Microbiología Bacterias - Marisol Camacho

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Microbiología
Prof. (a): Nancy Elizabeth A. Trujillo
Alumn(a): Joana Marisol Camacho Rincón
UNIDAD II: BACTERIAS
CONTENIDO
➥Introducción…
➥Morfología de las bacterias…
➥Fisiología de las bacterias… 
➥Estructura de las bacterias…
➥Cultivo de bacterias…
➥Taxonomía de las bacterias…
➥Conclusión (Personal)…
➥Bibliografía…
➥Introducción
Las bacterias son organismos unicelulares microscópicos, sin núcleo ni clorofila, que pueden presentarse desnudas o con una cápsula, aisladas o en grupos y que pueden tener cilios o flagelos.
Las bacterias juegan un papel fundamental en la naturaleza y en el hombre: la presencia de una flora bacteriana normal es indispensable, aunque gérmenes son patógenos. Análogamente tienen un papel importante en la industria y permiten desarrollar importantes progresos en la investigación, concretamente en fisiología celular y en genética. El examen microscopio de las bacterias no permite identificarlas, ya que existen pocos tipos morfológicos, cocos (esféricos), bacilos (bastón), espirilos (espiras). El estudio mediante la microscopia óptica y electrónica de las bacterias revela la estructura de éstas.
➥Morfología de las bacterias
La morfología bacteriana debe considerarse desde dos puntos de vista:
· Como células individuales observables sólo al microscopio.
· Como colonias bacterianas apreciables a simple vista después de desarrollarse en la superficie de medios de cultivo sólidos.
Las diferencias en el tamaño, forma y ciertos detalles estructurales son características de los principales grupos de bacterias, y proporcionan las bases fundamentales para su estudio sistemático e identificación. De la misma forma, las colonias bacterianas, compuestas por masas de células individuales, tienen características de tamaño, consistencia, textura y color que poseen un valor sistemático, pero no tienen la importancia fundamental de la morfología celular.
➥Tamaño de las bacterias
El tamaño de las células bacterianas se mide habitualmente en micrómetros, oscilando entre los 1 x 10 µm de los bacilos grandes como Bacillus anthracis, y los 0,2 x 0,7 µm de Francisella tularensis.
Existen ligeras variaciones de tamaño de las células bacterianas dentro de algunas especies, siendo mayores las fluctuaciones entre las formas bacilares que entre las formas esféricas. Los límites de tamaño entre las células bacterianas y los virus no tienen una frontera bien definida, pues curiosamente existen virus más grandes que ciertas bacterias.
➥Formas de las bacterias
Desde el punto de vista microscópico, la diferencia más importante entre las bacterias es su forma, existiendo tres tipos morfológicos claramente distinguibles:
· Formas esféricas o cocos.
· Formas alargadas o bacilos.
· Formas curvadas, comas o espirilos.
Cocos
Estas bacterias presentan formas casi esféricas y sus agrupaciones son homogéneas. El tamaño de los cocos oscila entre los 0,8 a 1,0 m. y puede presentar y tomar diversas formas, producto de dos factores importantes como son la tendencia de las células a mantenerse unidas, una vez sucedida la división y el o los planos de división celular. Estas agrupaciones pueden ser:
· Diplococos: Estos, después de su división, permanecen en pares, por ejemplo la Neisseria (Meningococo).
· Tétradas: Estos cocos se dividen en dos direcciones perpendiculares, formando una agrupación de cocos en una disposición cuadrada.
· Sarcinas: Producto de la división de los cocos en tres direcciones perpendiculares, formando una agrupación de cocos con una disposición cúbica.
· Estreptococos: Estos cocos se dividen en un solo plano, formando una secuencia de cuatro o más células como si se tratase de una cadena.
· Estafilococos: Formados por la agrupación irregular de cuatro o más cocos, en ocasiones se asemejan a racimos de uvas.
Algunas veces la forma de estas bacterias presenta variaciones, pudiendo observarse cocos de forma lanceolada, en forma de granos de café o achatados, estos últimos suelen denominarse cocobacilos.
Bacilos
Estas bacterias forman agrupaciones bastante heterogéneas por su variedad de subtipos morfológicos, que pueden ser cilíndricos, en forma de bastón, largos y delgados, pequeños y gruesos, también pueden presentar variaciones en sus extremos pudiendo ser rectos, afilados o redondeados.
Al igual que los cocos, pueden presentar varias formas según la tendencia que tengan células hijas para mantenerse unidas, estas agrupaciones pueden ser:
· Diplobacilos: Formados por bacilos agrupados en pares.
· Estreptobacilos: Agrupación semejante a una cadena formada por cuatro o más bacilos.
· Empalizado: Son bacilos agrupados lado a lado como palitos de fósforo.
· Formas filamentosas: Son bacilos que crecen en forma de fibras y toman distintas disposiciones por lo que esta formación se denomina también letras chinas.
Espirilos
Dentro de este tipo de bacterias se encuentran aquellas que en su forma presentan una o más curvaturas, algunas pueden presentar forma de hélices.
Dentro de este grupo se encuentran:
· Vibriones: Son espirilos bastante cortos, por lo general presenta la forma de una coma.
· Espirilos: Estas bacterias, relativamente rígidas, presentan una forma helicoidal; se mueven a través de flagelos externos dando una o más vueltas alrededor de su propio eje.
· Espiroquetas: Presentan una forma helicoidal, pero a diferencia de los espirilos, poseen un cuerpo flexible, se mueven con la ayuda de filamentos axiales que son flagelos periplasmáticos, lo que les permite dar varias vueltas completas alrededor de su propio eje.
Otras formas
Las bacterias pueden presentar una serie de variaciones y entre estas se pueden presentar bacterias en forma de estrella conocidas como género Stella, también se presentan bacterias de forma rectangular y planas pertenecientes al género Haloarcula, ciertas células alargadas en forma de pera pertenecen al género Hyphomicrobium y por último se hace mención de bacterias que forman pedúnculos no celulares.
➥Formas de las colonias bacterianas
Las colonias son la manera macroscópica de observar la morfología que constituye una agrupación de bacterias, que se constituyen en agrupaciones formadas por la reproducción de las bacterias en un medio en el cual son incubadas por espacio de 24 horas aproximadamente; algunas bacterias requieren semanas de incubación para su desarrollo y pueden estar formadas por millones de bacterias, de esta manera el tamaño de las colonias puede variar desde 0,5 a 4,0 mm de diámetro.
La morfología de una colonia dependerá del borde y la forma en que se eleva sobre el medio de cultivo. Así, se menciona que la forma de una colonia puede ser:
· Circular: Pueden medir hasta 4,0 mm.
· Puntiforme: Denominados también en “cabeza de alfiler”.
· Irregular: No representan una forma geométrica.
· Rizoide: Presentan una forma helicoidal.
· Fusiforme: En forma de husos.
En cuanto a los bordes estos pueden ser:
· Enteros: Son homogéneos en todo su recorrido.
· Ondulados: Presentan pequeñas fenestraciones.
· Lobulados: Sus bordes son curveados de manera irregular.
· Filamentosos: Presentan finos filamentos alrededor de toda la colonia.
La elevación de la colonia puede ser:
· Plana
· Convexa
· Elevada
Las colonias pueden presentar diferentes texturas, estas pueden ser:
· Lisas: Presentan una superficie homogénea.
· Concéntricas: Su textura se extiende de manera circular, por lo general de afuera hacia adentro.
· Arrugadas: Su superficie presenta pequeñas áreas sobresalientes y leves depresiones.
· Con curvas: Llamadas también sinuosas, presenta una textura similar a la concéntrica, la diferencia radica en que este presenta un contorno más irregular.
Las bacterias en conjunto, presentan también otras características como:
· Pigmentación: Que puede ser verde, amarillo o grisáceo.
· Olor: frutal o putrefacto.
· Consistencia: mucoide, liso o rugoso.
· Comportamiento óptico: frente a luz transmitida estos pueden ser opacos, translúcidos o transparentes; frente a la luz reflejada estos pueden ser brillantes u opacos.➥Fisiología de las bacterias
La Fisiología microbiana comprende el estudio de las funciones realizadas por los microorganismos. La función fundamental de todo ser vivo es el crecimiento, esto es aumentar en forma ordenada el número y la masa de todos sus componentes celulares, tales como pared celular, membrana citoplasmática, ácidos nucleicos (ADN y ARN), flagelos, fimbrias, entre otros. Estas estructuras celulares están compuestas fundamentalmente de macromoléculas: proteínas, polisacáridos, lípidos y ácidos nucleicos.
Las bacterias son muy eficientes fisiológicamente, sintetizan en forma muy rápida todos sus componentes celulares, siendo la mayoría autosuficientes a pesar de su simpleza estructural. Para que esto ocurra, en la bacteria se desencadenan una serie de procesos químicos que en su conjunto constituyen el metabolismo bacteriano.
En el metabolismo bacteriano, los procesos químicos por los cuales la bacteria construye componentes celulares, a partir de compuestos simples externos (nutrientes), se denomina anabolismo. En cambio, aquellas reacciones destinadas a obtener energía a partir de compuestos químicos corresponden al catabolismo.
Desde su hábitat o entorno la bacteria incorpora las sustancias necesarias para vivir, proceso llamado nutrición. Una vez incorporados estos nutrientes, a través del metabolismo bacteriano, la célula será capaz de reproducirse y transmitir su material genético a la progenie.
➥Nutrición y crecimiento bacterianos
Las bacterias necesitan de un aporte energético para desarrollarse.
Se distinguen distintos tipos nutricionales según la fuente de energía utilizada: las bacterias que utilizan la luz son fotótrofas y las que utilizan los procesos de oxirreducción son quimiótrofas. Las bacterias pueden utilizar un sustrato mineral (litótrofas) u orgánico (organótrofas). Las bacterias patógenas que viven a expensas de la materia orgánica son quimioorganótrofas.
La energía en un sustrato orgánico es liberada en la oxidación del mismo mediante sucesivas deshidrogenaciones. El aceptor final del hidrógeno puede ser el oxígeno: se trata entonces de una respiración. Cuando el aceptor de hidrógeno es una sustancia orgánica (fermentación) o una sustancia inorgánica, estamos frente a una anaerobiosis.
Además de los elementos indispensables para la síntesis de sus constituyentes y de una fuente de energía, ciertas bacterias precisan de unas sustancias específicas: los factores de crecimiento. Son éstos unos elementos indispensables para el crecimiento de un organismo incapaz de llevar a cabo su síntesis. Las bacterias que precisan de factores de crecimiento se llaman "autótrofas". Las que pueden sintetizar todos sus metabolitos se llaman "protótrofas". Ciertos factores son específicos, tal como la nicotinamida (vitamina B,) en Proteus. Existen unos niveles en la exigencia de las bacterias. Según André Lwoff, se pueden distinguir verdaderos factores de crecimiento, absolutamente indispensables, factores de partida, necesarios al principio del crecimiento y factores estimulantes. El crecimiento bacteriano es proporcional a la concentración de los factores de crecimiento. Así, las vitaminas, que constituyen factores de crecimiento para ciertas bacterias, pueden ser dosificadas por métodos microbiológicos (B12 y Lactobacillus lactis Doraren).
Se puede medir el crecimiento de las bacterias siguiendo la evolución a lo largo del tiempo del número de bacterias por unidad de volumen. Se utilizan métodos directos como pueden ser el contaje de gérmenes mediante el microscopio o el contaje de colonias presentes después de un cultivo de una dilución de una muestra dada en un intervalo de tiempo determinado. Igualmente se utilizan métodos indirectos (densidad óptica más que técnicas bioquímicas).
Existen seis fases en las curvas de crecimiento. Las más importantes son la fase de latencia (que depende del estado fisiológico de los gérmenes estudiados) y la fase exponencial, en la que la tasa de crecimiento es máxima. El crecimiento se para como consecuencia del agotamiento de uno o varios alimentos, de la acumulación de sustancias nocivas, o de la evolución hacia un pH desfavorable: se puede obtener una sincronización en la división de todas las células de la población, lo que permite estudiar ciertas propiedades fisiológicas de los gérmenes.
➥Necesidades de gases
Los gases principales que afectan al desarrollo microbiano son el oxígeno y el dióxido de carbono. Las bacterias presentan una respuesta amplia y variable al oxígeno libre clasificándose en cuatro grupos:
· Aerobias: bacterias que se desarrollan en presencia de oxígeno libre.
· Anaerobias: bacterias que se desarrollan en ausencia de oxígeno libre.
· Anaerobias facultativas: bacterias que se desarrollan tanto en presencia como en ausencia de oxígeno libre.
· Microaerófilas: bacterias que crecen en presencia de pequeñas cantidades de oxígeno libre.
Para desarrollar bacterias aerobias se incuban los medios de cultivo en agitación constante o introduciendo aire estéril en el medio.
Los anaerobios estrictos son muy sensibles al O2 por lo que se debe evitar la exposición de estos microorganismos al O2. Se puede obtener un ambiente de anaerobiosis por los siguientes métodos:
· Agregando al medio de cultivo un compuesto reductor, como es el tioglicolato sódico, para disminuir el contenido de O2.
· Quitando el O2 por procedimientos mecánicos y reemplazándolo por N2 o CO2.
· Mediante reacciones químicas dentro del recipiente que contiene el medio de cultivo inoculado para combinar el oxígeno libre con otro compuesto. Por ejemplo: al encender una vela se transforma el oxígeno en dióxido de carbono.
➥Suministro de Luz
Los organismos fotosintéticos deberán ser expuestos a una fuente de iluminación ya que la luz es su fuente de energía. Esta fuente de iluminación no debe plantear problemas de variación de temperatura, por lo que suelen usarse lámparas fluorescentes con un desprendimiento mínimo de calor.
➥Control de la temperatura
El desarrollo de las bacterias depende de reacciones químicas, y la velocidad con que se efectúan estas reacciones está influída por la temperatura, por lo que la temperatura puede en parte determinar la velocidad de crecimiento de los microorganismos. Cada especie microbiana posee una temperatura óptima de crecimiento clasificándose según esto en los siguientes grupos:
· Psicrófilas: capaces de desarrollarse a 0° C o menos. Su temperatura óptima es alrededor de los 15° C.
· Mesófilas: crecen mejor entre 25 y 40° C.
· Termófilas: crecen mejor entre 45 y 60° C.
➥Poder de síntesis
Las bacterias llamadas autótrofas además de utilizar como fuente de carbono el CO2, están dotadas de un poder de síntesis extraordinario ya que son capaces de sintetizar compuestos orgánicos a partir de otros muy simples como CO2, agua, minerales etc.
Las bacterias heterótrofas que utilizan como fuente de carbono compuestos orgánicos carecen del poder de síntesis y necesitan el aporte de cantidades suficientes de sustancias orgánicas.
· Fuentes energéticas
· Condiciones fisicoquímicas.
➥Estructura de las bacterias
La estructura de las bacterias se dividen en dos tipos: estructuras permanentes que son las que se encuentran en todas las bacterias y son importantes para su supervivencia, y las estructuras variables que no son esenciales para su viabilidad y no se encuentran en todas las especies bacterianas.
➥Estructura de las bacterias permanentes
Pared celular
La pared celular se ubica en el exterior de la membrana plasmática y se encuentra en todas las bacterias excepto en los mycoplasmas, la pared celular protege a la bacteria de la lisis osmótica, de los antibióticos y contribuye a su patogenicidad.
Las diferencias en las características de la pared celular como composición y grosor permiten diferenciar a las bacterias en dos grandes grupos las Grampositivas y Gramnegativas.
Membrana celular
La membrana celular es una bicapa lipídica que envuelve a la bacteria y la limita, está formada por fosfolípidos, diferenciándosede la de las células eucariotas por la ausencia de esteroles, también tiene proteínas transmembranales que permiten el paso de sustancias a través de la membrana.
Cuerpos de inclusión
En la estructura de las bacterias, los cuerpos de inclusión son estructuras de almacenamiento, generalmente de moléculas necesarias para producir energía como glucógeno y lípidos, están formadas por material orgánico o inorgánico y pueden o no estar rodeadas de membrana celular.
Ribosomas
Están compuestos por ARN con tamaño 70S con dos subunidades de 50S y 30S. Se encuentran asociados tanto al ADN cromosómico como al ARN mensajero, pueden codificar para uno o varios genes y se pueden agrupar en polirribosomas o estar aislados.
Material genético
Las bacterias por ser células procariotas no poseen núcleo, no presentan nucléolo o membrana celular. Son haploides, su material genético se organiza en un cromosoma que es una hebra de ADN de forma circular, que se enrolla sobre sí misma y se asocia a proteínas que no son del tipo histonas como las de las células eucariotas.
Plásmidos
Se encuentran en la mayoría de bacterias y son hebras de ADN bicatenario extracromosómico que se organizan en forma circular, tienen tamaños que van hasta mil kilopares de bases, pueden tener un bajo número de copias (1 a 10) o alto número de copias (10 a 100). Los plásmidos utilizan para replicarse la maquinaria cromosomal de replicación celular de la bacteria.
Los plásmidos se clasifican según sus propiedades en:
· Plásmidos de resistencia: inactivan o impiden la entrada de moléculas dañinas para la bacteria como los antibióticos o metales pesados.
· Plásmidos con propiedades metabólicas: tienen funciones de producción de metabolitos implicados en el metabolismo bacteriano como el de los carbohidratos o la fijación de nitrógeno.
· Plásmidos que producen compuestos: intervienen en la interacción con el hospedero como la producción de toxinas o la infección de las bacterias en leguminosas.
➥Estructura de las bacterias variables
Flagelos
Los flagelos, como estructura de las bacterias, son los encargados de la movilidad bacteriana, son estructuras rígidas formadas por proteínas organizadas en forma helicoidal, de diámetro y longitud uniforme, son tan delgados que solo es posible verlos usando un microscopio electrónico.
Las partes del flagelo son: el cuerpo basal que es la parte que se une a la membrana plasmática en las bacterias Grampositivas y a la membrana externa en las bacterias Gramnegativas, el gancho es la porción media que está fija al cuerpo basal, finalmente el filamento es la porción externa y móvil del flagelo, tiene forma de hélice rígida.
El número y distribución de los flagelos son utilizados para su identificación, pueden presentar un solo flagelo ubicado en un extremo (monotricas), dos flagelos uno en cada extremo (anfitricas), en agrupaciones en uno o ambos extremos (lofotricas) o distribuidas sobre toda la superficie de la bacteria (peritricas).
Fimbrias y pilis
Estas estructuras de las bacterias son de forma filamentosa, se caracterizan por no tener funciones relacionadas con el movimiento, están conformadas por proteínas que se organizan en forma no helicoidal, con un diámetro menor de 8nm.
Su función se ha relacionado con la adhesión a receptores específicos de las células del hospedero en bacterias patógenas, siendo relevantes en el proceso de colonización en epitelios específicos como por ejemplo Neisseria gonorrohoeae, que tiene fimbrias que se adhieren específicamente a las células epiteliales de la uretra en el hombre y de la cérvix en la mujer.
Los pilis se encuentran de dos a tres por célula, suelen ser más largos y se relacionan con la conjugación entre bacterias, por esta razón se les denomina pilis sexuales, en el proceso de la conjugación dos bacterias se transfieren el material genético en forma de plásmido, siendo una la bacteria donadora y otra la receptora.
Cápsulas
Se ubican en el exterior de la pared celular, está formada generalmente por polisacáridos, aunque existen de naturaleza peptídica. Está relacionada con la virulencia de las cepas que la presentan, impidiendo su presencia la fagocitosis de la bacteria por las células de defensa del huésped; la pérdida de la cápsula produce la pérdida de virulencia en la bacteria.
La cápsula también provoca en el huésped la producción de anticuerpos, esta característica ha sido utilizada para la elaboración de vacunas.
Esporos
Finalmente para concluir este tema sobre estructura de las bacterias, destacar que los esporos se encuentra solamente en bacterias Grampositivas y es una estructura compleja que está formada por capas de proteínas y peptidoglicano, su función es proteger a la bacteria en situaciones extremas de temperatura, radiación, desecación y exposición a agentes químicos.
➥Cultivo de bacterias
Cuando hablamos del cultivo de bacterias, nos referimos a uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos observando su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio químico.
Si hablamos de cómo se cultivan las bacterias, tenemos que hacerlos inevitablemente del medio de cultivo, material alimenticio en el que crecen los microorganismos generando un cultivo.
Si hablamos de cómo se cultivan las bacterias tenemos que hacerlo también de unas condiciones generales que deben darse:
· Nutrientes adecuados disponibles. Un cultivo de bacterias adecuado para investigar ha de contener como mínimo carbono, nitrógeno, azufre, fósforos y sales inorgánicas. Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de nitrógeno y carbón. A menudo se añaden al medio de cultivo ciertos colorantes.
· Consistencia del medio. Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como la albúmina, gelatina o agar.
· Luz ambiental. La mayoría de los microorganismos de un cultivo de bacterias crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar.
· Temperatura. En líneas generales los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC.
· Humedad y pH. Un mínimo de humedad en medio y atmosfera es necesario para el desarrollo, así como un pH neutro.
· Esterilidad. Fundamental recordar que todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascara o impedir el crecimiento.
➥Taxonomía de las bacterias
Es muy habitual que cada vez aparezcan más especies bacterianas La palabra taxonomía significa la ciencia de la clasificación, con la que pretendemos separar microorganismos en base a ciertas similitudes genéticas o fenotípicas. Hay que entender que la taxonomía es una ciencia artificial que está sometida a los avances tecnológicos y, por tanto, en continuo cambio 
Hay tres pilares dentro de esta ciencia: 
· Clasificación: ordenación de los microorganismos según semejanzas o parentescos evolutivos en diferentes grupos o taxones.
· Nomenclatura: pretende asignar un nombre científico en base a ciertas reglas ya establecidas y admitidas internacionalmente.
· Identificación: es la parte más práctica, pues nos permite meter a un microorganismo dentro de un taxón ya establecido.
➥Nomenclatura
La nomenclatura es la ciencia que nos permite asignar a los microorganismos un nombre científico concreto y admitido internacionalmente. Para poner un nombre tengo que basarme en una serie de reglas que se recogen en lo que se denomina como nomenclatura binomial: 
· Nombre género y especie latinizados.
· Inicial denominación genérica: mayúscula
Género y especie cursiva o itálica, o en su defecto subrayados (Staphylococcus aureus o Staphylococcus aureus).
Denominación de especie (ej. S. aureus).
No es arbitraria (The Internacional Code of Nomenclature of Bacteria). 
Referencia a alguna característica del organismo, talescomo su apariencia, procedencia, alguna propiedad característica, el investigador que la descubrió.
➥Taxonomía fenotípica
La fenotípica es la más sencilla pues intentamos clasificar según las semejanzas entre apariencia en el momento actual, sin tener en cuenta la evolución de los mismos. Lo que hacían era tener en cuenta unos pocos caracteres a los que se le daba mucha importancia.
Una vez que se dieron cuenta de los errores de la clasificación según unos pocos caracteres lo que intentaron es clasificar en cuenta a muchos factores de apariencia, esto era la taxonomía numérica, cuantas más características mejor. Así se conseguían matrices de semejanza o similaridad, se podía decir si dos organismos tenían semejanzas.
➥Taxonomía filogenética
La taxonomía filogenética se basa en el establecimiento de relaciones evolutivas más que en semejanzas generales. Realmente hubo otro paso hacia delante, cuando se observó teniendo en cuenta otro tipo de parámetros podíamos obtener más relaciones entre bacterias que fijándonos únicamente en su parecido. El desarrollo de los cronómetros evolutivos nos permitió dar un gran paso de esta ciencia; pues nos permite ver el parecido evolutivo en función de las secuencias de los nucleótidos. El número de diferencias que nosotros vamos a ver va a ser proporcional al número de cambios en las mutaciones fijas que están presentes en la secuencia del gen que codifica estos marcadores. Por hablar de mutaciones nos metemos ya en el concepto de evolución.
Para considerar una molécula como cronómetro evolutivo deben ser:
· Moléculas que aparecen de forma universal (moléculas conservadas, si en algún momento una bacteria perdiese o le quedase inhabilitada este gen moriría).
· Tener la misma función.
· Sus secuencias deben permitir la identificación de regiones de homología y heterogeneidad.
· Poder alinearse para determinar homologías y variaciones.
· La tasa de cambio es lo que nos permite identificar la distancia evolutiva.
La siguiente pregunta que nos planteamos es qué cronómetros podemos utilizar para estudiar estos parentescos evolutivos.
· El más habitual es el gen que codifica para el 16S ARNr.
· Cada vez es más habitual que se utilicen los genes housekeeping.
· Proteínas del shock térmico.
· ATPasa.
· Citocromos.
· recA; sodA; rpoB; cpn60.
A nivel de 16S existen 16 zonas hipervariables, para saber si se trata de la misma bacteria o no. Lo que se suele hacer es comparar los nucleótidos de la región v1, y dependiendo de su nivel de parentesco se puede deducir si son de la misma especie o no. Esto no nos permite decir cuál viene primero. La evolución de estos cronómetros evolutivos ha permitido aumentar de forma extraordinaria las bases de las secuencias de nuevas bacterias (cada vez hay más nuevas bacterias y más clasificaciones).
La utilización de estos cronómetros nos permitió clasificar los organismos en el árbol de la vida o filogenético; que se puede ir acotando y acercándose.
Cuanto más alejadas estén las especies entre sí más diferencias de nucleótidos habrá en sus bases.
➥Taxonomía filogenética
Estas relaciones no tendrían nada que ver con el árbol que me surgiría de establecer las relaciones fenotípicas. Así se tiene que llegar a un consenso, por ello nació la taxonomía polifásica, intenta armonizar las clasificaciones fenotípicas y filogenéticas mediante el análisis conjunto e integración del mayor número posible de características fenotípicas, quimiotaxonómicas, genéticas y filogenéticas utilizadas en taxonomía bacteriana. Esta unión será la que nos permita clasificar a las bacterias. 
No todas las técnicas se utilizan con las mismas bacterias. Una de estas características es el estudio de los ácidos grasos (FAME) mediante cromatografía de gases:
· El perfil de ácidos grasos es particular de cada especie bacteriana: dos bacterias de la misma especie van a presentar el mismo porcentaje de ácidos grasos.
· Siempre hay que decir cómo se realiza la técnica, pues la forma en la que se cultivan las bacterias hace que varíe la proporción de ácidos grasos, por lo que muchas veces hay que estandarizar las cifras.
En ocasiones es imposible realizar esta técnica con algunos organismos. 
Orta de las técnicas es el contenido de guanina y citosinas que existe en un cromosoma bacteriano:
· Se estudia el porcentaje de guaninas y citosinas en el DNA genómico.
· Los valores de este porcentaje oscilan entre 20-80% en Bacteria y Archaea. 
· El DNA con mayor porcentaje de G+C se desnaturaliza a mayor temperatura, por esto, la temperatura de desnaturalización del ADN es proporcional al contenido de G+C.
· Si 2 organismos difieren en más del 5% de G+C, entonces no estarían estrechamente relacionados. Sin embargo, 2 organismos con igual contenido G+C pueden ser muy distintos.
La hibridación ADN te dice si una bacteria es igual a otra o no:
· Comparación de secuencias de DNA.
· Dos DNA se hibridan en proporción su similitud. 
El grado de similitud de las dos hebras podrá determinar si los organismos estrechamente relacionados. 
Útil en organismos muy cercanos Este criterio es el actual para definir las especies.
Se basa en: 
· Porcentaje de hibridación ADN-ADN.
· Temperatura de desnaturalización del híbrido.
➥Conclusión
El tema de la bacteria sirvió para poder reconocerlo cuanto esté presente en un cultivo esto por medio de sus síntomas, caracteres y desarrollo de su signo.
El mejor control de las bacterias es la prevención del desarrollo de la enfermedad por medio de diseminación y presencia de factores que sean favorables.
Y la clasificación de las bacterias nos ayuda a identificar al tipo de bacteria según su morfología.
Después de leer toda la información sobre las bacterias, sinceramente me parece que es un tema bastante amplio y que gran importancia para el ser humano.
➥Bibliografía
· Brock. Biología de microorganismos. Madigan. 10ª Ed. Pearson Prentice Hall Capítulo 4.
· Microbiología médica. Murray. 1ª Ed 2007. Elsevier Capítulo 3
· Vargas-Flores, T. & Kuno-Vargas, A. (2014). Morfología bacteriana. Revista de Actualización Clínica, 49(2), 2594-2598.
· Explorando el Universo de la Microbiología. Fisiología Bacteriana. Unidad II. (http://microbiologiavip.blogspot.com/2012/02/fisiologia-bacteriana.html)
· Prescott, Harley, Klein. Microbiología. Mc Graw-Hill Interamericana de España. 4ª ed. 1999.
· Schaechter M, Medoff G, Eisenstein BI, Guerra H. Microbiología. Mecanismos de las enfermedades infecciosas. Ed Panamericana. 2ª ed. Buenos Aires 1993.
· Joklik WK, Willett HP, Amos DB, Wilgert CM. editors, Zinsser Microbiología. 20ª ed. BsAs. Panamericana; 1994.
· Brock, M. (2007). Pírez, M., Mota, M. (2008).
· ALKEMI. El cultivo de bacterias en el laboratorio. 2017. (https://alkemi.es/blog/como-cultivar-bacterias-en-el-laboratorio/)
➥Práctica de siembra, tinción y observación de las bacterias
➥Introducción
Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias.
En la tinción de Gram, el cristal violeta, penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas), a través de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), el cual está presente para solubilizar el yodo, y actúa de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega,sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos sí lo hacen.
Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la zafranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.
➥Objetivos
Identificar las bacterias en base a la tinción y estructura que presentan estas.
➥Materiales y reactivos
	MATERIAL
	REACTIVOS
	MATERIAL QUE LOS ESTUDIANTES DEBEN TRAER
	• 1 Asa de siembra
• 1 portaobjetos
• 1 mechero bunsen
• 1 microscopio 
• 1 puente de tinción
	• Agua
• 5 ml de cristal violeta
• 5 ml de lugol
• 5 ml de zafranina o fucsina básica
• 5 ml de alcohol acetona
• 5 ml Aceite de inmersión
	• Cultivo de bacterias
1 Asa de siembra x subgrupo.
➥Instrucciones
➥ 1. Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resulta suficiente. 
➥ 1. Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado.
Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos.
FIJACIÓN DE LAS BACTERIAS AL PORTAOBJETOS
➥ 1. Por calor: Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. Dejar enfriar el portaobjetos entre los pases. 
➥ 2. Con metanol (para bacterias procedentes de medio líquido). Añadir unas gotas de metanol sobre la extensión completamente seca. Golpear el portaobjetos por su canto con cuidado contra la mesa de trabajo para retirar de inmediato el exceso de metanol. Esperar a que el metanol se evapore completamente.
TINCIÓN GRAM
➥ 1. Una vez fijada la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces aprox.), agrega cristal violeta o violeta de genciana durante 1 min.
➥ 2. Enjuagar con agua y agrega lugol y espera un minuto.
➥ 3. Enjuaga con agua y agrega alcohol-acetona durante 4 segundos.
➥ 4. Enjuaga con agua y agrega safranina o fucsina básica y espera de 1a 2 min Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas. 
➥ 5. Lava con agua, deja secar y observa al microscopio con el objetivo de 100X.
Webgrafía
· https://www.academia.edu/18973282/PRACTICA_5_OBSERVACION_DE_BACTERIAS