1 Diagnostico de Brucelosis Bovina

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DIAGNÓSTICO DE 
BRUCELOSIS BOVINA
ISSN 2469-2123
Toma de muestras
Diagnóstico
BacteriológicoSerológico
-Sangre
-Suero
-Fetos: pulmón, hígado, 
placenta, membrana
corioalantoidea
-Animal vivo: sangre, 
semen, secreciones
vaginales
-Animal sacrificado:
ganglios, bazo, hígado, 
testículo, epidídimo
Cuando se pretende aislar
bacterias, NUNCA agregar
antibióticos a la muestra y 
enviarla refrigerada y 
acondicionada al laboratorio
(Xavier et al, 2010)
Zoonosis
INFECCION EN HUMANOS
• Ingestión leche y subproductos no pasteurizados
• Exposición ocupacional de mucosas y abrasiones de piel a fluidos y
tejidos de fetos abortados, y descargas vaginales.
• Laboratorio!!! Es la infección más comúnmente adquirida en
los laboratorios del mundo debido a la eficiente transmisión de
Brucella por inhalación de aerosoles o polvo.
ENFERMEDAD EN EL HUMANO
• Riesgo de vida, presentación variable
• Período de incubación: 5-60 días
• Mayoría de los casos son agudos: fiebre, 
linfoadenopatía, espleno y hepatomegalia.
• Forma crónica (más severa)
• Signos osteoarticulares: espondilitis, artritis y 
osteomielitis.
• Genitourinarios: orquitis, epididimitis, 
gomerulonefritis y abscesos renales
• Neurobrucelosis, abscesos hepáticos y 
endocarditis.
Zoonosis
Cultivo y aislamiento
•Las brucelas son microorganismos delicados de crecimiento lento en el
aislamiento primario
• Medios de agar sangre y a veces en agar McConkey, 3 o más días
• Aislamiento en hemocultivo: hasta 4 o 6 semanas
•Identificación por lisis fagos, bioquímica y antigenicidad.
•Tinción modificada de ácido alcohol resistencia
•Laboratorio con nivel de bioseguridad 2 (muestras) y 3 (cultivo)
•Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR).
Es un método rápido, sensible y específico para la identificación de
Brucella, que permite la detección de género y especie al amplificar
secuencias específicas de ADN bacteriano. Identificación de biotipos.
Histopatología
• Granuloma 
– células epitelioides
– células gigantes multinucleadas
– linfocitos
– capa fibrótica
Membrana coriónica con células trofoblásticas con B abortus
intracelular marcada por IHQ 50x (Xavier et al, 2010)
Patogenia
Las bacterias fagocitadas multiplican dentro de los 
macrófagos y células dendríticas y van a linfonódulos
regionales
Son transportadas hacia 
hígado, bazo, médula ósea, 
linfonódulos, riñones
Multiplican en 
células del sistema 
reticuloendotelial, 
con formación de 
granulomas
Ingreso por mucosa oronasal, y atraviesan epitelio 
digestivo a través de las células M (MALT)
Vía hematógena llegan al útero
Infectan células fagocíticas
trofoblásticas de la
membrana corioalantoidea
Vía hematógena 
llega al feto y al 
placentoma
Patogenia
Factores de virulencia:
1. Supervivencia y replicación 
dentro de los macrófagos
• Inhibe la fusión fago-lisosomal
• Previene la liberación de enzimas 
tóxicas desde gránulos 
intracelulares (catalasa, SOD)
2. Endotoxina
Inmunopatogenia
Técnicas Serológicas
Se basan en la detección de anticuerpos específicos contra 
un determinado antígeno en fluidos biológicos
Técnicas Serológicas
Algunas definiciones…
Título
Máxima dilución a la cual un suero continúa siendo positivo
en una prueba serológica determinada
Seroconversión
Aumento del título de anticuerpos al menos en 2 diluciones
en un período de 15-21 días, o paso de negativo a positivo
Técnicas Serológicas
Algunos conceptos para la 
interpretación de resultados…
• Las IgM normalmente reflejan una
infección reciente
• El aumento del título de anticuerpos
indica una infección reciente
• Un título elevado supone que se ha producido un contacto reciente,
repetido o prolongado con el antígeno
• Los títulos de IgG por sí solos suelen indicar una infección pasada
IgG
IgM
0 14-21 días
ANIMAL VACUNADO CEPA 19
IgM
IgG
0 14-21 días
ANIMAL INFECTADO
Respuesta inmune
Suero
Leche Sintomatología
Diagnóstico
presuntivo
Diagnóstico
diferencial
Técnicas posibles para cada enfermedad
Resultados
Bioseguridad
RUTA SEROLOGICA
Interpretación
 Costo
 Plan Nacional
 Viabilidad de la muestra
 Viabilidad de reactivos
 Tiempo
 Envío de sangre sin anticoagulante para obtener 
suero sanguíneo (refrigerado)
Se utilizan tubos de hemólisis con tapón .
• Mínimo 5 ml de sangre sin anticoagulante.
• Retirar la aguja y permitir que la sangre fluya por 
las paredes del tubo suavemente 
• Se deja el tubo a temperatura ambiente en un 
ángulo de 30° por unos treinta minutos
• La alteración más frecuente en esta muestra es la 
hemólisis que se produce por:
-tubos o agujas húmedas
-presencia de residuos de detergente
-exposición directa a los rayos solares
-almacenamiento a temperaturas no adecuadas 
 Envío de suero (refrigerado o congelado)
 Leche mínimo 50 mL (agregar 1 mL formalina al 1% 
por cada 10 mL de leche) (refrigerada)
Muestra
http://ar.wrs.yahoo.com/_ylt=A0Je56QAmvRF4KwAScCt9Qt./SIG=1f5jvhofa/EXP=1173744512/**http:/ar.search.yahoo.com/search/images/view?back=http://ar.search.yahoo.com/search/images?p=SUERO+COAGULO&ei=UTF-8&fr=slv1-mdp&x=wrt&w=103&h=202&imgurl=html.rincondelvago.com/files/0/0/2/000330020.png&rurl=http://html.rincondelvago.com/glucosa.html&size=1.0kB&name=000330020.png&p=SUERO+COAGULO&type=png&no=1&tt=1&oid=1b76c7ce52a35a9e&ei=UTF-8
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Muestra - Requisitos
• Tubos con identificación CLARA, NO en el tapón
• Correlación con los datos de la planilla
• Refrigerado (congelado: SOLO suero)
Condiciones de rechazo
• Falta de planillas protocolo o planillas incompletas. Debe 
estar firmada y sellada por el veterinario acreditado en cada 
hoja entregada
• Sangre entera congelada
• Sangre entera o suero, contaminados
• Sueros hemolizados
• Tubos no identificados o ilegibles
Muestra
Bioseguridad
Diagnóstico Serológico
Brucelosis Bovina
Interpretación
Suero Leche
 PAL
 I-ELISA leche
 BPA
 RB
 I-ELISA
 Wright-2ME
 C-ELISA
 FPA
 FC
Resultados
Brucelosis
Negativo a 
Brucelosis
Positivo
BPA
(o RB o I-ELISA)
Negativo Positivo
BPA
Se inhiben aglutininas inespecíficas por el bajo pH. 
Detecta IgG y algunas IgM específicas. CONTROLES!
Ac Muestra
Negativo
Positivo
Conjugado 
anti-IgG1 
bovino
I-ELISA
+sustrato
% P
• Leche: ≥ 40%
• Suero: ≥ 53%
Brucelosis
W y 2-Me
Negativo a 
Brucelosis
Positivo
Negativo a 
Brucelosis
Sospechoso Positivo a 
Brucelosis
BPA
(o RB o I-ELISA)
NegativoIncompletoCompleto
SAT
1/25 1/50 1/100 1/200
1/100
1/25
1/50 i
Interpretación de resultados
Brucelosis
W y 2-Me
Negativo a 
Brucelosis
Positivo
Negativo a 
Brucelosis
FC
Sospechoso Positivo a 
Brucelosis
BPA
(o RB o I-ELISA)
FPA, C-ELISA
W y 2-Me
en 30-40 días
Confirmación
optativa
FPA (prueba de 
polarización de la 
fluorescencia)
Negativo a 
Brucelosis
Sospechoso Positivo a 
Brucelosis
Brucelosis
Negativo Positivo
entre 94 y 105 mP
Sospechoso
FPA
Ag B. abortus-FITC
Rotación rápida
Baja polarización (<94mP)
Complejo Ac-Ag B. abortus-FITC
Rotación lenta
Alta polarización (>105 mP)
FPA
Negativo a 
Brucelosis
Sospechoso Positivo a 
Brucelosis
C-ELISA
Negativo a 
Brucelosis
Positivo a 
Brucelosis
Brucelosis
Ac Muestra
+sustrato
Ac Ratón
Conjugado 
anti-ratón
Positivo
Negativo
C-ELISA
% I
≥ 40%
C-ELISA
FC
Repetir la 
misma
técnica en 
30-40 días
Confirmación
optativa
FPA
Negativo a 
Brucelosis
Sospechoso Positivo a 
Brucelosis
C-ELISA
Negativo a 
Brucelosis
Positivo a 
Brucelosis
Brucelosis
C
NegativoPositivo
FC
UIFC
• ≥ 40 (hembrasvacunadas)
• ≥ 20 (animales no vacunados)
Muestra
Bioseguridad
DIAGNOSTICO SEROLOGICO
Interpretación
Suero Leche
 PAL
 I-ELISA leche
 BPA
 RB
 I-ELISA
 Wright-2ME
 C-ELISA
 FPA
 FC
Resultados
Glóbulos grasos 
coloreados por los 
complejos Ag-Ac
Glóbulos grasos 
blanco natural
PAL
DIAGNOSTICO SEROLOGICO
Resumen
Vacunas Brucelosis Bovina
CEPA 19 CEPA RB 51
Diagnóstico
Falsos positivos.
No se puede diferenciar de la 
enfermedad.
No produce falsos positivos.
Edad de 
vacunación
Solamente terneras de 3 a 8 meses. 
Diagnóstico serológico a partir 
de los 18 meses de edad.
Se puede vacunar a cualquier 
edad y más de una vez.
Abortos Causa abortos. Raramente causa abortos.
Riesgo en 
humanos
La aplicación accidental genera 
enfermedad.
La aplicación accidental no 
desarrolla síntomas.
Suero
Leche Sintomatología
Diagnóstico
presuntivo
Diagnóstico
diferencial
Técnicas posibles para cada enfermedad
Resultados
Bioseguridad
RUTA SEROLOGICA
Interpretación
 Costo
 Plan Nacional
 Viabilidad de la muestra
 Viabilidad de reactivos
 Tiempo
Inmunopatogenia
Inmunidad Humoral