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1 Facultad de Ciencias Veterinarias -UNCPBA- Verificación de los Procedimientos Operativos Estandarizados de Saneamiento (POES) en una sala de elaboración de dulce de leche tradicional. Gianibelli, Julieta; Tomas, María Cecilia; Agüeria, Daniela. Mayo, 2022 Tandil 2 Verificación de los Procedimientos Operativos Estandarizados de Saneamiento (POES) en una sala de elaboración de dulce de leche tradicional. Tesis de la Carrera de Licenciatura en Tecnología de los Alimentos, presentada como parte de los requisitos para optar al título de grado de Licenciado del estudiante: Gianibelli, Julieta. Tutor: Lic. en Ciencia y Tec. de los Alimentos, Tomas María Cecilia. Director: Dra., Agüeria Daniela. Evaluador: M. V., Pena Miguel Ángel. 3 Agradecimientos En primer lugar, agradecerle a mi familia por el acompañamiento incondicional en este trayecto, principalmente a mis padres por brindarme la posibilidad de estudiar e inculcarme la importancia de la constancia, el compromiso y el esfuerzo. A mi directora de Tesis Daniela Agüeria, por su predisposición, ayuda y apoyo, presente en cada momento y en cada detalle para poder realizar este trabajo. Agradecerle también a mi tutora María Cecilia Tomas y al establecimiento, por abrirme sus puertas y por el gran apoyo durante mi residencia, la cual fue muy enriquecedora. Brindándome total confianza, libertad y los elementos necesarios para poder realizar este trabajo. A cada persona que me acompaño en este camino y fundamentalmente a los profesores por brindar sus conocimientos y acompañamiento durante toda la carrera. 4 Resumen Los Procedimientos Operativos Estandarizados de Saneamiento (POES) son planes que describen las actividades de limpieza y desinfección de instalaciones y equipos. El cumplimiento y la eficacia de los POES implementados en un establecimiento de alimentos se puede evaluar mediante procedimientos de verificación. El objetivo fue verificar los Procedimientos Operativos Estandarizados de Saneamiento implementados en una sala de elaboración de dulce de leche tradicional, mediante inspección visual y análisis microbiológicos. Se recolectó información a partir de los documentos escritos, se observó el proceso de elaboración del dulce de leche “in situ” y se realizó un relevamiento de los equipos involucrados en cada sector. Se elaboró el flujograma del proceso y su memoria operativa. Para realizar el procedimiento de verificación (muestreo pre-operacional), se seleccionaron superficies en contacto con el alimento (tanque de leche, paila de elaboración de dulce, enfriador y descarga de producto terminado) y se determinaron aerobios totales, mohos y levaduras, coliformes totales y Escherichia coli. Además, se realizó el monitoreo ambiental de la sala de elaboración y el análisis microbiológico del producto final (recuento de mohos y levaduras y Staphylococcus coagulasa positiva). Luego de los POES implementados, las superficies se observaron limpias, sin restos de alimento u otras sustancias. Los resultados microbiológicos de las superficies analizadas fueron satisfactorios, debido a que no se observó desarrollo microbiano o los recuentos estuvieron por debajo del límite de detección de los métodos utilizados. En cuanto al análisis microbiológico del dulce de leche tradicional, los resultados se encontraron dentro de los criterios de aceptación establecidos en la legislación vigente. Los resultados obtenidos a partir de la inspección visual y de los análisis microbiológicos de superficies evaluadas, demuestran que los POES implementados en la sala de elaboración del establecimiento son eficaces, generando condiciones de higiene para la elaboración de productos inocuos y de calidad. Palabras clave: POES; verificación; análisis microbiológico; dulce de leche. 5 ÍNDICE 1. INTRODUCCIÓN ...................................................................................................................... 6 2. MARCO TEÓRICO .................................................................................................................. 7 2.2. Limpieza y desinfección ............................................................................................... 7 2.2.1. Métodos de limpieza .............................................................................................. 8 2.2.2. Agentes de limpieza ............................................................................................ 11 2.3. Procedimientos Operativos Estandarizados de Saneamiento ......................... 12 2.3.1. Verificación de los Procedimientos Operativos Estandarizados de Saneamiento .......................................................................................................................... 13 2.3.2. Cómo verificar la implementación y la eficacia de los POES ................... 14 2.3.3. Metodología de muestreos ambientales ........................................................ 15 3. MARCO LEGAL ..................................................................................................................... 17 4. MATERIALES Y MÉTODOS ................................................................................................ 18 4.1. Verificación de los POES ........................................................................................... 18 4.1.1. Inspección visual, análisis microbiológico de superficies y monitoreo ambiental ................................................................................................................................ 19 4.1.2. Análisis microbiológico en producto final .................................................... 21 5. RESULTADOS ....................................................................................................................... 22 5.1. Sala de elaboración de dulce de leche tradicional: Equipos del proceso .... 22 5.2. Flujograma y memoria operativa ............................................................................. 24 5.3. Inspección visual.......................................................................................................... 30 5.4. Análisis microbiológicos de superficies y monitoreo ambiental .................... 31 6. CONCLUSIÓN ........................................................................................................................ 32 7. BIBLIOGRAFÍA ...................................................................................................................... 33 6 1. INTRODUCCIÓN El dulce de leche se considera un producto estable y seguro microbiológicamente debido a su composición y a sus características intrínsecas. Sin embargo, puede contaminarse debido a prácticas y condiciones poco higiénicas durante su manipulación, producción o envasado. La higiene en una planta procesadora de alimentos es una herramienta esencial para elaborar alimentos inocuos (MAGyP, 2013). Una manera eficiente y segura de llevar a cabo las operaciones de saneamiento en un establecimiento es mediante la implementación de los Procedimientos Operativos Estandarizados de Saneamiento (POES) que, en conjunto con las Buenas Prácticas de Manufactura (BPM) son programas que establecen las condiciones operativas y ambientales adecuadas para asegurar la inocuidad de los alimentos que allí se elaboran, fraccionan y/o comercializan, previniendo la contaminación directa o la adulteración de los mismos (ANMAT, 2008). Los POES se encuentran establecidos como obligatorios en la legislación argentina, tanto en el Código Alimentario Argentino (CAA) como en el Decreto 4238/68 (Reglamento de Inspección de Productos, Subproductos yDerivados de Origen Animal), donde se establece que todos los establecimientos donde se faenen animales, elaboren y/o almacenen alimentos están obligados a desarrollar e implementar los Procedimientos Operativos Estandarizados de Saneamiento que describan los procesos de saneamiento diarios. Objetivo Verificar los Procedimientos Operativos Estandarizados de Saneamiento implementados en una sala de elaboración de dulce de leche tradicional, mediante inspección visual y análisis microbiológicos. 7 2. MARCO TEÓRICO 2.1. Higiene e inocuidad alimentaria La higiene alimentaria es definida por la Organización Mundial de la Salud (OMS) como las condiciones y medidas necesarias para la producción, elaboración, almacenamiento, distribución y comercialización de los alimentos destinadas a garantizar un producto inocuo y seguro, apto para el consumo humano (OPS/OMS, s.f.). De acuerdo al Codex Alimentarius (2020), la inocuidad alimentaria es “la garantía de que los alimentos no causarán daños en la salud del consumidor cuando se preparen o se consuman de acuerdo con su uso previsto” (Codex Alimentarius, 2020). 2.2. Limpieza y desinfección El concepto de limpieza ha sido definido por el Codex Alimentarius (2020) como “el proceso cuyo objetivo consiste en la eliminación de tierra, residuos de alimentos, suciedad, grasa u otras materias objetables, que puedan ser una fuente de contaminación”. Los objetivos del proceso de limpieza son: - Eliminar la suciedad y los restos de alimentos con el fin de evitar que sirvan como sustratos para el desarrollo de microorganismos. - Favorecer la acción microbicida del desinfectante durante el proceso de desinfección, al retirar la materia orgánica para que el desinfectante pueda actuar sobre los microorganismos. - Evitar la transferencia de olores y sabores a los alimentos. - Evitar la presencia de plagas, eliminando los restos de alimentos que sirven como sustrato para su desarrollo y multiplicación. - Cumplir con las especificaciones de las normas de calidad, higiénicas, sanitarias y organolépticas (Codex Alimentarius, 2009). 8 La desinfección se describe como la reducción por medio de agentes químicos (desinfectantes químicos) o por métodos físicos (calor, calor más presión, calor húmedo y luz UV), del número de microorganismos en las instalaciones, maquinarias, utensilios y equipos, hasta un nivel que no comprometa la inocuidad del alimento (MAGyP, 2016). Luego de la limpieza, es posible que sea necesario realizar una desinfección, especialmente de las superficies que entran en contacto directo con los alimentos (Codex Alimentarius, 2020). 2.2.1. Métodos de limpieza La limpieza se efectúa utilizando métodos físicos y/o métodos químicos, en los que se emplean detergentes, alcalinos o ácidos (Codex Alimentarius, 2020). Los métodos y los productos de limpieza dependerán de la naturaleza de la empresa de alimentos, del tipo de suciedad resultante de las diferentes operaciones de elaboración de los productos y del material en que está construido el equipo, utensilio o superficie a limpiar (Codex Alimentarius, 2020). Diferentes métodos de limpieza Limpieza en seco: Se realiza cuando no es necesario el uso de agua o cuando los equipos, elementos de trabajo y las salas de elaboración no deban ser mojadas. Se emplea generalmente cuando se han procesado alimentos desecados. Este método consiste en aspirar, barrer y recolectar la suciedad dispersa (Berra y Di Bartolo, 2014). Limpieza húmeda: 9 Se emplea el agua u otro líquido como medio de remoción, utilizando productos químicos con distintas propiedades (como, por ejemplo, disolvente, emulgente, dispersante) de acuerdo a la naturaleza del residuo (Berra y Di Bartolo, 2014). Existen diversos métodos de limpieza húmeda: Limpieza manual: La limpieza manual se utiliza en instalaciones, equipos y utensilios que por sus características de construcción no es posible realizarla de otro modo y es necesario eliminar la suciedad por cepillado o rascado manual de las superficies con una solución detergente. La secuencia de pasos consiste en un enjuague previo con agua, posteriormente un lavado con agua y una solución detergente y un enjuague final de los equipos con agua tibia. Este método de limpieza no permite trabajar con altas temperaturas ni con altas concentraciones del limpiador (Lazcano, 2007; Berra y Di Bartolo, 2014). Limpieza a base de espuma: Este método consiste en la aplicación de un detergente en forma de espuma, el cual se deja actuar entre 15-20 minutos, y luego un enjuague con agua para eliminar los restos del producto utilizado. La eficacia de la limpieza depende de la combinación de la calidad del detergente y del tiempo en contacto con la superficie. En la industria, en general, se aplica a superficies de acero inoxidable, techos y paredes (Lazcano, 2007; Berra y Di Bartolo, 2014). Limpieza Cleaning In Place (CIP): El funcionamiento de este sistema de limpieza se basa en la circulación secuencial de agua y soluciones químicas (detergentes y desinfectantes) por las tuberías y equipos de producción. Es un método de limpieza automático. En el caso de la industria láctea, donde se utilizan equipos de sistema cerrado, es conveniente utilizar este sistema, debido a que se puede realizar un lavado sin desarmar el equipo o la instalación (Lazcano, 2007). 10 La secuencia de las operaciones de saneamiento consiste en: Pre-lavado con agua a temperatura ambiente (25°C), para eliminar la suciedad más gruesa. Circulación con detergente alcalino. Se calienta el agua a temperatura entre 55-90° C, se añade el detergente y se hace recircular la solución de limpieza. Enjuague intermedio con agua para eliminar los restos de solución alcalina y la suciedad residual. Lavado y recirculación con detergente ácido. La solución debe estar a una temperatura entre 50 y 70° C. Esta operación se lleva a cabo para neutralizar el limpiador alcalino residual y eliminar los restos sólidos adheridos a los equipos. Enjuague final con agua para eliminar los restos de ácido (Martínez Lorenzo, 2019). En caso de ser necesario, se hace circular un desinfectante y posteriormente se realiza un enjuague con agua para eliminar los restos del producto. Los factores más importantes que influyen sobre la limpieza de superficies mediante la aplicación de productos químicos son: la acción química referida a los productos empleados y su concentración, el tiempo de aplicación, la temperatura durante el proceso de limpieza y la acción mecánica (Martínez Lorenzo, 2019). La efectividad de la limpieza depende de diversos factores dentro de los cuales se pueden mencionar: El material y las condiciones de la superficie. El tipo y la cantidad de suciedad o residuo a remover y sus características. El método de limpieza. La calidad y temperatura del agua. Las propiedades químicas y físico-químicas del agente de limpieza, concentración, temperatura y tiempo de exposición en que se use. 11 Energía mecánica aplicada (Gutiérrez Martínez, s.f.; Berra y Di Bartolo, 2014). 2.2.2. Agentes de limpieza Un detergente o agente de limpieza es un producto químico que, disuelto o disperso en el agua o en otros disolventes, tiene la propiedad de modificar la tensión superficial, con lo que la solución o la dispersión adquieren la capacidad humectante y emulsionante necesaria para producir el efecto limpiador (López Rial, 2013). Al momento de seleccionar un agente de limpieza se debe considerar: - Tipo de suciedad presente en las superficies a limpiar. - Naturaleza de la superficie a limpiar. - Método de aplicación de los detergentes. Tipo de suciedad a eliminar: La composición de los residuos o suciedad a eliminar depende de la naturalezadel alimento y del proceso o métodos de tratamiento al cual ha sido sometido, y de acuerdo a los residuos presentes se debe seleccionar el detergente adecuado. Los principales residuos de la industria láctea son: la lactosa, materia grasa, proteínas y sales minerales (Berra y Di Bartolo, 2014). La materia orgánica, como las proteínas, grasas y carbohidratos se eliminan mediante detergentes fuertemente alcalinos, dentro de los cuales se pueden mencionar a la soda cáustica y el hidróxido de sodio (López Rial, 2013). La materia inorgánica, como las sales minerales, se elimina eficazmente con productos de limpieza ácidos, los cuales actúan como desincrustantes favoreciendo la eliminación de los residuos calcáreos, que son incrustaciones superficiales duras formadas por la deposición de sales (López Rial, 2013). 12 Naturaleza de la superficie a limpiar: Las superficies en contacto con los alimentos deben cumplir con determinadas características, no deben ser tóxicas, absorbentes, porosas ni corrosivas. El acero inoxidable es el material más recomendado para su uso en la industria alimentaria debido a su resistencia a la corrosión, su superficie compacta, lisa, suave y de fácil limpieza (Lazcano, 2007). La eliminación de suciedad y de microorganismos adheridos a superficies lisas puede realizarse mediante una limpieza profunda, seguida de una desinfección. Por otro lado, superficies rugosas y agrietadas, ofrecen un ámbito óptimo para la formación de biofilms, difíciles de eliminar (Lazcano, 2007). 2.3. Procedimientos Operativos Estandarizados de Saneamiento La ANMAT (2008) define a los POES como “las prácticas y procedimientos de saneamiento escritos que un establecimiento elaborador de alimentos debe desarrollar e implementar para prevenir la contaminación directa o la adulteración de los alimentos en cada una de las etapas de la cadena alimentaria”. Los POES son planes que describen las actividades de limpieza y desinfección de instalaciones y equipos que un establecimiento elaborador de alimentos llevará a cabo diariamente, antes y durante las operaciones de elaboración, a los cuales se denominan procedimientos pre-operacionales y operacionales, respectivamente. Un programa POES, en general, se compone de los siguientes elementos: I. Descripción de todos los procedimientos de limpieza y desinfección diarios, pre-operacionales y operacionales. II. Acciones de monitoreo. III. Acciones correctivas. IV. Verificación. V. Mantenimiento de registros VI. Personal capacitado (CFR, 1996; Decreto 4238/68; Agüeria, et al., 2021) 13 El Decreto 4238/68 establece que dentro de un establecimiento debe haber personal técnicamente capacitado, responsable de comprobar la aplicación y documentar el cumplimiento de los POES y establecer las acciones correctivas para prevenir la contaminación del producto o su alteración. La documentación escrita debe estar disponible para su verificación. Cada empresa alimentaria debe desarrollar su propio documento a partir de los lineamientos generales establecidos en las reglamentaciones, que describa los procedimientos de saneamiento diarios que realizarán antes (saneamiento pre- operacional) y durante (saneamiento operacional) las actividades y las acciones correctivas en caso de que sean necesarias. Las indicaciones deben estar escritas de forma clara y concisa, y en ellos se debe especificar: Qué limpiar y desinfectar Cada cuánto se hará Quién será el responsable de realizar las tareas Cómo deben realizarse Quién es el responsable del monitoreo Qué acciones correctivas se establecerán si se detecta alguna falla Qué se registrará y en qué forma (MAGyP, 2016; Decreto 4238/68). 2.3.1. Verificación de los Procedimientos Operativos Estandarizados de Saneamiento El nivel de cumplimiento y la eficacia de los POES se puede evaluar mediante procedimientos de verificación. La verificación es la aplicación de métodos en un marco de tiempo para determinar el cumplimiento de los procedimientos establecidos en los programas de saneamiento (Holah, 2014). Según ISO 22000 (ISO, 2018a), la verificación es la “confirmación, mediante la aportación de evidencia objetiva, que se han cumplido los requisitos establecidos en la información documentada”. 14 Este procedimiento se realiza luego de las tareas de saneamiento para comprobar que la limpieza funciona en la práctica y controla los peligros relevantes y contaminantes (Schmitt y Moerman, 2016). La actividad de verificación para la evaluación de implementación de los POES representa una herramienta de mejora continua de los establecimientos elaboradores de alimentos, siendo un indicador de la eficacia de la metodología y de los procedimientos de trabajo (Agüeria, et al., 2021). Los métodos utilizados para la verificación se basan en pruebas microbiológicas, inspección visual, bioluminiscencia de ATP u otras. A su vez, se puede realizar el análisis del producto terminado o en distintas etapas del proceso de elaboración, para relacionar el nivel de contaminación del producto con el nivel de higiene de los equipos y el ambiente de producción (González, 2018). 2.3.2. Cómo verificar la implementación y la eficacia de los POES Para verificar la implementación y la eficacia del programa de saneamiento se debe observar la práctica de los POES, pre operacional y operacional. La secuencia de la verificación es la siguiente: 1. Observar las tareas de limpieza y desinfección realizadas, “in situ”. 2. Llevar adelante una evaluación organoléptica de superficies, equipos y utensilios. Se deben seleccionar las superficies para verificar, en general, es conveniente seleccionar aquellas que resulten más difíciles de limpiar. Luego, se realiza un examen organoléptico para determinar si se encuentran en condiciones adecuadas. Esto significa, que la superficie, equipo o utensilio debe verse limpio, estar limpio al tacto y oler limpio. La superficie se debe encontrar libre de material extraño tal como restos de alimentos, grasa, aceite, polvo, residuos químicos de limpieza, entre otros (ANMAT, 2008). 15 La evaluación organoléptica no es el método más efectivo para evaluar la limpieza de superficies, en general, se complementa con pruebas microbiológicas (Tebbutt, et al., 2007). 2.3.3. Metodología de muestreos ambientales La detección y el recuento de microorganismos mediante pruebas microbiológicas es uno de los métodos analíticos más utilizados en la verificación de los procesos de limpieza y desinfección. Con este propósito, se usan diferentes indicadores microbiológicos tales como, mesófilos aerobios totales, coliformes, Escherichia coli, Enterobacteriaceae, mohos y levaduras (Schmitt y Moerman, 2016; Agüeria et al., 2020). Para realizar el estudio microbiológico de un ambiente se debe establecer la metodología de muestreo. La elección del método de muestreo depende de la naturaleza y el tamaño de la superficie, los recuentos esperados, limitaciones presupuestarias, entre otros factores. Existen diversas metodologías para llevar a cabo un monitoreo ambiental, en general, es común el uso de esponjas de poliuretano o la técnica del hisopo para superficies más pequeñas y para muestreos por contacto se utilizan las placas RODAC o petrifilm de contacto (Michanie, 2013; Agüeria, et al., 2020). La norma internacional ISO 18593 describe los métodos de muestreo que incluyen placas de contacto y la técnica del hisopo. Ambas metodologías son apropiadas para estimar la carga microbiana de las superficies y determinar la higiene de las mismas (Schmitt y Moerman, 2016). Métodos de contacto: Las placas de contacto, con el medio de cultivo adecuado, se presionan sobre la superficie a analizar. Luego de la incubación, se obtiene una estimación de la contaminaciónde la superficie a través del recuento de microorganismos. Las placas de RODAC pueden contener un medio de cultivo para el “recuento total” o un medio de cultivo específico (Michanie, 2013). 16 Método de hisopado: Este método es posible utilizarlo para todo tipo de superficies sin importar el valor del recuento de microorganismos a hallar y la superficie no deberá ser menor a 100 cm2 (Michanie, 2013). El muestreo se realiza en superficies de equipos, pisos, paredes, mesadas, envases, materia prima y manos de operarios. Se utilizan hisopos estériles que se frotan sobre la superficie a evaluar y posteriormente son introducidos en un tubo con una cantidad conocida de diluyente. Los diluyentes comúnmente utilizados son: agua peptonada al 0,1 %, solución salina peptonada, solución reguladora de fosfatos, entre otros. Cuando sea necesario se hacen diluciones decimales y a partir de las mismas se realiza la siembra en placas (ISO, 2018). 17 3. MARCO LEGAL Los POES están establecidos como obligatorios en la legislación argentina. Por el Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENASA) en el capítulo 31 del Decreto 4238/68 (Reglamento de Inspección de Productos, Subproductos y Derivados de Origen Animal), en el apartado 31.2 que establece lo siguiente: “Todos los establecimientos donde se faenen animales, elaboren, fraccionen y/o depositen alimentos están obligados a desarrollar Procedimientos Operativos Estandarizados de Saneamiento (POES) que describan los métodos de saneamiento diario a ser cumplidos por el establecimiento”. El Código Alimentario Argentino (CAA) no menciona a los POES, sino que los considera dentro de las Buenas Prácticas de Manufactura (BPM). Los requisitos generales (esenciales) de higiene se encuentran en el capítulo II: “Condiciones generales de las fábricas y comercios de alimentos normas de carácter general”, establecidos en la Resolución GMC N° 080/96 N°080/96 “Reglamento técnico Mercosur sobre las condiciones higiénico sanitarias y de buenas prácticas de elaboración para establecimientos elaboradores/industrializadores de alimentos”. En el mismo se menciona que cada establecimiento debe establecer e implementar un programa de higiene y desinfección. 18 4. MATERIALES Y MÉTODOS El estudio se realizó en una fábrica de productos lácteos, ubicada en la ciudad de Olavarría, provincia de Buenos Aires. La industria láctea se dedica a la fabricación de una amplia variedad de productos tales como, quesos (Cremoso, Port Salut, Port Salut descremado, Gruyere, Fontina, Pategras, Gouda, quesos saborizados, Cheddar, Parmesano, Provolone, Reggianito estacionado, Romanito, Sardo estacionado, Sardo fresco, Mozzarella, queso parrillero), manteca, ricotta, dulce de leche y crema de leche. Para verificar la eficacia de la implementación del plan POES, se seleccionó la sala de elaboración del dulce de leche tradicional. En una primera etapa se recolectó información a partir de los documentos escritos, se observó el proceso de elaboración del dulce de leche “in situ” y se realizó un relevamiento de los equipos de trabajo involucrados en cada uno de los sectores. Por otra parte, se elaboró el flujograma del proceso de elaboración del dulce de leche tradicional y su memoria operativa. 4.1. Verificación de los POES La verificación de la eficacia de la implementación del plan se realizó mediante inspección visual y análisis microbiológicos de superficies de contacto con el producto. Además, se realizó un monitoreo ambiental de la sala de elaboración y un análisis microbiológico del producto final. Se realizaron 5 muestreos. Por muestreo se efectuó el hisopado de las siguientes superficies: tanque de leche, paila de elaboración de dulce, enfriador y descarga de producto terminado. El procedimiento de toma de muestra se llevó a cabo durante 5 semanas, en los días correspondientes a la producción de dulce de leche tradicional, en el momento previo a que se inicie el proceso de elaboración (pre-operacional). 19 4.1.1. Inspección visual, análisis microbiológico de superficies y monitoreo ambiental Previo al muestreo microbiológico se realizó una inspección visual de las superficies. Se realizó la toma de muestra por el método de hisopado en superficie (10 x 10 cm). Para el control microbiológico de superficies, se realizaron las siguientes determinaciones: aerobios mesófilos totales, coliformes totales, mohos y levaduras y Escherichia coli. Se utilizaron placas de cultivo Charm Peel Plate (Figura 1), según las especificaciones técnicas del fabricante. Figura 1. Placas de cultivo para recuento de: a) Coliformes y Escherichia coli, b) Aerobios mesófilos totales, c) Mohos y levaduras. Técnica del hisopado: Consiste en frotar con un hisopo estéril, previamente humedecido en una solución diluyente, el área determinada en el muestreo. El procedimiento consiste en: - Colocar un delimitador de 10 x 10 cm sobre la superficie a muestrear. - Humedecer el hisopo en la solución diluyente y presionar en la pared del tubo con un movimiento de rotación para quitar el exceso de solución. 20 - Con el hisopo inclinado en un ángulo de 30º, frotar 4 veces la superficie delimitada por la plantilla, cada una en dirección opuesta a la anterior, asegurando el hisopado en toda la superficie. - Una vez tomada la muestra se debe descargar el hisopo en el diluyente. Análisis microbiológico: técnica de siembra Previo a la siembra, se procedió a agitar la muestra en un agitador tipo Vortex con la finalidad de liberar las bacterias adheridas a la cabeza del hisopo. Aerobios mesófilos totales: - Levantar la tapa adhesiva completamente hasta exponer el disco de cultivo y agregar 1 ml de la muestra sobre el centro de la misma. - Incubar las placas a 35 ± 1 °C por 48 horas. - Al final del período de incubación, las colonias de aerobios mesófilos se observan de color rojo/púrpura. Coliformes totales y Escherichia coli: - Colocar 1ml de la muestra en el centro de la placa. - Incubar la placa a 35 ± 1 °C por 24 ± 2 horas. - Al final del período de incubación las colonias aparecen como puntos de color azul y rojo. Cada punto representa una Unidad Formadora de Colonias (UFC). Escherichia coli se diferencia colorimétricamente por formar colonias de color azul, púrpura o verdoso mientras que los coliformes crecen de color rojo. Mohos y levaduras: - Para la determinación de mohos y levaduras se debe colocar 1 ml de la muestra en la placa e incubar a 25 ± 3 °C en la oscuridad, durante 3 a 5 días. 21 - Las colonias de mohos y levaduras aparecen en las placas como puntos de color azul o azul/gris/verde/café. Cada punto representa una UFC. Para el monitoreo ambiental se utilizaron placas con medio de cultivo adecuado para el crecimiento de mohos y levaduras (YM), las que fueron expuestas durante 15 minutos en la sala de elaboración. Se colocó una placa por muestreo (n=5). Este control refleja las condiciones microbiológicas generales del ambiente de producción. 4.1.2. Análisis microbiológico en producto final En cada uno de los muestreos, se tomó una muestra del producto final. Se realizó el recuento de mohos y levaduras (FIL94B:1990) y Staphylococcus coagulasa positiva (FIL145:1990), considerando las exigencias establecidas para el dulce de leche en el Código Alimentario Argentino (CAA), Capítulo VIII, artículo 592 (Resolución conjunta SPRyRS y SAGPyA N°33/2006 y N°563/2006). 22 5. RESULTADOS 5.1. Sala de elaboración de dulce de leche tradicional: Equipos del proceso A partir de la observación “in situ” del proceso de elaboración del dulce de leche tradicional se identificaron los siguientes equipos: Tanque de recepcióny pretratamiento de la leche (Figura 2). Bomba mezcladora de sólidos y líquidos (Figura 2). 3 pailas para la elaboración del dulce de leche con doble camisa para la inyección de vapor (Figura 3). Escalera y plataforma de acceso a las pailas. 3 tanques de leche (capacidad de 100 litros) (Figura 3). Batch enfriador con doble camisa y agitador (Figura 4). Envasadora. Balanza/mesa. Todos los equipos son de acero inoxidable. Figura 2. Tanque de recepción de leche y bomba mezcladora en sala de elaboración de dulce de leche. 23 Figura 3. Pailas y tanques de leche en sala de elaboración de dulce de leche. Figura 4. Batch enfriador en sala de elaboración de dulce de leche. 24 5.2. Flujograma y memoria operativa En la Figura 5 se muestra el flujograma del proceso de elaboración del dulce de leche tradicional. Figura 5. Flujograma: Proceso de elaboración del dulce de leche tradicional. 25 Memoria operativa del proceso de elaboración del dulce de leche tradicional: 1. Recepción de la leche y control de calidad: se recibe la leche y se realiza el control de calidad de la materia prima, asegurándose que no tenga una acidez mayor a 18 °D, sea estable a la prueba de alcohol 70 %, no presente inhibidores, se encuentre a una temperatura menor a 5 °C y no tenga más de 48 h de almacenada. 2. Recepción de ingredientes, aditivos y coadyuvantes: se recepciona la sacarosa y el jarabe de glucosa, los aditivos (sorbato de potasio y esencia de vainilla) y los coadyuvantes (β-galactosidasab (lactasa) e hidróxido de sodio). 3. Recepción de envases primarios: se recepcionan potes de plástico de 400 g y potes de cartón de 500 g. 4. Almacenamiento de la leche: se almacena la leche en los tanques de leche. 5. Almacenamiento de ingredientes, aditivos y coadyuvantes: luego de la recepción se almacenan en el sector de ingredientes y aditivos. 6. Almacenamiento de envases primarios: luego de la recepción se almacenan en palets en el sector de envases primarios. 7. Estandarización e higienización: la leche se estandariza con una relación grasa/proteína de 1. 8. Pasteurización: la leche se pasteuriza a una temperatura de 72 °C durante 15 segundos, luego se envía al tanque receptor de leche ubicado en la sala de elaboración del dulce de leche y allí se enfría hasta alcanzar una temperatura de 40 °C. 9. Enfriado: luego de la pasteurización, en el tanque receptor la leche se enfría hasta alcanzar una temperatura de 40 °C. 10. Deslactosado y neutralización: se hidroliza el 30 % de la lactosa de la leche mediante el agregado de la enzima lactasa a 40 °C durante 2 h. Luego, se corrige la acidez hasta alcanzar entre 10 y 11 °D, utilizando hidróxido de sodio (25 %). 11. Caramelización: el proceso de caramelización comienza mezclando 100 litros de leche en cada paila con 100 kg de sacarosa. El sector cuenta con un 26 total de tres pailas. Se deja disolver unos minutos y se purgan los desagotes de las pailas, se abre el vapor y se comienza con la cocción. El tiempo estimado es de 50 minutos, finaliza cuando baja el volumen de leche y se obtiene el color del caramelo deseado. 12. Concentración: la mezcla se va dosificando por goteo incorporando de a 50 litros de leche cada 25 minutos aproximadamente, hasta alcanzar los 500 litros de leche total por paila. Al finalizar el agregado total de la leche comienza la etapa de concentración de la mezcla. Durante la cocción, cuando el dulce llega a los 60-61 °Brix se le incorpora el jarabe de glucosa que debe estar a unos 60-70 °C para lograr una correcta homogeneización. La cocción continúa hasta alcanzar los 68 °Brix. Esta etapa dura 4 horas. Cuando se alcanza el punto final de la concentración, el vapor se cierra y se procede a la descarga del dulce al batch enfriador. 13. Enfriamiento: se baja la temperatura del dulce y cuando se alcanzan los 70- 65 °C se agrega la esencia de vainilla y el sorbato de potasio agitando continuamente para lograr una correcta homogeneización. 14. Envasado: se realiza el envasado a 65 °C en potes de plástico de 400 g o en potes de cartón de 500 g 27 Procedimientos Operativos Estandarizados de Saneamiento en la sala de elaboración de dulce de leche: En la Tabla 1 se muestra un resumen de los procedimientos de saneamiento establecidos en el plan POES de la empresa para la sala de elaboración de dulce de leche. Tabla 1. Procedimientos Operativos Estandarizados de Saneamiento: Sala de elaboración de dulce de leche. Sector/ Frecuencia Descripción de la tarea Material a utilizar Tanque de recepción de leche Frecuencia diaria Enjuagar el tanque con agua para eliminar los restos de leche. Preparar una solución de 33 kg de detergente alcalino en 800 litros de agua y calentar hasta 70 °C. Hacer recircular por las cañerías y los tanques de leche que se encuentran sobre cada paila, durante 15 minutos, luego desagotar la solución en las pailas dulceras. Enjuagar con abundante agua el tanque de leche y hacer recircular por las cañerías para eliminar los restos de detergente. Preparar una solución con 24 kg de detergente ácido en 800 litros de agua, calentar hasta 65°C y hacer recircular durante 15 minutos, luego desagotar en las pailas dulceras. Enjuagar el tanque y las cañerías con agua. Cepillo Agua caliente Detergente alcalino Detergente ácido Tanques receptores de leche (ubicados sobre las pailas) y manguera de descarga Frecuencia diaria Lavar con agua, detergente y cepillo para eliminar los restos de leche. Enjuagar. Hacer pasar la solución de detergente alcalino y detergente ácido antes de descargar a las pailas. Lavar las mangueras de descarga a las pailas y las mangueras de nivel con cepillo, agua y detergente. Enjuagar. Cepillo lava tanque Detergente Agua caliente Detergente alcalino Detergente ácido Pailas dulceras, enfriador, caño de descarga y filtros. Pailas: Realizar un enjuague con agua (50-55 °C) para eliminar los restos de dulce. Agregar la solución de detergente alcalino en cada paila, proveniente del circuito de lavado de cañerías, y calentar a 100 ºC. Dejar en contacto 20 minutos, Cepillo lava tanque Detergente alcalino 28 Frecuencia diaria con agitación continua. Realizar limpieza manual con cepillo. Enjuagar con agua a temperatura ambiente durante 10-15 minutos. Agregar en cada paila la solución de detergente ácido a 65ºC y dejar en contacto 20 minutos, con agitación continua. Realizar una limpieza manual con cepillo y finalmente, enjuagar con agua potable a temperatura ambiente para eliminar los restos de solución. Enfriador: Realizar un enjuague con agua caliente y cepillar para eliminar los restos de dulce. Enjuagar. Hacer circular las soluciones de detergente alcalino y detergente ácido, proveniente de la limpieza de las pailas. Realizar una limpieza manual con cepillo, del enfriador y del caño de descarga. Enjuagar con agua para eliminar los restos de solución detergente. Filtros: Los filtros se sacan y se enjuagan para eliminar los restos de dulce. Detergente ácido Agua caliente Cono mezclador Frecuencia diaria Se limpia con agua, detergente y esponja verde. Detergente Esponja Utensilios, balde, escalera y soportes Frecuencia diaria Lavar con cepillo y solución detergente para eliminar los restos de dulce de pisos y plataforma. Enjuagar. Los baldes deben quedar limpios y los trapos en agua clorada. Cepillo Detergente Refractómetro Frecuencia diaria Lavar con un paño húmedo suave, secar con servilleta, teniendo la precaución de no rallar la superficie. Paño Servilletas Pisos Lavar con solución dedetergente y agua. Enjuagar. Clorar (100 ml de cloro en balde de 20 litros). Detergente Cloro Agua 29 A partir de la observación de las tareas de saneamiento se pudo verificar que las actividades llevadas a cabo en el sector se realizan de acuerdo a lo establecido en el documento escrito del plan POES, respetándose los procedimientos, los productos y sus concentraciones, temperaturas y los tiempos. Frecuencia diaria Mesa de envasado/Bala nza Frecuencia diaria Limpiar con esponja verde y detergente. Enjuagar Esponja verde Detergente Agua Depósito de insumos Frecuencia semanal Lavar el piso con agua y detergente. Enjuagar. Clorar. Ordenar y limpiar la estantería de insumos. Esponja verde Detergente Agua Paredes, escaleras, soportes Frecuencia semanal Espumar con detergente alcalino y detergente ácido, y realizar la limpieza con cepillo/esponja. Enjuagar con agua. Cepillo Esponja verde Detergente alcalino Detergente ácido Equipos y superficies de acero inoxidable (pailas, tanques de leche, cañerías, enfriador, cono mezclador, balanza, mesada) Frecuencia semanal Espumar con detergente alcalino al 4 % (2 kg en 50 litros de agua) todas las superficies de acero inoxidable y limpiar con esponja verde para eliminar los restos de materia orgánica y de sarro que se forma sobre la superficie externa. Enjugar con agua a temperatura ambiente. Repetir el proceso de espumado con DEPTACID SM 4 % (2 kg de producto en 50 litros de agua) Esponja verde Detergente alcalino Detergente ácido Máquina de espumado 30 5.3. Inspección visual Luego de la limpieza, no se observaron restos de alimentos, de productos químicos utilizados en la limpieza, ni otro tipo de suciedad en ninguna de las superficies de los equipos evaluados (Figuras 6, 7 y 8). Figura 6. Interior del tanque de leche. 31 Figura 7. Interior de paila. Figura 8. Interior del tanque enfriador. 5.4. Análisis microbiológicos de superficies y monitoreo ambiental En relación a los análisis microbiológicos (aerobios mesófilos totales, mohos y levaduras, coliformes y Escherichia coli) de las diferentes superficies evaluadas, no hubo desarrollo o estuvieron por debajo del límite de detección de los métodos. La legislación argentina vigente no establece referencias microbiológicas para evaluar la higiene de las superficies en los establecimientos de alimentos. En estudios previos, conducidos para evaluar la implementación y eficacia de los POES, se pudieron observar distintos criterios de aceptabilidad para superficies (Agüeria et al., 2020). En el caso de superficies de acero inoxidable, los resultados reportados por Agüeria et al. (2021), en plantas pesqueras, indicaron que el valor de 10 UFC de mesófilos/cm2 podría ser tomado como criterio de aceptabilidad dado que la mayoría de las superficies analizadas estuvieron por debajo de dicho valor. En un estudio realizado en queserías, Carrascosa et al. (2012) consideraron como satisfactorios los recuentos menores a 5 UFC/cm2 de aerobios totales. Losito et al. (2017), evaluaron superficies en contacto con alimentos (entre ellos productos lácteos) en diferentes puntos de ventas, donde se analizaron superficies de acero 32 inoxidable, entre otras. Estos autores, clasificaron las superficies como: 'conforme' (no detectable–49 UFC/cm2 de aerobios totales), 'conforme-mejorable' (50–499 UFC/cm2) y 'no conforme' (≥500 UFC/cm2). Estos criterios de cumplimiento fueron seleccionados por ser prácticos, alcanzables y verificables en la industria alimentaria y en los sistemas de distribución de alimentos. En relación a la bibliografía consultada los resultados obtenidos en este estudio fueron satisfactorios, encontrándose por debajo de los límites establecidos en los trabajos de investigación mencionados. El monitoreo ambiental realizado a partir del análisis de mohos y levaduras dio como resultado recuentos ≤ a 4 UFC/15 min de exposición. 5.5. Análisis microbiológico de producto final Los resultados microbiológicos del dulce de leche tradicional se encontraron dentro de los criterios de aceptación establecidos en el CAA, capítulo VIII (Tabla 2). Tabla 2. Análisis microbiológico de producto final. Indicador Resultado (UFC/g) Criterios de aceptación (CAA) Staphylococcus coag. Positiva - n = 5 c = 2 m=10 M=100 Mohos y levaduras - n = 5 c = 2 m = 50 M = 100 6. CONCLUSIÓN Los resultados obtenidos a partir de la inspección visual y de los análisis microbiológicos de superficies en contacto con el alimento, demuestran que los Procedimientos Operativos Estandarizados de Saneamiento implementados en la sala de elaboración del establecimiento son eficaces, generando condiciones de higiene para la elaboración de productos inocuos y de calidad. 33 7. BIBLIOGRAFÍA - Agüeria, D.; Libonatti, C.; Baldovino, M.; Martínez Souto, L.; Ruau, M.; Terni, C.; Civit, D. (2021). Evaluación de Procedimientos Operativos Estandarizados de Saneamiento (POES) en plantas pesqueras. La Industria Cárnica Latinoamericana Nº 220: 48-53. - Agüeria, D.A; Libonatti, C; Civit, D. (2020). Cleaning and disinfection programmes in food establishments: a literature review on verification procedures. Journal of Applied Microbiology 131, 23-35. - ANMAT (Administración Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnología Médica). (2008). Higiene e Inocuidad de los Alimentos: Procedimientos Operativos Estandarizados de Saneamiento (POES). El Boletín del Inspector Bromatológico N° 9. Disponible en el URL: http://www.anmat.gov.ar/webanmat/Publicaciones_inspectorBromatologico_ 08.asp (Fecha de consulta: 16/07/2021). - Berra, C; Di Bartolo, E. (2014). Gestión de la Calidad y Seguridad Alimentaria en la Industria Láctea. 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