantidad de bacterias y hongos de crecimiento rápido) 
 
 Técnicas de concentración (centrifugación) sobre todo si la 
muestra es pequeña 
 
 Se siembran en medios como 
Lowenstein –Jensen (L-J) con piruvato 
y glicerol, medio Coletsos (M. bovis), 
Medios enriquecidos con micobactina J 
 para M. avium subsp 
paratuberculosis (medio de Herrold ) 
Aislamiento 
 Las patógenas crecen lento y las colonias no son visibles 
hasta que el cultivo ha sido incubado al menos 3 semanas, 
en contraste las de rápido crecimiento (saprófitas) son 
visibles en días. 
 
 M. bovis, M. tuberculosis, M. avium subsp paratuberculosis 
tienen una temperatura de crecimiento a 37°C, mientras 
que las que pertenecen al complejo M. avium crecen entre 
37 y 43°C 
 
 La influencia del glicerol 
y piruvato de sodio en el crecimiento 
 se usa para diferenciar especies 
patógenas 
 
Aislamiento 
 Pruebas bioquímicas específicas (Producción de 
niacina, reducción de nitrato, deaminación de 
pirazinamida, test de ureasa, McConkey con cristal 
violeta, pruebas de inhibición y tolerancia) 
 
 Algunos no pueden ser asignados a una especies, 
usando diferenciación bioquímica porque estos 
perfiles bioquímicos son difíciles de interpretar 
 
Pruebas de identificación 
 Producción de pigmentos y fotoreactividad para 
oportunistas 
 
 No cromógenas: no producen pigmento, pero al 
envejecer poder tornarse con tintes amarillentos 
 
 Cromógenas: si producen y según como se manifieste 
ésta propiedad pueden ser: 
 
• Escotocromógenas (luz y oscuridad) 
 
• Fotocromógenas lo producen al estar expuestas a luz 
blanca de 100 watios a 50cm de distancia durante al 
menos una hora e incubarlas posteriormente en la 
oscuridad de 1 a 3 días más. 
Pruebas de identificación 
(cuadro 514 de vadillo) 
 Sondas para la confirmación de cultivos: sondas para 
hibridación comerciales, complementarias de 
secuencias específicas de especie de ARNr para 
identificación del complejo M. tuberculosis, complejo 
M. avium, M. gordonae y M. kansasii 
 
 Secuenciación de ADN: rápido pero caro y laborioso. 
Definición de las secuencias de las regiones 
hipervariables del ARNr de las distintas especies 
micobacterianas 
 
 Detección directa e identificación por amplificación de 
ácidos nucleicos e hibridación 
 
 Sistemas de tipificación molecular de cepas. 
Técnicas moleculares 
 Las técnicas más versátiles y fiables son las que tratan de 
medir la respuesta inmunitaria celular. 
 
 El método más aceptado y estandarizado en la mayor 
parte de los países es la intradermoreacción con 
tuberculina PPD (derivado proteico purificado, extractos 
purificados de M. tuberculosis, M. bovis o M. avium) 
 
 Provoca reacción intensa de hipersensibilidad retardada 
en animales que hayan tenido anteriormente contacto 
previo con el bacilo. 
Análisis inmunológico de campo y 
laboratorio 
La inoculación se realiza en áreas de la piel 
donde el animal no se pueda rascar (región 
escapular o pliegue caudal de la cola) 
 
 La positividad se refleja por el aumento de 
grosor de la piel en el área inoculada al cabo 
de unas horas (72 máximo). El engrosamiento 
es consecuencia de la respuesta celular 
asociada a edema 
 Se pueden hacer de dos formas 
 
 Intradérmico sencillo: Doblez caudal, 0.1 de PPD 
bovino (M. bovis) es inyectado intradérmico en el 
pliegue caudal de la cola 
 
 Prueba intradérmica comparativa: 0,1 de PPD aviar y 
0,1 PPD bovino son inyectados de forma intradérmica 
en sitios separados a los lados del cuello con 12 cm de 
separación 
 Puede dar: 
 
 Falsos positivos: por reacciones cruzadas con 
micobacterias banales (diferentes a M.bovis) o con 
bacterias muy similares filogenéticamente 
 
 Falsos negativos: anérgico como ocurre (deficiencias 
inmunitarias o al final de la enfermedad con 
desplome de las defensas orgánicas) 
 
• Animales que fueron testeados antes de haber 
desarrollado la hipersensibilidad retardada (30 post 
infección) no reaccionan 
 
• Vacas pueden no responder a la prueba de 
tuberculina en el período postparto temprano. 
 
 Pruebas sanguíneas: han sido desarrolladas para 
usarse en conjunto con la de tuberculina, para 
contrarrestar estos errores se pueden hacer pruebas 
 
• ELISA para detección de anticuerpos 
• Ensayo de interferón Gamma 
 
 Para el diagnóstico de la paratuberculosis las pruebas 
son similares se usa intradermoreacción con un 
derivado de M. avium subsp. paratuberculosis 
llamado Johnina PPD. 
 M. bovis tratamiento y vacunación son inapropiados en 
programas de control 
 
 En muchos países la prueba de tuberculina seguida de 
aislamiento y sacrificio de animales positivos son la base 
de los esquemas nacionales de erradicación. 
 
 Inspección de rutina de la carne es la base de la 
vigilancia de la tuberculosis en muchos países 
Control 
 Paratuberculosis animales sospechosos debe ser 
aislados, al confirmarse deben ser sacrificados 
 
 Excretores subclínicos deben ser detectados por 
cultivo fecal o ELISA cada 6 meses 
 
 Vacunas inactivadas disponibles, en bovinos, puede 
reducir el número de casos clínicos pero no elimina la 
enfermedad del rebaño, en ovinos la vacuna 
previene la infección 
Control 
 
 Lepra felina 
 
 Remoción quirúrgica de 
lesiones es el tratamiento 
de elección en esta 
enfermedad