Resultados del análisis inmunohistoquímico A la vista de que uno de los mayores cambios que se detectaron en los animales con infarto fue en la se...

Resultados del análisis inmunohistoquímico A la vista de que uno de los mayores cambios que se detectaron en los animales con infarto fue en la señal atribuida a los LMap (2,80ppm) que en la literatura aparece relacionado con apoptosis, se llevó a cabo un estudio inmunohistoquímico para detectar la presencia de apoptosis tanto en la zona infartada como en la región homóloga del hemisferio contralateral mediante la tinción con TUNEL (Figura 75). Estos ensayos se hicieron en los animales que no fueron sacrificados por irradiación con microondas focalizadas, sino por perfusión transcardíaca, que fueron los grupos evaluados como control, 1 día, 6,7 y 8 días post-isquemia. Los resultados inmunohistoquímicos de marcaje de la apoptosis (Figura 75 y tabla 12) muestran que la apoptosis es más elevada en la zona de infarto que en la contralateral desde 1 día post-isquemia, aunque, a excepción de algunos casos, en el hemisferio contralateral también se detecta un cierto nivel de apoptosis basal. En valores absolutos las células TUNEL+/mm2de la zona de infarto son similares a 1 día que a 6, 7 u 8 días. Al analizar el valor de cambio entre el H.contralateral y la zona de infarto se observa que a 1 día post-isquemia los cambios no son significativos debido a una alta SD en la zona de infarto a 1 día. En la etapa subaguda/crónica del infarto, a 6, 7 u 8 días post-isquemia el cambio entre el hemisferio contralateral y el infarto sí es significativo. Siendo el valor de cambio muy superior a los 7 días que a 6 y 8 días, concretamente de 506,19 ± 406,16 (p=0,02). Hay que tener en cuenta la elevada variación de la SD en los promedios de los valores de cambio de la Tabla 12 como el valor de cambio se calcula para cada animal y después se realiza el promedio, este hecho indica que los valores de apoptosis son muy distintos entre los animales de cada grupo investigado. Sin embargo a pesar de la elevada variabilidad, la diferencia respecto al hemisferio contralateral es significativa. Figura 75: Análisis inmunohistoquímico de la apoptosis en la zona de la ACM a) Conjunto de imágenes de la tinción inmunohistoquímica con TUNEL (células marcadas en verde) en la zona de infarto y el H.contralateral. La tinción con DAPI (azul) permite ver todos los núcleos de las células de la muestra. La imagen central corresponde a una imagen ponderada en T2 de una rata a 7 días post-isquemia. Los cuadrados azul y rojo indican la posición de la muestra analizada, b) Gráficas promedio ±SD para el marcaje de apoptosis en la zona de infarto (barra azul) y la zona contralateral (barra roja) para los distintos grupos experimentales. En b.1.) se muestra una ampliación de la región inferior de b) para valorar mejor la apoptosis basal en el H.contralateral. Cada valor promedio corresponde a n=3. Sobre las barras horizontales discontinuas se indican los VC entre el infarto y el H.contralateral. Sobre las barras horizontales continuas los VCT. Los cambios con significación estadística se indican con el símbolo *(p≤0,05). Test estadístico aplicado para los valores de VC: T de Student, test estadístico aplicado para los valores de VCT: ANOVA. Apoptosis en la zona de la ACM (TUNEL+/mm2) GRUPO TUNEL+/ mm2 H. contralateral (Promedio ± SD) TUNEL+/ mm2 Infarto (Promedio ± SD) VC Infarto-H.contralateral (Promedio ± SD) Significación (p ≤ 0,05) Control 0,00 ± 0,00 4,90 ± 8,49 5,57 ± 7,91# 0,479 1 día 3,89 ± 6,74 421,62 ± 339,88 191,13 ± 208,68# 0,167 6 días 46,05 ± 35,37 456,67 ± 106,82 14,30 ± 10,44 <0,01* 7 días 3,73 ± 6,46 649,03 ± 165,21 506,19 ± 406,16# 0,02* 8 días 67,60 ± 56,28 427,95 ± 130,85 31,30 ± 47,80 0,01* Tabla 12: Valores de apoptosis promedios ± SD del recuento de células apoptóticas por inmunohistoquímica (TUNEL+/mm 2 ) en la zona de infarto y H. contralateral para cada grupo. Análisis de los VC entre ambas regiones. El símbolo # indica que para el cálculo de los VC los valores correspondientes a 0 se han convertido arbitrariamente a 1 para poder realizar el cociente. Cada valor promedio corresponde a n=3. Los VC con significación estadística se indican con el símbolo *(p≤0,05). Test estadístico aplicado: T de Student