laboratorio_microbiologia

Vista previa del material en texto

UNIVERSIDAD FINIS TERRAE 
FACULTAD DE MEDICINA 
ESCUELA DE MEDICINA 
 
 
Laboratorio de Microbiología 
Informe Nº2 
 
 
Título de la Actividad : Identificación de Bacterias Cocáceas Gram Positivo (+) 
 
Nombres : Pedro Palza – Andrés Finschi 
 
Fecha : Lunes 9 de mayo, 2016. 
 
 
 
 
NÚMERO DE LA MUESTRA PROBLEMA: 
 
 
 
1) Objetivo principal de la actividad (2 ptos): 
 
- Aprender a identificar un patógeno entre varias especies de cocos Gram positivos, en 
base a sus características microscópicas, macroscópicas, y según la aplicación de 
distintas pruebas bioquímicas como también estudios de sensibilidad a 
antimicrobianos. 
- Aprender a realizar una variedad de pruebas de identificación bacteriana: prueba de la 
catalasa, prueba de factor CAMP y antibiograma (mediante técnica de difusión por 
discos). 
 
 
Puntaje NOTA 
12 
FIGURA 1. 
Muestra numero 12 en agar sangre 
2) Metodología: (5 ptos.) (Máximo media plana) 
 
1) Lo primero a realizar es la elección de un cultivo “X” para el desarrollo de la actividad 
práctica. 
2) Observar las características macroscópicas de la muestra elegida. 
3) Realizar una tinción de Gram (lo cual ayudará a reducir nuestro espectro de 
posibilidades frente a qué agente patógeno estamos identificando), para luego 
describir las características microscópicas de la bacteria (afinidad tintorial, forma y 
agrupación). 
4) Realizar pruebas bioquímicas. La prueba de la catalasa, para observar la reacción de 
la muestra de bacterias con gotas de peróxido de hidrogeno sobre un portaobjeto 
(presencia de burbujas). 
5) Luego se da pasó a la prueba llamada Test de Latex, en la cual se manifestaran 
coágulos blanquecinos en el caso de ser una bacteria coagulasa positiva. 
6) Observar presencia y características de los halos de hemolisis de las colonias en las 
placas entregadas. Clasificar según hemolisis. 
7) Realizar un antibiograma homogeneizando muestra de bacteria de una colonia en un 
tubo de ensayo con una concentración igual a turbidez MacFarland 0,5. Plaquear 
suspensión sobre placa de agar Muller-Minton sangre. Colocar sensidiscos de 
Oxacilina, Eritromicina, Clindamicina, Novobiocina y Vancomicina sobre siembra. 
8) Observar resultados de las distintas pruebas (observables y bioquímicas) para ir 
clasificando bacteria según su taxonomía bacteriana, para diagnosticarla la 
bacteria del trabajo práctico. 
 
 
 
 FIGURA 2. 
Muestra bacteriana nº5 en agar sangre, hemolisis alfa (izquierda) 
Muestra bacteriana nº12 en agar sangre, hemolisis gamma (derecha) 
3.- ANÁLISIS MACROSCÓPICO 
 
 Las muestras clínicas que usted recibió deben ser analizadas en forma macroscópica. En 
base a sus observaciones llene el siguiente cuadro informativo (5 ptos) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
NUMERO 
MUESTRA 
12 
FORMA 
 
Circular 
BORDE 
 
Entero 
ELEVACIÓN 
 
Cóncava 
COLOR 
 
Blanquecina 
 
BRILLO 
 
Brillante 
CONSISTENCIA 
 
Cremosa 
HEMÓLISIS 
 
Gamma 
 
 
4.- ANÁLISIS MICROSCÓPICO 
 
Tinción de Gram. Dibuje lo observado y describa sus observaciones. Describa: afinidad 
tintorial, forma y agrupación. (10 ptos) 
 
 
 
 
 
5.- Resultados de las pruebas Bioquímicas. Indique las pruebas que realizó a su 
muestra clínica (en el orden correcto) y el resultado que obtuvo en cada una de ellas (15 
ptos.) (Máximo media plana) 
 
 
Posterior a la identificacion de la forma (coco) y agrupacion basteriana (racimo), mediante la 
tincion de Gram, se debe realizar pruebas quimicas: 
 
• 1) TEST DE LA CATALASA 
La catalasa es una enzima, que cataliza la reaccion de descomposicion del peróxido 
de hidrógeno en oxígeno y agua, las bacterias que poseen esta enzima dan resultado 
positivo, esto es visible por la presencia de burbujas sobre la muestra. 
Esta prueba permite diferencias los generos Staphlycoccus, Micrococcus y Listeria 
(catalasa +) del genero Streptococcus (catalasa -) 
- Metodologia: se debe colocar una gota de peroxido de hidrogeno sobre un 
portaobjetos y encima ademas se agrega la colonia en estudio. La aparicion rapida 
y sostenida de burbujas (antes de 20 segundos), indica test [+] 
- Resultado obtenido: Positivo. Se confirmó la presencia de bacterias del género 
Staphylococcus, Microccocus o Listeria. Sin embargo en clases practica se informo 
que dentro de las muestras no se cuenta con gernero Micrococcus o Listeria, por lo 
que se concluye que la bacteria de la muesta es del genero Staphylococcus. 
 
Observaciones 
Se observa una muestra bacteriana en 
microscopio optico con aumento 1000x , de 
tincion Gram (+), de forma coco y agrupacion 
en racimo. 
 
 
 
 
• TEST DE LATEX 
Esta prueba permite diferenciar especies bacterianas del genero Staphylococcus, 
especificamente diferencia la especie S. Aureus de otras especias del genero. 
- Metodologia: consiste en poner una gota de reactivo latex sobre un circulo de una 
tarjeta, a continuacion se emulsiona sobre la gota, la colonia sospechosa, se agita 
durante unos segundos y si hay formacion de grumos visibles se considera positiva 
la prueba. Se debe realizar un control negativo que esta incluido en el kit. 
- Resultado obtenido: Positivo. Se confirmo la presencia de bacterias de la especia 
S.aureus. 
 
 
 
 
 
FIGURA 3. 
Asa de platino con colonia de bacterias en 
punta, inmersa en la gota de peroxido de 
hidrogeno sobre portabojetos. Se evidencia 
mediante burbujas, resultado positivo TEST 
DE LA CATALASA 
FIGURA 4. 
Colinias en agar sangre (izquierda) 
Tarjeta para test de latex. Sobre circulo, nº 2 latex 
y sobre circulo nº 5, control negativo (derecha) 
 
 
FIGURA 5-6 
Circulo nº 2 con colonia de bacterias ya revuelto y expermientado reaccion de agltuniacion 
Circulo nº5 con colonia de bacterias. No experimenta aglutinacion, ya que es el control negativo 
 
6.- Resultado del antibiograma (10 ptos) 
 
Nombre de la bacteria : Staphylococcus aureus 
 
Sensidisco Resultado en mm Sensible Resistente 
 
Vancomicina (Va) 
 
 
(23 + 23)/2 = 23; 23 >15mm 
 
SI 
 
NO 
 
Eritromicina (E) 
 
 
(36 + 33)/2 = 34,5; 33,5 >23mm 
 
SI 
 
 
NO 
 
Clindamicina (CD) 
 
 
(26 + 28)/2 = 27; 27 >21mm 
 
SI 
 
NO 
 
Oxacilina (Ox) 
 
 
(28 + 26)/2 = 27; 27 >13mm 
 
SI 
 
NO 
 
Novobiocina (Nb) 
 
 
(36 + 36)/2 = 36; 36 >16mm1 
 
SI 
 
NO 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FIGURA 7 
Agar Muller-Hinton, con 
sensidiscos en cultivo de 
bacterias luego de una desde la 
siembra. 
-S.D superior à Vancomicina 
-S.D inferior à Oxacilina 
-S.D central à Novomiocina 
-S.D izquierda à Eritromicina 
-S.D derecha àClindamicina 
FIGURA 8 
Agar Muller-Hinton, con sensidiscos en cultivo de 
bacterias luego de una desde la siembra. 
Papel milimetrado para calcular el diametro de 
cada halo alrededor de cada sensidiscos con sus 
respectivos resultados. 
 
7.- Discusión y conclusión: Haga un análisis de sus resultados para llegar a concluir que 
especie bacteriana se encuentra presente en su muestra. También mencione 3 cuadros 
clínicos producidos por esta bacteria y cuál es el tratamiento más apropiado. (20 ptos.) 
(Máximo 1 plana) 
 
 
En primer lugar se realizo Tinción de Gram para verificar la presencia de Bacterias 
Cocáceas Gram (+) y poder identificar el tipo de agrupación que adoptan, tambien 
identificar la familia de nuestra muestra. 
Esta nos indico que se trata de Cocáceas Gram positivo agrupadas en racimos, por lo que se 
puede tener la hipótesis de un tipo Staphylococcus. Concordante con la información 
académica de Laboratorio Microbiología Médica I2. 
 
En segundo lugar, se realizaron pruebas bioquímicas de Catalasa y Test de Latex. La 
primera de Catalasa dio positivo (+) indicando la presencia de esta enzima en la bacteria y 
permitiéndonos saber que la bacteria tiene enzimas detoxificantes y probablemente sea una 
bacteria anaerobia facultativa. La prueba Test de Latex nos dio positivo (+), indicando que labacteria formaba grumos y precipitaba; lo que nos permite señalar la especie de la bacteria 
en una Staphylococcus aureus3. 
 
Adicionalmente a ello, se aplicó la prueba de antibiograma; resultando ser sensible a todos 
los antibióticos probados. La prueba consiste en observar la presencia y diámetro de halos 
de inhibición alrededor de discos de antibióticos. Se comparan los diámetros de los halos con 
respecto a tablas estandarizadas. 
 
 
• Cuadros clínicos producidos por S. epidermidis 
Osteomielitis4: Corresponde a la infección del hueso, considerado como un órgano, proceso 
que se extiende a la totalidad de los tejidos que lo componen. 
Así, la infección compromete en mayor o menor grado al tejido mieloreticular contenido en el 
canal medular, los conductos de Havers (Haversitis), al tejido óseo propiamente tal, ya sea 
laminillas en el hueso esponjoso o compacto en la cortical (osteítis), compromiso del periostio 
(periostitis), de vasos y nervios. La experiencia clínica demuestra que aproximadamente el 
90% de los casos está provocado por el Staphylococcus aureus 
 
Impétigo5: El impétigo es una enfermedad infecciosa superficial de la piel producida por 
bacterias. El impétigo es causado principalmente por la bacteria Staphylococcus aureus 
resistente a la meticilina (SARM). La piel normalmente contiene muchos tipos de bacterias. 
Cuando hay una ruptura en la piel, las bacterias pueden ingresar al cuerpo y multiplicarse 
allí, lo cual causa inflamación e infección. 
 
Endocarditis aguda6. Es una inflamación del revestimiento interno de las cámaras y válvulas 
cardíacas (endocardio). Es causada por una infección bacteriana o, en raras ocasiones, 
fúngica. La endocarditis puede comprometer el miocardio, las válvulas o el revestimiento del 
corazón. La principal causa es la infección por Staphylococcus aureus. 
 
 
 
 
 
 
 
 
8.- Bibliografía (3 ptos) 
 
 
- 2. “Laboratorio Microbiología Médica I”, Berrocal, Liliana et al. Separata del ramo 
Microbiología I, carrera medicina U. Finis Terrae, 2016. 
- 3.Rev. chil. infectol. v.18 n.4 Santiago 2001 Comparación de reacción de polimerasa 
en cadena, látex y antibiograma para detección de Staphylococcus aureus 
meticilina resistente, Ulloa, María Teresa et al. Uchile 
- 4.http://escuela.med.puc.cl/publ/OrtopediaTraumatologia/Trau_Secc03/Trau_Sec03_0
2.html 
- 5.https://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000860.html 
- 6.https://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/001098.html