Practica7_Equipo1

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UNIVERSIDAD VERACRUZANA 
 FACULTAD DE BIOANÁLISIS 
 
EXPERIENCIA EDUCATIVA 
TOXICOLOGÍA 
 
DOCENTE 
ISELA SANTIAGO ROQUE 
 
PRÁCTICA 7 
DETERMINACIÓN DE ETANOL EN ORINA 
 
EQUIPO 1 
DANIELA FALFÁN LUCAS 
ARANTXA ROCHELY JIMÉNEZ GARCÍA 
FREDDY FRANCISCO SALINAS RODRÍGUEZ 
 
13/09/2022 
Sustento teórico 
Se estima que el uso nocivo del alcohol causa cada año 3 millones de muertes en 
el mundo, aproximadamente representa el 5 % de todas las defunciones con sus 
repercusiones en carga de salud a nivel individual, familiar, social y económica. 
El consumo de alcohol incrementa el riesgo de provocar una amplia variedad de 
problemas sanitarios de manera dosis dependiente, sin que existan evidencias de 
un efecto umbral. Para el bebedor cuanto mayor sea la cantidad de alcohol 
consumido, mayor es el riesgo. Se atribuyen en términos de salud individual más de 
60 enfermedades y lesiones causadas por el consumo de alcohol. 
El informe sobre la situación mundial del alcohol y la salud de la OMS plantea que, 
en el año 2016 de todas las muertes atribuibles al consumo de alcohol en todo el 
mundo, el 28,7 % se debió a traumatismos, el 21,3 % a enfermedades digestivas, 
el 19 % a enfermedades cardiovasculares, el 12,9 % a enfermedades infecciosas y 
el 12,6 % a cánceres. El consumo de alcohol puede tener repercusiones no solo 
sobre la incidencia de enfermedades, traumatismos y otros trastornos de salud, sino 
también en la evolución de los trastornos que padecen las personas y en sus 
resultados. (Zelarayán et al., 2022) 
El consumo de alcohol se ha convertido en un problema médico legal, por lo cual 
es importante su determinación, con la finalidad de contribuir al esclarecimiento de 
hechos delictivos y una mejor impartición de justicia. Para a determinación de etanol 
en las tres matrices de interés que son: plasma, orina y humor vítreo. (Gob. Mx, 
2022) 
El consumo de etanol incrementa la acumulación de acetaldehído y especies 
reactivas de oxígeno, provocando daño a nivel cerebral. Dos importantes 
neurotransmisores involucrados en el daño neuronal son el ácido γ-amino butírico 
(GABA), un neurotransmisor inhibitorio, y el glutamato, el más importante 
neurotransmisor excitatorio. Las afectaciones del receptor GABAérgico contribuyen 
a la tolerancia y dependencia al etanol y síntomas de hiperexcitabilidad durante la 
abstinencia, mientras que las afectaciones del receptor NMDA glutamatérgico 
contribuyen a la tolerancia y dependencia al etanol así como al establecimiento de 
los síntomas de abstinencia. Las afectaciones en el metabolismo del etanol 
desencadenan alteraciones conductuales, ya que la disfunción de la enzima 
acetaldehído deshidrogenasa provoca acumulación a nivel cerebral de 
acetaldehído, responsable en gran medida del daño cerebral ocasionado durante el 
alcoholismo. (Díaz y Calderín, 2020) 
La concentración de alcohol en la sangre es variable dependiendo el metabolismo 
del individuo. Los parámetros específicos del individuo, como el tamaño físico, el 
peso, el nivel de actividad, los hábitos alimenticios y la tolerancia al alcohol, todo 
esto afecta el nivel de acetilación. La determinación del alcohol etílico en la orina, la 
sangre y la saliva se utiliza comúnmente para medir el consumo legal, la intoxicación 
por alcohol, etc. Las técnicas de cromatografía de gases y los métodos enzimáticos 
están disponibles comercialmente para la determinación de alcohol etílico en fluidos 
humanos. 
Los efectos que se producen de acuerdo a la alcoholemia serían: entre 0 a 0.49 
habría ausencia de intoxicación, no se observan síntomas, excepto en personas 
sensibles; entre 0.50 a 0.99 habría una desinhibición de las funciones síquicas 
superiores, alteraciones sensoriales, disminución de la concentración síquica, 
alteración de la asociación de ideas y lentificación de las reacciones sicomotoras; 
entre 1 y 3 tenemos una ebriedad clínica prácticamente tal, con una desinhibición 
franca de las funciones síquicas superiores, grave compromiso de la autocrítica, 
compromiso notorio de las facultades intelectuales (juicio, atención, comprensión), 
trastornos motores, limitación de la fuerza muscular, descoordinación de los 
movimientos, temblor, marcha oscilante, alteraciones del lenguaje, alteraciones 
sensoriales profundas que distorsionan las percepciones visuales y auditivas 
principales, disminución de la sensibilidad y trastornos cerebelo-laberínticos 
(vértigo); sobre tres gramos por mil estaría la ebriedad comatosa, confusión, 
estupor, inconciencia, anestesia, abolición de los reflejos, parálisis, hipotermia y 
muerte. (Jorquera y Arismendi, 2019) 
Objetivo 
Determinar la presencia de etanol en una muestra problema y su concentración en 
la misma. 
Descripción de la práctica 
En esta experiencia educativa el alumno tiene que identificar a un sujeto intoxicado 
con etanol, para luego recolectar su orina y hacer una cuantificación de etanol en la 
muestra mediante un proceso cualitativo, posteriormente debe hacer un examen 
cuantitativo de la misma muestra con la finalidad de calcular la concentración de 
etanol. 
Técnica 
Método cualitativo 
1. Traer la orina al laboratorio con 15 minutos de anticipación. 
2. Preparar el lugar de trabajo limpiando las mesas, solicitando el material de 
cristalería y el biológico. 
3. Rotular los tubos y prepararlos de la siguiente forma: 
 
4. Mezclar cada tubo para tener preparaciones homogéneas. 
5. Incubar a 37°C por 2 a 3 minutos. 
6. Medir absorbancias a 450 nm. 
7. Incubar a 3° C por 5 minutos. 
8. Realizar lectura cada minuto hasta antes que exceda la medida final. 
9. Calcular la actividad enzimática de la penúltima lectura, comparándola con el 
estándar. 
Mientras que, en la muestra de orina 
1. En un tubo, agregar Etanol + Agua destilada + K2Cr2O7 a los siguientes 
tubos 
• Control Positivo 250 ul 750 ul 0.5 ml 
Reactivo Muestra y patrones Muestra blanco 
Buffer 82 ul 92 ul 
Revelador 8 ul 8 ul 
2M Etanol 10 ul -- 
• Control Negativo --- 1 ml 0.5 ml 
• Problema 1 1 ml --- 0.5 ml 
2. Tapar cada tubo con papel aluminio y colocar los tubos en baño maría 
durante 2 minutos. Se desarrolla un color azul-verdoso en caso positivo. 
Material 
• Micropipeta de 10-100 ul 
• Puntas para micropipeta 
• 3 tubos de Eppendorf 
• 1 gradilla para tubos Eppendorf 
Equipo 
• Baño María 
• Cronómetro 
Material biológico 
• Orina de humanos intoxicado con etanol. 
Reactivos 
• Dicromato de potasio (Pesar 2.5 g de K2Cr2O7 y solubilizarlo en 20 mL de 
ácido sulfúrico al 50%, aforar a 100 mL con ácido sulfúrico 50%). 
• Etanol 
• Agua destilada 
• Kit de alcohol deshidrogenasa 
 
Resultados 
Absorbancia 
1. 0.030 
2. 0.142 
Absorbancia para medir la actividad enzimática 
1. 0.038 
2. 0.047 
3. 0.096 
4. 0.122 (Este es el penúltimo) 
5. 0.140 
 
➢ Actividad alcohol deshidrogenasa: 
𝛥450 = (𝐴450)𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙 − (𝐴450)𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 
0.122- 0.030= 0.092 𝛥450 
➢ Presencia de etanol en orina 
Problema 1= Positivo 
Discusión 
Los resultados obtenidos en la práctica son los esperados a compararse con la 
literatura. 
La muestra de orina dio positivo en presencia de etanol, al virar a un color azul- 
verdoso. 
Autoevaluación 
1. Explica a qué se debe la presencia de un color verde azul en la prueba presuntiva 
positiva. 
Esto es porque los alcoholes primarios, tal como el etanol, frente al dicromato de 
potasio, generan aldehídos. Entonces, se observa la reacción mediante el cambio 
de color a verde debido a la reducción del cromo. 
Referencias 
1. Díaz-Soto MT y. C-MJM. Síndrome de abstinencia alcohólica: Resultado del 
estrés oxidativo y desequilibrio neuronal. Estado del arte. Rev Biomed 
[Internet]. 2020;31(2). Disponible en: 
https://www.medigraphic.com/pdfs/revbio/bio-2020/bio202e.pdf 
2. Jorquera H y Arismendi S. Panel IV: Exámenes de Laboratorio y Alcoholemia 
[Internet]. vol. 2. 2019[citado el 27 de septiembre de 2022]. Disponible en: 
https://www.redalyc.org/pdf/197/19720107.pdf 
3. Revista de Revisión bibliográfica para el análisis de etanol (alcohol etílico) en 
orina, humor vítreo y plasma en cadáveres [Internet]. Gob.mx. [citado el 27 
de septiembre de 2022]. Disponible en: 
https://revistaciencias.inacipe.gob.mx/index.php/02/article/view/505/405 
4. Zelarayán M, Garré DL. Consumo de alcohol y salud [Internet]. 
Cardiosalud.org. [citado el 27 de septiembre de 2022]. Disponible en: 
https://cardiosalud.org/wp-content/uploads/2020/02/Alcohol-y-salud_web-
1.pdf 
https://www.medigraphic.com/pdfs/revbio/bio-2020/bio202e.pdf
https://www.redalyc.org/pdf/197/19720107.pdf
https://revistaciencias.inacipe.gob.mx/index.php/02/article/view/505/405
https://cardiosalud.org/wp-content/uploads/2020/02/Alcohol-y-salud_web-1.pdf
https://cardiosalud.org/wp-content/uploads/2020/02/Alcohol-y-salud_web-1.pdf