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Bacter 2019 Plantae Animalia Bacter 2019 Aristóteles Ernst Haeckel (S. XIX) Tercer Reino: Protista Organismos unicelulares intermedios animal/vegetal Bacter 2019 Bacter 2019 El cuarto reino: Monera, Bacterias y algas verde-azuladas, células procariotas: sin núcleo celular definido ni organelos Bacter 2019 R. H. Whittaker en 1969 el quinto reino: Fungi Poseen células eucarióticas, tienen núcleos y paredes celulares pero carecen de pigmentos fotosintéticos. En 1978 Whittaker y Margulis conservaron estos mismos 5 reinos pero incluyeron a las algas en los Protistas, denominándolo Protoctista. Bacter 2019 Tradicionalmente las células se han clasificado en eucariotas (eucariontes) y procariotas (procariontes). La Biología Celular actualmente propone una tercera categoría: las postcariontes para definir aquellas células que una vez maduras no requieren del núcleo para desarrollar sus funciones, por ejemplo los eritrocitos y las plaquetas, aunque sus precursores inmaduros si presentan núcleo. Bacter 2019 • Monera, incluye a todos los microorganismos procariotas. • Protista, incluye a todos los microorganismos eucariotas unicelulares u ocasionalmente multicelulares. • Fungi, incluye a los hongos en sus diversas formas. •Plantae, corresponde al reino vegetal • Animalia, corresponde al reino animal R.H. Whittaker: CINCO REINOS Bacter 2019 En 1977 Carl Woese propuso una categoría superior a reino: DOMINIO Tres linajes evolutivos; ARCHAEA, BACTERIA y EUKARYA. Las características para separar estos dominios son el tipo de célula, compuestos que forman la membrana y estructura del ARN Bacter 2019 • Bacteria: procariotas unicelulares cuya pared celular contiene peptidoglucano • Arquea: procariotas unicelulares cuya pared celular no contiene peptidoglucano • Eukarya: todos los eucariotas Carl Woese TRES DOMINIOS Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 En la taxonomía bacteriana los niveles o rangos utilizados son los siguientes (en orden ascendente): ● especie ● Género ● FAMILIA ● ORDEN ● CLASE ● PHYLUM ● REINO ● DOMINIO Bacter 2019 Bacter 2019 BACTERIAS • Procariotas (procariontes) • Microorganismos unicelulares que se reproducen por fisión binaria (división simple) • Muchas tiene vida libre • Contienen información genética, sistemas de producción de energía y sistemas biosintéticos para crecimiento y reproducción Bacter 2019 Células Procariontes • No son compartamentalizadas – No hay membrana nuclear, ni mitocondrias, ni RE, ni aparato de Golgi, ni fagosomas o lisosomas. • Poseen un sólo cromosoma circular – El cromosoma está unido a un sitio específico en la membrana celular (mesosoma) • Las membranas bacterianas generalmente no contienen esteroles (ejemplo: colesterol) Bacter 2019 Estructura nuclear y función: -Membrana nuclear -Nucléolo -Ácido desoxirribonucleico (ADN) Ausente Ausente Una sola molécula, no asociada a histonas Presente Presente Varios cromosomas, asociados con histonas División Fisión binaria No hay mitosis, ni meiosis Mitosis y meiosis Estructura citoplasmática y organización: -Membrana citoplasmática -Ribosomas -Sistema respiratorio Generalmente carece de esteroles 70 S En la membrana plasmática Presenta esteroles 80 S En las mitocondrias Pared celular Estructura compleja, con peptidoglucano como componente Cuando la presentan, no contiene peptidoglucano Mecanismos metabólicos Gran variedad, en particular reacciones anaeróbicas que generan energía. Algunas fijan Nitrógeno La glicólisis es la vía para obtener energía en condiciones anaeróbicas Tamaño En general, menor de 2 μm de diámetro Desde 2 μm hasta más de 100 μm de diámetro Ejemplos Bacterias Algas verde-azules Protozoarios Hongos Algunas algas DIFERENCIAS ENTRE CELULAS PROCARIONTES Y EUCARIONTES PROCARIONTES EUCARIONTES Bacter 2019 Bacter 2019 Estructuras bacterianas Estructuras permanentes o constantes: • Pared celular* • Membrana celular • Ribosomas • Material genético Estructuras variables o accesorias: • Flagelos • Fimbrias o pilis • Cápsula • Esporas Bacter 2019 Bacter 2019 Pared celular gramnegativa • Formada por varias zonas: – Membrana citoplásmica – Espacio periplásmico – Peptidoglicano – Membrana externa que contiene fosfolípidos, el lipopolisacárido (LPS) característica de GramNeg y proteínas (de membrana externa) Bacter 2019 Bacter 2019 • Situada por fuera de la membrana celular • Única capa homogénea de 20 a 80 nm de espesor • Peptidoglicano (mureína) como constituyente principal – Polímero de N-acetil glucosamina y N-acetil murámico y varios aa: L-alanina, ácido D-glutámico, ácido meso-diaminopimélico y D-alanina • Tiene unidos ácidos teicoicos y lipoteicoicos (polímeros de glicerol y ribitol unidos por grupos fosfatos) Pared celular grampositiva Bacter 2019 Pared celular Bacilos Alcohol Acido Resistentes Bacter 2019 • Bacteria modelo: Género Mycobacterium • Gran cantidad de glicolípidos – Complejo lipidico arabinogalactano – Ácidos micólicos • No tingibles con Gram Bacter 2019 BENEFICIOS Ultraestructura bacteriana Ubicación definitiva como procariotas Relación bacteria- hombre Flora normal y patógena Estructura antigénica bacteriana Avances en vacunas Composición bioquímica y metabolismo bacterianos Mecanismos de acción de nuevos antimicrobianos Estudio del material genético bacteriano Técnicas en investigación y diagnóstico Bacter 2019 Requerimientos de O2 Forma • Esférica: Cocos • Cilíndrica: Bacilos • Espiral: Espirilos Bacter 2019 Bacter 2019 • Bacilos Bacter 2019 • Formas espirales: Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Tinción Gram •Cristal violeta •yodo lugol •alcohol acetona •safranina Bacter 2019 Tinción Gram 1. Aplicar cristal violeta Grampositivo Gramnegativo Bacter 2019 Tinción Gram 1. Aplicar cristal violeta Grampositivo Gramnegativo Bacter 2019 Tinción Gram 3. Decolorar con alcohol-acetona Grampositivo Gramnegativo Bacter 2019 Tinción Gram 4. Aplicar safranina Grampositivo Gramnegativo Bacter 2019 Tinción Gram Resultado final: Grampositivos Gramnegativos Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 IMPORTANCIA DE LA FLORA NORMAL Efectos directos: •Producción de bacteriocinas •Producción de metabolitos tóxicos •Reducción del potencial redox •Consumo de nutrientes esenciales •Competencia por receptores Efectos indirectos: •Aumento de la producción de anticuerpos. •Estímulo de la fagocitosis •Aumento de la producción de interferón. •Deconjugación de ácidos biliares. Bacter 2019 FLORA DE LA PIEL •Staphylococcus (estafilococos): • epidermidis y otros coagulasa - (90 % del total de gérmenes aerobios de la piel). • aureus: presente en cara y manos de "portadores nasales" de dicho germen. •Streptococcus (estreptococos) •Difteroides (corinebacterias), en folículos pilosos, glándulas sebáceas y sudoríparas. • Propionibacterium acnes •Micrococcus •Candida: sobre todo en personal sanitario ZONAS DE LA PIEL CON MAYOR FLORA •Cuero cabelludo, cara y oído. •Axilas. •Regiones urinarias y anal. •Plantas y pliegues interdigitales de los pies. Bacter 2019 FLORA DE LA NARIZ •Staphylococcus •aureus (20 % de la población). •epidermidis •Micrococcus •Streptococcus •Difteroides FLORA DE LA CONJUNTIVA •Staphylococcus: epidermidis aureus. Streptococcus Propionibacterium acnes Haemophilus spp. Neisserias spp. FLORA DE LA BOCA La cavidad oral es uno de los hábitats microbianos mas complejos y heterogéneos del cuerpo. Streptococcus del grupo viridans: mitis. mutans (relacionados con las caries). sanguis. Otros Streptococcus no viridans. Bacteroides. Fusobacterium.Actinomyces. Trichomonas tenax. Candida spp. La superficie de los dientes y los surcos gingivales contienen un gran número de bacterias anaerobias. Bacter 2019 FLORA FARINGEA Streptococcus: grupo viridans S. pyogenes (Beta Hemolítico del grupo A) S. pneumoniae (neumococo) Staphylococcus: epidermidis aureus Especies de Neisseria. A veces: Neisseria meningitidis Haemophilus influenzae Algunos de los componentes de la flora en individuos sanos son potencialmente patógenos (ej. neumococo, S. pyogenes, Haemophilus) FLORA DE LA URETRA ANTERIOR •Staphylococcus epidermidis. •Estreptococos, sobre todo alfa hemolíticos. •Enterococcus faecalis •En ocasiones: •Corinebacterias y bacilos gramnegativos. Bacter 2019 FLORA DE LA VAGINA Experimenta cambios en su flora con la edad. Antes de la pubertad predominan Staphylococcus, Streptococcus, Difteroides y Escherichia coli Luego de la pubertad predomina el Lactobacillus aerophillus Se encuentran algunos hongos incluyendo Candida, que puede proliferar para causar candidiasis si el pH vaginal aumenta y disminuyen las bacterias competidoras. El protozoo Trichomonas vaginalis se puede hallar en mujeres sanas FLORA DEL ESTOMAGO El estómago, por su acidez, puede considerarse una barrera contra la penetración de bacterias extrañas al tracto intestinal. La cantidad de bacterias presentes en el estómago es generalmente baja y, en sus paredes, podemos encontrar: Lactobacilos Streptococcus (Estreptococos) acidotolerantes Estas bacterias aparecen poco después del nacimiento, estando bien establecidas a la semana de vida. Bacter 2019 FLORA DEL INTESTINO DELGADO Lactobacilos Estreptococos Enterobacterias Especies de Bacteroides Candida spp. La primera parte del intestino delgado es muy ácida y se parece al estómago en su flora normal. A medida que el pH se hace alcalino aumenta el número de bacterias. FLORA DEL INTESTINO GRUESO (COLON) En el intestino grueso la gran mayoría de las bacterias son anaerobias 95 - 99 %. Especies de Bacteroides Especies de Fusobacterium Enterococcus faecalis Enterobacterias: Escherichia coli Especies de Klebsiella Salmonellas spp. Pseudomonas Eubacterias Bifidobacterias Lactobacillus Especies de Clostridium Staphylococcus aureus Estreptococos Candida spp. GERMENES PRESENTES EN LA MATERIA FECAL Especies de Bacteroides Bifidobacterias Eubacterias Coliformes Enterococcus faecalis Candida spp. En el intestino existen varios protozoos inocuos que pueden ser considerados parte de la flora normal a pesar de ser animales ej.: Entamoeba coli Bacter 2019 Bacter 2019 ¿Qué son los probióticos? Son bacterias (cultivos o mezclas de cultivos) que cuando son administradas en cantidades adecuadas, confieren un beneficio a la salud a través de la flora intestinal. Para que una bacteria sea considerada probiótico tiene que cumplir con las siguientes características: - Ser integrante normal de la flora humana - Ser resistente a la degradación por jugos gástricos y bilis - Ser capaz de colonizar el intestino - Que no cause efectos adversos - Que tenga efectos favorables comprobados científicamente ¿Cuáles son sus funciones? Interviene en los procesos digestivos, en la síntesis de vitaminas, en la regulación del sistema inmune, en el mantenimiento de la funcionalidad e integridad de la mucosa intestinal, y en la estimulación de los movimientos del intestino. Bacter 2019 ¿Cuáles son los beneficios de los probióticos? Bacter 2019 •Lactobacillus acidophilus •Lactobacillus casei var. Shirota •Lactobacillus fermentum •Lactobacillus casei •Lactobacillus johnsonii •Lactobacillus crispatus •Lactobacillus reuteri •Lactobacillus rhamnosus •Lactobacillus plantarum •Lactobacillus bulgaricus •Lactobacillus cellobiosus •Lactobacillus curvatus •Lactobacillus lactis cremoris •Lactobacillus GG •Bifidobacterium lactis •Bifidobacterium longum •Bifidobacteria adolescentis •Bifidobacteria animalis •Bifidobacteria infantis •Bifidobacteria bifidum •Streptococcus salivaris •Streptococcus faecium •Streptococcus diacetylactis •Streptococcus intermedius •Saccharomyces boulardii MICROORGANISMOS PROBIOTICOS Bacter 2019 Bacter 2019 • Patógeno es un microorganismo capaz de producir enfermedad • Patogenicidad es la capacidad que tienen los microorganismos de producir enfermedad en un organismo anfitrión • Patógeno oportunista: producen enfermedad en pacientes inmunocomprometidos • Virulencia es el grado o nivel de expresión de la patogenicidad Bacter 2019 Determinantes de una enfermedad infecciosa El agente patógeno debe ser capaz de: • Inicialmente ser transportado al anfitrión • Adherirse, colonizar o invadir al anfitrión • Multiplicarse o completar su ciclo vital sobre o dentro del anfitrión o de sus células • En principio, evitar los mecanismos de defensa del anfitrión • Poseer la capacidad mecánica, química o molecular para lesionar al anfitrión Bacter 2019 Transmisión del patógeno • Contacto directo : persona a persona • Indirectamente : – Medio ambiente – Superficies, aire – Tierra, agua y alimentos – Vectores – Fómites * Bacter 2019 Colonización Establecimiento del patógeno en el portal de entrada adecuado • Tejidos que están en contacto con el ambiente externo: tracto urogenital, digestivo, respiratorio y conjuntiva • Patógenos que infectan estas regiones desarrollan MECANISMOS DE ADHERENCIA a tejidos y habilidad para rebasar los mecanismos de defensa locales Bacter 2019 Antibiótico (del griego αντί - anti, "en contra" + βιοτικός - biotikos, "dado a la vida”) Sustancia química producida por un ser vivo o derivada sintética de ella que a bajas concentraciones mata o impide el crecimiento de ciertas clases de microorganismos sensibles, generalmente bacterias. Un antibiótico es bacteriostático si impide el crecimiento de los gérmenes, y bactericida si los destruye. Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Antibiótico Acción Inhibición de la síntesis de la pared celular Penicilina Cefalosporina Cefamicina Carbapenémicos Monobactam Unión a PFP y enzimas responsables de la síntesis de peptidoglicanos Vancomicina Isoniacida Etionamida Etambutol Cicloserina Polimixina Bacitracina Inhibe la elongación de la cadena de peptidoglicanos Inhiben la síntesis de ácido micólico Inhibe la síntesis de arabinogalactano Inhibe la elongación de la cadena de peptidoglicanos Inhibe la membrana bacteriana Inhibe la membrana citoplásmica bacteriana y transporta precursores de peptidoglicanos Inhibidores de β lactamasas Unión a β lactamasas y evita la inactivación enzimática del anillo β lactámico Inhibidores de la síntesis de proteínas Aminoglucósidos Tetraciclina Oxazolidiona Macrólidos Clindamicina Estreptograminas Provoca la liberación prematura de cadenas de péptidos aberrantes en el ribosoma 30s Bloquea la elongación polipeptídica en el ribosoma 302 Bloquea el inicio de la síntesis proteica en el ribosoma 50s Bloquean la elongación polipeptídica en el ribosoma 50s Inhibición de la síntesis de ácido nucleico Quinolona Rifampicina Rifabutina Metronidazol Unión a la subunidad de la ADN girasa Bloquean la transcripción uniéndose a la ARN-polimerasa ADN dependiente Rotura del ADN bacteriano (su metabolito tóxico) Antimetabolitos Sulfonamidas Dapsona Trimetoprim Inhibe la dihidropteroato sintetasa y bloquea la síntesis de ácido fólico Inhibe la dihidropteroato sintetasa Inhibe la dihidrofolato reductasa y bloquea la síntesis de ácido fólico Bacter 2019 Bacter 2019 Β-lactámicos Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Prueba de Kirby Bauer Requerimientos: • Agar de Mueller Hinton (pH 7.2 a 7.4/ prof. 4mm) • Solución salina estéril (tubos con 3 ml) • Caldo de Mueller Hinton (tubos con 3 ml) • Hisopos estériles • Sensidiscos individuales • Aplicadorde sensidiscos • Escala de Mc Farland Antibiogramas Bacter 2019 TUBO H2SO4 al 1% BaCl2 al 1% Suspensión bacteriana (x108) 1 9.9 0.1 3 2 9.8 0.2 6 3 9.7 0.3 9 4 9.6 0.4 12 5 9.5 0.5 15 6 9.4 0.6 18 7 9.3 0.7 21 8 9.2 0.8 24 9 9.1 0.9 27 10 9.0 1.0 30 Escala de Mc Farland Bacter 2019 Bacter 2019 Antibiogramas Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Factores del antimicrobiano • Farmacocinética • Unión a proteínas plasmáticas • Vías de administración • Acción bacteriostática o bactericida • Concentración en el sitio de la infección Factores de influencian la correlación de resultados antibiograma (in vitro) y respuesta clínica (in vivo) Factores del microorganismo •Virulencia •Alta concentración de bacterias •Infección mixta •Desarrollo de resistencia durante el Tx Factores del paciente •Enfermedad de base •Estado inmunológico •Formación de abscesos •Presencia de cuerpo extraño •Función renal y hepática •Cumplimiento del tratamiento Antibiogramas Bacter 2019 Bacter 2019 Género Staphylococcus Cocos grampositivos 0.5 a 1.5 µ de diámetro Disposición en racimos irregulares, solos o en cadenas cortas No forman esporas Inmóviles Catalasa positivos Anaerobios facultativos Bacter 2019 http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/5/57/Staphylococcus_aureus_01.jpg Bacter 2019 Bacter 2019 Toma de muestras: Hisopados Secreciones Líquidos biológicos Observación al microscopio: Cocos grampositivos (en racimos) Staphylococcus Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophyticus Especies de Staphylococcus de mayor interés clínico Pruebas de identificación: •Catalasa* •Coagulasa •Resistencia a Novobiocina Bacter 2019 Staphylococcus Catalasa: Bacter 2019 Staphylococcus Bacter 2019 Bacter 2019 Staphylococcus saprophyticus Novobiocina Sensible Resistente (<16mm) Bacter 2019 Staphylococcus Coagulasa Novobiocina Manitol S. aureus + S + S. epidermidis - S - S. saprophyticus - R d Bacter 2019 Bacter 2019 S. aureus: Piel:foliculitis, impétigo,furúnculos, celulitis, carbúnculos, infecciones de heridas en el post operatorio. Infecciones profundas: endocarditis, meningitis, artritis, neumonía, osteomielitis, piomiositis, sepsis e insuficiencia múltiple de órganos Enfermedad mediada por toxinas: intoxicación alimentaria, síndrome de escaldadura cutánea, síndrome de choque tóxico Staphylococcus Bacter 2019 Estafilococos coagulasa negativos: Infecciones de cuerpos extraños a permanencia: Prótesis de válvulas cardíacas, alambres y electrodos de marcapaso permanentes, injertos vasculares, derivaciones de LCR, catéteres de diálisis peritoneal, prótesis articulares y catéteres intravenosos Infecciones de vías urinarias: Nosocomiales (S. epidermidis) , Mujeres de consulta externa / VSA (S. saprophyticus) Otras: Endoftalmitis posoperatoria, endocarditis de válvulas nativas y osteomielitis Staphylococcus Género Streptococcus •Cocos grampositivos •En pares o cadenas cortas o largas •Catalasa negativos •Oxidasa negativa •Hábitat: •Flora de la boca y faringe de humanos y animales •Algunos en intestino, vagina y piel Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Género Streptococcus Clasificación según Lancefield Grupo y hemólisis Especie •Beta hemolíticos •Grupo A S. pyogenes •Grupo B S. agalactiae •Grupo C S. equisimilis, S. zooepidemicus o S. equi •Grupo D * •Grupo F S. anginosus •Grupo G Grupo G Bacter 2019 Género Streptococcus Clasificación según Lancefield Grupo y hemólisis Especie •No Beta hemolíticos (alfa/no) •Grupo B S. agalactiae •Grupo D Enterococos y No enterococos •No Grupo B o D S. pneumoniae, viridans, etc. Bacter 2019 Género Streptococcus Estreptococos del grupo D Enterococos: E. faecalis E. faecium E. avium No enterococos S. bovis S. mutans S. uberis Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Género Streptococcus Técnicas de aislamiento en agar sangre: Aislamiento por estría e incisión •rápida y fácil •no requiere resiembras •menor sensibilidad •hemólisis no fácilmente visible Bacter 2019 Género Streptococcus Técnicas de aislamiento en agar sangre: Técnica de Placa Vaciada •Sensible •Colonias de fácil apreciación •No requiere atmósfera especial •Más laboriosa •No indica cantidad de bacterias Bacter 2019 Género Streptococcus Técnica de Placa Vaciada Caldo SSF Base agar sangre Sangre de carnero Bacter 2019 Bacter 2019 Género Streptococcus Identificación: Determinar tipo de hemólisis Identificación presuntiva •Susceptibilidad a Bacitracina •Presencia de factor CAMP •Hidrólisis de Esculina en presencia de bilis al 40% •Tolerancia al caldo con NaCl al 6.5% Caracterización serológica Bacter 2019 Sensibilidad a bacitracina (grupo A) Bacter 2019 Prueba del Factor CAMP (grupo B)Bacter 2019 Género Streptococcus Hidrólisis de la bilis esculina Tolerancia al caldo “salado” Bacter 2019 Streptococcus pneumoniae Bacter 2019 Sensibilidad a optoquina Bacter 2019 Género Streptococcus Tabla de identificación presuntiva Hemolisis Bac. CAMP BEM NaCl 6.5% Opto Grupo A b S - - - - Grupo B b - + - - - Enterococos b/a/- - - + + - Grupo D (no entero) b/a/- - - + - - No A,B ni D b - - - - - Gpo. viridans a/- - - - - - S. Pneumoniae a - - - - S Bacter 2019 Género Streptococcus Procesos infecciosos Serogrupo A Faringitis, amigdalitis, otitis media, sinusitis, escarlatina, erisipela, celulitis, impétigo, neumonía, endometritis, septicemia Secuelas tardías: Fiebre reumática, glomerulonefritis B Corioamnioitis, sepsis puerperal, sepsis y meningitis neonatales C Infecciones respiratorias altas D Infecciones del tracto genitourinario, infecciones de heridas, endocarditis G Infecciones respiratorias altas, celulitis, septicemia, infecciones de tejidos profundos Bacter 2019 Bacter 2019 Conceptos básicos para la correcta recolección de muestras para estudios microbiológicos ◼ Material del verdadero sitio de la infección y con mínimo de contaminación de tejidos, órganos o secreciones adyacentes ❑ Muestra de endometrio contaminada con secreción vaginal ◼ Establecer períodos óptimos para la recolección de muestras para tener la mejor oportunidad de aislar a los verdaderos gérmenes causantes ❑ Pacientes con fiebre tifoidea se recupera S. typhi en MO y sangre la primera semana, en heces y orina en la segunda o tercera semanas Bacter 2019 Conceptos básicos para la correcta recolección de muestras para estudios microbiológicos ◼ Obtener suficiente cantidad para todas las pruebas solicitadas ❑ En muchos casos es factible ❑ Excepciones LCR y otros líquidos, secreciones conjuntivales e incluso sangre en neonatos o pacientes de difícil punción venosa ❑ No rechazar aunque sea escasa ◼ Es mejor una muestra escasa que nada ❑ Solicitar nueva muestra (trabajando la escasa) Bacter 2019 Conceptos básicos para la correcta recolección de muestras para estudios microbiológicos ◼ Utilizar dispositivos de recolección, recipientes para las muestras y medios de cultivo adecuados para asegurar el óptimo aislamiento de microorganismos ❑ Recipientes estériles ❑ Seguros para evitar derrames y contaminación ❑ Aptos para la recolección (boca ancha Vg.) ❑ Medios de transporte adecuados Bacter 2019 Conceptos básicos para la correcta recolección de muestras para estudios microbiológicos ◼ Rotulación, transporte y conservación correctos de la muestra ❑ Nombre completo, ID de hospital y/o de laboratorio ❑ Tipo de muestra ❑ Fecha y hora de recolección ❑ Transporte inmediato a laboratorio ❑Conservación adecuada según la muestra ◼ LCR no refrigerar ◼ Orina refrigerar Bacter 2019 Conceptos básicos para la correcta recolección de muestras para estudios microbiológicos ◼ Siempre que sea posible obtener las muestras antes de la administración de antimicrobianos ❑ Estreptococos beta hemolíticos ❑ Neisseria gonorrhoeae ❑ Neisseria meningitidis ❑ Haemophilus influenzae ❑ Recordar que algunos antibióticos son bacteriostáticos, no bactericidas Bacter 2019 Protección ◼ Bata ◼ Guantes ◼ Cubrebocas ◼ Lavado de manos previo y posterior a la toma ◼ Lentes de seguridad Bacter 2019 Recordar que en muestras para Microbiología ◼ Se esta trabajando con seres vivos ◼ Algunos altamente patógenos ◼ Requieren determinadas condiciones vitales como temperatura, pH, nutrientes, hábitat, etc. ◼ Pueden pasar del paciente al personal ¡¡¡ y viceversa !!! Bacter 2019 En Laboratorio de Microbiología … “ No todo lo que crece infecta ni todo lo que infecta crece” Enterobacterias • Bacilos gramnegativos – 0.5-2.0 u de ancho y de 2 a 4 u de largo • anaerobios facultativos • fermentan la glucosa en medio anaerobio • oxidasa negativos • reducen nitratos a nitritos Bacter 2019 Agar McConkey Bacter 2019 Agar McConkey Bacter 2019 Proteus (Swarming) Bacter 2019 Agar SS Bacter 2019 R/A K/K K/A H2S+ K/A A/A A/A A/A A/A H2S+ C/GAS+++ C/GAS+ S/GAS Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 K/K K/A H2s+ R/A Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 + Indol _ Bacter 2019 Medio SIM, Medio semisólido que evalúa tres propiedades bioquímicas: Sulfhídrico (H2S), Indol y Motilidad Bacter 2019 Bacter 2019 Agar Urea de Christensen Bacter 2019 Bacter 2019 Se presentan cuatro tubos con Agar TSI. Sobre la base de las reacciones observadas, menciona a que microorganismo podría corresponder cada tubo. En algunos casos hay mas de una opción Menciona las diferentes reacciones en cada uno de los tubos dando ejemplos de microorganismos probables Bacter 2019 Bacter 2019 Menciona probables microorganismos para cada tubo Pseudomonas aeruginosa • Bacilos gramnegativos • Aerobios • Habita en la tierra, el agua y superficie de las plantas • Oportunista • Necesidades nutricionales básicas • Resistente a altas concentraciones de NaCl y tinturas, antisépticos suaves Bacter 2019 Pseudomonas aeruginosa Crecimiento en Agar Sangre de Carnero Bacter 2019 Pseudomonas aeruginosa (OXIDASA +) Bacter 2019 Pseudomonas aeruginosa Producción de pigmentos Bacter 2019 Bacter 2019 ¿Que buscamos? T. vaginalis Candida spp. Vaginosis bacteriana Micoplasma y Ureaplasma N. gonorrhoeae C. trachomatis Protozoarios Exudados genitales Bacter 2019 Gardnerella vaginalis (Células “Clave”) Bacter 2019 Trichomonas vaginalis Examen en fresco Bacter 2019 Trichomonas vaginalis Tinción Giemsa Bacter 2019 Candida albicans Examen en fresco y filamentación Bacter 2019 Candida albicans Tinción Gram de exudado vaginal Bacter 2019 Candida albicans Prueba de tubos germinales Candida albicans Tinción Gram de colonias en agar Sangre de carnero Bacter 2019 Bacter 2019 Neisseria gonorrhoeae Cultivo en Agar de Thayer Martin Bacter 2019 Neisseria gonorrhoeae Oxidasa y utilización de azúcares Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 VIDEO Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Chancro duro: Sífilis Bacter 2019 Chancroide o chancro blando: Haemophilus ducreyi Agentes etiológicos principales Resfriado común Rinovirus, Coronavirus, mixovirus, paramixovirus y adenovirus Rinitis purulenta Sinusitis: S. pneumoniae, H.influenzae, M. catarrhalis, P. aeruginosa Faringoamigdalitis Estreptococcica No estreptococcica Infecciones de Vías Respiratorias Altas Bacter 2019 Agentes etiológicos de Faringoamigdalitis Desconocida 30-40% Estreptococcica (15 a 30%): Serogrupos A, C y G No estreptococcica: Bacterias H.influenzae, Corynebacterium spp, Anaerobios, Gonococo, M. pneumoniae, Chlamydia spp., etc. Virus Rinovirus, Adenovirus, RSV, HSV, virus de influenza A, B; virus de parainfluenzae 1,2,3,4; EBV,CMV, etc. Hongos Candida spp. Infecciones de Vías Respiratorias Altas Bacter 2019 • Otitis media • Sinusitis • Mastoiditis • Absceso retrofaríngeo • Absceso periamigdalino • Neumonía • Mediastinitis • Meningitis • Endocarditis • Fiebre reumática • Glomerulonefritis Complicaciones de la Faringoamigdalitis estreptocócica Infecciones de Vías Respiratorias Altas Bacter 2019 • Fuentes para aislar patógenos del Tracto Respiratorio Superior: Organismo Nasofaringe Boca Garganta Ojos Oído Senos N.meningitidis + + + H. influenzae + + + S. aureus+ + + + S. pyogenes + + S. pneumoniae + + + + P. aeruginosa + + N. gonorrhoeae + + Moraxella + C. diphteriae + B. pertussis + Candida spp. + + Infecciones de Vías Respiratorias Altas Bacter 2019 Toma de muestra: •Paciente en ayunas •Sin aseo bucal •Sin tratamiento AMB Medios de Cultivo: •Caldo nutritivo •Agar Sangre de Carnero •Agar Sal y Manitol Exudado Faríngeo Bacter 2019 Siembra directa en Agar Sangre de Carnero: Ventajas: Rápido, económico, semicuantitativo Desventajas: No óptimo para SBH, se afecta por swarming de Proteus Caldo y Placa vaciada: Desventajas: Laborioso, requiere incubación, se afecta por swarming, no idea del número de colonias Ventajas: Más sensible, colonias de fácil identificación Sal y Manitol: Investigación de S. aureus* Exudado Faríngeo Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Muestra Nasal Toma de muestra: Directa o por drenado, sin tratamiento antimicrobiano (tópico o sistémico) Bacter 2019 • Siembra de la muestra: Caldo nutritivo Placa vaciada Agar sal y manitol Staphylococcus aureus* Agar sangre de carnero Estreptococos y Neumococos Agar chocolate H. Influenzae, N. gonorrhoeae y N. meningitidis MacConkey Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae Muestra Nasal Bacter 2019 Bacilos gramnegativos de longitud variable pleomórficos inmóviles no esporulados requieren factores X (hemina) y V (NAD) anaerobios facultativos Haemophilus influenzae Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Requerimiento de factores X y V Requiere sólo factor X H. aphrophilus Requiere solo factor V H. parainfluenzae Requiere factores X y V H. influenzae Haemophilus influenzae Bacter 2019 Satelitismo a Staphylococcus aureus ( factor V) H. influenzae H. parainfluenzae agar sangre (factor X) agar soya tripticaseína Haemophilus influenzae Bacter 2019 Satelitismo a discos con factores X y V X V H. aphrophilus Haemophilus influenzae Bacter 2019 Satelitismo a discos con factores X y V X V H. parainfluenzae Haemophilus influenzae Bacter 2019 Satelitismo a discos con factores X y V X V H. influenzae Haemophilus influenzae Bacter 2019 H. influenzae en agar Sangre (Satelitismo con S. aureus) Bacter 2019 Bacter 2019 H. influenzae en agar Sangre (Satelitismo con S. aureus) Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Urocultivos Microorganismos que invaden VU por vía ascendente: Bacilos Gramnegativos: Enterobacterias: E. coli, Proteus spp., Klebsiella, Enterobacter, etc. Pseudomonas y Acinetobacter Cocos Grampositivos: S. aureus, S. saprophyticus, S. epidermidis E. faecalis y S. agalactiae Hongos: Candida spp. y Torulopsis glabrata Bacter 2019 Urocultivos Microorganismos que invaden VU por vía hematógena: Bacterias: Salmonella spp. Mycobacterium sp. Parásitos: Schistosoma haematobium Hongos: Histoplasma capsulatum Virus: Citomegalovirus y Adenovirustipo II Bacter 2019 Urocultivos Recolección de la muestra de Orina Primera orina de la mañana* Frasco esterilizado Técnica aséptica Sin tratamiento antimicrobiano Siembra inmediata o refrigeración* Bacter 2019 Bacter 2019 Agar CLED Urocultivos Criterios de interpretación según Kass Una densidad 105 UFC/ml indica infección, <105 UFC/ml podría indicar contaminación uretral o vaginal, En tanto que se deben evaluar nuevamente las densidades entre 104 y 105 UFC/ml basándose en la información clínica. Las bacterias contaminantes generalmente aparecen en escasas cantidades, que varían según la morfología colonial. Bacter 2019 Urocultivos Criterios de interpretación según Stamm En presencia de sintomatología EGO compatible con IVU Una densidad 103 UFC/ml indica infección, Bacter 2019 Urocultivos Factores que influyen en recuentos coloniales bajos aún en presencia de IVU activa: flujo urinario aumentado pH urinario bajo terapia antimicrobiana actual o reciente organismos de lento crecimiento (enterococos o Candida) técnicas de cultivo inapropiadas Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019 Bacter 2019
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