MANUAL DE PRACTICAS_ALICIAZAMUDIOSANCHEZ

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Universidad Veracruzana 
Facultad de Bioanálisis 
 
 
Manual de prácticas 
BIOQUIMICA CLINICA (88159) 
Docente: Moreno Cortes María Luisa 
 
 
Alicia de los Ángeles Zamudio Sánchez 
1 de diciembre de 2022
 
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Índice 
 
 
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL ....................................................... 3 
 
DETERMINACIÓN DE TRIGLÍCERIDOS ............................................................... 7 
 
LIPOPROTEÍNAS (COLESTEROL HDL) .............................................................. 10 
 
 
3 
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL 
 
MICROUNIDAD DE COMPETENCIA 
El estudiante identifica las pruebas de un perfil de lípidos, realizando la 
cuantificación de los metabolitos que lo constituyen por medio de la realización de 
las metodologías de laboratorio propuestas, y en equipo colaborativo discute la 
significancia clínica y correlación de estos parámetros. 
 
INTRODUCCION 
Los lípidos son un importante alimento; una dieta normal contiene, por día, alrededor 
de 60g de lípidos, lo que constituye cerca del 30% de las calorías dietéticas totales 
necesarias. Los lípidos actúan como amortiguadores físicos y aislantes de la 
temperatura corporal; una de sus funciones sobresalientes es la de participar, 
asociados a proteínas y carbohidratos, en la composición de las membranas 
celulares y subcelulares. “(Laguna 2002)” 
El colesterol es un lípido anfipático, dado que no tiene carga el colesterol y los 
esteres de colesterol se llaman lípidos neutrales, como tal, es un componente 
estructural esencial de las membranas, y de la capa externa de las lipoproteínas 
plasmática. 
 
 
MARCO TEORICO 
El colesterol es una sustancia grasosa encontrada en los tejidos sanguíneos, sea 
como colesterol libre o combinado con un ácido graso de cadena larga como el 
colesteril éster la forma de almacenamiento, en líquido biliar y cerebral. Se sintetiza 
en muchos tejidos a partir de la acetil-CoA, sirve como precursor de los ácidos 
biliares, esteroides, incluso corticosteroides, hormonas sexuales y vitamina D. La 
determinación de colesterol en suero es un auxiliar principal para el diagnóstico y 
clasificación de lipemias. Otras condiciones como enfermedades tiroideas y 
hepáticas influyen en los niveles de colesterol. 
Los niveles elevados de colesterol en sangre se asocian con la formación de placas 
ateroscleróticas que pueden ocluir los vasos sanguíneos, causando ataques 
cardiacos y apoplejías. Si bien los altos niveles de colesterol LDL son especialmente 
aterogénicos, altos niveles de colesterol HDL son protectores, porque estas 
partículas están involucradas en el proceso de retirar el colesterol de los tejidos, 
tales como las células de revestimiento de los vasos y regresarlo al hígado. (Marks 
2013). 
 
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MATERIAL 
Aquí se integra el material para poder realizar las dos técnicas de triglicéridos y 
colesterol 
 INSTRUMENTOS EQUIPOS 
Cubetas de 1cm de paso 
de luz 
1 pipeta automática de 
10-100µL 
Espectrofotómetro, 
ajustado a 505n. 
5 tubos de ensaye de 
13x100 
1 pipeta automática de 
100-1000µL Baño María a 37°C 
Puntillas desechables 
para las pipetas 
1 gradilla 
1 centrifuga 
1 piseta con agua 
destilada 
Kit comercial de 
SPINREACT 
 
 
PROCEDIMIENTO 
COLESTEROL 
• Muestra: suero o plasma 
• Longitud de onda del espectrofotómetro a 505nm 
• Valores de referencia (evaluación de riesgo): 
o Normal < 200 mg/dL 
o Moderado 200 – 239 mg/dL 
o Alto 240 mg/dL o más 
 
1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada 
2. Pipetear en una cubeta: 
 Blanco Patrón Muestra 
R (mL) 1,0 1,0 1,0 
Patrón (µL) -- 10 -- 
Muestra (µL) -- -- 10 
 
3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C o 10 minutos a 15 – 25°C 
4. Leer la absorbancia (A) del patrón y la muestra, frente al Blanco de reactivo. 
El color es estable como mínimo 60 minutos. 
 
Cálculos: 
𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 =
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝐶𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑑𝑜𝑟
𝐴𝑏𝑠. 𝐶𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑑𝑜𝑟
 
 
 
5 
𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 (𝑚𝑔/𝑑𝐿) = 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑥 𝐴𝑏𝑠. 𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 
 
REPORTE 
• mg/dL de colesterol en la muestra: 
Paciente sano: 
785.52 𝑥 .19 = 149.24 𝑚𝑔/𝑑𝐿 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 
Paciente enfermo: 
785.52 𝑥 .281 = 220.73 𝑚𝑔/𝑑𝐿 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 
 
• Diagnostico: 
El paciente enfermo tiene antecedentes de obesidad, presentando colesterol alto en 
la prueba realizada. Se conoce que el paciente no realiza ejercicio físico y tiene una 
dieta abundante en azucares y grasas, por lo tanto, posee más colesterol del que el 
organismo necesita. 
 
AUTOEVALUACION 
• ¿Necesita alguna condición especial esta prueba hacía con el paciente? 
 
El paciente debe conservar su dieta habitual. Si consume alcohol no es necesario 
que se suspenda el consumo, pero si no lo hace habitualmente, debe abstenerse 
de ingerirlo 24 horas antes del estudio. 
Ayuno de 8-10 horas, no mayor de 12 horas. Si se excede ese tiempo de ayuno, 
empieza la lipolisis, es decir, el cuerpo empieza a degradar lípidos almacenados 
para obtener energía, y por el ayuno prolongado probablemente ya hubo formación 
de cuerpos cetónicos. 
 
• Qué consecuencias patológicas podría desarrollar tener niveles altos en 
estos parámetros 
 
El colesterol se acumula fundamentalmente en la pared interna de los vasos 
sanguíneos, en concreto en las arterias, y especialmente en las arterias coronarias, 
las que irrigan los miembros inferiores e incluso en las arterias que irrigan el cerebro. 
Ahí, ese depósito produce una inflamación y consiguiente fibrosis, lo que a su vez 
crea una placa que puede llegar a obstruir las arterias. 
 
 
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Cuando se produce esa obstrucción de forma parcial a nivel de las arterias del 
corazón, los síntomas que presenta el paciente son los de una angina -dolor en el 
pecho sobre todo cuando hace esfuerzos, aunque también puede aparecer en 
reposo-. Pero si se trata de una obstrucción total de forma aguda puede provocar 
un infarto agudo de miocardio. Y cuando esas placas afectan a los vasos que van 
al cerebro el resultado son accidentes cerebrovasculares o ictus. 
 
 
 
FUENTES CONSULTADAS 
• Análisis de colesterol: cómo interpretar los resultados. (2020, 13 noviembre). 
Actualidad Sanitaria. https://actualidadsanitaria.com/enfermedades/analisis-
de-colesterol-como-interpretar-los-resultados/ 
• Los riesgos de unos niveles altos de colesterol. (2018, 17 agosto). Fundación 
Española del Corazón. https://fundaciondelcorazon.com/blog-impulso-
vital/3193-los-riesgos-de-unos-niveles-altos-de-colesterol.html 
• Laguna J. Garza P. E., (2002) Bioquímica de Laguna (5ª. Edición) México, 
D.F. Editorial: el Manual Moderno. 
• Manual de Bioquímica clínica 2010 
• Inserto SPINREACT (2014). Colesterol – LQ. CHOD-POD Liquido., España. 
Recuperado el 13-11-2015 en: http://www.spinreact.com 
• Murray R. K., Bender D. A., Botham K. M., Kennelly P. J., Rodwell V.W., Weil 
P. A., (2010) Harper Bioquímica Ilustrada (28a Edición) México D.F. Editorial 
McGraw-Hill Interamericana Editores. 
• Marks A., Lieberman M., Peet A., Chansky M. (2013) Bioquímica médica 
básica un enfoque clínico (4ª Edición) España: Editorial Wolters Kluwer 
Health Lippincott Williams & Wilkins. 
 
 
 
 
http://www.spinreact.com/
 
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DETERMINACIÓN DE TRIGLÍCERIDOS 
 
INTRODUCCION 
Los lípidos son un grupo de compuestos celulares con diversas propiedades 
químicas, que tienen como característica común el hecho de ser solubles en 
solventes orgánicos (éter, benceno, heptano) y ser insoluble en agua. De igual 
forma, las funciones biológicas de estos lípidos son diversas; por ejemplo, las 
grasas y los aceites son las principales formas de almacenamiento de energía en 
muchos organismos y los fosfolípidos y esteroles constituyen aproximadamente la 
mitad de la masa de las membranas biológicas. 
 
MARCO TEORICO 
Los triglicéridos o grasasneutras, son los lípidos más abundantes en los organismos 
vivos y están formados por el alcohol glicerol esterificado con tres ácidos grasos. 
Las moléculas de triacilgliceroles en las grasas naturales son muy variadas pues 
cada uno de los tres ácidos grasos puede ser alguno de los cerca de 10 ácidos 
grasos más frecuentes, lo cual hace posible las características observadas en la 
grasa de las distintas especies, por ejemplo: el sebo, la manteca, la mantequilla y 
los aceites. 
Las principales funciones de los triacilgliceroles es la de constituir la reserva más 
grande de energía en el organismo humano y la única que permite la sobrevida 
durante el ayuno prolongado y la función nutricional pues las grasas figuran en la 
dieta diaria aportando alrededor del 30% de las kilocalorías necesarias para el 
mantenimiento del organismo; cada gramo de grasa aporta 9 Kcal. 
Las grasas corporales funcionan también como amortiguador mecánico para 
proteger a los tejidos, por ejemplo: la grasa que rodea a los riñones, el corazón y el 
intestino. La grasa subcutánea protege también al cuerpo de los agentes mecánicos 
externos y además funciona como un aislante térmico que protege a los organismos 
de las bajas temperaturas. 
Los resultados de laboratorio para considerar en un valor normal en sangre de 
triglicéridos en ayunas son de 0.34 – 2.26 mmol/L (unidades SI) o 30 a 200 mg/dL 
(unidades convencionales). (Murray 2010). 
 
 
 
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MATERIAL 
 INSTRUMENTOS EQUIPOS 
5 tubos de ensaye de 
13x100 
1 pipeta automática de 
10 a 100µL 
Espectrofotómetro 
ajustado a 505nm 
Cubetas de paso de luz 
de 1 cm 
1 pipeta automática de 
100 a 1000µL 
1 centrifuga 
Puntillas desechables 
para pipetas automáticas 
1 gradilla 1 baño maría a 37°C 
1 piseta con agua 
destilada 
kit comercial de 
SPINREACT 
 
 
PROCEDIMIENTO 
TRIGLICERIDOS 
• Muestra: suero o plasma 
• Longitud de onda del espectrofotómetro a 505nm. 
• Valores de referencia 
o Hombre: 40 – 160 mg/dL 
o Mujeres: 35 – 135 mg/dL 
 
1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada 
2. Pipetear en una cubeta 
 Blanco Patrón Muestra 
R (mL) 1,0 1,0 1,0 
Patrón (µL) -- 10 -- 
Muestra (µL) -- -- 10 
 
3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C o a 10 minutos a 15-25°C 
4. Leer la absorbancia (A) del patrón y de la muestra, frente a blanco de 
reactivo. El color es estable como mínimo 30min. 
Cálculos: 
𝐴𝑏𝑠. 𝑃𝑅
𝐴𝑏𝑠. 𝑆𝑇 
 𝑥 200 = 𝑚𝑔/𝑑𝐿 𝑑𝑒 𝑡𝑟𝑖𝑔𝑙𝑖𝑐𝑒𝑟𝑖𝑑𝑜 
Abs. PR: Absorbancia de la muestra 
Abs. ST: Absorbancia del estándar. 
 
 
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REPORTES 
• mg/dL de triglicéridos en la muestra: 
 
Paciente sano: 
. 2467
. 3456
 𝑥 200 = 142.76 𝑚𝑔/𝑑𝐿 𝑑𝑒 𝑡𝑟𝑖𝑔𝑙𝑖𝑐𝑒𝑟𝑖𝑑𝑜 
Paciente enfermo: 
. 3987
. 3456
 𝑥 200 = 230.72 𝑚𝑔/𝑑𝐿 𝑑𝑒 𝑡𝑟𝑖𝑔𝑙𝑖𝑐𝑒𝑟𝑖𝑑𝑜 
 
• Diagnostico: 
 
El paciente enfermo tiene antecedentes de obesidad, presentando colesterol alto en 
la prueba realizada. Se conoce que el paciente no realiza ejercicio físico y tiene una 
dieta abundante en azucares y grasas, por lo tanto, posee más colesterol del que el 
organismo necesita. 
 
FUENTES DE CONSULTA 
• Triglicéridos: ¿por qué son importantes? (2022, 3 septiembre). Mayo Clinic. 
https://www.mayoclinic.org/es-es/diseases-conditions/high-blood-
cholesterol/in-depth/triglycerides/art-20048186 
• Inserto SPINREACT (2014). Triglicéridos – LQ GPO-POD Liquido., España. 
Recuperado el 13-11-2015 en: http://www.spinreact.com 
• Murray R. K., Bender D. A., Botham K. M., Kennelly P. J., Rodwell V.W., 
Weil P. A., (2010) Harper Bioquímica Ilustrada (28a Edición) México D.F. 
Editorial McGraw-Hill Interamericana Editores. 
• Marks A., Lieberman M., Peet A., Chansky M. (2013) Bioquímica médica 
básica un enfoque clínico (4ª Edición) España: Editorial Wolters Kluwer 
Health Lippincott Williams & Wilkins. 
 
 
 
 
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LIPOPROTEÍNAS (COLESTEROL HDL) 
 
MICROUNIDAD DE COMPETENCIA 
El estudiante identifica las lipoproteínas como pruebas complementarias al perfil de 
lípidos, realizando su cuantificación de por medio de la realización de las 
metodologías analíticas de laboratorio propuestas, y en equipo colaborativo discute 
la significancia clínica y correlación de la elevación o disminución de las 
lipoproteínas con respecto al perfil de lípidos. 
 
INTRODUCCION 
Las lipoproteínas son partículas las cuales se ha propuesto un modelo el cual 
consiste en un núcleo no polar de ésteres de colesterol y triglicéridos, rodeado por 
una capa polar de proteínas, fosfolípidos y colesterol. La composición y estructura 
de todas las clases normales de lipoproteínas es consistente con un modelo esférico 
de un radio variable y un núcleo lipídico no polar. Rodeando al núcleo se encuentra 
una mono capa de colesterol y fosfolípidos. 
Los componentes proteínicos de las lipoproteínas se denominan apoproteínas, de 
las que en su mayoría se conoce la secuencia de los aminoácidos compartiendo un 
rasgo estructural común, debido a la presencia de alfa hélices anfipáticas. 
Las lipoproteínas se clasifican de acuerdo a la densidad de la solución salina en la 
cual son separadas por ultracentrifugación, esto es debido a que cada de 
lipoproteínas está compuesta de un diferente porcentaje de lípidos y proteínas. Esta 
distinta composición y la diferencia en densidad entre lípidos y proteínas explican 
las características de flotación diferencial de las lipoproteínas. Entre las de origen 
hepático se encuentran las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL), de densidad 
intermedia (IDL), de baja densidad (LDL) y de alta densidad (HDL); las de origen 
intestinal son preferentemente los quilomicrones, aunque el intestino puede 
sintetizar también VLDL y HDL. (Laguna 2002) 
Las lipoproteínas más grandes son precisamente los quilomicrones, que presentan 
un diámetro aproximadamente de 100nm y una densidad menor a 0.9g/ml. Están 
compuestos en aproximadamente 99% por lípidos, de los cuales el 90% son 
triglicéridos. 
 
 
 
 
11 
MARCO TEORICO 
Las lipoproteínas más grandes son precisamente los quilomicrones, que presentan 
un diámetro aproximadamente de 100nm y una densidad menor a 0.9g/ml. Están 
compuestos en aproximadamente 99% por lípidos, de los cuales el 90% son 
triglicéridos. 
Las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) tienen una densidad menor a 
1.006g/ml, un diámetro de entre 30-70nm, están formadas por un 88% a 90% de 
lípidos: aproximadamente 55% de triglicéridos, 20% de colesterol y 15% de 
fosfolípidos; y en un 10-12% por proteínas. 
Las lipoproteínas de baja densidad (LDL) tiene una densidad de entre 1.019 a 
1.063g/ml, y son las que transportan la mayor cantidad de colesterol en los humanos 
(las dos terceras partes del colesterol plasmático total). Su composición lipídica es 
de un 35% de esteres de colesterol, un 12% de colesterol, un 8% de triglicéridos y 
un 20% de fosfolípidos; constituyendo los lípidos aproximadamente el 75% de la 
molécula. 
Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) tienen un diámetro de entre 8 y 13nm, son 
las lipoproteínas más pequeñas, están constituidas en cerca de la mitad de su peso 
por las apoproteínas A y C; contienen 25% de fosfolípidos, 16% de esteres de 
colesterol, 5% de colesterol y 4% de triglicéridos. Estas lipoproteínas poseen 
movilidad eléctrica alfa. 
Estas lipoproteínas mantienen un gran intercambio de colesterol libre y esteres de 
colesterol con las VLDL y de colesterol libre con las membranas plasmáticas, 
considerándose como la forma de eliminar colesterol de la célula; por esto se le 
conoce en el léxico popular como colesterol “bueno”. El colesterol “malo” es aquel 
que se encuentra en las partículas LDL, las cuales, al contrario de las HDL, 
depositan colesterol en los tejidos periféricos. (Laguna 2002). 
 
MATERIAL 
 INSTRUMENTOS EQUIPOS 
8 tubos de ensaye de 
13x100 
1 pipeta automática de 
10-100µL 
Espectrofotómetroajustado a los nm. de 
cada técnica 
1 piseta con agua 
destilada 
1 pipeta automática de 
100-1000µL 
Baño María a 37°C 
Cubetas de 1cm de paso 
de luz 
1 pipeta de 1 a 10 µL 
1 gradillas 
1 Centrifuga 
 
12 
Puntillas desechables 
para las pipetas 
automáticas 
Kit comercial de 
SPINREACT* 
 
 
PROCEDIMIENTO 
HDL 
• Muestra: suero o plasma 
• Longitud de onda del espectrofotómetro a 550-560 nm 
• Valores de referencia 
o HDL - Colesterol 
 Hombres Mujeres 
Riesgo menor > 55 mg/dL > 65 mg/dL 
Riesgo normal 35 – 55 mg/dL 45 – 65 mg/dL 
Riesgo elevado < 35 mg/dL < 45 mg/dL 
 
1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada 
2. Pipetear en tubos de ensayo 
 Blanco Calibrador Muestra 
R1 (µL) 300 300 300 
Calibrador (µL) -- 3 -- 
Muestra (µL) -- -- 3 
 
3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C y leer la absorbancia (A1) del calibrador 
y la muestra. 
4. Añadir: 
 Blanco Calibrador Muestra 
R2 (µL) 100 100 100 
 
5. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C. 
6. Leer la absorbancia (A2) frente al blanco de reactivo. 
 
Cálculos: 
(𝐴2 − 𝐴1) 𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 − (𝐴2 − 𝐴1) 𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜
(𝐴2 − 𝐴1) 𝐶𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑑𝑜𝑟 − (𝐴2 − 𝐴1) 𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜
𝑥 (𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝐶𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑑𝑜𝑟) = 𝑚𝑔/𝑑𝐿 𝑑𝑒 𝐻𝐷𝐿 
 
 
 
 
 
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REPORTE 
Hubo errores al momento de leer en el espectrofotómetro por las cantidades de 
volumen que se tenían que aspirar en el equipo, por lo que nuestros resultados 
dan negativos en la práctica. 
 
FUENTES CONSULTADAS 
• Colesterol. (s. f.). https://fundaciondelcorazon.com/prevencion/riesgo-
cardiovascular/colesterol.html 
• Colesterol bueno (HDL). (s. f.). 
https://medlineplus.gov/spanish/hdlthegoodcholesterol.html 
• Laguna J. Garza P. E., (2002) Bioquímica de Laguna (5ª. Edición) México, 
D.F. Editorial: el Manual Moderno. 
• Inserto SPINREACT (2014). HDL COLESTEROL P reactivo precipitante. 
España. Recuperado el 13-11-2015 en: http://www.spinreact.com 
• Inserto SPINREACT (2014). LDL COLESTEROL D enzimático colorimétrico 
Liquido. España. Recuperado el 13-11-2015 en: http://www.spinreact.com 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
http://www.spinreact.com/
http://www.spinreact.com/