ONTOGENIA T

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ONTOGENIA DE LINFOCITOS T
Fundación H. A. Barceló-Facultad de Medicina
Bioquímica, inmunología y nutrición normal
Generalidades del desarrollo del linfocito:
Compromiso de las células progenitoras hacia la línea B o T.
Proliferación de células inmaduras.
Reordenamiento secuencial y ordenado de los genes del receptor para antígeno (recombinación).
Selección de células cuyos receptores sean útiles y eliminación de aquellas con receptores autoreactivos. 
Diferenciación de los linfocitos B y T en subpoblaciones con funciones y fenotipos maduros
TCR: heterodímero con cadenas α y β (o γ, δ ) asociadas a CD3 ( cadenas γ,δ,ε) y otras dos moléculas que permiten la comunicación intracelular (cadenas ζ).
ESTRUCTURA DEL TCR
Receptor células T (TCR)
 ab (95%) 
 gd (5%)
La región variable del TCR es parecido al fragmento Fab de la Ig o a la región variable del BCR; pero tiene algunas diferencias estructurales en el dominio C.
Compromiso en las líneas de los linfocitos T
Durante la hematopoyesis una de las poblaciones resultantes de la diferenciación de la Células Madres Pluripotenciales; el progenitor linfoide común se compromete a formar linfocitos B, T o NK.
El compromiso hacia los linfocitos T depende de señales producidas por los factores Notch-1 y GATA-3
PRINCIPAL SITIO DE LA ONTOGENIA T
ETAPAS DE LA ONTOGENIA T
Características de la síntesis del TCR
Genes fragmentados en segmentos
Recombinación somática o Reordenamiento génica del ADN
Cromosoma 14
Genes de la cadena α
Cromosoma 7 genes de la cadena β
Durante la ontogenia T ocurren los siguientes eventos:
Reordenamiento de los genes para el TCR.
Escoger entre el TCRαβ o el TCRγδ.
Selección positiva y negativa.
Escoger entre CD4 o CD8.
ESTADIO DOBLE NEGATIVO
Al ingresan los precursores al Timo interaccionan con las células estromales lo que induce su proliferación.
Estos timocitos empiezan a expresar el CD2 que es marcador de células T.
Durante la etapa doble negativo transita por períodos caracterizados por la ausencia o presencia de los marcadores CD44 y CD 25. 
La decisión sobre el tipo de TCR se toma en el estadio DN3…
Si se forma en este estadio un linfocito con TCRγδ (no posee ni CD4, ni CD8) este abandona el timo y se dirige a los tejidos donde reside.
El rearreglo de la cadena β ocurre en dos etapas:
- Primero se reordenan los fragmentos D-J (exclusión alélica).
-Luego se asocia un fragmento V al DJ ya reordenado (exclusión alélica).
Un reordenamiento exitoso genera la expresión de la cadena β junto a una α sustituta y el complejo CD3 sobre la membrana del timocito (preTCR). Estadio DN4.
β
Recombinación de genes para el TCR
PASAJE DE DOBLE NEGATIVO A DOBLE POSITIVO
La expresión del preTCR genera señales de supervivencia y estimula la proliferación; además de inducir expresión en la membrana del CD4 y el CD8 y el reordenamiento de los genes de la cadena α.
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Durante la ontogenia T ocurren los siguientes eventos:
Reordenamiento de los genes para el TCR.
Escoger entre el TCRαβ o el TCRγδ.
Selección positiva y negativa.
Escoger entre CD4 o CD8.
SELECCIÓN POSITIVA: la célula T con su TCR interacciona con los CMH de las células epiteliales Tímicas. En este proceso se conservan los linfocitos T que reconocen al CMH propio (con péptidos propios) con avidez baja, los demás mueren por apoptosis.
Además la selección positiva determina el fenotipo CD4 o CD8.
SELECCIÓN NEGATIVA: proceso por el cual se eliminan por apoptosis los timocitos cuyos TCR se unen con fuerza a antígenos peptídicos propios asociados a moléculas del CMH
Corteza Subcapsular
Corteza Profunda
Médula
Clones que reconocen Antígenos
Linfocito T Inmaduro
 Célula Epitelial Tímica
ESCUELA TIMICA
Macrófagos
Órganos Linfoides Secundarios
Torrente sanguíneo
Médula Ósea
Stem cell
No reconocen Ags
Apoptosis
Apoptosis
SELECCION POSITIVA
SELECCION NEGATIVA
Reconocen
Ags Propios
con elevada afinidad
No reconocen antígenos propios con elevada afinidad
Células dendrítica y células del epitelio tímico
La Familia de los Linfocitos T
Linfocitos T (TCRδγ)
Linfocitos T (TCRαβ)
Linfocitos T CD4+ 
Linfocitos T CD8+
Linfocitos NKT 
LINFOCITOS T γδ
Los linfocitos γδ presentan un tropismo por las superficies epiteliales de las mucosas.
A diferencia de los linfocitos αβ tienen un limitado repertorio de receptores.
Reconocen moléculas cuya expresión suele incrementarse en células “estresadas” (DAMP).
Cuando migran a las mucosas ya muestran un fenotipo de células proactivas, lo que les permite generar una rápida respuesta frente al proceso infeccioso.
Participan en la inmunidad frente a patógenos intracelulares y extracelulares y en la inmunidad antitumoral
	Linfocitos T con TRC αβ
CELULAS NKT
Expresan un TCRαβ que reconoce antígenos presentados por los CD1 (similares a los CMH de tipo I) 
Tienen marcadores de superficie de los NK.
Su TCR reconoce antígenos lipídicos.
 En la corteza del timo los linfocitos doble positivo que reconocen moléculas CD1 expresadas en timocitos vecinos se diferencian a esta progenie.
Produce IL4, INFγ y quimiocinas.
Ayuda los linfocitos de la zona marginal del bazo a producir anticuerpos frente a antígenos lipídicos.
Puede provocar citotoxicidad.
	Los linfocitos T que emigran del Timo al finalizar el proceso de ontogenia son células maduras que expresan: un TCRαβ, la molécula CD4 o CD8 y circulan por sangre en estado de reposo. 
Se denominan linfocitos vírgenes (naive) ya que no han encontrado aún su antígeno específico. 
Están representados por centenares de millones de clones diferentes, cada uno con una especificidad singular.
Los linfocitos T vírgenes se extravasan a los OL2° ( ganglios, bazo y tejido linfoide asociado a mucosas) a fin de encontrar su antígeno específico. 
Extravasación de linfocitos vírgenes en los OL2°
- Los linfocitos vírgenes ingresan al OL2° a través de las vénulas poscapilares denominadas vénulas de endotelio alto o HEV. (todos los OL2° contienen HEV excepto el Bazo) 
-La extravasación linfocitaria involucra: rodamiento, adherencia estable, diapédesis y transmigración.
Rodamiento: L-selectina y adhesinas endoteliales vasculares (débil y transitoria).
Adherencia estable: el linfocito recibe una señal mediada por quimiocinas CCL19 y CCL21 inmovilizadas en la cara luminal de las HEV. Estas señales aumentan la afinidad de las integrinas por sus ligandos. 
Diapédesis y transmigración: involucran un conjunto similar de moléculas de adhesión. 
Las células dendríticas reconocen antígenos por distintos receptores en tejidos periféricos. 
Los linfocitos se mueven sobre la trama de conductos fibroblásticos reticulares que exhiben las quimiocinas CCL19 y CCL21 inmovilizadas. Durante su trafico los linfocitos interactúan con células dendríticas. Si no contactan con su antígeno específico, se separan de la célula presentadora y luego de permanecer 8-24 hs abandona el ganglio por linfáticos eferentes hasta la circulación sanguínea.
El reconocimiento del antígeno presentado por moléculas del CMHII induce un aumento de la afinidad de la integrina LFA-1. Se estabiliza la unión permitiendo un mejor reconocimiento del antígeno. 
La activación del linfocito T requiere de dos señales: 1° CMHII-TCR y 2° CD80/CD86 expresada por la CPA (madura) y el CD28 expresado constitutivamente por el linfocitos T. 
La activación del CD28 conduce a la producción de IL2 y su receptor (expansión clonal) y de una proteína antiapoptótica (Bim) que promueve la supervivencia de los linfocitos activados. 
Las citoquinas derivadas de las CPA influyen en la diferenciación de los linfocitos T CD4
Las células T CD4 efectoras requerirán reconocer nuevamente al antígeno para activarse en tejidos periféricos pero en este caso lo harán sin moléculas coestimuladoras.
NK
MASTOCITOS
Activación clásica de macrófagos: 
Aumento de la muerte de bacterias fagocitadas, secr de citosinas proinfl., aumento de laexpresión de CMH y coestimuladores.
Sobre los linfocitos B promueve el swich isotípico hacia IgG.
Inhibe la diferenciación de los T CD4 hacia Th2 y Th17
Th2
Estimula el peristaltismo
Activación del macrófago en su forma alternativa
Las células T CD4+ que reconozcan con mayor afinidad a los péptidos presentados por el CMHII de las CPA y establezcan con ellas una fuerte interacción sostenida en el tiempo se diferencian a Thf.
Nuevos perfiles de CD4…
Células Th22: Existen células T CD4 que producen IL 22 pero no IL 17A e IL 17F, se encuentran en piel y parecen participar en la inmunidad antibacteriana y antifúngica.
Células Th9: La IL 9 es producida selectivamente por un linfocito en ausencia de IL 4, IL 5, IL 13 e IL 25. La diferenciación de este linfocito depende de IL 4 e TGF β. Está implicado en la activación de mastocitos.
# En OL2 por reconocimiento de antígenos en condiciones tolerogénicas (ausencia de citoquinas inflamatorias, presencia de IL10 y TGFβ, baja expresión de moléculas coestimuladoras o producción de ácido retinoico por células dendríticas).
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En el Timo por interacciones de alta afinidad TCR-MCH en la presentación de antígenos propios
LINFOCITOS T αβ CD8
CD 8 NAIVE Y DE MEMORIA (CD8+ αβ/CD28+)
REGULADORES CD8+ (CD8 αα)
REGULADORES CD8+/CD28-
Células citotóxicas puras
Células reguladoras
Reconocimiento de la célula diana que debe ser eliminada
Citotoxicidad mediada por Fas-FasL
Citotoxicidad mediada por granzimas y perforinas
La coestimulación necesaria para activar al linfocito 
CD8 es superior que la requerida por las células CD4 
vírgenes…¿cómo se resuelve?