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El ADNc procedente de genes eucarióticos contiene sólo
la secuencia de los exones, incluyendo el marco de lectura
que codifica la proteína correspondiente, y es muy útil cuan-
do se clona el gen para estudiar la función o la secuencia de
dicha proteína.
Sin embargo, en otros muchos casos es conveniente clo-
nar fragmentos de ADN derivados del genoma de un orga-
nismo determinado. El ADN genómico se corta con una o
varias endonucleasas de restricción, dando lugar a una
colección de fragmentos de tamaño apropiado. Tras su
unión al vector y la transformación de bacterias huéspedes,
se obtiene una población de bacterias transformadas en la
que cada componente porta una molécula de ADN recombi-
nante. El genoma de partida estará prácticamente represen-
tado en dicha población, denominada biblioteca genómica o
genoteca. 
A partir de esta genoteca, se podrá seleccionar un clon
que posea un ADN recombinante específico, y cultivarlo
posteriormente para amplificarlo. Cuando el material ini-
cial son los ADNc sintetizados, a partir de los ARNm
correspondientes a los genes que se expresan en el organis-
mo de partida, se obtiene una genoteca de ADNc, con
menos componentes que las genotecas genómicas. El
ADNc de un gen determinado puede utilizarse como sonda
para seleccionar las secuencias genómicas correspondien-
tes en una genoteca genómica. Los clones genómicos resul-
tantes serán mayores que el ADNc, al incluir las secuencias
de los exones e intrones.
Anális is molecular del genoma | 409
Figura 23-6. Ejemplos de vectores plasmídicos utilizados para
generar ADN recombinante. El plásmido pBR322 contiene tres
elementos fundamentales para su función: un origen de replica-
ción que permite la replicación del plásmido y, por tanto, del
ADN recombinante generado en el interior de una bacteria;
algún gen o genes que confieren resistencia para algún antibió-
tico (ampicilina y tetraciclina, en este caso) y dianas de restric-
ción (tres en este caso: PstI, EcoRI y Bam HI) para linearizar el
plásmido y poder unirlo al inserto. Un cósmido es un plásmido
que contiene elementos de vectores virales como las secuencias
cos del fago λ, que permiten empaquetar el ADN recombinante
dentro de partículas virales.
EcoRI
BamHI
Rtetraciclina
Rampicilina
PstI
pBR322
ori
EcoRI
BamHI
Rtetraciclina
Rampicilina
PstI
ori
Cósmido
cos
Figura 23-7. Síntesis enzimática de ADN complementario. A
partir de moléculas de ARNm eucariótico se puede generar ADN
bicatenario con una cadena similar a la del ARNm unida a su
complementaria (ADNc). En un primer paso, utilizando oligo(dT)
(que se aparea con la cola de poli(A) del ARNm) como cebador, la
enzima transcriptasa inversa es capaz de crear una cadena de ADN
complementaria al ARNm. Tras degradar la cadena de ARN del
híbrido ADN/ARN, por medio de RNAsa H o hidrólisis alcalina,
se genera sobre el extremo 3’ de la monohebra de ADN una cola
de poli(C) mediante incubación con la transferasa terminal y
dCTP. Tras incubar con oligo(G) y ADN polimerasa, se generará
una cadena de ADN complementaria al anterior, obteniéndose,
por tanto, el ADNc.
5’ 3’
5’ 3’
ARNm
ARN
Transcriptasa inversa
Oligo(dT)
dNTP
ADN
ARN
ADN
ARNasa H
o
hidrólisis alcalina
ADN polimerasa
CCCC
CCCC
GGGG
5’ 3’
5’
5’
5’
5’
5’
3’
3’
3’
3’
3’
Transferasa terminal CTP
dNTP
Poli(G)
TTT(T)nTTTAAA(A)nAAA
AAA(A)nAAA
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