MANUAL DE PRACTICAS_ALICIAZAMUDIOSANCHEZ

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Universidad Veracruzana
Facultad de Bioanálisis
Manual de prácticas
BIOQUIMICA CLINICA (88159)
Docente: Moreno Cortes María Luisa
Alicia de los Ángeles Zamudio Sánchez
1 de diciembre de 2022
Índice
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL	3
DETERMINACIÓN DE TRIGLÍCERIDOS	7
LIPOPROTEÍNAS (COLESTEROL HDL)	10
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL
MICROUNIDAD DE COMPETENCIA 
El estudiante identifica las pruebas de un perfil de lípidos, realizando la cuantificación de los metabolitos que lo constituyen por medio de la realización de las metodologías de laboratorio propuestas, y en equipo colaborativo discute la significancia clínica y correlación de estos parámetros. 
INTRODUCCION
Los lípidos son un importante alimento; una dieta normal contiene, por día, alrededor de 60g de lípidos, lo que constituye cerca del 30% de las calorías dietéticas totales necesarias. Los lípidos actúan como amortiguadores físicos y aislantes de la temperatura corporal; una de sus funciones sobresalientes es la de participar, asociados a proteínas y carbohidratos, en la composición de las membranas celulares y subcelulares. “(Laguna 2002)”
El colesterol es un lípido anfipático, dado que no tiene carga el colesterol y los esteres de colesterol se llaman lípidos neutrales, como tal, es un componente estructural esencial de las membranas, y de la capa externa de las lipoproteínas plasmática. 
MARCO TEORICO
El colesterol es una sustancia grasosa encontrada en los tejidos sanguíneos, sea como colesterol libre o combinado con un ácido graso de cadena larga como el colesteril éster la forma de almacenamiento, en líquido biliar y cerebral. Se sintetiza en muchos tejidos a partir de la acetil-CoA, sirve como precursor de los ácidos biliares, esteroides, incluso corticosteroides, hormonas sexuales y vitamina D. La determinación de colesterol en suero es un auxiliar principal para el diagnóstico y clasificación de lipemias. Otras condiciones como enfermedades tiroideas y hepáticas influyen en los niveles de colesterol. 
Los niveles elevados de colesterol en sangre se asocian con la formación de placas ateroscleróticas que pueden ocluir los vasos sanguíneos, causando ataques cardiacos y apoplejías. Si bien los altos niveles de colesterol LDL son especialmente aterogénicos, altos niveles de colesterol HDL son protectores, porque estas partículas están involucradas en el proceso de retirar el colesterol de los tejidos, tales como las células de revestimiento de los vasos y regresarlo al hígado. (Marks 2013). 
MATERIAL
Aquí se integra el material para poder realizar las dos técnicas de triglicéridos y colesterol 
	
	INSTRUMENTOS
	EQUIPOS
	Cubetas de 1cm de paso de luz 
	1 pipeta automática de 10-100µL
	Espectrofotómetro, ajustado a 505n.
	5 tubos de ensaye de 13x100
	1 pipeta automática de 100-1000µL
	Baño María a 37°C
	Puntillas desechables para las pipetas 
	1 gradilla
	
	
	
	1 centrifuga 
	1 piseta con agua destilada
	Kit comercial de SPINREACT
	
PROCEDIMIENTO
COLESTEROL
· Muestra: suero o plasma
· Longitud de onda del espectrofotómetro a 505nm
· Valores de referencia (evaluación de riesgo):
· Normal < 200 mg/dL
· Moderado 200 – 239 mg/dL
· Alto 240 mg/dL o más
1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada 
2. Pipetear en una cubeta:
	
	Blanco
	Patrón
	Muestra
	R (mL)
	1,0
	1,0
	1,0
	Patrón (µL)
	--
	10
	--
	Muestra (µL)
	--
	--
	10
3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C o 10 minutos a 15 – 25°C
4. Leer la absorbancia (A) del patrón y la muestra, frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 60 minutos. 
Cálculos: 
REPORTE
· mg/dL de colesterol en la muestra: 
Paciente sano:
Paciente enfermo: 
· Diagnostico: 
El paciente enfermo tiene antecedentes de obesidad, presentando colesterol alto en la prueba realizada. Se conoce que el paciente no realiza ejercicio físico y tiene una dieta abundante en azucares y grasas, por lo tanto, posee más colesterol del que el organismo necesita. 
AUTOEVALUACION 
· ¿Necesita alguna condición especial esta prueba hacía con el paciente?
El paciente debe conservar su dieta habitual. Si consume alcohol no es necesario que se suspenda el consumo, pero si no lo hace habitualmente, debe abstenerse de ingerirlo 24 horas antes del estudio.
Ayuno de 8-10 horas, no mayor de 12 horas. Si se excede ese tiempo de ayuno, empieza la lipolisis, es decir, el cuerpo empieza a degradar lípidos almacenados para obtener energía, y por el ayuno prolongado probablemente ya hubo formación de cuerpos cetónicos. 
· Qué consecuencias patológicas podría desarrollar tener niveles altos en estos parámetros
El colesterol se acumula fundamentalmente en la pared interna de los vasos sanguíneos, en concreto en las arterias, y especialmente en las arterias coronarias, las que irrigan los miembros inferiores e incluso en las arterias que irrigan el cerebro. Ahí, ese depósito produce una inflamación y consiguiente fibrosis, lo que a su vez crea una placa que puede llegar a obstruir las arterias.
Cuando se produce esa obstrucción de forma parcial a nivel de las arterias del corazón, los síntomas que presenta el paciente son los de una angina -dolor en el pecho sobre todo cuando hace esfuerzos, aunque también puede aparecer en reposo-. Pero si se trata de una obstrucción total de forma aguda puede provocar un infarto agudo de miocardio. Y cuando esas placas afectan a los vasos que van al cerebro el resultado son accidentes cerebrovasculares o ictus.
FUENTES CONSULTADAS
· Análisis de colesterol: cómo interpretar los resultados. (2020, 13 noviembre). Actualidad Sanitaria. https://actualidadsanitaria.com/enfermedades/analisis-de-colesterol-como-interpretar-los-resultados/
· Los riesgos de unos niveles altos de colesterol. (2018, 17 agosto). Fundación Española del Corazón. https://fundaciondelcorazon.com/blog-impulso-vital/3193-los-riesgos-de-unos-niveles-altos-de-colesterol.html
· Laguna J. Garza P. E., (2002) Bioquímica de Laguna (5ª. Edición) México, D.F. Editorial: el Manual Moderno.
· Manual de Bioquímica clínica 2010
· Inserto SPINREACT (2014). Colesterol – LQ. CHOD-POD Liquido., España. Recuperado el 13-11-2015 en: http://www.spinreact.com 
· Murray R. K., Bender D. A., Botham K. M., Kennelly P. J., Rodwell V.W., Weil P. A., (2010) Harper Bioquímica Ilustrada (28a Edición) México D.F. Editorial McGraw-Hill Interamericana Editores. 
· Marks A., Lieberman M., Peet A., Chansky M. (2013) Bioquímica médica básica un enfoque clínico (4ª Edición) España: Editorial Wolters Kluwer Health Lippincott Williams & Wilkins.
DETERMINACIÓN DE TRIGLÍCERIDOS 
INTRODUCCION
Los lípidos son un grupo de compuestos celulares con diversas propiedades químicas, que tienen como característica común el hecho de ser solubles en solventes orgánicos (éter, benceno, heptano) y ser insoluble en agua. De igual forma, las funciones biológicas de estos lípidos son diversas; por ejemplo, las grasas y los aceites son las principales formas de almacenamiento de energía en muchos organismos y los fosfolípidos y esteroles constituyen aproximadamente la mitad de la masa de las membranas biológicas. 
MARCO TEORICO 
Los triglicéridos o grasas neutras, son los lípidos más abundantes en los organismos vivos y están formados por el alcohol glicerol esterificado con tres ácidos grasos. Las moléculas de triacilgliceroles en las grasas naturales son muy variadas pues cada uno de los tres ácidos grasos puede ser alguno de los cerca de 10 ácidos grasos más frecuentes, lo cual hace posible las características observadas en la grasa de las distintas especies, por ejemplo: el sebo, la manteca, la mantequilla y los aceites. 
Las principales funciones de los triacilgliceroles es la de constituir la reserva más grande de energía en el organismo humano y la única que permite la sobrevida durante el ayuno prolongado y la función nutricional pues las grasas figuran en la dieta diaria aportando alrededor del 30% de las kilocalorías necesarias para el mantenimiento del organismo; cada gramo de grasa aporta 9Kcal.
Las grasas corporales funcionan también como amortiguador mecánico para proteger a los tejidos, por ejemplo: la grasa que rodea a los riñones, el corazón y el intestino. La grasa subcutánea protege también al cuerpo de los agentes mecánicos externos y además funciona como un aislante térmico que protege a los organismos de las bajas temperaturas. 
Los resultados de laboratorio para considerar en un valor normal en sangre de triglicéridos en ayunas son de 0.34 – 2.26 mmol/L (unidades SI) o 30 a 200 mg/dL (unidades convencionales). (Murray 2010). 
MATERIAL 
	
	INSTRUMENTOS
	EQUIPOS
	5 tubos de ensaye de 13x100
	1 pipeta automática de 10 a 100µL
	Espectrofotómetro ajustado a 505nm
	Cubetas de paso de luz de 1 cm 
	1 pipeta automática de 100 a 1000µL
	1 centrifuga
	Puntillas desechables para pipetas automáticas
	1 gradilla
	1 baño maría a 37°C
	1 piseta con agua destilada
	kit comercial de SPINREACT
	
PROCEDIMIENTO
TRIGLICERIDOS
· Muestra: suero o plasma
· Longitud de onda del espectrofotómetro a 505nm.
· Valores de referencia 
· Hombre: 40 – 160 mg/dL
· Mujeres: 35 – 135 mg/dL
1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada 
2. Pipetear en una cubeta
	
	Blanco
	Patrón
	Muestra
	R (mL)
	1,0
	1,0
	1,0
	Patrón (µL)
	--
	10
	--
	Muestra (µL)
	--
	--
	10
3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C o a 10 minutos a 15-25°C
4. Leer la absorbancia (A) del patrón y de la muestra, frente a blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 30min.
Cálculos:
Abs. PR: Absorbancia de la muestra
Abs. ST: Absorbancia del estándar.
REPORTES 
· mg/dL de triglicéridos en la muestra: 
Paciente sano:
Paciente enfermo: 
· Diagnostico: 
El paciente enfermo tiene antecedentes de obesidad, presentando colesterol alto en la prueba realizada. Se conoce que el paciente no realiza ejercicio físico y tiene una dieta abundante en azucares y grasas, por lo tanto, posee más colesterol del que el organismo necesita. 
FUENTES DE CONSULTA
· Triglicéridos: ¿por qué son importantes? (2022, 3 septiembre). Mayo Clinic. https://www.mayoclinic.org/es-es/diseases-conditions/high-blood-cholesterol/in-depth/triglycerides/art-20048186
· Inserto SPINREACT (2014). Triglicéridos – LQ GPO-POD Liquido., España. Recuperado el 13-11-2015 en: http://www.spinreact.com 
· Murray R. K., Bender D. A., Botham K. M., Kennelly P. J., Rodwell V.W., Weil P. A., (2010) Harper Bioquímica Ilustrada (28a Edición) México D.F. Editorial McGraw-Hill Interamericana Editores. 
· Marks A., Lieberman M., Peet A., Chansky M. (2013) Bioquímica médica básica un enfoque clínico (4ª Edición) España: Editorial Wolters Kluwer Health Lippincott Williams & Wilkins.
LIPOPROTEÍNAS (COLESTEROL HDL)
MICROUNIDAD DE COMPETENCIA 
El estudiante identifica las lipoproteínas como pruebas complementarias al perfil de lípidos, realizando su cuantificación de por medio de la realización de las metodologías analíticas de laboratorio propuestas, y en equipo colaborativo discute la significancia clínica y correlación de la elevación o disminución de las lipoproteínas con respecto al perfil de lípidos. 
INTRODUCCION
Las lipoproteínas son partículas las cuales se ha propuesto un modelo el cual consiste en un núcleo no polar de ésteres de colesterol y triglicéridos, rodeado por una capa polar de proteínas, fosfolípidos y colesterol. La composición y estructura de todas las clases normales de lipoproteínas es consistente con un modelo esférico de un radio variable y un núcleo lipídico no polar. Rodeando al núcleo se encuentra una mono capa de colesterol y fosfolípidos. 
Los componentes proteínicos de las lipoproteínas se denominan apoproteínas, de las que en su mayoría se conoce la secuencia de los aminoácidos compartiendo un rasgo estructural común, debido a la presencia de alfa hélices anfipáticas. 
Las lipoproteínas se clasifican de acuerdo a la densidad de la solución salina en la cual son separadas por ultracentrifugación, esto es debido a que cada de lipoproteínas está compuesta de un diferente porcentaje de lípidos y proteínas. Esta distinta composición y la diferencia en densidad entre lípidos y proteínas explican las características de flotación diferencial de las lipoproteínas. Entre las de origen hepático se encuentran las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL), de densidad intermedia (IDL), de baja densidad (LDL) y de alta densidad (HDL); las de origen intestinal son preferentemente los quilomicrones, aunque el intestino puede sintetizar también VLDL y HDL. (Laguna 2002)
Las lipoproteínas más grandes son precisamente los quilomicrones, que presentan un diámetro aproximadamente de 100nm y una densidad menor a 0.9g/ml. Están compuestos en aproximadamente 99% por lípidos, de los cuales el 90% son triglicéridos. 
MARCO TEORICO
Las lipoproteínas más grandes son precisamente los quilomicrones, que presentan un diámetro aproximadamente de 100nm y una densidad menor a 0.9g/ml. Están compuestos en aproximadamente 99% por lípidos, de los cuales el 90% son triglicéridos. 
Las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) tienen una densidad menor a 1.006g/ml, un diámetro de entre 30-70nm, están formadas por un 88% a 90% de lípidos: aproximadamente 55% de triglicéridos, 20% de colesterol y 15% de fosfolípidos; y en un 10-12% por proteínas. 
Las lipoproteínas de baja densidad (LDL) tiene una densidad de entre 1.019 a 1.063g/ml, y son las que transportan la mayor cantidad de colesterol en los humanos (las dos terceras partes del colesterol plasmático total). Su composición lipídica es de un 35% de esteres de colesterol, un 12% de colesterol, un 8% de triglicéridos y un 20% de fosfolípidos; constituyendo los lípidos aproximadamente el 75% de la molécula. 
Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) tienen un diámetro de entre 8 y 13nm, son las lipoproteínas más pequeñas, están constituidas en cerca de la mitad de su peso por las apoproteínas A y C; contienen 25% de fosfolípidos, 16% de esteres de colesterol, 5% de colesterol y 4% de triglicéridos. Estas lipoproteínas poseen movilidad eléctrica alfa.
Estas lipoproteínas mantienen un gran intercambio de colesterol libre y esteres de colesterol con las VLDL y de colesterol libre con las membranas plasmáticas, considerándose como la forma de eliminar colesterol de la célula; por esto se le conoce en el léxico popular como colesterol “bueno”. El colesterol “malo” es aquel que se encuentra en las partículas LDL, las cuales, al contrario de las HDL, depositan colesterol en los tejidos periféricos. (Laguna 2002).
MATERIAL
	
	INSTRUMENTOS
	EQUIPOS
	8 tubos de ensaye de 13x100
	1 pipeta automática de 10-100µL
	Espectrofotómetro ajustado a los nm. de cada técnica
	1 piseta con agua destilada
	1 pipeta automática de 100-1000µL
	Baño María a 37°C
	Cubetas de 1cm de paso de luz 
	1 pipeta de 1 a 10 µL
	
	
	1 gradillas
	
	
	
	1 Centrifuga 
	Puntillas desechables para las pipetas automáticas
	Kit comercial de SPINREACT*
	
PROCEDIMIENTO
HDL
· Muestra: suero o plasma
· Longitud de onda del espectrofotómetro a 550-560 nm 
· Valores de referencia 
· HDL - Colesterol 
	
	Hombres
	Mujeres
	Riesgo menor
	> 55 mg/dL
	> 65 mg/dL
	Riesgo normal
	35 – 55 mg/dL
	45 – 65 mg/dL
	Riesgo elevado
	< 35 mg/dL
	< 45 mg/dL
1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada 
2. Pipetear en tubos de ensayo
	
	Blanco
	Calibrador
	Muestra
	R1 (µL)
	300
	300
	300
	Calibrador (µL)
	--
	3
	--
	Muestra (µL)
	--
	--
	3
3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C y leer la absorbancia (A1) del calibrador y la muestra.
4. Añadir: 
	
	Blanco
	Calibrador
	Muestra
	R2 (µL)
	100
	100
	100
5. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C.
6. Leer la absorbancia (A2) frente al blanco de reactivo. 
Cálculos: 
REPORTE
Hubo errores al momento de leer en el espectrofotómetro por las cantidades de volumen que se tenían que aspirar en el equipo, por lo que nuestros resultados dan negativos en la práctica.
FUENTES CONSULTADAS
· Colesterol. (s. f.). https://fundaciondelcorazon.com/prevencion/riesgo-cardiovascular/colesterol.html
· Colesterolbueno (HDL). (s. f.). https://medlineplus.gov/spanish/hdlthegoodcholesterol.html
· Laguna J. Garza P. E., (2002) Bioquímica de Laguna (5ª. Edición) México, D.F. Editorial: el Manual Moderno.
· Inserto SPINREACT (2014). HDL COLESTEROL P reactivo precipitante. España. Recuperado el 13-11-2015 en: http://www.spinreact.com 
· Inserto SPINREACT (2014). LDL COLESTEROL D enzimático colorimétrico Liquido. España. Recuperado el 13-11-2015 en: http://www.spinreact.com