bacte ii pruebas actualizado (1)

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AGAR HEKTOEN
Sustratos:
Lactosa
Sacarosa
salicina
Tiosulfato de sodio
Agentes inhibidores:
Sales biliares 
Indicadores:
Azul de bromotimol
Fucsina acida 
Citrato de hierro 
AGAR EMB
Sustrato:
Lactosa 
Sacarosa 
Agentes inhibidores:
Azul de metileno 
Eosina 
indicadores:
Azul de metileno 
Eosina 
AGAR MacConkey
Sustrato:
lactosa
Agentes inhibidores:
Sales biliares 
Cristal violeta 
Indicadores:
Rojo neutro 
AGAR bismuto sulfito 
Sustrato: 
glucosa, 
tiosulfato de sodio
Agentes inhibidores:
Bismuto sulfito 
Verde brillante 
Indicadores:
Sulfato de hierro 
AGAR S.S
Sustrato: 
Lactosa
Tiosulfato de sodio
Agentes inhibidores:
Verde brillante 
Sales biliares 
Indicadores:
Rojo neutro 
Citrato ferrico 
AGAR XLD
Sustrato:
Lisina 
Xilosa
Lactosa
Sacarosa
Tiosulfato de sodio
Agentes inhibidores:
Desoxicolato de sodio
Sales biliares 
Indicadores:
Citrato ferrico de amonio 
Rojo fenol 
Activación de la xilosa 
Descarboxilación de la lisina 
TSI
Sustrato:
Lactosa
Sacarosa
Glucosa
Tiosulfato de sodio
Indicadores:
Rojo fenol
Sales de hierro 
Enzimas:
Glucosidasa 
Productos finales:
Ácidos mixtos
Medio empleado para la diferenciación de enterobacterias en base a la fermentación de la lactosa, sacarosa y glucosa 
También observar la producción de H2S y producción de gas 
Agar Simmons citrato 
Sustrato:
Citrato de sodio 
Sales de amonio 
Indicadores:
Azul de bromotimol
Enzimas:
 citrato permeasa 
Productos finales:
Carbonatos y Bicarbonatos alcalinos 
el metabolismo del citrato se realiza gracias a la enzima citrato permeasa a través del ciclo tricarboxilico 
El desdoblamiento de citrato genera oxalacetato y piruvato este ultimo en presencia de un medio alcalino da origen a ácidos orgánicos que al ser utilizados como fuentes de carbono produce carbonatos y bicarbonatos alcalinos 
Agar urea 
Sustrato: 
urea
Indicadores:
Rojo fenol
Productos finales:
Amonio 
CO2
Enzima:
ureasa
Caldo MR/vp 
Sustrato:
glucosa
Indicadores:
Rojo de metilio
 
Indicadores:
Alfa naftol 5%
Koh 40%
Enzima:
Glucosidasa 
Productos finales:
ácidos mixtos 
Productos finales:
Diacetilo
Producto intermedio
Acetil metil carbonil 
Sustrato:
Lisina 
Glucosa
Tiosulfato de sodio 
Agar lia 
Indicadores:
Purpura de bromocresol
Citrato de hierro y amonio
Enzimas:
Lisina desaminasa 
Lisina descarboxilasa
Glusidasa 
Tiosulfato reductasa 
Productos finales 
Amina cadaverina y CO2
Alfacetoacidos 
K/A
R/A
K/K 
H2S
K/K
En lia pseudomonas se observa morado por que consume las peptonas 
sim 
Sustrato:
Tripteina 
Tiosulfato de sodio
Indicadores:
Reactivo de kovas
Sales de hierro 
enzimas:
Triptofanasa 
Tiosulfato reductasa 
Productos finales:
Amonio y acido pirúvico 
H2S
Coprocultivo
caldo selenito
Sustrato: 
Lactosa 
Peptonas 
Inhibidores 
Selenito de sodio 
Fosfato de sodio 
Fundamento 
Medio de cultivo liquido selectivo, el enriquecimiento de muestras en donde se sospecha la presencia salmonella 
Permite la recuperación de cepas de shigella y no inhibe el crecimiento de pseudomonas y proteus 
caldo Tetrationato
Reacción de yodo-iodorada con tiosulfato de sodio 
Carbonato de calcio: neutraliza y absorbe metabolitos tóxicos 
Sustrato 
Peptonas 
Inhibidores 
Sales biliares 
Tetrationato 
Se forma por la reacción del iodo- yodurada con el tiosulfato de sodio 
Peptonas proporcionan los nutrientes necesarios y el carbonato de calcio neutraliza y absorbe los metabolitos tóxicos 
Noboviocina inhibe el crecimiento de proteus 
rappaport caldo
Sustrato
Peptonas 
Inhibidores
Altas concentraciones de sal de magnesio y sodio
Verde de malaquita 
Medio de cultivo nutritivo que contiene un sistema buffer de fosfatos, alta concentración de sales de magnesio y sodio y la presencia del verde de malaquita 
El enriquecimiento selectivo se debe a la capacidad que tiene las cepas de salmonella de sobrevivir y replicarse en presiones osmóticas alta ph relativamente altos debido a que suprimen el efecto toxico del verde de malaquita por la alta concentración de cloruro de magnesio 
MacConkey con sorbitol
Sustrato 
Sorbitol
Inhibidores 
Sales biliares 
Cristal violeta 
Indicador 
Rojo neutro 
E.Coli: O 137 H7
Urocultivos 
AGAR CLED
Sustrato:
Extratacto de carne 
 peptona de caseína
Peptona de gelatina
Lactosa 
Agentes inhibidores 
 L-cistina 
Indicadores 
Andrade 
Azul de bromotimol 
Se basa en la fermentación de la lactosa y disminución del ph del medio con la producción de ácidos 
La peptona de caseína, la peptona de gelatina y el extracto de carne proporcionan los nutrientes 
Agar chromogenico
Sustrato:
Sustratos cromogenicos
Productos finales 
Colonias marrones (proteus spp, morganella y providencia) actividad del triptófano desaminasa 
Colonias azul turquesa actividad enzima B-glucosidasa (enterobacterias)
Colonias rosadas actividad enzima B-galactosidasa (E.coli)
Colonias azul violeta Ambos sustratos cromogenicos escinde
Violeta oscuro bacterias coliformes 
 
Vibrio 
Citrato positivo
NaCl 0% V.cholerae 
NaCl 3% 6% todos crecen
+ 5 leucocitos en el campo INVASIVO
- 5 leucocitos en el campo TOXIGENICO 
TSI
Sustrato:
Lactosa
Sacarosa
Glucosa
Tiosulfato de sodio
Indicadores:
Rojo fenol
Sales de hierro 
Enzimas:
Glucosidasa 
Productos finales:
Ácidos mixtos
/A
K/A
V. Choleare ( sacarosa y glucosa )
V. Parahemolyticus (glucosa )
V. Vulnificus (glucosa y lactosa ) 
LIA
Sustratos: 
Lisina 
Glucosa 
Tiosulfato de sodio
Indicadores:
Purpura de bromocresol 
Citrato de hierro y amonio 
 
Enzimas:
Lisina desaminasa 
Lisina descarboxilasa
Glusidasa 
Tiosulfato reductasa 
Productos finales 
Amina cadaverina y CO2
Alfacetoacidos 
K/K
Todos son iguales: descarboxilan la lisina 
NO producen H2S 
NO producen GAS 
APA
Recuperación de las cepas del microorganismo
El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico 
PH alcalino 
agar TCBS
Sustrato:
Sacarosa
Tiosulfato de sodio 
Inhibidor:
Bilis de buey 
Citrato de sodio 
Ph alcalino 
Indicador:
Azul de bromotimol 
Azul de timol 
Citrato férrico 
Siembra directa a partir de APA
Sacarosa = amarilla (V. cholerae)
No fermenta =
verde (V. parahemolyticus )
V. Choleare 
V. Choleare ( sacarosa y glucosa )
V. Parahemolyticus (glucosa )
V. Vulnificus (glucosa y lactosa ) 
KLIGLER agar 
Sustratos 
Lactosa 
Glucosa
Tiosulfato de sodio 
Indicadores 
Rojo fenol 
Lactosa 
Glucosa 
Alcalino 
Acido 
A/A 
V. Choleare ( sacarosa y glucosa )
V. Parahemolyticus (glucosa )
V. Vulnificus (glucosa y lactosa ) 
K/A 
Fuente de iones de azufre 
Citrato de hierro 
Amonio
Fuente de nutrientes 
Tripteina 
 
Motilidad 
Indol
Ornitina agar 
Sustrato: 
Glucosa --
Tripteina 
Ornitina= putrescina y CO2 
Indicador 
Purpura de bromocresol 
Reactivo de kovas
Medio alcalino= purpura 
Medio acido = amarillo 
Indol positivo 
Fermentación de glucosa 
Movilidad positiva 
Ornitina positiva 
Alcalino 
ACIDO 
Ornitina positiva= choleare y parahemolyticus 
Ornitina variable= vulnificus
Todos son móviles 
Todos son indol positivo 
Ornitina es el sustrato para la detección de la enzima ornitina descarboxilasa 
Hilo mucoide 
desoxicolato de sodio 0,5 %
Las bacterias son lisadas por el desoxicolato quedando ADN liberado, presentándose un aspecto viscoso en la muestra y se formara una cuerda mucoide cuando se introduzca lentamente el asa 
Negativo: aeromonas 
 
Tripticasa de soya 
Sustrapto 
Tripteina 
Peptina de soya
Cloruro de sodio balance osmótico 
La tripteina y la peptona de soya aportan nutrientes ricos en peptonas
La peptona de soya es fuente de hidratos de carbonos que estimulan el crecimiento de diversos microorganismos 
El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico 
Agar almidón
Hidrolisis de almidón 
Sustrato 
Almidón (polímero de glucosa)
Enzima
Amilasa (exoenzima)
Producto Final
Glucosa 
Restos de maltosa 
Revelador 
Lugol 
El Lugol con el almidón forman un complejo color café-purpura que desaparece cuando el almidón ha sido degradado
Fundamento:Capacidad que tiene el microorganismo de utilizar las enzimas amilolíticas para hidrolizar el almidón
Y esta hidrolisis se revela con el Lugol 
Prueba de GELATINA
Licuefacción de la gelatina 
Sustrato 
Gelatina (proteina)
Enzimas 
Gelatinasa (proteasa, exoenzimas ) 
Producto 
aminoácidos 
Revelador 
No requiere 
Carbón activado en polvo
Fundamento: 
Evidenciar la capacidad que tiene un microorganismo de producir enzimas proteolíticas como lo son las enzimas gelatinasas que hidrolizan la gelatina
 
La gelatina es hidrolizada por la gelatinasa en sus aminoácidos constituidos, con perdida de sus características gelificantes 
Solidificación del medio 
Reducción de nitratos a nitritos 
Fundamento: 
Determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato a nitritos o en su defecto a otros productos como el nitrógeno o oxido nitroso 
Atreves de la presencia de enzimas nitrato reductasa 
Caldo nitritos
Sustrato:
Nitrato de potasio 
Reveladores: 
Acido sulfanilico al 0.8% 
Dimetil-Alfa naftilamina al 0.5%
Polvo de zinc
 
La reacción de color se debe a la formación de un compuesto diazonio, p-sulfabenceno alfo naftilamina 
Desnitrificación 
Descarboxilación de la L-ornitina 
Fundamento: 
El aminocido L-ornitina es descarboxilado por la enzima ornitina desacaboxilasa para formar una diamina putrecina y CO2, lo que intensifica el color violeta del medio 
Negativo : Viraje del medio de purpura a amarillo 
Indicador purpura de bromocresol 
Sustrato: glucosa y ornitina 
Todos los vibrios son ornitina positivo 
Vulnificos variable 
Prueba de ADH 
Determinar la formación de amoniaco ya sea atreves de la hidrolisis o descarboxilación de la arginina
 indicado través del reactivo de Neesler que forma un complejo con el amoniaco
Positivo: anaranjado oscuro 
Negativo: incoloro o ámbar 
Arginina negativo 
Determinación de la L-arginina 
Puede ser catabolizada por dos sistemas 
Hidrolizada 
Amoniaco 
Fosfato de adenina 
triFosfato de adenina 
Fosfato 
Fermentación inositol 
Vibrio inositol negativo 
Sustrato 
Inositol
Inhibidor 
Litio 
Enzima 
Inositol fosfato fosfatasa 
PSEUDOMONAS 
Medio OF 
Microorganismos oxidativo: producen ácido solo en el tubo abierto, expuesto al O2 atmosférico. Por lo que solamente el tubo expuesto al aire atmosférico cambia su color original a amarillo. Atmosfera de aerobiosis 
Microorganismos fermentadores: producen ácido en los 2 tubos. O sea que los dos tubos viran del verde al amarillo. atmosfera de anaerobiosis 
Bacterias sacarolíticas: son inertes a este medio que conserva su pH alcalino después de la incubación, conservando su color original.
Sustrato
Glucosa 
Indicador 
Azul de bromotimol 
Fermentativo oxidativo 
Aceite de inmersión
 
Alcaligenes 
Pseudomonas oxidativas 
Agar F (King B)
Fundamento 
Es un medio de confirmación para la detección y diferenciación de Pseudomonas aeruginosa de otras Pseudomonas basadas en la producción de fluoresceína (pyoverdin) y la inhibición de la piocianina.
El hidrogenofosfato de potasio es una fuente de fósforo, y el sulfato de magnesio proporciona cationes para activar la producción de fluoresceína y inhibir la producción de piocianina y piorrubina 
pigmento fluorescente amarillo-verde que puede oxidarse a amarillo.
AGAR P (King A)
 La peptona de gelatina es baja en fósforo para reducir la acción inhibitoria sobre la producción de piocianina.
 El sulfato de potasio y el cloruro de magnesio proporcionan cationes para activar la producción de piocianina y mejorar la producción de pigmentos. 
El glicerol es una fuente de carbono.
Glicerina favorece la producción de pigmentos 
pigmento verde azulado que se oxida a marrón
Agar Cetrimida 
el cloruro de magnesio y el sulfato de potasio promueven la formación de piocianina, pioverdina, piomelanina y fluorescencia de P-aerusinogena 
La cetrimida es un detergente catiónico que actúa como agente inhibidor libera nitrógeno y el fósforo de las células de casi toda la flora acompañante
Medio utilizado para el aislamiento e identificación de Pseudomonas aeruginosas y de otras especies del genero 
Pigmentos y olor de pseudomonas 
Piocianina pigmento azul
 
Pioverdina pigemento verde 
Piorrubina pigemento marron 
Piomelanina pigmento negro 
Produce un olor a uvas o nixtamal, por la producción de trimetilaminas.
En lia pseudomonas se observa morado por que consume las peptonas 
Oxidasa 
Mycobacterium 
Tinciones 
 técnica de Kinyoun 
se utiliza un agente tenso activo (alta concentración de fenol en la carbol fucsina) que aumenta la permeabilidad del colorante a través de la capa cérea.
 Esta alta concentración de fenol permite disolver el material lipídico de la pared celular de la micobacteria, lo cual ocasiona la penetración de la carbolfuscina sin la necesidad de calor.
fluorocromo Auramina
 utiliza auramina, 
tiene la capacidad de unirse a los lípidos de la pared de la micobacteria.
 Las bacterias ácido resistentes teñidas con fluorocromos son coloreadas de color amarillo brillante (si se utiliza auramina) o naranja-rojo (utilizando rodamina).
 La coloración de contraste utilizada en esta tinción es el permanganato de potasio, el cual produce un fondo negro de contraste.
Ziehl neelsen 
Fosfato trisódico 10% 
PROCEDIMIENTO 
Adicionar a la totalidad de la muestra = cantidad de FTS 10% 
Agitar vigorosamente 
Dejar en reposo 2 horas 
Centrifugar a 3500 RPM x 30 minutos 
Descartar sobrenadante 
Procesar el sedimento por método del escobillón de kudoh
1. Descontaminación de la muestra 
Escobillón de kudoh (NaOH 2% o 4%) 
PROCEDIMIENTO 
Impregnar con la muestra la totalidad del algodón de un escobillón estéril 
Introducir el escobillón en 3ml de NaOH al 4% durante 2 minutos 
Sembrar en medio OK y STG
N-acetil-L-cistina= homogenizar 
Tacquet y tison (NaOH y laurilsulfato de sodio)
Combinación de la homogeneización y descontaminación
Reactivos: 
Solución de lauril sulfato de sodio 
Hidróxido sódico 
Sustratos: 
Huevos enteros coagulados
sales definidas
Glicerol
 fécula de papa
Inhibidor 
Verde de malaquita
Lowenstein-Jensen
Fotocromogenos= producen pigmento en la luz, pero no en la oscuridad 
Escotocromogenos= generan pigmento cuando ploriferan en la oscuridad 
No fotocromogenos= no tienen pigmento y las colonias tienen un color claro o de piel
Ogawa Kudoh agar OK
Medio para el aislamiento y cultivo de microorganismos del género Mycobacterium
está constituido por un conjunto de sales tales como 
Citrato deMagnesio
Sulfato de Magnesio
 Glutamato de Sodio
 Fosfato disódico
 Fosfato monopotásícoanhidro
 además incorpora 
glicerol
 verde demalaquita 
 homogenizado de huevo
estámezcla debe tener un pH de 6.4
ACUMULACION DE NIACINA
Todas las micobacterias no tienen la capacidad de acumular la niacna, sin embargo M. tuberculosis, M. simiae y ocasionalmente cepas de M. africanum, M. bovis, M. marinum y M. chelonae si tienen las enzimas para convertir la niacina a ribonucleotido de niacina.
los tubos de ensayo contienen una tira de papel filtro impregnado con bromuro de cianógeno. Se extraen las colonias provenientes del medio sólido mezcladas con un poco de solución salina y se colocan en el fondo del tubo de vidrio.
 Mycobacterium tuberculosis positiva
 Urea positiva 
Reducción de nitratos a nitritos 
Fundamento: 
Determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato a nitritos o en su defecto a otros productos como el nitrógeno o oxido nitroso 
Atreves de la presencia de enzimas nitrato reductasa 
Caldo nitritos
Sustrato:
Nitrato de potasio 
Reveladores: 
Acido sulfanilico al 0.8% 
Dimetil-Alfa naftilamina al 0.5%
Polvo de zinc
 
La reacción de color se debe a la formación de un compuesto diazonio, p-sulfabenceno alfo naftilamina 
Desnitrificación 
Mycobacterium positivo 
PRUEBA DE LA ENZIMA ARISULFATASA
las micobacterias de crecimiento rápido, son positivas a esta prueba. 
La arilsulfatasa es una enzima que cliva fenolftaleína libre a partirde la sal tripótasica del disulfito de fenolftaleína.
La prueba es realizada, agregando disulfato de fenolftaleína tripotásica a un tubo que contiene sustrato de fenolftaleína en agar ácido oleico (Wayne).
En 3 o 14 días de incubación, la lectura de la prueba puede realizarse al observar una coloración rojo a rosa después de la adición de carbonato de sodio, lo cual indica la prueba positiva.
La prueba es negativa cuando no hay cambio de color después de la adición de carbonato de sodio.
Mycobacterium tuberculosis es negativa a esta prueba.
	Brucella
Brucella
Muestras
DX de laboratorio
Cultivo
Métodos directos
Métodos directos
Dx serológico
Métodos indirectos
Reacción de Huddleson
Estudiar la presencia de Ag de Brucella en distintos tejidos
Dx de laboratorio titulación de AC