Técnicas de inactivación de virus

Vista previa del material en texto

Técnicas de inactivación de virus
Método con pH bajo para la inactivación viral
Se tiene constancia de que la inactivación viral de pH bajo de productos bioterapéuticos se ve influenciada por el pH, el tiempo, la temperatura y el contenido de proteínas y solutos o contenido de la solución tampón. Muchos virus se desnaturalizan de forma irreversible y se destruyen eficazmente a un pH de 5,0-5,5. En función del alcance de los virus objeto de la inactivación y depuración, este rango puede ser suficiente. Sin embargo, varios virus con envoltura se inactivan de forma eficaz solo a un rango de pH de 3,5-4. Muchos productos bioterapéuticos de mAb requieren una depuración con un espectro especialmente amplio para muchos tipos de virus, de forma que se suele establecer un objetivo de pH “bajo” de 3,5-4 (figura A). No obstante, la exposición prolongada a este rango de pH puede dañar o inactivar algunos productos bioterapéuticos, sobre todo las proteínas o enzimas como las proteínas sanguíneas y la insulina . Con una exposición prolongada al estrés del pH, las proteínas y las enzimas están sujetas a una desamidación, desnaturalización y agregación significativas. Las soluciones de inmunoglobulina (incluidas tanto las IgG como las IgM mAbs) suelen ser menos susceptibles que otras proteínas o enzimas a un pH de 3,5-5.5, aunque siguen siendo susceptibles a varios grados. Después de un tiempo suficiente en condiciones de inactivación viral, la carga vírica infecciosa debería minimizarse eficazmente. Sin embargo, las partículas virales residuales, los deshechos u otro contenido no se eliminarán físicamente
Tratamiento con disolvente/detergente para la inactivación viral
Los métodos de inactivación viral con disolvente o detergente son los más empleados para los virus con envoltura. Los reactivos que se suelen emplear tienen un impacto insignificante en la labilidad de la proteína o los anticuerpos terapéuticos, que están sujetos a los problemas de la desnaturalización o desamidación posibles con algunos métodos de pH bajo. Los métodos de tratamiento con disolventes o detergentes para la inactivación viral presentan muchas de las necesidades y factores determinantes de los métodos de pH bajo; principalmente para definir el alcance de la adición de reactivos (en este caso un disolvente o un detergente) y el tiempo necesario para el proceso. Al igual que con la inactivación viral con pH bajo, las condiciones varían entre las inmunoglobulinas u otros tipos de sustancias medicamentosas. Por tanto, deben llevarse a cabo estudios para cada molécula a fin de caracterizar y validar el espacio de diseño o los límites operativos en los que puede tener lugar una inactivación viral con disolvente o detergente eficaz. 
Inactivación viral para las vacunas
Los productos de vacunas que se someten a la inactivación viral son diversos, como el toxoide, la proteína recombinante, la subunidad, el polisacárido e incluso algunas vacunas de partículas similares a virus. De nuevo, para seleccionar un método de inactivación viral adecuado se debe considerar la naturaleza del producto bioterapéutico, así como la magnitud de los virus que deben depurarse eficazmente.
Por lo general, se deben tener muy en cuenta los métodos o prácticas alternativos que impiden la contaminación vírica externa de determinados tipos de vacunas, como las de virus vivos atenuados, en las que el producto bioterapéutico es una partícula viral. Las metodologías específicas para estos productos pueden incluir uno o más procesos de nanofiltración o cromatografía para reducir de forma eficaz la carga vírica externa en las respectivas fuentes de materia prima. Los virus que se inactivan o destruyen pueden someterse a un proceso adecuado de inactivación viral basado en disolventes o detergentes, o con un pH bajo, ya que con ello se puede mantener el efecto inmunoestimulador deseado, incluso si el producto vírico ha sido desnaturalizado o alterado de alguna u otra manera