Diagnostico bacteriologico

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Ruta Bacteriológica
ISSN 2469-2123
RUTA BACTERIOLÓGICA
IDENTIFICACIÓN
Por pruebas 
bioquímicas o PCR
AISLAMIENTO
Obtener la bacteria en
pureza (iguales 
características macro y 
microscópicas = 
colonias y al Gram)
CULTIVO
Selección de medios 
según la bacteria 
sospechada
MUESTRA
TINCIÓN DE GRAM
Afinidad tintorial, 
morfología y 
agrupación
OBSERVACIÓN 
DIRECTA
Antibiograma
OBSERVACIÓN 
INDIRECTA
RUTA BACTERIOLÓGICA
IDENTIFICACIÓN
Por pruebas 
bioquímicas o PCR
AISLAMIENTO
Obtener la bacteria en
pureza (iguales 
características macro y 
microscópicas = 
colonias y al Gram)
CULTIVO
Selección de medios 
según la bacteria 
sospechada
MUESTRA
TINCIÓN DE GRAM
Afinidad tintorial, 
morfología y 
agrupación
OBSERVACIÓN 
DIRECTA
Antibiograma
OBSERVACIÓN 
INDIRECTA
MUESTRA
La muestra debe ser representativa del proceso infeccioso
Tener en cuenta no estar en tratamiento antibiótico durante el muestreo 
Toma de muestra en esterilidad
Enviarla refrigerada (hisopos en medio de transporte) y con el acondicionamiento 
adecuado para el tipo de muestra
MUESTRA
RUTA BACTERIOLÓGICA
IDENTIFICACIÓN
Por pruebas 
bioquímicas o PCR
AISLAMIENTO
Obtener la bacteria en
pureza (iguales 
características macro y 
microscópicas = 
colonias y al Gram)
CULTIVO
Selección de medios 
según la bacteria 
sospechada
MUESTRA
TINCIÓN DE GRAM
Afinidad tintorial, 
morfología y 
agrupación
OBSERVACIÓN 
DIRECTA
Antibiograma
OBSERVACIÓN 
INDIRECTA
OBSERVACIÓN DIRECTA
OBSERVACIÓN DIRECTA
TINCIÓN DE GRAM
• Afinidad tintorial
• Forma
• Agrupación
DATOS
OBSERVACIÓN DIRECTA
CRISTAL VIOLETA
LUGOL
ALCOHOL-
ACETONA
SAFRANINA
G+ G-
Fundamento: El colorante primario (cristal violeta) tiñe a todas las bacterias. El lugol
actúa de mordiente. Al decolorarse (con alcohol-acetona) las bacterias grampositivas 
no se decoloran conservando el cristal violeta y las gramnegativas pierden el color. 
Al colocar el colorante secundario (safranina) las gramnegativas que estaban sin color 
se colorean de rosa y las grampositivas continúan violetas.
OBSERVACIÓN DIRECTA
ROTULARROTULAR
FIJARSECAR
EXTENDER
OBSERVACIÓN DIRECTA
CRISTAL VIOLETA: 60 seg
LUGOL: 60 seg
lavar
SAFRANINA: 60 seg
lavar
lavar
lavar
ALCOHOL-ACETONA: 15 seg
OBSERVACIÓN DIRECTA
MICROSCOPIO ÓPTICO:
objetivo 100X 
aceite de inmersión
Pleomórficos
grampositivos
Cocos grampositivos
en racimos
Bacilos 
gramnegativos
Bacilos grampositivos 
(esporulados)
Cocos grampositivos
en cadenas
RUTA BACTERIOLÓGICA
IDENTIFICACIÓN
Por pruebas 
bioquímicas o PCR
AISLAMIENTO
Obtener la bacteria en
pureza (iguales 
características macro y 
microscópicas = 
colonias y al Gram)
CULTIVO
Selección de medios 
según la bacteria 
sospechada
MUESTRA
TINCIÓN DE GRAM
Afinidad tintorial, 
morfología y 
agrupación
OBSERVACIÓN 
DIRECTA
Antibiograma
OBSERVACIÓN 
INDIRECTA
OBSERVACIÓN INDIRECTA
RUTA BACTERIOLÓGICA
IDENTIFICACIÓN
Por pruebas 
bioquímicas o PCR
AISLAMIENTO
Obtener la bacteria en
pureza (iguales 
características macro y 
microscópicas = 
colonias y al Gram)
CULTIVO
Selección de medios 
según la bacteria 
sospechada
MUESTRA
TINCIÓN DE GRAM
Afinidad tintorial, 
morfología y 
agrupación
OBSERVACIÓN 
DIRECTA
Antibiograma
OBSERVACIÓN 
INDIRECTA
OBSERVACIÓN INDIRECTA
CULTIVO
Se esteriliza el ansa en el mechero y se toma la muestra sembrandola en 
medios sólidos y/o líquidos. Posteriormente se incuba en condiciones 
favorables para el micoorganismo sospechado (de rutina a 37ºC en 
aerobiosis durante 24-48 hs)
RUTA BACTERIOLÓGICA
IDENTIFICACIÓN
Por pruebas 
bioquímicas o PCR
AISLAMIENTO
Obtener la bacteria en
pureza (iguales 
características macro y 
microscópicas = 
colonias y al Gram)
CULTIVO
Selección de medios 
según la bacteria 
sospechada
MUESTRA
TINCIÓN DE GRAM
Afinidad tintorial, 
morfología y 
agrupación
OBSERVACIÓN 
DIRECTA
Antibiograma
OBSERVACIÓN 
INDIRECTA
OBSERVACIÓN INDIRECTA
AISLAMIENTO
Si en el primocultivo se observan varias colonias de diferentes 
características se realiza el reaislamiento, repicando cada colonia por 
separado para obtener cultivos en pureza, es decir, con iguales 
características macroscópicas de las colonias y microscópicas al Gram: 
afinidad tintorial, forma y agrupación
Cultivo con varias colonias Cultivo en pureza
RUTA BACTERIOLÓGICA
IDENTIFICACIÓN
Por pruebas 
bioquímicas o PCR
AISLAMIENTO
Obtener la bacteria en
pureza (iguales 
características macro y 
microscópicas = 
colonias y al Gram)
CULTIVO
Selección de medios 
según la bacteria 
sospechada
MUESTRA
TINCIÓN DE GRAM
Afinidad tintorial, 
morfología y 
agrupación
OBSERVACIÓN 
DIRECTA
Antibiograma
OBSERVACIÓN 
INDIRECTA
OBSERVACIÓN INDIRECTA
IDENTIFICACIÓN
Sólo cuando el cultivo esta en pureza, se procede a la identificación mediante 
las capacidades bioquímico-metabólicas (PRUEBAS BIOQUÍMICAS) y/o la 
detección de genes específicos (PCR: Reacción en Cadena de la 
Polimerasa)
Pruebas bioquímicas por galerías
comerciales. 
Pruebas bioquímicas “caseras”
PCR: Reacción en cadena de la 
polimerasa
Pruebas bioquímicas caseras
SIEMPRE se realizan a partir de 
un cultivo puro y en fase
exponencial de crecimiento
(cultivo jóven).
Se realizan las pruebas bioquímicas “caseras” según el microorganismo sospechado.
Se evalúan diferentes capacidades como la presencia de enzimas (ej: citocromo oxidasa, 
catalasa, etc.), la capacidad de crecer en ciertos medios (ej. agar Manitol salado) o la 
capacidad de utilizar diferentes sustratos (ej: citrato, fenilalanina, etc.). 
Luego se recurre 
a la ayuda de 
tablas de lectura
para identificar
género y especie. 
OXIDASASA
Detección de la citocromo oxidasa mediante discos de oxidasa. 
CATALASA
Detección de la enzima catalasa al agregar agua oxigenada. 
Catalasa positiva
Formación de burbujas
Oxidasa positiva
Viraje de color del disco comercial
Catalasa negativa
Ausencia de burbujas
CAPACIDAD DE HEMÓLISIS
Gamma hemolìtico
Sin Hemólisis
Alfa hemolìtico
Hemólisis incompleta
Beta hemolìtico
Hemólisis completa
Detección de la producción de hemolisinas en agar sangre
COAGULASA
Detección de la capacidad de coagular el plasma citratado de conejo. 
Coagulasa positiva Coagulasa negativa
Pruebas bioquímicas comerciales
Luego se coloca la galería en un lector 
específico que realiza la lectura 
mediante un software.
Así se determina el microorganismo que 
coincide con ese perfil bioquímico. 
Se realizan las pruebas bioquímicas en 
una galería comercial incubando la 
bacteria en pocillos con el 
agregado de diferentes reactivos.
RUTA BACTERIOLÓGICA
IDENTIFICACIÓN
Por pruebas 
bioquímicas o PCR
AISLAMIENTO
Obtener la bacteria en
pureza (iguales 
características macro y 
microscópicas = 
colonias y al Gram)
CULTIVO
Selección de medios 
según la bacteria 
sospechada
MUESTRA
TINCIÓN DE GRAM
Afinidad tintorial, 
morfología y 
agrupación
OBSERVACIÓN 
DIRECTA
Antibiograma
OBSERVACIÓN 
INDIRECTA
ANTIBIOGRAMA
ANTIBIOGRAMA
Se realiza el perfil de sensibilidad antibiótica mediante el método de difusión.
Recordar que se evalúa sensibilidad “in vitro” y que debe tenerse en cuenta el 
agente, el huesped y la ubicación de la infección para que el tratamiento 
antibiótico sea eficaz.
Antibiograma con medio adicionado con sangre
(para Estreptococos beta hemolíticos)
Antibiograma por difusión
SENSIBLE
RESISTENTE
RESISTENTE
SENSIBLE