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1 ASOCIACIÓN DE LOS FACTORES BIÓTICOS Y ABIÓTICOS CON LA CARGA BACTERIANA EN EL ENTORNO DE LOS SALONES DE CLASE DE LA UDES SEDE CÚCUTA 2019, periodo A. SHIRLEY ADRIANA BOLÍVAR GUTIÉRREZ UNIVERSIDAD DE SANTANDER “UDES” CAMPUS CÚCUTA FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD PROGRAMA DE BACTERIOLOGÍA Y LABORATORIO CLÍNICO SAN JOSE DE CÚCUTA 2019 2 ASOCIACIÓN DE LOS FACTORES BIÓTICOS Y ABIÓTICOS CON LA CARGA BACTERIANA EN EL ENTORNO DE LOS SALONES DE CLASE DE LA UDES SEDE CÚCUTA 2019, periodo A. SHIRLEY ADRIANA BOLÍVAR GUTIÉRREZ COD: 15171056 Trabajo de grado de Bacteriología y Laboratorio Clínico DIRECTOR CIENTIFICO Dra. Azula Sanguino Quintero ASESOR METODOLOGICO MSc. Jael Contreras Rangel UNIVERSIDAD DE SANTANDER “UDES” CAMPUS CÚCUTA FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD PROGRAMA DE BACTERIOLOGÍA Y LABORATORIO CLÍNICO SAN JOSE DE CÚCUTA 2019 3 ADVERTENCIA El autor, SHIRLEY ADRIANA BOLÍVAR GUTIÉRREZ, autoriza a la UNIVERSIDAD DE SANTANDER (UDES) la reproducción total o parcial de este documento, con la debida cita de reconocimiento de la autoría y cede a la misma Universidad los derechos patrimoniales con fines de investigación, docencia e institucionales, consagrado en el artículo 72 de la Ley 23 de 1982 y las normas que lo instituyan o modifiquen. (Artículo 4°, Acuerdo 0066 de 2003). 4 5 6 7 AGRADECIMIENTOS UDES: Mi más sincero agradecimiento a la Universidad de Santander UDES Campus Cúcuta quien me brinda apoyo para continuar con las metas propuestas, por la enseñanza dada durante mi formación como profesional. Agradezco a la Dra. Azula Sanguino quien con su constante apoyo, paciencia y motivación me ha guiado con sus conocimientos para la realización del proyecto de investigación. 8 DEDICATORIA De: Shirley Bolívar Para: Mamá, papá, hermana. Dedico este trabajo de investigación a mi familia por el apoyo brindado, paciencia, acompañamiento durante la realización del trabajo, por la comprensión, por cada guía dada, cada aprendizaje impartido y por los consejos por parte de cada uno de ellos. 9 Título: ASOCIACIÓN DE LOS FACTORES BIÓTICOS Y ABIÓTICOS CON LA CARGA BACTERIANA EN EL ENTORNO DE LOS SALONES DE CLASE DE LA UDES SEDE CÚCUTA 2019, periodo A. Autor SHIRLEY ADRIANA BOLÍVAR GUTIÉRREZ Director Científico Dra. Azula Sanguino Quintero Asesor Metodológico MSc. Jael Contreras Rangel Línea de investigación Microbiología Clínica Palabras clave: factores bióticos, factores abióticos, humedad, temperatura. Resumen Se llevó a cabo una investigación de tipo descriptivo de campo en la que se recolectaron datos que permitieron determinar la relación existente entre los factores abióticos y la carga microbiana encontrada en los salones de clase de la Universidad de Santander campus Cúcuta. Para esto se seleccionaron 5 salones al azar por cada bloque (B, C y D) y se procedió a la toma de muestra mediante la técnica de sedimentación en placa exponiendo cajas con agar SPC y Baird Parker por 15 minutos. Luego del periodo de incubación, se realizó el recuento de colonias, y se reportó como UFC/65cm2/15 minutos para aerobios mesófilos y Staphylococcus aureus. Posteriormente, se tomaron colonias representativas de cada una de las cajas y se realizó caracterización macroscópica y microscópica de las mismas. Para la determinación de los factores abióticos, se consideraron las variables de temperatura, humedad y partículas de polvo. Finalmente, se determinó el grado de correlación lineal entre las variables utilizando la técnica estadística de coeficiente de correlación de Pearson, a través del software SPSS v26, Los resultados mostraron la presencia de mesófilos aerobios y 10 Staphylococcus aureus en bajas concentraciones, no obstante, no existe una asociación lineal entre las variables analizadas lo que permite concluir que la presencia de la carga bacteriana no depende de la temperatura, humedad relativa, presencia o ausencia de partículas de polvo encontrados al interior de los salones de clase muestreados. 11 Title: ASSOCIATION OF BIOLOGICAL AND ABIOTIC FACTORS WITH THE BACTERIAL LOAD IN THE ENVIRONMENT OF THE CLASSROOMS OF THE UDES HEADQUARTERS CÚCUTA 2019, period A. Author SHIRLEY ADRIANA BOLÍVAR GUTIÉRREZ Scientific Director Dr. Azula Sanguino Quintero Methodological Advisor MSc. Jael Contreras Rangel Research Line Clinical Microbiology Keywords: biotic factors, abiotic factors, humidity, temperature. Abstract A descriptive field investigation was carried out in which data were collected that allowed to determine the relationship between abiotic factors and the microbial load found in the classrooms of the University of Santander campus Cúcuta. For this, 5 random rooms were selected for each block (B, C and D) and the sample was taken using the plate sedimentation technique exposing boxes with SPC agar and Baird Parker for 15 minutes. After the incubation period, the colony count was performed, and reported as UFC / 65cm2 / 15 minutes for mesophilic aerobes and Staphylococcus aureus. Subsequently, representative colonies of each of the boxes were taken and macroscopic and microscopic characterization of them was performed. For the determination of abiotic factors, variables of temperature, humidity and dust particles were considered. Finally, the degree of linear correlation between the variables was determined using Pearson correlation 12 statistical technique, through the SPSS v26 software. The results showed the presence of aerobic mesophiles and Staphylococcus aureus in low concentrations, however, There is no linear association between the analyzed variables which allows to conclude that the presence of the bacterial load does not depend on the temperature, relative humidity, presence or absence of dust particles found inside the sampled classrooms. 13 CONTENIDO Pág. INTRODUCCIÓN 19 1. PROBLEMA 21 1.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 21 1.2. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA 24 1.3. OBJETIVOS 24 1.3.1 Objetivo General 24 1.3.2 Objetivos Específicos 24 1.4 JUSTIFICACIÓN 24 2. MARCO REFERENCIAL 27 2.1. ANTECEDENTES DE LA INVESTIGACIÓN 27 2.2 MARCO TEÓRICO 30 2.2.1. Factores que influyen en el medio ambiente. 30 2.2.1.1 Factores abióticos. 30 2.2.1.2 Factores bióticos 31 2.2.1.3 Coeficiente de correlación de Pearson (ρ): 34 2.3 MARCO CONCEPTUAL. 35 2.4. MARCO CONTEXTUAL 36 2.5 MARCO LEGAL 37 2.6 SISTEMA DE HIPÓTESIS 38 2.7 OPERACIONALIZACIÓN DE LAS VARIABLES 39 3. MARCO METODOLÓGICO 41 3.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN 41 3.1.1 Nivel de investigación. 41 14 3.1.2. Diseño de la investigación 41 3.2 MÉTODOS 41 3.3 POBLACIÓN Y MUESTRA. 43 3.3.1 Población 43 3.3.2 Muestra. 43 3.4. TÉCNICA E INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS. 43 3.5. TÉCNICA DE PROCESAMIENTO Y ANÁLISIS DE LOS DATOS. 43 4. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS 45 4.1 RESULTADOS E INTERPRETACIÓN. 45 4.1.1 Caracterización de la carga microbiana presente en los salones de clase. 45 Caracterización de la carga microbiana presente en los salones de clase 47 4.1.2 Caracterización microscópica y macroscópica de los aislados obtenidos. 49 4.1.3 Identificación bioquímica de los aislados obtenidos. 52 4.1.4 Caracterización de los factores abióticos. 54 4.1.5 Asociación de los factores bióticos y abióticos con la carga bacteriana mediante correlación de Pearson. 60 4.2 DISCUSIÓN 635. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 66 5.1 CONCLUSIONES 66 5.2 RECOMENDACIONES 67 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 68 ANEXOS 71 15 LISTA DE ANEXOS Pág. Anexo A. PREPARACIÓN DE MEDIOS 72 Anexo B. EXPOSICIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO A MEDIO AMBIENTE DE LOS SALONES DE CLASE POR 15 MINUTOS 73 Anexo C. INCUBACION DE MUESTRAS A 37 °C POR 24 HORAS 74 Anexo D. ANALISIS DE RESULTADOS 75 Anexo E. ANÁLISIS DE RESULTADOS MICROSCÓPICO 76 Anexo F. PRUEBAS BIOQUÍMICAS 77 Anexo G. PRUEBA COAGULASA 78 Anexo H. PRUEBA DE DNAsa 79 16 LISTA DE GRÁFICOS Pág. Grafico 1. Variabilidad entre la temperatura (°C) registrada en los ambientes de los salones ubicados en los bloques B C y D durante los 3 muestreos realizados 56 Grafico 2. Variabilidad entre la Humedad relativa (%) registrada en los ambientes de los salones ubicados en los bloques B C y D durante los 3 muestreos realizados 57 Grafico 3. Variabilidad entre el partículas de polvo encontrado en los salones ubicados en los bloques B C y D durante los 3 muestreos realizados 60 Grafico 4. Correlación de Pearson entre los factores abióticos y la concentración de S. aureus encontrada en los salones de clase 60 Grafico 5. Matriz de asociación entre la Temperatura, Humedad relativa, presencia o ausencia del material particulado y la concentración de S.aureus 61 Grafico 6. Correlación de Pearson entre los factores abióticos y la concentración de mesófilos aerobios encontrada en los salones de clase 62 Grafico 7. Matriz de asociación entre la Temperatura, Humedad relativa, presencia o ausencia del material particulado y la concentración de mesófilos aerobios 63 17 LISTA DE FIGURAS Pág. Figura 1. Bacterias 32 Figura 2. Ubicación geográfica Universidad de Santander 37 18 LISTA DE TABLAS Pág. Tabla 1. Matriz Operativa 39 Tabla 3. Recuento de Staphylococcus aureus en los salones muestreados. 45 Tabla 4. Recuento de aerobios mesófilos en los ambientes muestreados. 47 Tabla 5. Caracterización microscópica y macroscópica. Primer muestreo. 49 Tabla 6. Caracterización microscópica y macroscópica. Segundo muestreo. 50 Tabla 7. Caracterización microscópica y macroscópica. Tercer muestreo. 51 Tabla 8. Identificación bioquímica microorganismos Gram positivos. Primer muestreo. 52 Tabla 9. Identificación bioquímica microorganismos Gram positivos. Segundo muestreo. 53 Tabla 10. Identificación bioquímica microorganismos Gram negativos. Segundo muestreo 53 Tabla 11. Identificación bioquímica microorganismos Gram positivos. Tercer muestreo. 53 Tabla 12. Identificación bioquímica microorganismos Gram negativos. Tercer muestreo. 54 Tabla 13. Resumen del ANOVA 54 Tabla 14. Promedio de temperatura registrada durante los muestreos 55 Tabla 15. Promedio de la humedad relativa registrada durante los muestreos 56 Tabla 16. Promedio de la presencia o ausencia de partículas de polvo registrado durante los muestreos 58 Tabla 17. Instructivo de recolección de factores abióticas mediante observación directa 59 19 INTRODUCCIÓN La contaminación medioambiental ha sido ampliamente estudiada en los últimos años, ya que afecta a todos los seres vivientes, de alguna u otra manera, presentes en el ecosistema. En especial, aquella contaminación proveniente del material particulado y los gases tóxicos, producidos en la industria a diario por el ser humano. Esta contaminación trae a consecuencia una problemática en la salud relacionada con el transporte de varias clases de virus, bacterias, hongos y organismos protozoarios que finalmente desencadenan enfermedades que afectan la calidad de vida de los seres humanos. Otros factores como la temperatura y humedad relativa del ambiente, en condiciones específicas estudiadas, también incrementan la actividad de estos microorganismos en la atmósfera. Se hace importante entonces, estudiar las relaciones entre los factores abióticos antes mencionados y la carga microbiana presente en ambientes interiores, como viviendas, escuelas, y otras clases de recintos. En este particular estudio, se busca determinar si hay una relación lineal entre estas variables, para determinar si son o no una causa probable del aumento de enfermedades respiratorias asociadas a estos factores en los salones de clase de la Universidad de Santander Campus Cúcuta. Este campus, al estar ubicado en la ciudad de Cúcuta, en el departamento de Norte de Santander, cuenta con las características de temperatura y humedad relativa que la literatura científica reconoce como óptimas para el crecimiento de la actividad microbiana. La metodología usada en este estudio consistió en la recolección de muestras de aceleradores de crecimiento bacteriano enfocándose en la búsqueda de la presencia de Staphylococcus aureus y aerobios mesófilos comunes en los ambientes de salones de clase seleccionados aleatoriamente, a la par que se registraban las variables de temperatura, humedad relativa y presencia o en su defecto, ausencia de material particulado (polvo). Posteriormente se realizó la inoculación de estas muestras para ser estudiadas con más detenimiento y caracterizar apropiadamente las muestras. A continuación, se estudió la correlación lineal entre estas variables utilizando el método de coeficiente de correlación de Pearson. 20 En el capítulo 1 el lector encontrará toda la información relacionada con la problemática, objetivos y justificación de la investigación, en el capítulo 2 se encontrará toda la referenciación teórica y antecedentes de investigación, en el capítulo 3 se encontrará especificadamente la metodología usada, en el capítulo 4 se encontrarán los resultados de las tomas de muestras, caracterización de éstas y la correlación entre estas variables, finalizando en el capítulo 5 con el análisis de resultados y su discusión respectiva. 21 1. PROBLEMA 1.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA La contaminación puede definirse como cualquier modificación indeseable del ambiente, causada por la introducción de agentes físicos, químicos o biológicos (contaminantes) en cantidades superiores a las naturales, que resulta nociva para la salud humana, daña los recursos naturales o altera el equilibrio ecológico (1). Los efectos de esta contaminación están siendo estudiados en todo el mundo y sus repercusiones en la salud son cada vez más preocupantes. Desde 1987, la OMS ha publicado un informe detallado conocido como “Guías de calidad de aire de la OMS, relativas al material particulado, el ozono, el dióxido de nitrógeno y el dióxido de azufre”, donde se informa públicamente todos los hallazgos científicos de los últimos tiempos en materia de calidad de aire, y tiene como objeto ofrecer orientación sobre la manera de reducir los efectos de la contaminación del aire en la salud. El último informe, presentado en 2005, más de dos millones de muertes prematuras son atribuibles a los efectos de la contaminación del aire en espacios urbanos y cerrados, ocasionados por la quema de combustibles fósiles, de las cuales, más de la mitad se presenta en países en vía de desarrollo (2). En Colombia, el artículo 13 de la Ley 768 de 2002 y el artículo 3 de la Resolución 651 de 2010, obliga a las Corporaciones Autónomas Regionales, Corporaciones para el Desarrollo Sostenible y a las Autoridades Ambientales de los Grandes Centros Urbanos, a reportar la información de la calidad de aire, meteorológica y de ruido al Subsistema de Información sobre Calidad de Aire, conocido como SISAIRE. De acuerdo con los datos obtenidos en el SISAIRE, el Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales, IDEAM, publica cada año el Informe del estado de la calidaddel aire en Colombia. Dado a conocer a la opinión pública el 17 de Julio de 2018, el informe para el año 2017 analiza la información de las 204 estaciones de monitoreo, presentes en 91 municipios en 22 departamentos. Basados en los criterios establecidos en el protocolo para el monitoreo y seguimiento de la calidad del aire (Res. 650 de 2010), Cúcuta debería contar con monitoreo permanente, sin embargo, no lo tiene (3). 22 Aunque el porcentaje de cumplimiento de la normatividad de la calidad del año 2017 es del 88%, superior a los obtenidos durante los últimos 4 años anteriores que en promedio es del 72% (3), no es un dato extrapolable a la totalidad de una ciudad o región, debido a las diversas condiciones topográficas, meteorológicas y geomorfológicas, que influyen en la concentración o dilución de los diversos contaminantes atmosféricos, por lo tanto, no se tienen datos concretos sobre el panorama de la ciudad. En el aire se encuentran disueltos o en suspensión una mezcla bastante compleja de partículas líquidas y sólidas, o sustancias orgánicas e inorgánicas, que varían en tamaño, forma y composición. El material particulado, clasificado en PM2.5 y PM10, mejor conocidas como Partículas Menores a 2.5 micras y Partículas Menores a 10 micras, son partículas dispersas en el aire que no se sedimentan en períodos cortos, sino que permanecen suspendidas debido a su tamaño y densidad, suponen el mayor peligro para la salud, debido que, al inhalarlas, pueden afectar las zonas periféricas de los bronquiolos. Además, la OMS hace especial seguimiento a cuatro contaminantes, considerados los de mayor impacto, siendo estos el Monóxido de Carbono (CO), Dióxido de Azufre (SO2), Dióxido de Nitrógeno (NO2) y Ozono (O3). Estos parámetros, tanto material particulado, como contaminantes volátiles, coexisten a su vez, con un ecosistema de microorganismos en la atmósfera: bacterias, virus, hongos, toxinas, esporas, entre otras. Aunque, si bien, la atmósfera como tal no tiene una microbiota autóctona, es un rápido medio para la dispersión hacia largas distancias, incluso a escala global. Estos microorganismos utilizan como transporte bioaerosoles (estornudos), partículas de saliva, gotas de agua, fibras de ropa, piel, fragmentos de hojas secas y partículas de polvo, arrastradas a su vez por las corrientes de aire. Según una investigación llevada a cabo en el 2009 por Soto et al., (4) , la actividad antropocéntrica, especialmente en edificaciones públicas, es una fuente de la microbiota presente en el aire. Los resultados obtenidos muestran que la hora en que la actividad humana era nula, presentó niveles más bajos de contaminación bacteriana (50 UFC/m3), mientras que el valor máximo (338 UFC/m3) se presentó cuando había presencia de usuarios en las instalaciones. Caso contrario sucedió con los hongos, los cuales no parecen seguir el patrón de densidad que la bacteriana, dado que la menor concentración (70 UFC/m3) se observó en presencia de usuarios, mientras que la concentración mayor fue en ausencia de 23 ella (275 UFC/m3). Esto sugiere que la mayoría de las especies fúngicas presentes en el aire no son de origen humano. Entre los géneros de las bacterias aisladas en el estudio con mayor frecuencia se encuentran Micrococcus sp. Staphylococcus sp., Streptococcus sp., Bacillus sp., Neisseria sp., Acinetobacter sp., Pseudomonas sp. y Corynebacterium sp. y entre los hongos, el género Cladosporium sp. en mayor frecuencia, seguido de Alternaria sp. Penicillium sp. y Aspergillus sp. Estos resultados no difieren mayormente a los obtenidos por BORREGO, Sofía y PERDOMO, Ivette (5) en 2014, donde dentro de las bacterias aisladas se encontraron Staphylococcus sp., Streptococcus sp., Corynebacterium sp., Bacillus polymyxa, Bacillus sp., Streptomyces sp., Serratia marcescens, Serratia sp., Pantoae agglomerans, Enterobacter sp. y Hafnia alvei. Los géneros de hongos predominantes fueron Aspergillus sp., Cladosporium sp. y Penicillium sp; se detectaron otros como Curvularia sp., Alternaria sp, Fusarium sp., Mucor sp. y Chrysonilia sp. Aunque se observó que algunos espacios cumplían con el orden y aseo satisfactoriamente, incluso con los parámetros de temperatura y humedad, los valores encontrados superaban la concentración microbiana para que el ambiente no sea considerado como contaminado, cuyo valor es de 1000 UFC/m3. Otros estudios encontraron diferencias no muy significativas a los discutidos anteriormente. En Tunja, Toloza et al., (6) encontró una mayor cantidad de géneros fúngicos que bacterianos, entre los cuales se evidenció principalmente los géneros Cladosporium sp., Paecilomyces sp. y Penicillium sp., y en cuanto a las bacterias, Bacillus sp. y Neisseria sp. Estos microorganismos fueron aislados al estudiar la biblioteca central Jorge Palacios Preciado de la Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia. Similar información reportó Rivadeneira (7), donde hongos de géneros Cladosporium spp., Penicillium spp., Rhizopus spp., Cephalosporium spp. y Aspergillus spp., fueron aislados de un edificio antiguo de la Pontificia Universidad Católica del Ecuador, sugiriendo que las causas determinantes en el desarrollo de éstos son el desgaste de la estructura y su falta de mantenimiento. Además de la problemática descrita anteriormente, en la Universidad de Santander sede Cúcuta algunos estudiantes y docentes refieren pasar por cuadros alérgicos y/o gripales que se van presentando desde el inicio del calendario académico durante el paso por los salones de clase y laboratorios hasta su finalización; teniendo en cuenta que no sólo las actividades diarias llevadas a cabo por los humanos son factores de estudio en la calidad microbiológica del aire sino que también el estado de las edificaciones, la humedad, temperatura, tipo de 24 aireación, frecuencia de aseo y mantenimiento, entre otros, se constituyen también como parte de los factores determinantes. Por tal razón, este estudio se propuso establecer la asociación de aquellos factores bióticos y abióticos con la carga bacteriana encontrada al interior de los salones de clase de la Universidad de Santander sede Cúcuta. 1.2. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA ¿Cuál es la asociación de los factores bióticos y abióticos con la carga bacteriana en el entorno de los salones de clase de la UDES sede Cúcuta 2019-A? 1.3. OBJETIVOS 1.3.1 Objetivo General Asociar los factores bióticos y abióticos que influyen en la carga bacteriana en el entorno de los salones de clase de la UDES sede Cúcuta 2019-A. 1.3.2 Objetivos Específicos Identificar la carga bacteriana en los salones de clase mediante técnicas de laboratorio. Caracterizar los factores bióticos y abióticos en los entornos de los salones de clase mediante técnicas de observación. Establecer la asociación de los factores bióticos y abióticos con la carga bacteriana mediante el coeficiente de correlación de Pearson. 1.4 JUSTIFICACIÓN Pertinencia: Al buscar los factores bióticos y abióticos presentes en las aulas de clase, se espera encontrar si existe o no, una correlación entre ellos y la carga bacteriana que llevan a ocasionar enfermedades respiratorias, sistémicas y 25 alergias afectando la calidad de vida y el normal desempeño de los estudiantes, docentes y el personal de trabajo de la Universidad de Santander. El presente trabajo toma en cuenta las normas nacionales e internacionales en la evaluación y técnicas para el estudio de la calidad del aire en los ambientes interiores, con el fin de obtener datos pertinentes que permitan determinar si existe o no una correlación entre las variables de importancia. Articulación. Desde la Universidad de Santander, específicamente desde el programa UDES Verde se tiene como objetivo analizar los factores queintervienen en la conservación y degradación del medio ambiente, teniendo en cuenta que la carga bacteriana existente en los salones de clases es una de las causas de degeneración del entorno; este propósito de UDES Verde cumple con la proyección de la investigación, ya que, lleva al análisis de ese factor que afecta el entorno en donde los estudiantes se desenvuelven. También se muestra el compromiso por la conservación y protección del medio ambiente, vinculando proyectos que se desarrollen dentro de la comunidad, que ayuden a cumplir esta misión; entendiendo que otro pilar de esta investigación es la conservación del ambiente. Un último objetivo de UDES verde, con el que se encuentra articulado, es llegar a motivar la participación y sensibilización de toda la comunidad universitaria en la educación ambiental, tanto individual como colectiva. Este punto de articulación va acorde a los objetivos propuestos por esta investigación, ya que, hace parte de la finalidad de esta, promoviendo el beneficio de la comunidad universitaria en general: docentes, estudiantes y personal operativo. De igual manera, desde el Ministerio de Educación Nacional, se plantean los Proyectos Ambientales Escolares (PRAE), los cuales se deben desarrollar en las instituciones educativas con un único fin, el cual es, generar conciencia ambiental en la comunidad y conocer los problemas ambientales que se encuentran dentro de los establecimientos educativos enfatizando en las situaciones encontradas en los salones de clases, que permitan aplicar estrategias pertinentes para llegar a mitigar los hallazgos. Por tal razón, se articula con la presente investigación, al buscar mejorar el ambiente de desarrollo de estudiantes y docentes promoviendo buenas prácticas que eliminen amenazas en el entorno. 26 Motivación: Contribuir activamente al beneficio de la comunidad universitaria, también con programas como UDES Verde, atendiendo la necesidad de identificar, promover y mantener en los entornos utilizados a diario por todo el personal universitario. Aportes: El estudio generará evidencia científica que permitirá hacer un análisis de los factores que se presume, influyen negativamente en el ambiente de los interiores de salones de clase de la Universidad de Santander Campus Cúcuta. Beneficiarios: Todo el personal, tanto docente, administrativo, estudiantil y todo aquel que haga parte o presencia en los entornos interiores de la Universidad de Santander Campus Cúcuta. 27 2. MARCO REFERENCIAL 2.1. ANTECEDENTES DE LA INVESTIGACIÓN INTERNACIONALES DE LAROSA et al. (9), establece un precedente con un artículo de revisión titulado “El aire: hábitat y medio de transmisión de microorganismos”, donde presenta todo un desarrollo histórico, los tipos de microorganismos que se presentan en la atmósfera, las condiciones necesarias para su supervivencia, las técnicas de investigación de los microorganismos presentes en el aire y un recuento de las principales enfermedades transmitidas por el aire, causadas por virus, bacterias y hongos. FEKADU HAYLEEYESUS, S y MELAKU, A. (10) en su artículo “Microbiological Quality of Indoor Air in University Libraries”, evalúan la concentración de bacterias y hongos en el ambiente interno de las bibliotecas de la Universidad de Jimma, Etiopía, utilizando cajas de Petri abiertas para el conteo de UFC estándares. Se evidencia que, de acuerdo con los estándares de sanidad de la Comisión Europea, casi todos los ambientes aéreos de las bibliotecas están severamente contaminados, en rangos entre 367 y 2595 UFC/m3. Establece que el ambiente es potencial candidato en la relación con el Síndrome del Edificio Enfermo (SEE), asociado comúnmente con manifestaciones clínicas como alergia, conjuntivitis, rinitis y asma. ORTIZ, G y CATALÁN, V. (11) en su artículo “Calidad microbiológica en ambientes interiores”, publicado en Gestión práctica de Riesgos laborales, establece que los principales factores que influyen en la calidad el aire son: nivel y efectividad de la renovación de aire, nivel y eficiencia de la filtración del aire, la efectividad de la desinfección, nivel de recirculación interna del aire, la densidad de ocupación, la temperatura, la humedad del aire y el mantenimiento de la edificación. Además, hace un recuento de técnicas para el seguimiento y plan de muestreo y la recomendación según normas internacionales sobre la calidad del aire. También cabe resaltar la gran investigación liderada por AFSHINNEKOO et al. (12), donde durante 17 meses, más de 470 estaciones de la ciudad de New York en Estados Unidos, donde se identificaron 562 especies en total, siendo 67 de éstas patógenas. Las más comunes entre las patógenas fueron la Escherichia coli 28 encontrada en un total de 56 estaciones y Stenotrophomonas maltophilia en 409 estaciones. Se resalta la gran biodiversidad en las especies encontradas, incluso una de ellas sólo se había encontrado antes en la Antártica. El estudio tuvo como objetivo crear una base de datos que pueda utilizarse para hacer comparaciones en un futuro, y determinar si se está desarrollando una epidemia como el cólera o el Ébola. El estudio se denomina “Geospatial Resolution of Human and Bacterial Diversity with City-Scale Metagenomics”, y está publicado en la revista Cell Systems. NACIONALES En el ámbito nacional es importante resaltar la investigación realizada por MENDEZ, C et al. (13), en Neiva, Colombia, año 2015 titulada “Identificación de bacterias y hongos en el aire de Neiva, Colombia”, el cual planteó como objetivo general aislar e identificar microorganismos (bacterias y hongos) presentes en el aire de la zona urbana de la ciudad de Neiva en el periodo comprendido entre la época de sequía y la época de lluvias durante el año 2012. La investigación se realizó bajo un enfoque cualitativo, cuyos resultados arrojaron que el género Aspergillus spp. y los bacilos Gram positivos fueron los microorganismos predominantes en las distintas zonas de muestreo, mientras que los géneros Aureobasidium sp. y bacilos Gram negativos presentaron frecuencia de aparición ocasional y rara, ya que no son considerados microorganismos propios del aire. El aporte que hace al presente trabajo de investigación es que la carga microbiana fue mayor en la época de sequía con respecto a la época de lluvias, presentándose más crecimiento bacteriano que fúngico en las dos temporadas del año. A nivel nacional cabe exaltar la investigación realizada por ROMERO, C et al. (14), en Bogotá, Colombia, año 2015 denominada "Determinación de bacterias en el aire del laboratorio de microbiología de la facultad de medio ambiente y recursos naturales de la Universidad Distrital Francisco José de Caldas asociadas a posibles afecciones en la salud”, el cual planteó como objetivo general cuantificar e identificar las bacterias presentes en el aire del laboratorio de microbiología relacionadas con posibles afecciones en la salud, los resultados obtenidos fueron que se encontró una mayor cantidad de bacterias Gram positivas que Gram negativas, identificándose Micrococcus sedentarius, Staphylococcus sp., S. haemolyticus, S. capitis, S. cohnii sp. cohnii, S. hominis y S. lentus. Así mismo, Leuconostoc pseudomesenteroides, Bacillus subtilis y Corynebacterium renale son asociados con infecciones pulmonares y reacciones alérgicas. Este da un aporte a 29 la presente investigación, debido a que destaca que la transmisión y el contagio de algunas de las enfermedades suelen ocurrir de manera horizontal, es decir, por contacto de persona a persona, personas a objetos y objetos a personas, actuando como vectores principales de bacterias. De igual manera en el ámbito nacional, cabe destacar la investigación realizada por DAZA, M et al. (15), en Barranquilla,Colombia, año 2015 titulada “Contaminación microbiológica del aire al interior y el síndrome del edificio enfermo”, el cual planteó como objetivo general describir los microorganismos como hongos y bacterias y las partículas biológicas que están involucrados en la contaminación al interior de edificaciones, causando deterioro en las infraestructuras y en algunos casos, problemas de salud. Los resultados obtenidos muestran que son diversos los factores que influyen en el albergue de contaminantes de tipo microbiano del aire al interior de edificaciones no industrializadas, la mayoría de ellos debido a actividades antropocéntricas, materiales de construcción, humedad relativa por encima del 60 % y carencia de programas planificados de evaluación y control de contaminantes. Este da un aporte a la investigación, porque evidencia la importancia de estructurar programas de prevención, promoción y saneamiento integral, que incluyan inspecciones periódicas a estructuras, sistemas de aireación y ambientes exteriores. LOCALES En el ámbito local se encuentra el trabajo de SILVA, J (16), denominado “Determinación de la calidad microbiológica en los ambientes de los laboratorios de la Universidad de Santander Campus Cúcuta en el año 2018”, donde se tenía como objetivo determinar la calidad microbiológica de los laboratorios de la Universidad de Santander Campus Cúcuta, utilizando la búsqueda de información a través de encuestas de los procesos de limpieza y desinfección, la recuperación de microorganismos mediante sedimentación en placa y la posterior identificación de éstos. El estudio demostró un alto crecimiento en UFC de mesófilos, mohos y levaduras, resaltando el hallazgo de Staphylococcus aureus en más del 50% de los laboratorios objeto de estudio. 30 2.2 MARCO TEÓRICO 2.2.1. Factores que influyen en el medio ambiente. La ecología se define como “la ciencia que estudia las interacciones de los organismos vivos y su ambiente”. Derivando de ésta, la ecología humana es el estudio de los ecosistemas desde el punto de vista de la forma en que afectan a los seres humanos y en la que resultan afectados por ellos. La ecología humana incluye conocimientos de muchas ramas del saber: aspectos químicos, económicos, políticos, sociales, éticos, y también estrictamente biológicos. Cuando se estudian estas interacciones entre humanos y ecosistemas, se pueden encontrar tres tipos de componentes adicionales: factores bióticos (compuestos por organismos vivos), factores abióticos y sistemas biológicos. Estos últimos se consideran existentes siempre y cuando los factores bióticos y abióticos interactúen entre sí intercambiando energía y materia. Algunos pueden llegar a ser tan complejos, que se hace necesario estudiarlos bajo niveles distintos de jerarquía, desde individuos hasta ecosistemas. 2.2.1.1 Factores abióticos. Los factores abióticos son las características fisicoquímicas que posee un medio. No dependen directamente de los seres vivos, aunque su actividad puede modificarlos. (17) Los componentes del medio abiótico se pueden agrupar en: Compuestos inorgánicos: formados por carbono, nitrógeno, agua, fósforo, azufre; es decir aquellos elementos que fluyen entre el componente biótico y abiótico del ecosistema, en los ciclos biogeoquímicos. Compuestos orgánicos: los cuales fluyen en el ecosistema en las cadenas tróficas. Factores climáticos: como la temperatura, luz, humedad, presión atmosférica y se relacionan con la posición sobre el globo terráqueo. Factores edáficos, que se relacionan con el ciclo geológico y los factores y procesos formadores del suelo. Los componentes bióticos y abióticos de cualquier ecosistema están íntimamente entrelazados en la naturaleza, que resulta difícil desde el punto de vista funcional establecer una separación clara entre ellos. Así por ejemplo los elementos biológicos como carbono, hidrógeno, oxígeno, nitrógeno, fósforo y azufre, los 31 cuales constituyen las moléculas orgánicas de los seres vivos se encuentran en el medio externo, tanto en la atmósfera, como en el suelo y fluyen de manera constante entre los diferentes componentes del ecosistema. (18) Temperatura. La temperatura es un factor fundamental en el desarrollo de las bacterias, ya que condicionan su velocidad de crecimiento (y por lo tanto su velocidad de generación) y la velocidad a la que catalizan las enzimas. A una temperatura mínima para ellas, la velocidad de los procesos de transporte ocurridas en la membrana se detiene, ya que la fluidez de ésta depende de la temperatura. A medida que sube ésta, las reacciones metabólicas catalizadas por las enzimas aumentan gradualmente hasta una temperatura máxima, donde nuevamente esta velocidad empieza a descender (19). Humedad. La humedad también es un factor determinante, ésta se puede expresar como humedad absoluta o como humedad relativa. La primera hace referencia al número de gramos de vapor de agua contenidos en un metro cúbico de aire; mientras que la humedad relativa es la relación, expresada en porcentaje, entre la cantidad de vapor de agua realmente existente en la atmósfera y la que existiría si el aire estuviera saturado a la misma temperatura (20). Esta capacidad del aire para contener humedad se relaciona con la temperatura, donde si la capacidad del aire para absorber vapor de agua aumenta, la temperatura se eleva; mientras que la humedad relativa disminuye cuando la temperatura aumenta. La humedad relativa es un factor determinante en el crecimiento de los microorganismos; cuando esta se encuentra entre el 40 y 60% la atmósfera no contiene el vapor de agua necesario para su óptimo crecimiento, haciendo que se disminuya su concentración en el aire; por otra parte al presentarse una baja humedad relativa se pueden presentar efectos adversos en la salud de los seres humanos, generando sequedad en las fosas nasales y garganta, lo que permite tener una mayor susceptibilidad a los patógenos que se puedan encontrar suspendidos en el aire. (21) 2.2.1.2 Factores bióticos. Dentro de los componentes bióticos que se destacan en este estudio, están los microorganismos capaces de transmitirse por el ambiente a través del aire. En ambientes interiores se produce un importante aporte de microorganismos por medio de las personas que están en ellos, los 32 sistemas de aire acondicionado, de distribución de agua, entre otros. Por otro lado, los edificios contienen en su interior muchos lugares que permiten el crecimiento de microorganismos, actuando como amplificadores de la contaminación biológica aportada (22). Dentro de estos microorganismos, se estudian en este trabajo de investigación las bacterias, de las cuales se hablará a continuación. Bacterias. Se definen como células procariotas sin núcleo definido, tienen una estructura sencilla cuando se comparan con las células eucariotas; sus formas y tamaños son variados. Algunas bacterias formas endosporas resistentes para sobrevivir en ambientes extremos en estado de reposo. De acuerdo a su forma. Las bacterias pueden ser bacilos (bastones), cocos (forma redondeada) y espirilos (formas espirales o helicoidales) (23). Figura 1. Bacterias Fuente:http://academico.upv.cl/doctos/ENFE-6017/%7B103AD534-8A1F-456C- 9BF899DD8BE54F05%7D/2012/S1/Clasificaci%C3%B3n%20de%20los%20Microorganismos.pdf - p.16 http://academico.upv.cl/doctos/ENFE-6017/%7B103AD534-8A1F-456C-9BF899DD8BE54F05%7D/2012/S1/Clasificaci%C3%B3n%20de%20los%20Microorganismos.pdf http://academico.upv.cl/doctos/ENFE-6017/%7B103AD534-8A1F-456C-9BF899DD8BE54F05%7D/2012/S1/Clasificaci%C3%B3n%20de%20los%20Microorganismos.pdf 33 Dentro de las bacterias presentes en el aire se encuentran: Familia Bacillaceae. El géneroBacillus sp., está comprendido por bacilos Gram positivos, caracterizados principalmente por su capacidad de producir esporas. Este género incluye microorganismos aerobios estrictos y anaerobios facultativos. Las especies pertenecientes a este género son bastante heterogéneas, debido a su gran diversidad metabólica, de tipo nutricional y de la composición y estructura de la pared celular de las formas vegetativas. De igual manera se encuentran especies psicrófilas, mesófilas y termófilas, así como alcalófilas, neutrófilas y acidófilas. La especie B. anthracis es el principal causante de enfermedades en el humano y en otros mamíferos, seguido de B. cereus causante de envenenamiento por consumo. Familia Corynebacteriaceae. Son bacilos Gram positivos, catalasa positiva, no forman esporas, hacen parte de la flora normal del humano, pueden encontrarse en el ambiente y estar asociados con animales. Las corinebacterias se han considerado como poco importantes en cuanto a patologías del ser humano, aunque, en personas con inmunodeficiencias pueden asumir el papel de invasores oportunistas, causando principalmente infecciones cutáneas, neumonía, endocarditis, placa dental entre otras. Corynebacterium diphtheriae es el patógeno humano más importante dentro de esta familia, la cual tiene la capacidad de producir la toxina diftérica cuando es lisogenizada por el fago beta. Familia Pseudomonadaceae. El género Pseudomonas sp., está compuesto por varias especies de bacilos Gram negativos, oxidasa-positivos, aerobios y no fermentadores, que habitan principalmente en el suelo y agua, cumplen un papel importante en la descomposición de la materia orgánica. Generalmente son móviles debido a los flagelos polares que posee. Algunas especies son patógenas para plantas y animales, mientras otras son patógenas oportunistas que infectan al ser humano que presente inmunodeficiencias. Pseudomonas aeruginosa es el patógeno humano, causando infecciones nosocomiales, meningitis. Familia Actinomicetaceae Son bacilos Gram positivos que varían en su morfología, requerimientos de oxígeno, composición de la pared celular y capacidad de formar esporas. Estas causan tres infecciones importantes que son Actinomicosis, Nocarditis y Actinomicetoma. Familia Enterobactereaceae: Son bacilos Gram negativos, no formadores de esporas que pueden ser móviles por flagelos perítricos o inmóviles, son 34 anaerobios facultativos con diversidad bioquímica. Cuando se desarrollan en anaerobiosis fermentan los hidratos de carbono; mientras que en concentraciones elevadas de oxígeno utilizan el ciclo del ácido tricarboxílico. La mayor parte de las especies de esta familia no son patógenas, sino microorganismos oportunistas que pueden infectar cualquier sitio del organismo cuando encuentren un huésped alterado o inmunodeficiente. Los bacilos entéricos pueden llegar a invadir cualquier parte del organismo y causar infecciones nosocomiales, neumonía, meningitis y diversos trastornos gastrointestinales. Estos microorganismos son sensibles a la desecación, pero pueden sobrevivir durante periodos prolongados si se les proporciona la humedad adecuada. Entre las especies de mayor interés para los humanos se encuentran: Escherichia coli, Citrobacter koseri, Citrobacter amalonaticus, Enterobacter aerogenes, Klebsiella oxytoca, Klebsiella ozaenae, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella rhinoscleromatis, Morganella morganii, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Serratia odorífera y Providencia alcalifaciens. Familia Staphylococcaceae. A esta familia pertenece el género Staphylococcus sp., son anaerobios facultativos Gram positivos de los cuales existen 33 especies aproximadamente y tres de ellas son de importancia clínica, entre los que se encuentran Staphylococcus aureus, S. epidermidis y S. saprophyticus, en donde el S. aureus es el patógeno más significativo para el hombre; S. epidermidis es asociado con infecciones en pacientes con inmunodeficiencias, S. saprophyticus puede causar infecciones en el tracto urinario en las mujeres (24). Otras especies que se asocian con patología humana pertenecientes a esta familia se encuentran: Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus xylosus, Staphylococcus simulans. 2.2.1.3 Coeficiente de correlación de Pearson (ρ): Un coeficiente de correlación, mide el grado de relación o asociación existente generalmente entre dos variables aleatorias. No es conveniente identificar correlación con dependencia causal, ya que, si hay una semejanza formal entre ambos conceptos, no puede deducirse de esto que sean análogos; en efecto es posible que haya una alta correlación entre dos acontecimientos y que, sin embargo, no exista entre ellos relación de causa o efecto; por ejemplo cuando dos acontecimientos tienen alguna causa común, pueden resultar altamente asociados y no son el uno causa del otro. Cabe recordar que el coeficiente fluctúa entre -1 ≤ ρ ≤ 1. 35 Este coeficiente tiene como objetivo medir la fuerza o grado de asociación entre dos variables aleatorias cuantitativas que poseen una distribución normal bivariada conjunta. El coeficiente se define por la siguiente fórmula (25): Características: Cuando ρ sea un valor cercano a uno, la asociación lineal de ambas variables es fuerte. Cuando ρ sea un valor cercano a cero, la asociación lineal de ambas variables es muy pobre o nula. 2.3 MARCO CONCEPTUAL. Los términos que se definen a continuación corresponden a la perspectiva teórica que asumen los investigadores en este estudio. AEROBIOS MESÓFILOS: en este grupo se incluyen todas las bacterias, mohos y levaduras capaces de desarrollarse a 35ºC +/- 2ºC en las condiciones establecidas. (26) AGAR: gel coloidal formado por hidratos de carbono. Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. En el agar bacteriológico el componente dominante es un polisacárido que se obtiene de ciertas algas marinas y que presenta la indudable ventaja que, a excepción de algunos microorganismos marinos, no es utilizado como nutriente. Un gel de agar al 1-2% se licua alrededor de los 100ºC y se gelifica alrededor de los 40ºC, dependiendo de su grado de pureza. (27) BIOAEROSOLES: se definen como partículas que se encuentran suspendidas en el aire y que contienen organismos vivos tales como bacterias, virus, hongos, polen e incluso insectos muy pequeños o sus desechos. (28) MEDIO DE CULTIVO: un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de microorganismos. En las condiciones de 36 laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias. MICROORGANISMO: organismo que no es visible al ojo humano, capaz de realizar sus procesos vitales tales como crecer, alimentarse, producir energía y reproducirse. (29) MICROORGANISMOS PATÓGENOS: microorganismos que dañan la salud humana y son principalmente bacterias, virus y parásitos. (29) SÍNDROME DEL EDIFICIO ENFERMO: conjunto de síntomas diversos de origen multifactorial y de relación temporal positiva, experimentados por más de un 20 % de los ocupantes de edificios no industriales, que mejoran e incluso pueden llegar a desaparecer cuando el afectado deja el edificio. UNIDADES FORMADORAS DE COLONIA (UFC): crecimiento de un microorganismo sobre un medio de cultivo que se puede visualizar macroscópicamente en las muestras para su recuento e identificación. 2.4. MARCO CONTEXTUAL Esta investigación se realizó en la Universidad de Santander, Campus Cúcuta, ubicada en la Urb. El Bosque, en la ciudad de San José de Cúcuta37 Figura 2. Ubicación geográfica Universidad de Santander La recolección de las muestras se realizó en los salones de clase B, C y D de la Universidad de Santander Campus Cúcuta. En cuanto a la preparación de los medios cultivos y el análisis de la carga bacteriana con los medios de cultivo Agar SPC y Agar Baird Parker, se llevaron a cabo en el Laboratorio de Microbiología 1 de la Universidad de Santander campus Cúcuta. 2.5 MARCO LEGAL Este estudio pretende apoyarse en el fundamento ético y legal de diferentes resoluciones, decretos internacionales que norman y direccionan el tema de esta investigación. Normas UNE 100012:2005 El objeto de esta norma es valorar la higiene de los sistemas de ventilación y acondicionamiento de aire (SVAA). NORMA UNE 171330 – Calidad ambiental en interiores Esta norma se desarrolla con el objeto de establecer un sistema paso a paso de diagnóstico, inspección y gestión de los ambientes interiores. El campo de aplicación de esta norma es el 38 ambiente interior de todo tipo de recintos, instalaciones y edificaciones, exceptuando aquellos que se destinan a actividades desarrolladas en procesos industriales y agrícolas 2.6 SISTEMA DE HIPÓTESIS H1: Existe alguna relación entre los factores bióticos y abióticos y la carga bacteriana presente en las aulas de clase de la Universidad de Santander, Campus Cúcuta. H0: No existe alguna relación entre los factores bióticos y abióticos y la carga bacteriana presente en las aulas de clase de la Universidad de Santander, Campus Cúcuta. 39 2.7 OPERACIONALIZACIÓN DE LAS VARIABLES Tabla 1. Matriz Operativa VARIABLE PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN OBJETIVO ESPECÍFICO VARIABLE DIMENSIÓN INDICADOR INSTRUMENTO ESCALA FUENTE ¿Cuál es la carga bacteriana existente en los salones de clase de la Universidad de Santander, Campus Cúcuta? Identificar la carga bacteriana en los salones de clase mediante técnicas de laboratorio Carga microbiana UFC/cm2 /15 min 20;21;22… Incubadora Razón Muestras de ambiente ¿Cuáles son los factores bióticos y abióticos que están presentes en los salones de clase de la Universidad de Santander, Campus Cúcuta? Caracterizar los factores bióticos y abióticos en los entornos de los salones de clase mediante técnicas de Factores bióticos y abióticos Temperatura, humedad, presencia de partículas de polvo, tipo de microorganis mos °C, %HR Termohigróme tro, incubadora, medio de cultivo Nominal, Razón Salones de clase 40 observación . ¿Existe o no una asociación entre los factores bióticos y abióticos con la carga bacteriana presente en los salones de clase de la Universidad de Santander, Campus Cúcuta? Establecer la asociación de los factores bióticos y abióticos con la carga bacteriana mediante el coeficiente de determinaci ón R2. Asociación entre variables Adimensional 0.67…0.85 SPSS v26 Razón Salones de clase 41 3. MARCO METODOLÓGICO 3.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN Los tipos de investigación se clasifican en función de su propósito, del nivel de profundidad con el que se estudia un fenómeno, el tipo de datos empleados, el tiempo que toma estudiar el problema, entre otras. 3.1.1 Nivel de investigación. Según Arias (30), la investigación descriptiva consiste en la caracterización de un hecho, fenómeno, individuo o grupo, con el fin de establecer su estructura o comportamiento. Por tal razón, el tipo de investigación realizada en el presente estudio es descriptiva correlacional, ya que se recolectó información sobre la presencia o ausencia de aerobios mesófilos y Staphylococcus aureus, en los ambientes de 15 salones de clase de la Universidad de Santander UDES, y además se estableció el grado de relación o asociación existente entre dos o más variables (temperatura, humedad relativa). 3.1.2. Diseño de la investigación. Según Arias (30), la investigación de campo es aquella que consiste en la recolección de datos directamente de los sujetos investigados, o de la realidad donde ocurren los hechos, sin manipular o controlar variable alguna. Dado lo anterior, esta investigación es de campo, por lo que se realizó la recolección de los datos directamente en 15 salones de la Universidad de Santander Campus Cúcuta, sin realizar ninguna modificación en estos recintos. 3.2 MÉTODOS Para el desarrollo de la presente investigación, fue necesario desarrollar las siguientes fases: Fase I: Preparatoria En esta fase fue importante la preparación y alistamiento del material de laboratorio necesario para la toma de muestras ambientales, además de seleccionar los salones y puntos de toma de muestra de los bloques B, C y D. 42 Fase II: Descriptiva Esta fase constó de 3 etapas que permitieron la descripción y desarrollo de la investigación. Etapa 1. Toma de muestras. Se realizaron dos muestreos en el periodo A del año 2019. Para la recolección de muestras se empleó la técnica de sedimentación en placa, mediante la utilización de 30 cajas de Petri con los medios de cultivo SPC y Baird Parker para recuento de aerobios mesófilos y Staphylococcus aureus respectivamente. Dichos medios se transportaron hasta los salones de clase objeto de estudio y posteriormente se expusieron al ambiente durante 15 minutos. Los muestreos se realizaron en 5 salones por bloque (B, C y D) de la Universidad de Santander, Campus Cúcuta. Todas las muestras se incubaron a una temperatura de 37ºC durante 48 horas. Etapa 2. Caracterización de factores bióticos. Luego del periodo de incubación, se realizó el recuento de colonias, y se reportó como UFC/65cm2/15 minutos para aerobios mesófilos y Staphylococcus aureus. Posteriormente, se tomaron colonias representativas de cada una de las cajas y se realizó caracterización macroscópica y microscópica de las mismas. Tras obtener dicha caracterización, se procedió a la identificación bioquímica de cada uno de los aislados mediante siembra en agar TSI, LIA, indol, motilidad, citrato, DNAsa y coagulasa y se llevaron a incubación a 37°C durante 24 horas. Transcurrido este tiempo se realizó la interpretación de los resultados. Etapa 3. Identificación de factores abióticos. Para la identificación de los factores abióticos, se tuvo en cuenta la temperatura, humedad relativa con un termohigrómetro de marca hitech y presencia o ausencia de partículas de polvo por la técnica de observación. Para la recolección de los datos, se utilizó el método de observación, registrando cada una de las características en un formato diseñado para tal fin (Anexo A, B y C). Fase III: Análisis Etapa 1. Determinación de la correlación. Para la determinación de la correlación entre las variables, se utilizó la técnica estadística de correlación de Pearson, a través del software SPSS v26. De esta manera, se estableció el grado de correlación entre ellas según el coeficiente de correlación de Pearson (r) donde 43 se correlacionó cada una de las variables con la presencia de carga microbiana, un valor cercano de r a 1, explica una buena relación entre las variables, caso contrario cuando r tiene un valor cercano a 0. Fase 5: Cierre La interpretación se llevó a cabo a partir de la carga microbiana obtenida de los dos muestreos realizados y la correlación establecida entre estos, la temperatura ambiental y la humedad relativa de los salones muestreados. 3.3 POBLACIÓN Y MUESTRA. 3.3.1 Población. Es el conjunto total de individuos, objetos o medidas que poseen algunas características comunes observables en un lugar y en un momento determinado. La población utilizada en esta investigación estuvo compuesta por los ambientesde los salones de la Universidad de Santander, Campus Cúcuta. 3.3.2 Muestra. La muestra es un subconjunto fielmente representativo de la población. La muestra estuvo constituida por los ambientes de 15 salones ubicados en los bloques B, C y D de la Universidad de Santander, Campus Cúcuta. 3.4. TÉCNICA E INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS. Las técnicas utilizadas para la recolección de datos fue la observación de aquellos factores abióticos como temperatura, humedad relativa y presencia o ausencia de material particulado. De igual manera, los resultados de las muestras tomadas se registraron en un cuaderno de campo y se realizó registro fotográfico de cada una de las actividades realizadas. 3.5. TÉCNICA DE PROCESAMIENTO Y ANÁLISIS DE LOS DATOS. Para el análisis de resultados, se aplicó el análisis del coeficiente de correlación de Pearson entre las variables cuantitativas de temperatura, humedad relativa y presencia de material particulado versus la carga microbiana presente en los 44 salones de clase de la Universidad de Santander Campus Cúcuta utilizando el software SPSS v.23 45 4. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS 4.1 RESULTADOS E INTERPRETACIÓN. 4.1.1 Caracterización de la carga microbiana presente en los salones de clase. Tabla 2. Recuento de Staphylococcus aureus en los salones muestreados. SALÓN PRIMER MUESTREO INFORME B-301 4 UFC/65cm2/15min B-302 1 UFC/65cm2/15min B-303 3 UFC/65cm2/15min B-402 4 UFC/65cm2/15min B-403 2 UFC/65cm2/15min C-502 2 UFC/65cm2/15min C-503 3 UFC/65cm2/15min C-305 0 UFC/65cm2/15min C-301 0 UFC/65cm2/15min C-304 0 UFC/65cm2/15min D-202 0 UFC/65cm2/15min D-405 1 UFC/65cm2/15min D-402 2 UFC/65cm2/15min D-501 0 UFC/65cm2/15min D-603 2 UFC/65cm2/15min SEGUNDO MUESTREO INFORME 2 UFC/65cm2/15min 0 UFC/65cm2/15min 1 UFC/65cm2/15min 0 UFC/65cm2/15min 2 UFC/65cm2/15min 1 UFC/65cm2/15min 1 UFC/65cm2/15min 1 UFC/65cm2/15min 1 UFC/65cm2/15min 2 UFC/65cm2/15min 2 UFC/65cm2/15min 0 UFC/65cm2/15min 0 UFC/65cm2/15min 0 UFC/65cm2/15min 0 UFC/65cm2/15min TERCER MUESTREO INFORME 2 UFC/65cm2/15min 3 UFC/65cm2/15min 1 UFC/65cm2/15min 3 UFC/65cm2/15min 1 UFC/65cm2/15min 4 UFC/65cm2/15min 2 UFC/65cm2/15min 0 UFC/65cm2/15min 2 UFC/65cm2/15min 1 UFC/65cm2/15min 0 UFC/65cm2/15min 3 UFC/65cm2/15min 0 UFC/65cm2/15min 1 UFC/65cm2/15min 4 UFC/65cm2/15min 46 Según la Tabla 2, se puede observar una baja presencia de Staphylococcus aureus en todos los salones muestreados, sin embargo, los salones del Bloque B, específicamente los salones B-301 y B-402 mostraron mayor concentración de este microorganismo.Según la Tabla 4, los salones del Bloque D mostraron una carga bacteriana de Staphylococcus aureus casi nula, mientras que los Bloque B y C mostraron una concentración muy baja de este microorganismo.Los resultados de la Tabla 6, muestran el promedio de Unidades Formadoras de Colonias en los salones muestreados, encontrándose valores que oscilaron entre 0 UFC/65cm2/15min y 4 UFC/65cm2/15min. 47 Caracterización de la carga microbiana presente en los salones de clase Tabla 3. Recuento de aerobios mesófilos en los ambientes muestreados. TERCER MUESTREO INFORME 5 UFC/65cm2/15min 3 UFC/65cm2/15min 1 UFC/65cm2/15min 2 UFC/65cm2/15min 4 UFC/65cm2/15min 2 UFC/65cm2/15min 5 UFC/65cm2/15min 2 UFC/65cm2/15min 0 UFC/65cm2/15min 1 UFC/65cm2/15min 2 UFC/65cm2/15min 3 UFC/65cm2/15min 2 UFC/65cm2/15min 3 UFC/65cm2/15min 3 UFC/65cm2/15min SALÓN PRIMER MUESTREO INFORME B-301 1 UFC/65cm2/15min B-302 8 UFC/65cm2/15min B-303 6 UFC/65cm2/15min B-402 1 UFC/65cm2/15min B-403 4 UFC/65cm2/15min C-502 3 UFC/65cm2/15min C-503 5 UFC/65cm2/15min C-305 6 UFC/65cm2/15min C-301 1 UFC/65cm2/15min C-304 0 UFC/65cm2/15min D-202 1 UFC/65cm2/15min D-405 0 UFC/65cm2/15min D-402 0 UFC/65cm2/15min D-501 1 UFC/65cm2/15min D-603 0 UFC/65cm2/15min SEGUNDO MUESTREO INFORME 0 UFC/65cm2/15min 2 UFC/65cm2/15min 3 UFC/65cm2/15min 1 UFC/65cm2/15min 3 UFC/65cm2/15min 2 UFC/65cm2/15min 1 UFC/65cm2/15min 4 UFC/65cm2/15min 1 UFC/65cm2/15min 0 UFC/65cm2/15min 1 UFC/65cm2/15min 0 UFC/65cm2/15min 0 UFC/65cm2/15min 1 UFC/65cm2/15min 1 UFC/65cm2/15min 48 Según la Tabla 3, se puede observar una baja presencia de aerobios mesófilos en los salones del Bloque D en comparación con los salones muestreados de los Bloques B y C, con recuentos que oscilan entre 1 y 8 UFC/65cm2/15min. De acuerdo con la Tabla 5, los resultados obtenidos muestran una carga bacteriana muy baja en el Bloque D, y moderada en los Bloques B y C. Según la Tabla 7, la concentración de mesófilos aerobios en los ambientes de los salones muestreados estuvo entre 0 y 5 UFC/65cm2/15min. En promedio, los Bloques B y D presentaron 3 UFC/65cm2/15min, mientras que el bloque C presentó un promedio de 2 UFC/65cm2/15min. 49 4.1.2 Caracterización microscópica y macroscópica de los aislados obtenidos. Tabla 4. Caracterización microscópica y macroscópica. Primer muestreo. MEDIO DE CULTIVO MORFOLOGÍA MICROSCÓPICA MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA IMAGEN Baird Parker Cocos Gram Positivos en racimos Colonias negras Redondas, de bordes lisos, convexas, húmedas, brillantes, rodeadas de una zona opaca y un halo claro con actividad de las enzimas lecitinasa y lipasa. Fuente Shirley Bolívar Fuente Shirley Bolívar SPC Cocos Gram positivos en cadena colonias de color blanco convexa, borde regular, aspecto cremoso SPC Bacilos Gram positivos aislados colonias de color rosado convexa, borde regular, aspecto brillante Fuente Shirley Bolívar En la tabla 8, se describe la morfología macroscópica y microscópica de las diferentes colonias aisladas a partir del primer muestreo realizado a los ambientes de los salones de clase. Estos resultados muestran la presencia tanto de bacterias Gram positivas como bacterias Gram negativas. 50 Tabla 5. Caracterización microscópica y macroscópica. Segundo muestreo. MEDIO DE CULTIVO MORFOLOGÍA MICROSCÓPICA MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA IMAGEN Baird Parker Cocos Gram Positivos en racimos Colonias negras Redondas, de bordes lisos, convexas, húmedas, brillantes, rodeadas de una zona opaca y un halo claro con actividad de las enzimas lecitinasa y lipasa. Fuente Shirley Bolívar SPC Bacilos Gram positivos Colonias de color blanco convexa, borde regular, aspecto cremoso Fuente Shirley Bolívar SPC Bacilos Gram positivos y negativos Colonias de color beige borde irregular, plana, aspecto seco Fuente Shirley Bolívar La tabla 9, muestra la morfología macroscópica y microscópica de las diferentes colonias aisladas a partir del segundo muestreo realizado a los ambientes de los salones de clase. Estos resultados enmarcan la presencia principalmente de bacterias Gram positivas. 51 Tabla 6. Caracterización microscópica y macroscópica. Tercer muestreo. MEDIO DE CULTIVO MORFOLOGÍA MICROSCÓPICA MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA IMAGEN Baird Parker Cocos Gram Positivos en racimos colonias negras Redondas, de bordes lisos, convexas, húmedas, brillantes, rodeadas de una zona opaca y un halo claro con actividad de las enzimas lecitinasa y lipasa. Fuente Shirley Bolívar SPC Cocos Gram positivos colonias de colorblanco convexa, borde regular, aspecto cremoso Fuente Shirley Bolívar SPC Bacilos Gram positivos esporulados colonias de color beige borde irregular, plana, aspecto seco Fuente Shirley Bolívar SPC Bacilos Gram negativos colonias de color amarillo convexa, borde regular, aspecto brillante Fuente Shirley Bolívar 52 SPC Cocos Gram positivos colonias de color naranja convexa, borde regular, aspecto brillante Fuente Shirley Bolívar En la tabla 10 se describe la morfología macroscópica y microscópica de las diferentes colonias aisladas a partir de los muestreos ambientales. Estos resultados destacan la presencia de bacterias Gram positivas principalmente. 4.1.3 Identificación bioquímica de los aislados obtenidos. Se tomaron las colonias más representativas y se realizó la identificación a partir de algunas pruebas bioquímicas, obteniendo los resultados descritos en las tablas encontradas a continuación: Tabla 7. Identificación bioquímica microorganismos Gram positivos. Primer muestreo. SALON COLONIAS A IDENTIFICAR COAGULASA DNAsa IDENTIFICACIÓN B-301,B-402, C-502,C-503 Colonias negras positivo Positivo Staphylococcus aureus C-502, B-303 Colonias blancas negativo negativo Staphylococcus epidermidis 53 Tabla 8. Identificación bioquímica microorganismos Gram positivos. Segundo muestreo. Tabla 9. Identificación bioquímica microorganismos Gram negativos. Segundo muestreo SALON COLONIAS A IDENTIFICAR CITRATO MOTILIDAD INDOL TSI LIA IDENTIFICACION C-305 D-202 D-501 D-603 Colonias beige Positivo Motilidad: positiva Indol: negativa A/A K/K Enterobacter cloacae Tabla 10. Identificación bioquímica microorganismos Gram positivos. Tercer muestreo. SALON COLONIAS A IDENTIFICAR COAGULASA DNAsa IDENTIFICACIÓN B-301,B- 402,C-502, C-503 Colonias negras Positivo positivo Staphylococcus aureus B-301, C- 502 Colonias blancas Negativo negativo Staphylococcus epidermidis B-301, C- 502 Colonias beige Positivo negativo Staphylococcus epidermidis D-405, C- 301,D-405 Colonias naranjas Negativo negativo Staphylococcus hominis SALON COLONIAS A IDENTIFICAR COAGULASA DNAsa IDENTIFICACIÓN B-301,B- 402,C- 502,C-503 Colonias negras Positivo Positivo Staphylococcus aureus C-502B- 303,D-603 Colonias blancas Negativo negativo Staphylococcus epidermidis 54 Tabla 11. Identificación bioquímica microorganismos Gram negativos. Tercer muestreo. SALON COLONIAS A IDENTIFICAR CITRATO MOTILIDAD INDOL TSI LIA IDENTIFICACION D-202 D-501 Colonias amarillas negativo Motilidad: negativo Indol: negativa A/A K/K Enterobacter aerogenes 4.1.4 Caracterización de los factores abióticos. Para la caracterización de los factores abióticos de interés en este estudio como temperatura, humedad relativa y presencia o ausencia de material particulado se realizó un análisis de varianza que permitió deducir la variabilidad de dichos datos al momento de los muestreos realizados. Tabla 12. Resumen del ANOVA Suma de cuadrados Gl Media cuadrática F Sig. °C Entre grupos ,578 2 ,289 ,054 ,947 Dentro de grupos 223,333 42 5,317 Total 223,911 44 %HR Entre grupos ,311 2 ,156 ,006 ,994 Dentro de grupos 1144,800 42 27,257 Total 1145,111 44 Mat_partic Entre grupos 48,844 2 24,422 17,644 ,000 Dentro de grupos 58,133 42 1,384 Total 106,978 44 Dado lo anterior, la tabla 16 muestra que existen diferencias estadísticamente significativas solo en la media del material particulado encontrado en los diferentes salones de clase (Sig.=0,00< 0,05). Caso contrario, se registra para la media de los datos obtenidos para temperatura y humedad relativa donde no aparecen diferencias estadísticamente significativas entre los 3 bloques muestreados con un nivel de confianza del 95%, (Sig.=0,994> 0,05). 55 Tabla 13. Promedio de temperatura registrada durante los muestreos Salones Temperatura (°C) B-301 28,7 B-302 26,7 B-303 27,0 B-402 27,3 B-403 25,3 C-502 27,0 C-503 26,0 C-305 26,7 C-301 27,3 C-304 27,7 D-202 26,3 D-405 28,3 D-402 26,3 D-501 26,3 D-603 28,7 En la tabla 17 se muestra el promedio de la temperatura registrada durante los tres muestreos, valores que oscilaron entre 25°C y 29°C. Por otro lado, el gráfico 1 confirma lo observado en la tabla 16, evidenciando la poca variabilidad de la temperatura alcanzada durante la época de muestreo, esto debido posiblemente a las condiciones medioambientales típicas de la ciudad de Cúcuta. 56 Grafico 1. Variabilidad entre la temperatura (°C) registrada en los ambientes de los salones ubicados en los bloques B C y D durante los 3 muestreos realizados Tabla 14. Promedio de la humedad relativa registrada durante los muestreos Salones Humedad relativa (%) B-301 42,7 B-302 41,3 B-303 43,3 B-402 43,3 B-403 42,0 C-502 39,0 C-503 41,0 C-305 44,7 C-301 44,3 C-304 43,3 D-202 40,7 D-405 40,7 D-402 43,7 D-501 42,3 D-603 46,0 La Tabla 18 evidencia el promedio de humedad relativa registrada durante los tres muestreos, valores que oscilaron entre 39% y 46%. Por otro lado, el gráfico 2 corrobora la poca variabilidad de los datos relacionados con la humedad relativa 57 expresada en la tabla 16 donde se muestra que no existen diferencias mínimas significativas entre los valores registrados para la época del muestreo. Grafico 2. Variabilidad entre la Humedad relativa (%) registrada en los ambientes de los salones ubicados en los bloques B C y D durante los 3 muestreos realizados La Tabla 19 evidencia el promedio registrado para la presencia de material particulado durante los tres muestreos. De igual manera, el gráfico 3 confirma la alta variabilidad de los datos relacionados con esta variable analizada en la tabla 16 donde se muestra que existen diferencias mínimas significativas entre los valores registrados para la época del muestreo, dando como resultado que en los salones del bloque D es donde se registra la mayor presencia de dicho material. 58 Tabla 15. Promedio de la presencia o ausencia de partículas de polvo registrado durante los muestreos BLOQUES SALON PRESENCIA DE PARTICULAS DE POLVO AUSENCIA DE PARTICULAS DE POLVO 1 2 3 4 5 0 TORRE B 1 - 301 × 2 - 302 × 3 - 303 × 4 - 402 × 5 - 403 × TORRE C 6 - 502 × 7 - 503 × 8 - 305 × 9 - 301 × 10 - 304 × TORRE D 11 - 202 × 12 -405 × 13 - 402 × 14 -501 × 15 - 603 × 59 Tabla 16. Instructivo de recolección de factores abióticas mediante observación directa Salones Presencia o ausencia de material particulado B-301 3 B-302 1 B-303 0 B-402 2 B-403 0 C-502 0 C-503 0 C-305 2 C-301 1 C-304 0 D-202 5 D-405 3 D-402 4 D-501 1 D-603 2 (0) Ausencia de partículas de polvo; (1) muy baja presencia; (2) baja presencia; (3) media presencia; (4) alta presencia; (5) Muy alta presencia. 60 Grafico 3. Variabilidad entre el partículas de polvo encontrado en los salones ubicados en los bloques B C y D durante los 3 muestreos realizados 4.1.5 Asociación de los factores bióticos y abióticos con la carga bacteriana mediante correlación de Pearson. Para establecer la asociación entre los factores bióticos y abióticos con la carga bacteriana encontrada en este estudio se realizó una correlación de Pearson, la cual sirve como prueba de hipótesis y como medida de correlación de los datos obtenidos, arrojandolos siguientes resultados: Grafico 4. Correlación de Pearson entre los factores abióticos y la concentración de S. aureus encontrada en los salones de clase °C %HR Material particulado Conc_celular _S.aureus °C Correlación de Pearson 1 ,610** ,089 ,244 Sig. (bilateral) ,000 ,559 ,107 N 45 45 45 45 %HR Correlación de Pearson ,610** 1 ,022 ,136 Sig. (bilateral) ,000 ,888 ,371 N 45 45 45 45 61 Material particulado Correlación de Pearson ,089 ,022 1 -,136 Sig. (bilateral) ,559 ,888 ,375 N 45 45 45 45 Conc_celular S.aureus Correlación de Pearson ,244 ,136 -,136 1 Sig. (bilateral) ,107 ,371 ,375 N 45 45 45 45 **. La correlación es significativa en el nivel 0,01 (bilateral). De acuerdo con los resultados presentados en la tabla 20 y el gráfico 4 se acepta la hipótesis nula la cual afirma que no existe correlación entre los factores bióticos y abióticos encontrados en los salones de clase dado que el p valor es superior a 0,05. Por otro lado, esta correlación cuyo índice es de (0,244) para la temperatura; (0,136) para la humedad relativa y (-0,136) para la presencia de material particulado se puede ubicar en escasa correlación e ínfima correlación respectivamente. Grafico 5. Matriz de asociación entre la Temperatura, Humedad relativa, presencia o ausencia del material particulado y la concentración de S.aureus 62 Grafico 6. Correlación de Pearson entre los factores abióticos y la concentración de mesófilos aerobios encontrada en los salones de clase °C %HR Material particulado Conc_celular _Mesófilos °C Correlación de Pearson 1 ,610** ,089 ,020 Sig. (bilateral) ,000 ,559 ,897 N 45 45 45 45 %HR Correlación de Pearson ,610** 1 ,022 -,009 Sig. (bilateral) ,000 ,888 ,954 N 45 45 45 45 Material particulado Correlación de Pearson ,089 ,022 1 -,295* Sig. (bilateral) ,559 ,888 ,049 N 45 45 45 45 Concentración Mesófilos Correlación de Pearson ,020 -,009 -,295* 1 Sig. (bilateral) ,897 ,954 ,049 N 45 45 45 45 **. La correlación es significativa en el nivel 0,01 (bilateral). *. La correlación es significativa en el nivel 0,05 (bilateral). Dados los resultados presentados en la tabla 21 y el gráfico 5 se acepta la hipótesis nula la cual afirma que no existe correlación entre los factores abióticos como la temperatura y la humedad relativa con la concentración de mesófilos aerobios encontrados en los salones de clase dado que el p valor es superior a 0,05. No obstante, se rechaza dicha hipótesis nula ya que si existe correlación entre la concentración de mesófilos aerobios y la presencia o no de material particulado encontrado en los salones de clase. Por otro lado, estas correlaciones cuyo índice es de (0,020) para la temperatura; (- 0,009) para la humedad relativa y (-0,295) para la presencia de material particulado se pueden ubicar en ínfima correlación (temperatura vs. Concentración mesófilos /humedad relativa vs. Concentración mesófilos) y buena correlación (material particulado vs. Concentración mesófilos) respectivamente. 63 Grafico 7. Matriz de asociación entre la Temperatura, Humedad relativa, presencia o ausencia del material particulado y la concentración de mesófilos aerobios 4.2 DISCUSIÓN De acuerdo con la Organización Mundial de la Salud (OMS), “se considera que el aire limpio es un requisito básico de la salud y el bienestar humanos” (2). Sin embargo, su contaminación sigue representando una amenaza importante para la salud en todo el mundo. Por tal razón, es importante estudiar los microorganismos ya sean hongos o bacterias y las partículas biológicas que generan dicha contaminación al interior de edificaciones, causando deterioro en las infraestructuras y en algunos casos, problemas de salud. Según Ortiz y Catalán, “se considera que un ambiente interior sufre una contaminación biológica si contiene bioaerosoles que pueden causar enfermedad, o efectos adversos para la salud de las personas que se hallen en ese ambiente como hipersensibilidad, irritación, inflamación, etc” (11). Los bioaerosoles son 64 pequeñas partículas transmitidas por el aire que contienen en su interior contaminantes biológicos: seres vivos o productos derivados de ellos. La inhalación, ingestión o el simple contacto con la piel permite a los microorganismos trasmitidos por bioaerosoles entrar en contacto con los seres humanos y producir diversas enfermedades. De otro lado, Cruz y Jiménez (21) afirman que la humedad relativa es un factor determinante en el crecimiento de los microorganismos; cuando esta se encuentra entre el 40 y 60% la atmósfera no contiene el vapor de agua necesario para su óptimo crecimiento, haciendo que se disminuya su concentración en el aire, razón por la cual, se puede asegurar que las condiciones de humedad relativa registradas en este estudio (39% y 46%) y encontradas en los salones de clase de la Universidad de Santander campus Cúcuta beneficiaron la poca concentración de microorganismos encontrados durante los muestreos realizados; por otra parte es bien sabido que al presentarse una baja humedad relativa se pueden presentar efectos adversos en la salud de los seres humanos, generando sequedad en las fosas nasales y garganta, lo que permite tener una mayor susceptibilidad a los patógenos que se puedan encontrar suspendidos en el aire. De igual manera, la Organización Panamericana de la Salud afirma que la temperatura es un factor de importancia en la dinámica atmosférica, ya que esta influye directamente en la movilización y limpieza de grandes cantidades de polvo, humo, partículas y bioaerosoles suspendidos en el aire, transportándolos a través de cerros, valles y cañadas. Los resultados de esta investigación muestran como la temperatura estuvo entre 25°C y 29°C teniendo esta una variación inversa con la humedad; es decir que la humedad disminuyó cuando la temperatura aumentó. No obstante, los datos registrados muestran una temperatura que, aunque variable, es óptima para el crecimiento de mesófilos aerobios los cuales para esta investigación se observaron en bajas concentraciones. Esto coincide con muchos otros estudios que afirman que el origen de los microorganismos en ambientes interiores es muy diverso, llegándose a encontrar en los materiales utilizados como aislantes en la construcción de edificios, pintura, papel de las paredes, humificadores y por supuesto en los sistemas de aire acondicionado quienes introducen en los ambientes interiores, grandes cantidades de bacterias, hongos y protozoos, así como endotoxinas (11), lo que se cree fue determinante en la no obtención de altas concentraciones de microorganismos para esta investigación dado que las muestras fueron tomadas en momentos en los que los sistemas de aire acondicionado estaban apagados y sin flujo de personas al interior de los 65 lugares de muestreo. Esto comprueba una vez más, como, no solo el aire es importante en microbiología ya que proporciona un mecanismo de transferencia para los microorganismos (virus, bacterias, hongos y toda clase de alérgenos), constituyendo una parte del material particulado de la atmósfera, sino también el hecho de que cada vez los ambientes interiores al ser más herméticos dificultan la renovación del aire y causan que se acumule vapor de agua que, al condensar en superficies, crea condiciones de humedad idóneas para el crecimiento de microorganismos (11). Con base en lo anterior, para determinar el comportamiento y establecer el grado de relación existente entre la concentración de microorganismos y las variables meteorológicas (factores abióticos) se aplicó la correlación de Pearson, cuyo índice fue de (0,244) para la temperatura; (0,136)