PRACTICA albumina

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DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES
MICRUNIDAD DE COMPETENCIA 
El estudiante realiza la cuantificación de proteínas totales, en muestra sanguínea de procedencia humana, de acuerdo a la metodología sugerida estableciendo la correlación clínica de la misma en equipos colaborativos. 
INTRODUCCION
Las proteínas son moléculas complejas que desempeñan funciones muy variadas en los seres vivos. Existen proteínas estructurales como el colágeno o las proteínas integrales de membrana, proteínas de transporte y almacenamiento como la hemoglobina, proteínas implicadas en funciones tan importantes como la contracción muscular, proteínas con función de defensa como los anticuerpos y proteínas que participan en la recepción y transmisión de señales. Además, hay que destacar a las proteínas con función catalítica: las enzimas.
Las proteínas que se analizan con mayor frecuencia son las plasmáticas, aun cuando es posible valorarlas en otros líquidos del organismo como orina y fluidos extravasculares.
La función principal de las proteínas séricas es mantener la presión osmótica coloidal del plasma, a fin de evitar las pérdidas de líquidos hacia los tejidos. El contenido de proteínas totales en suero depende:
· Estado nutricional
· Funcionamiento hepático
· Funcionamiento renal
· Errores del metabolismo
· Afecciones como mieloma múltiple
El rango de referencia es de 6.4 a 6.2 g/dl, pero en la práctica, su cuantificaciones una medida que solo refleja los cambios de las proteínas más abundantes como la albúmina y las globulinas.
Las proteínas del suero se separan electroforéticamente en acetato de celulosa a un pH de 8.6 en el que casi todas las proteínas llevan carga negativa y migran hacia el ánodo (polo positivo), en cinco fracciones o en bandas que en orden decreciente de movilidad son: albúmina, globulina tales como la alfa 1, alfa 2, beta y gama. Las principales proteínas plasmáticas cuya cuantificación con de utilidad clínica se agrupan en el siguiente cuadro:
	FRACCION O BANDA
	PROTEINA PRINCIPAL
	VALOR DE REFERENCIA g/dl
	Pre albúmina
	Pre albúmina
	0.0 0.4
	Albumina
	Albúmina
	3.5 – 5.2
	Alfa 1 (α1)
	α1 Glucoproteína ácida
	0.5 – 1.2 
0.9 – 2.0
	
	α1 Antitripcina
	
	Alfa 2 (α2)
	α2 Macrogoblulina
	1.3 – 3.0
0.2 – 0.6
0.3 – 2.0
	
	Ceruloplasmina
	
	
	Haptoglobina
	
	Beta (β)
	Transferrina
	
	
	Complemento C3
	
	Gama (γ)
	IgG
	
	
	IgA
	
	
	IgM
	
MARCO TEORICO
Las proteínas totales de nuestro organismo son un conjunto de compuestos orgánicos macromoleculares, de un peso molecular elevado, que están formadas por moléculas llamadas aminoácidos que se unen entre sí por enlaces peptídicos. La secuencia con la que estos aminoácidos se encadenan y el número de cadenas de aminoácidos, determinan cuál es la estructura primaria de las proteínas. 
Las proteínas son introducidas en el organismo a través de los alimentos, donde se dividen en aminoácidos para formar posteriormente las nuevas proteínas a través del proceso conocido como síntesis de proteínas. Las proteínas realizan multitud de funciones en nuestro organismo para su correcto funcionamiento.
Las proteínas totales son el resultado de sumar los distintos componentes proteicos presentes en el organismo tales como: Alfa1, alfa2, beta gamma globulina y albúmina. Las proteínas fraccionadas, al contrario que las proteínas totales, miden la cantidad específica de cada proteína. Ambas pruebas, proteínas totales y fraccionadas, son útiles a la hora de determinar estados anormales y enfermedades que pueden afectar a nuestro organismo. 
MATERIAL
	
	INSTRUMENTOS
	EQUIPOS
	5 tubos de ensaye de 13x100
	Kit comercial de SPINREACT
	Espectrofotómetro a 540nm.
	Cubetas de 1cm de paso de luz
	Pipeta automática de 10-100µL
	Baño María a 37°C
	Piseta con agua destilada
	Pipeta automática de 100-1000µL
	Centrifuga
	
	1 gradilla
	
PROCEDIMIENTO
1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada
2. Pipetear en una cubeta. 
	
	Blanco
	Patrón
	muestra
	R (mL)
	1,0
	1,0
	1,0
	Patrón (µL)
	--
	25
	--
	Muestra (µL)
	--
	--
	25
3. Mezclar a incubar 5min a 37°C o 10min a Ta ambiente.
4. Leer la absorbancia (A) del patrón y de la muestra, frente al blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos. 
Calculo:
Valores de referencia 
Adultos: 6,6 – 8,3 g/dL
Recién nacido: 5,2 – 9,1 g/dL
Estos valores son orientativos. Es recomendable cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
REPORTE
· g/dL de proteínas en suero:
· Diagnostico: 
AUTOEVALUACION 
· ¿Cuáles son las funciones de las proteínas analizadas y diagnosticadas en esta prueba?
· ¿Para qué me sirve realizar esta técnica? 
· ¿Cuál es la significancia clínica de las proteínas analizadas en esta práctica?
· Realice un esquema electroforético identificando las regiones que se presenta en este tipo de pruebas.
FUENTES CONSULTADAS
· Feduchi, C. E., Blasco, C. I., Romero, Magdalena, C.S., Yáñez, C. E., (2014). Bioquímica Conceptos esenciales (2a Edición). Madrid: Editorial Medica Panamericana.
· Inserto SPINREACT (2014) Proteínas Totales Biuret Colorimétrico España. Recuperado el 13-11-2015 en: http://www.spinreact.com
	
. ALBUMINA
MICROUNIDAD DE COMPETENCIA
El estudiante realiza la cuantificación de albúmina, en muestra sanguínea de procedencia humana, de acuerdo a la metodología sugerida estableciendo la relación albúmina/globulinas en equipos colaborativos. 
INTRODUCCION 
La albúmina es la proteína más abundante del plasma, un total de 50% de las proteínas totales del suero humano. En comparación con otras proteínas, es una molécula relativamente pequeña, formada por una cadena de 584 aminoácidos, que consiste en un único polipéptido con un peso molecular alrededor de 69.000 d, dispuestas predominantemente en las hélices sostenidos y unidos por enlaces disulfuro. Una de las funciones importantes de la albúmina es su papel en el mantenimiento de la circulación de volumen de plasma, debido a su peso molecular relativamente bajo y su alta concentración. Es responsable de 80% de la presión osmótica coloidal, pero bajo condiciones de concentraciones de albúmina extremadamente bajos observados sorprendentemente si sólo un ligero edema, lo que sugiere que esta función puede ser realizada por otras proteínas del plasma.
La albúmina también juega un papel en el mantenimiento del equilibrio ácido-base. Residuos de histidina presentes en la estructura de la albúmina, por tener un pKa alrededor de 7.4 confieren una función de amortiguamiento en situaciones de acidosis metabólica, mientras que en la presencia de alcalosis metabólica, también lleva la función de amortiguación, ya que es capaz de liberar su hidrógeno iones. Además, la albúmina está implicado en el transporte de una amplia variedad de sustancias fisiológicas moléculas solubles tales como ácidos grasos de cadena larga, hormonas como la tiroxina, el cortisol y aldosterona y pequeñas iones tales como calcio, cobre, níquel y zinc. Muchos medicamentos también se unen a la albúmina y hay competencia por los sitios de unión, tanto entre ellos y entre los fármacos y los ácidos grasos de cadena larga. Por último, la albúmina también actúa como un reservorio de aminoácidos que representan alrededor del 5% de los aminoácidos disponibles a los tejidos periféricos, y este suministro se incrementa en pacientes con algunas enfermedades malignas, y en situaciones en las que el balance de nitrógeno es negativo. 
MARCO TEORICO
La albúmina es una proteína sintetizada en el hígado. La prueba de la albúmina en orina detecta y mide la cantidad de albúmina en orina. La presencia de una pequeña cantidad de albúmina en orina constituye un indicador precoz de daño renal. Anteriormente, cuando se detectaban estas pequeñas cantidades de albúmina en orina se hablaba de "microalbúmina" a pesar de que este término es incorrecto; es posible que algunos profesionales sanitarios sigan empleando esta terminología inadecuada.
La medida de albúmina en orina es útil en el cribado de algunas enfermedades crónicas como diabetese hipertensión; ambas favorecen el desarrollo de daño o enfermedad renal. Mediante esta prueba se pueden detectar bastantes años antes de que una lesión renal significativa se haga manifiesta, pequeñas cantidades de albúmina que se excretan hacia la orina por una alteración del mecanismo normal de control del riñón.
La albúmina es una proteína plasmática que se encuentra a elevadas concentraciones en sangre, de manera que cuando los riñones funcionan adecuadamente no se pierde prácticamente albúmina por la orina. Cuando existe una lesión o enfermedad renal, los riñones empiezan a perder su capacidad de retener la albúmina y otras proteínas. Esto puede observarse en enfermedades crónicas, como diabetes e hipertensión; el aumento de la cantidad de proteínas que se pierde refleja un aumento de la lesión o trastorno renal.
Una de las primeras proteínas que se detecta cuando existe daño renal es la albúmina. Las personas que presentan de manera persistente ciertas cantidades de albúmina en orina (albuminuria) presentan mayor riesgo de desarrollar insuficiencia renal y enfermedad cardiovascular.
MATERIAL 
	
	INSTRUMENTOS
	EQUIPOS
	Cubetas de paso de luz de 1cm. 
	Kit comercial de SPINREACT
	Espectrofotómetro a 630nm
	5 tubos de ensaye de 13x100mn
	Pipeta automáticas de 100-1000µL
	Baño María a 37°C
	Piseta con agua destilada
	Pipeta automática de 10 a 50µL
	Centrifuga
	
	1 gradilla 
	
PROCEDIMIENTO
1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
2. Pipetear en una cubeta: 
	
	Blanco
	Estándar
	Muestra
	R (mL)
	1,0
	1,0
	1,0
	Estándar (µL)
	--
	5
	--
	Muestra (µL)
	--
	--
	5
3. Mezclar e incubar por 5min, a 37°C o 10min, a temperatura ambiente (15.25°C)
4. Leer las absorbancias (A) de la muestra y el estándar, frente al blanco. El color es estable por 1 hora en cuarto a temperatura. 
Cálculos: 
REPORTE
· g/dL de albumina en suero de la muestra:
· Diagnostico: 
En ambas muestras se dio un resultado bajo en albumina, siendo los valores normales de 3.4 a 5.4 por lo tanto los niveles bajos de albúmina pueden ser una señal de enfermedad del hígado o los riñones; u otra afección médica
AUTOEVALUACION 
· Cuál es la función de la albumina Menciona y explica patologías donde se ve alterada la albumina
La función más importante de la albúmina es la regulación de la presión oncótica, necesaria para la distribución adecuada de los líquidos en los tejidos y fuera de ellos. Vamos a detenernos un momento en este término tan singular, pues es de gran interés médico y biológico.
La hipoalbuminemia se desarrolla por 4 causas generales: disminución de la síntesis; aumento del catabolismo; aumento en la pérdida; alteración en la distribución. Una hipoalbuminemia secundaria a los dos primeros mecanismos requiere de un periodo de tiempo prolongado, considerando la vida media de la albúmina y que un 30% de los hepatocitos se encarga de producirla. El aumento de pérdidas responde a varias causas entre ellas, hemorragias, síndrome nefrótico, enteropatía perdedora de proteínas y pérdidas exudativas (ej., quemaduras o drenajes quirúrgicos). 
· Esquematiza la función que consideres más importante de estas proteínas en el organismo
· ¿Cuáles son las causas del aumento y disminución de esta proteína en sangre?
Niveles de albúmina más bajos de lo normal pueden ser una señal de:
· Enfermedad del hígado, incluyendo cirrosis severa, hepatitis e hígado graso
· Enfermedad de los riñones
· Desnutrición
· Infección
· Enfermedades digestivas que implican problemas para utilizar las proteínas de los alimentos, como la enfermedad de Crohn y trastornos de malabsorción
· Quemaduras en extensas áreas del cuerpo
· Enfermedad tiroidea
Niveles de albúmina más altos de lo normal pueden ser una señal de deshidratación, la que puede ser causada por diarrea grave u otras afecciones.
FUENTES CONSULTDAS
· Scheyla J.D. N., Draibe A. S., Kamimura A. M., & Cuppari L. (2004). Albumina sérica como marcador nutricional de pacientes en hemodiálisis. Revista de Nutricion, 17(3), 339-349. Retrieved. Recuperado en Octubre 23 de 2015, desde: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1415-52732004000300007&lng=en&tlng=pt.
· LabTest Online (2014) Albumina en orina y cociente albumina/creatinina en orina. Recuperado el 23 de Octubre del 2015. Desde: http://www.labtestsonline.es 
· Inserto SPINREACT (2014) Albumin Bromocresol green Colorimetric España. Recuperado el 13-11-2015 en: http://www.spinreact.com
CREATININA
MICROUNIDAD DE COMPETENCIA
El estudiante cuantifica la creatinina como uno de los componentes que comprenden los parámetros de la Química Sanguínea por medio de técnicas analíticas en equipos colaborativos y correlaciona su significancia clínica.
INTRODUCCIÓN
La creatinina es un compuesto orgánico generado en la degradación de la creatina. Es un producto de desecho del metabolismo normal de los músculos que usualmente es producido en el cuerpo en una tasa muy constante (dependiendo de la masa de los músculos) y, normalmente, filtrado por los riñones y excretado en la orina. La medición de la creatinina es la manera más simple de monitorizar la correcta función de los riñones. (Feduchi 2014).
Pacientes obesos, asténicos, hipertiroideos, insuficientes renales o con distrofias musculares tienen una baja excreción urinaria de creatinina. Por el contrario, este parámetro aumenta en el hipotiroidismo, diabetes y en individuos musculosos.
Los valores aumentados pueden estar relacionado a una insuficiencia renal y este es un indicador más específico de enfermedad renal que el nitrógeno de urea. 
MARCO TEORICO 
Este examen se utiliza para evaluar el funcionamiento renal. La creatinina es eliminada del cuerpo completamente por los riñones. Si la función renal es anormal, los niveles de creatinina se incrementarán en la sangre, debido a que se elimina menos creatinina a través de la orina.
Los niveles de creatinina también varían de acuerdo con la talla y la masa muscular de la persona.
MATERIAL
	
	INSTRUMENTAL
	EQUIPOS
	Cubetas de paso de luz de 1cm 
	1 pipeta automática de 100 a 1000µL
	Espectrofotómetro a 492nm
	5 tubos de ensaye de 13x100
	1 pipeta automática de 10 a 100µL
	Baño María a 37°C
	1 piseta con agua destilada
	Kit comercial de SPINREACT
	Centrifuga
	Puntillas desechables
	1 Gradilla
	
PROCEDIMIENTO
CREATININA
· Muestra: suero o plasma heparinizado
· Longitud de onda: 492nm (490-510)
· Temperatura: 37°C 
· Valores de referencia: 
· Hombres: 0,7 – 1,4 mg/dL = 61,8 – 123,7 µmol/L
· Mujeres: 0,6 – 1,1 mg/dL = 53,0 – 97,2 µmol/L
1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
2. Pipetear en una cubeta 
	
	Blanco
	Patrón
	Muestra
	RT (mL)
	1,0
	1,0
	1,0
	Patrón (µL)
	--
	100
	--
	Muestra (µL)
	--
	--
	100
3. Mezclar y poner en marcha el cronometro
4. Leer la absorbancia (A1) al cabo de 30 segundos y al cabo de 90 segundos (A2) de la adición de la muestra. 
5. Calcular ΔA= A2 – A1 
Cálculos:
Factor de conversión: mg/dL x 88,4 = µmol/L.
REPORTE
NOMBRE DEL PACIENTE: 
EDAD: FECHA:
SEXO: PRUEBA: 
PARAMETROS
RESULTADOS
VALORES NORMALES
CREATININA
---
---
BUN /CREAT
---
---
OBERVACIONES: 
_________________________
AUTORIZO 
AUTOEVALUACION
· Describe y esquematiza el ciclo metabólico de la creatinina
· ¿Por qué se dice que este parámetro es útil para la valoración de la función renal? 
FUENTES DE CONSULTA
· Feduchi, C. E., Blasco, C. I., Romero, Magdalena, C.S., Yáñez, C. E., (2014). Bioquímica Conceptos esenciales (2a Edición). Madrid: Editorial Medica Panamericana.
· Inserto SPINREACT (2014) Creatinina Jaffé. Colorimétrico-cinético España. Recuperado el 13-11-2015 en: http://www.spinreact.com
· Marcos Vélez (2014) Química Sanguínea y Valores. Asociación Profesional Española de Neuropatía y Bioterapia. España: recuperado el 18 de Noviembre del 2015, en: http://www.apenb.org 
· Guía-Laboratorio de Bioquímica Clínica.,Facultad de Medicina Buenos Aires Argentina. Recuperado el 18 de Noviembre del 2015, en: http://www.fmed.uba.ar
UREA
MICROUNIDAD DE COMPETENCIA 
El estudiante cuantifica la urea como uno de los componentes que comprenden los parámetros de la Química Sanguínea por medio de técnicas analíticas en equipos colaborativos y correlaciona su significancia clínica.
INTRODUCCION
Los seres ureotélicos, como el hombre, elimina el nitrógeno de los aminoácidos en forma de urea en la orina, de tal modo que el nitrógeno ureico representa el 80% del total de nitrógeno excretado. La molécula de urea presenta dos átomos de nitrógeno, y se forma por un mecanismo cíclico denominado ciclo de la urea. Dichas reacciones se llevan a cabo en la mitocondria y en el citosol, siendo la ornitina la molécula que ensambla todo los compuestos para la posterior eliminación. (Feduchi 2014). 
MARCO TEORICO
La urea es la principal forma de excreción del grupo amino de los aminoácidos. 
El nitrógeno de aminoácidos forma amoniaco, que es toxico para el cuerpo. En el hígado, el amoniaco y los grupos amino de los aminoácidos se convierten en urea, que es no toxico, soluble en agua y fácilmente excretado en la orina. La misma se filtra libremente por el glomérulo y es parcialmente secretada y reabsorbida a nivel de los túbulos. Su excreción urinaria depende de las proteínas de la dieta, por tal motivo el aclaramiento renal de la misma no es una expresión fidedigna del funcionamiento renal. Por ello, el aclaramiento de urea no se usa para evaluar el funcionamiento renal. Cabe acotar que la concentración plasmática de urea se elevará recién cuando el deterioro renal afecte a más del 50% del parénquima. La excreción de urea se incrementa fisiológicamente por ejercicio y dietas ricas en proteínas y patológicamente en estados febriles y catabólicos. Durante el crecimiento, embarazo y bajo consumo de proteínas en la dieta disminuye la concentración de urea urinaria. Estados patológicos hepáticos y renales tienen la misma consecuencia.
MATERIAL 
	
	INSTRUMENTOS
	EQUIPOS
	5 tubos de ensaye de 13x100
	1 pipeta automática de 10 a 100µL
	Espectrofotómetro a 340nm
	Cubetas de paso de luz de 1cm
	1 pipeta automática de 100 a 1000µL
	1 Baño María a 37°C
	Puntillas desechables para las pipetas 
	1 gradilla
	Centrifuga
PROCEDIMIENTO
UREA
· Muestra: suero o plasma heparinizado
· Longitud de onda: 340nm
· Temperatura: 37°C / 15-25°C
· Valores de referencia:
· 15-45mg/dL = 2,5-7,5 mg/dL (2,49-7,49 mmol/L)
1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada 
2. Pipetear en una cubeta:
	
	Blanco
	Patrón
	Muestra
	RT (mL)
	1,0
	1,0
	1,0
	Patrón (µL)
	--
	10
	--
	Muestra (µL)
	--
	--
	10
3. Mezclar y leer las absorbancias a los 30 segundos (A1) y a los 90 segundos (A2)
4. Calcular: ΔA= A1 - A2 
Cálculos
Factor de conversión: mg/dL x 0,1665 = mmol/L.
REPORTE
NOMBRE DEL PACIENTE: 
EDAD: FECHA:
SEXO: PRUEBA: 
PARAMETROS
RESULTADOS
VALORES NORMALES
UREA
---
---
BUN
OBERVACIONES: 
________________________
AUTORIZO 
AUTOEVALUACION
· ¿Qué es la relación BUN / CREATININA?
· Describa por medio de un esquema el ciclo metabólico de la urea. 
· Cuál es la significancia clínica del aumento y disminución de la urea en sangre. 
FUENTES CONSULTADAS
· Feduchi, C. E., Blasco, C. I., Romero, Magdalena, C.S., Yáñez, C. E., (2014). Bioquímica Conceptos esenciales (2a Edición). Madrid: Editorial Medica Panamericana.
· Marcos Vélez (2014) Química Sanguínea y Valores. Asociación Profesional Española de Neuropatía y Bioterapia. España: recuperado el 18 de Noviembre del 2015, en: http://www.apenb.org 
· Guía-Laboratorio de Bioquímica Clínica., Facultad de Medicina Buenos Aires Argentina. Recuperado el 18 de Noviembre del 2015, en: http://www.fmed.uba.ar 
· Pera Z. E., (2013) Química Sanguínea Significado y valores 1ra parte (Centro Holístico de Estudios Integrativos) Articulo recuperado el 18 de Noviembre del 2015., en: http://www.chesin.com.mx 
· Inserto SPINREACT (2014) Urea-LQ Ureasa-GLDH. Cinético. Liquido España. Recuperado el 13-11-2015 en: http://www.spinreact.com 
· Marks A., Lieberman M., Peet A., Chansky M. (2013) Bioquímica médica básica un enfoque clínico (4ª Edición) España: Editorial Wolters Kluwer Health Lippincott Williams & Wilkins.