Descarga la aplicación para disfrutar aún más
Vista previa del material en texto
Aroñ K Mejias Grupo 10 6 República Bolivariana de Venezuela Universidad de Carabobo Facultad de Ciencias de la Salud Departamento de Ciencias Morfológicas y Microscópicas Catedra de Histología y Embriología Cuestionario N1 Técnicas histológicas y microscopia Lic. Beatriz Cohelo Cuadro comparativo de técnicas histológicas y frotis de sangre Técnica histológica Frotis de sangre 1.Tejido Tejido epitelial, conjuntivo, muscular. Tejido sanguíneo. 2.Obtencion de muestra Autopsia, necropsia o biopsia. Inyección o punción intravenosa o de capilares. 3. Tamaño de la muestra 2-3mm 3-4 ml. 4. Fijación. Formol 10%. Metanol 10%. 5. Deshidratación, aclaración, inclusión. Requiere de estos procesos. No se realizan estos procesos. 6. Montaje. Corte de tejido fijado en una lámina portaobjetos. Extensión de tejido lámina porta objetos. 7. Los colorantes. Acidofilos y basofilos Acidofilos y basofilos 8. Técnica de tinción Hematoxilina y eosina Wright (azul de metileno y eosina). 1. Cuadro comparativo entre Microscopia Óptica y Electrónica Óptica Electrónica Radiación empleada Haz de luz. Haz de electrones. Fuente de radiación Lámpara de luz visible Cátodo o catión (electrones). Longitud de onda 2000 -7500 A. 0.37-0.86 A. Medio presente en el tubo. Límite de resolucion Aire 0,2 micrómetros Vacío De transmisión: 0,05nm De barrido: 2,5nm. Lentes Cristal. Electromagnéticos. Tipo de imagen Ocular. Placa fotográfica Aumento del microscopio 100x-1000x. De transmisión: 10000x100000 De barrido:1000x-10000. Medio de fijación del tejido Fenol/ Formol. Gluteraldehído. Medio de inclusión del tejido Parafina Resina epoxi (monomérica). Espesor de corte del tejido 8-10 micrómetros. 20-100 nm Instrumento de corte de la muestra Micrótomo de acero. Micrótomo de diamante. Colorantes empleados Ácidos y básicos: Hematoxilina - eosina, Wright, Pas Schiff, fucsina, azul de metileno, entre otras Metales pesados: Nitrato de Uranios, tetroxido de osmio, entre otros. Contraste Absorción y reflexión. Scattering 2. Cuadro resumen de la técnica de preparados histológicos. Deshidratación Facilitar la penetración de solventes que no son solubles en agua Etanol creciente. Se sumerge la muestra en varios frascos de etanol en concentraciones crecientes. Agua sustituida por etanol Aclaramiento Facilitar la penetración de parafina ya que no es soluble en etanol. Xilol (xileno). Se sumerge en xilol que es miscible en alcoholes y en la parafina. Muestra aclara, lista para ser incluida. Infiltración Endurecer la muestra para dar firmeza al momento de corta Derretir la parafina, sumergir la muestra. Se coloca en un bloque la muestra con parafina para que esta se enfrié y solidifique Muestra firme y solidificada Encastramiento del tejido Preparación del taco. Soporte para el montaje y corte en el micrótomo. El bloque se coloca sobre un soporte de madera o plástico Muestra en soporte para corte. Corte Disminuir el tamaño para que pueda ser visible las estructura en el microscopio. Un corte denso y grande no es visible. Se realizan cortes finos en micrótomo Cortes de 8-10 micrómetros. Montaje Permite prepara la muestra a su visualización, dándole soporte Se monta en un porta objetos. Corte sobre el portaobjetos (montaje). Desparafinación Disolver la parafina, facilita la penetración del etanol. Sumergir en xilol. Muestra sin parafina lista para rehidratarse Hidratación Permite la penetración de los colorantes. Sumergir en frascos con etanol decreciente hasta llegar al agua. Muestra hidratada. Coloración Contrasta la estructura, otorgando colores que facilitan su estudio. Agregar colorantes la muestra. Muestra teñida Deshidratación Elimina el agua para facilitar la absorción en medios hidrófobos. Sumergir en frascos de etanol decreciente. Sustitución de agua por alcohol. Aclaración Facilita la penetración de la resina y da transparencia Sumergir en xilol Muestra lista para montaje. Montaje final Permite conservar la muestra Se añade bálsamo de Canadá y se cubre con un portaobjetos. Muestra lista para ser observada. 4. Menciona los tipos de colorantes o tinciones histológicas y a que estructuras son afines. · Hematoxilina: sal tiñe sustancias o estructuras ácidas, basofilas y núcleo. · Eosina: sal que tiñe sustancias o estructuras básicas que son acidofilas y citoplasma. · Hematoxilina férrica: Tiñe el núcleo y estriaciones del músculo esquelético. · Fucsina: Tiñe fibras elásticas. · Giemsa: Usado en el frotis de sangre, tiñe las células del tejido sanguíneo, es una tinción · Metacromática, tiñe las estructuras acidofilas y basofilas. · Wright: Usado en el frotis de sangre. Tiñe: acido nucleicos, núcleo celular, eritrocitos, leucocitos, algunas proteínas. · Tricrómico de Mallory: Tiñe las fibras de colágeno de la matriz extracelular, eritrocitos y fibras musculares esqueléticas y cardíacas. · Sudan III: Lípidos · Azul de metileno: Núcleo, ácidos nucleicos · Tionina: Nucléolo. · Feulgen: Tiñe las cromatinas de las células en interfase y división celular. · Peryódico reactivo de Schiff: Tiñe los hidratos de carbono, glucógeno, las fibras reticulares en tejido conjuntivo, y el moco en células y tejidos. · Fluoresceína: Usada en la inmunocitoquímica, hace visible los anticuerpos. 5. Partes de un microscopio óptico Mecánicas · Cabezal · Brazo · Revolver · Platina · base · Carro (desplazamiento de la platina) · Tornillos macrométrico y micrométrico Partes ópticas · Lámpara (Foco) · Condensador /Diafragma · Objetivos · Oculares
Compartir