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TAXONOMIA GENERO LISTERIA • Orden: Bacillales • Familia: Listeriaceae • Géneros: • Listeria “Bacterias Gram Positivas con bajo contenido en G+C” • L. monocytogenes (hombres y animales) • L. ivanovii (animales) 2 subespp. ivanovii y londonienses • L. innocua, L. welshimari, L. seeligeri, y L. grayi con subespp. grayi y murray. SE CONSIDERAN NO PATOGENAS. TAXONOMIA GENERO LISTERIA (Basto, 2017) Clasificación taxonómica del género Listeria GENERO LISTERIA DIFERENCIACION FENOTIPICA MORFOLOGIA GENERO LISTERIA • Bacilos pequeños Gram positivos de 0,5 x 0,5 a 2um, pleomórficos, extremos redondeados. Cultivos viejos forman cadenas cortas o formaciones de empalizadas. • Catalasa + y Oxidasa + e hidrolizan esculina. • Móvil a 20ºC- 25ºC (con flagelos de 1-6 peritricos). • Inmóvil a 37ºC. • Crecen a T° entre 1ºC a 43ºC. • Crecen a un pH entre 5,5 y 9,6. • No esporulados. • No capsulados. • Anaerobio facultativo (presencia/ ausencia O2). HÁBITAT DE GENERO LISTERIA • Amplia distribución en la naturaleza. M.O. Ubicuo por su variedad de condiciones. • Saprófito de pastos y vegetales en descomposición, en suelo, plantas, aguas residuales. • Aislado de ensilaje con pH < de 5,5. • Se ha aislado a partir de: • Heces, secreciones genitales y mucosa nasal de individuos “sanos”. • También en carnes, derivados lácteos, ya sean frescos o congelados. • “ LISTERIOSIS es Zoonosis” CARACTERISTICAS GENERO LISTERIA FACTORES DE VIRULENCIA: Patógeno Intracelular Facultativo (células epiteliales y macrófagos). 1. Listeriolisina O (Hemolisina): Toxina hemolítica y citotóxica. 2. Fosfolipasa C. (Lecitinasa): Paso de la bacteria de una célula hospedadora a otra, rompen las vacuolas que rodean al m.o. durante la transferencia. 3. Internalina (proteínas): InIA, InIB , p60 para Adhesión e invasión en célula hospedadora. 4. ActA para polimerización de actina y reconocimiento de receptores en células eucariotas. 5. Hly, PicA, PicB: Lisis del fagosoma y liberación de bacterias al citoplasma. PATOGENESIS • Bacteria Intracelular Facultativa. • Mecanismo de daño intracelular: ✴ Internalización: Induciendo la fagocitosis. A través de proteínas IniA y LAP que interactúan con la E-caderina. ✴ Evasión de la vacuola intracelular: La Bacteria una vez fagocitada, produce Listeriolisina O y Fosfolipasas C que reconocen el colesterol, formando poros en el fagosoma, producen su lisis y se libera al citosol para multiplicarse. CICLO DE INFECCION DE LISTERIA Se forman vacuolas celulares que pasan a través del poro de la célula, estas son lisadas por la formación de la toxina Listeriolisina O y Fosfolipasa C. •Dentro del citoplasma la bacteria se multiplica y se mueve rápidamente hasta salir con sus flagelos. •A la salida de la membrana de la célula el ciclo se completa. MODO DE INFECCIÓN POR LISTERIA •Infección Exógena: Fuente externa Huésped •Existen 2 formas: ★Neural: A través del Nervio Trigémino y por el ojo, nariz u orofaringe. ★Visceral: Ingestión del microorganismo en alimentos contaminados. • Forma neural: Común en rumiantes estabulados que se alimentan de ensilaje. • Signos SNC: Ataxia y meningitis. Se observan microabscesos en cerebro (Necropsia). • Queratoconjuntivitis y oftalmitis en rumiantes. • Forma visceral: Abortos sin signos centrales en rumiantes y equinos (Septicemia). • En Porcinos cuadro clínico neurológico. • Pollos y pavos cursan con septicemia. • En conejos, cobayos, antílopes que cursan con forma visceral y presentan septicemia y necrosis hepática. PATOGENICIDAD LISTERIA PATOGENICIDAD LISTERIA El período de incubación de la infección invasiva es desconocido, es de 11 a 70 días, promedio de 31 días. La bacteria atraviesa la barrera mucosa del intestino por Endocitosis. Es activa en las células endoteliales; una vez en el torrente sanguíneo, se disemina a otros sitios, al sistema nervioso central (SNC) y la placenta. DIAGNOSTICO • Signos clínicos. • Muestra depende de la forma clínica: • LCR o tejido nervioso, cerebro, medula oblonga. • Fetos, cotiledones o contenido abomasal (Estomago del feto abortado), placenta. • En septicemia: hígado, corazón, bazo y/o sangre. • Examen Directo, Coloración con Tinción Gram. Bacilos Gram+ agrupados en V, en empalizada. • Análisis histológico o Inmunocitoquímico. DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO • Aislamiento del M.O.: • Cultivo en Medios Selectivos Enriquecidos (Caldo Cerebro Corazón BHI, C. Listeria UVM, Caldo Base Fraser). • Cultivo en Agar Sangre y Agar MacConkey (medios selectivos y diferenciales). • Uso de medios enriquecidos selectivos y cultivados a 4º C hasta por 12 semanas. • Identificación: • Características de las colonias. • Catalasa positivo. • Oxidasa negativo. • Esculina Positivo. • Test CAMP + con S. aureus y R. equi. • Pruebas Bioquímicas y Pruebas Biológicas adicionales. DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO • Pruebas Bioquímicas: • En el medio de Edwards con esculina la hidrólisis del mismo presenta colonias negras. • No produce SH2 (Sulfuro de Hidrógeno). • Reduce N03 -N02. • No aprovecha los azucares. • En medios semisólidos tiene motilidad a 25 °. • Pruebas Biológicas: Inoculación de una suspensión de la bacteria en conejos, curieles, cobayos y ratas. Estos mueren en un plazo de 96 horas ocasionando lesiones necróticas, hepáticas y esplénicas. DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO Crecen en medios de cultivo bacteriológico no selectivos para un primer aislamiento en Agar Sangre (AS), detección de actividad Hemolítica. Incubación 24-48 horas a 37ºC en aerobiosis o microaerofilia. Forman pequeñas colonias de 0,5 a 2mm de Ø, redondas, lisas, planas, brillantes y translucidas. Con luz oblicua se observan en forma iridiscente de color azul/ verdoso. Las 3 especies L. monocytogenes, L. seeligeri y L. ivanovii en AS son β-hemolíticas halo bien circunscripto. Muestras contaminadas deben incubar a 4 ºC en medios selectivos enriquecidos como Oxford, Palcam, Mc Bride. LISTERIA EXAMEN DIRECTO Examen microscópico (100 X) frotis Coloración de Gram con Bacilos y cocos presentes. Listeris spp. al microscopio con objetivo de inmersión son cocobacilos o bacilos pequeños Gram positivos. MEDIO ENRIQUECIDO DIFERENCIAL Listeria monocytogenes (izquierda) y L. ivanovii (derecha) en Agar Sangre de Oveja. La hemolisis de L. ivanovii tiende a ser más pronunciada que la de L. monocytogenes En cultivos beta hemolíticos se observa zona clara e incolora que rodea a la colonia, debido a la destrucción total de los glóbulos rojos. PRUEBAS BIOQUIMICAS LISTERIA Pruebas bioquímicas y fisiológicas: •Glucosa: + •Lactosa: +/- •Rojo de metilo: + •Voges-Proskauer: + •Hidrólisis de la esculina: + •Prueba de CAMP: + •Catalasa: + •Movilidad: + •Indol:- •Acido sulfídrico: - •10% o más de cloruro de sodio •Altas concentraciones de nitritos y ácidos •pH: 4,4-9,6 (RM) (VP) PRUEBAS BIOQUIMICAS LISTERIA Prueba de CAMP: Se utilizan cepas de Staphylococcus aureus y Rhodococcus equi (Cultivos Patrones) productoras de Betalisina. Algunas especies de Listeria producen una proteína extracelular (factor CAMP), que actúa sobre los eritrocitos en forma sinérgica con la Betalisina. Se pueden emplear placas de agar sangre ovina, pero es preferible usar el método de la doble capa. MEDIOS SELECTIVOS ENRIQUECIDOS Listeria monocitogenes en Agar Oxford Listeria monocitogenes en Agar PALCAM DIFERENCIACION DE LISTERIA CON GENEROS RELACIONADOS GÉNERO ERYSIPHELOTHRIX TAXONOMÍA DE ERYSIPELOYHRIX Clase Mollicutes Orden Incertaesedis Familia Erysipelotrichaceae Género Erysipelothrix Especies: E. rhusiopathiae E. tonsillarum MORFOLOGÍA Y FISIOLOGÍA GENERO ERYSIPELOTHRIX Bacilos Gram + con morfología variable: Bacilos cortos se obtienen de colonias lisas (cuadros clínicos de infecciones agudas). Bacilos forma lisa de 0,2-0,4µmde ancho por 0,8-2,5µm de largo, rectos o ligeramente curvos, bordes redondeados. Bacilos Filamentosos se obtienen de colonias rugosas (cuadros de infecciones crónicas). Bacilos forma rugosa de 60µm o más de longitud. Inmóviles. No forma esporas , no son capsulados. Catalasa y Oxidasa negativos. Anaerobio facultativo. CARACTERISTICAS GENERO ERYSIPELOTHRIX Crecen en amplio rango de pH (6,7-9,0). Crecen en amplio rango de T° (5°C- 42ºC). Crecen en medios no enriquecidos. En Agar Sangre se evidencian colonias puntiformes (0,5 mm) no hemolíticas, después de las 48 horas hacen hemolisis alfa, verdosa, justo debajo y alrededor de la colonia. Colonias con morfología variable a las 48 horas de incubación: Forma lisa y Forma rugosa. El medio de cultivo y las condiciones de incubación modifican la morfología: pH ligeramente alcalino y 33ºC favorece formas lisas. pH inferior a 7,0 y 37 ºC favorecen formas rugosas. MORFOLOGÍA DE ERYSIPELOTHRIX Forma lisa de bacilos grampositivos pequeños Forma rugosa de filamentos cortos grampositivos con tendencia a decolorarse HÁBITAT DE ERYSIPELOTHRIX Distribución mundial, ampliamente en medio ambiente y materia orgánica. Presente en el suelo y aguas residuales de cochineras y mataderos. Sobrevive en la babaza de la superficie de peces y crustáceos de agua dulce y salada. Los Cerdos son el principal reservorio. Se localizan en las tonsilas (amígdalas), tracto respiratorio superior y heces. Cerdos portadores de E. rhusiopathiae lo excretan en heces y secreciones oronasales. Se ha aislado en otras especies como: ovinos, bovinos, equinos, perros , gatos y aves. En más de 50 especies de mamíferos salvajes y más de 30 especies de aves salvajes. MODO DE INFECCIÓN ERYSIPELOTHRIX Contacto directo con cerdos infectados y fómites. Principal vía de infección es por ingestión de agua y alimentos contaminados (harina de pescado). A través de heridas o picaduras de artrópodos. PATOGENESIS Y PATOGENICIDAD Factores de virulencia: Hialuronidasa, Coagulasa y Neuraminidasa. Invade torrente sanguíneo, el tipo de infección depende de la extensión y estatus inmunológico del huésped animal. Erisipela porcina o MAL ROJO tiene diferentes formas. Es Zoonosis, E. rhusiopathiae produce la ERISIPELOIDE o Enfermedad de Rosenbach en humanos. En humanos causa celulitis en la piel de trabajadores en industrias agroalimentarias, mataderos y veterinarios. CERDOS: ERISIPELA PORCINA o MAL ROJO. Afecta a cerdos entre 3 y 18 meses de edad. Formas de la enfermedad : Forma aguda: Septicemia de curso corto y alta tasa de mortalidad (48-72 horas). Forma aguda con urticaria: Aparición de típicas lesiones cutáneas rojizas o purpuras, en forma de rombos en piel de abdomen , orejas y miembros. Forma artrítica: en cerdos viejos, fibrosis periarticular. Forma cardiaca: Infecciones crónicas, presencia de estructuras en forma de coliflor sobre válvulas auriculo- ventriculares. PATOGENESIS Y PATOGENICIDAD ERYSIPHELOTHRIX RHUSIOPATHIAE FORMA AGUDA URTICARIA EN CERDOS ERYSIPHELOTHRIX RHUSIOPATHIAE FORMA ARTRITICA EN CERDOS ERYSIPHELOTHRIX RHUSIOPATHIAE EN HUMANOS (ERISIPELOIDE) PATOGENESIS Y PATOGENICIDAD OTRAS ESPECIES: Ovinos: Laminitis, poliartritis crónica, endocarditis valvular. Aves: Principalmente son afectados pollos, pavos y gansos, sufren septicemia aguda, endocarditis y artritis crónicas. Caninos: Endocarditis. Bovinos: Es raro, poliserositis, septicemia, artritis. DIAGNOSTICO DE LABORATORIO Según Signos clínicos. Depende de la forma clínica de la enfermedad (aguda o crónica) Toma de Muestras: Forma Aguda: tomar sangre para hemocultivo, parte profunda de piel. Necropsia: bazo, hígado, riñón. Forma Crónica: Liquido sinovial, válvulas cardiacas. Cultivo en medios enriquecido o selectivos. En base a Característica de las colonias y Examen Directo: Gram + . Pruebas bioquímicas y serológicas. DIAGNOSTICO DE LABORATORIO Cultivo en medio enriquecido Agar Sangre o Agar chocolate. En medios selectivos se agrega azida de sodio al 0,1 % y cristal violeta 0,001% para muestras contaminadas (heces, suelo). En casos de infecciones crónicas, agregar suero de equino al 5% y prolongar incubación en caldo glucosado al 1 % durante 10 días. Siembra en placas a 37ºC durante 24-48 horas. COLORACIÓN DE GRAM FORMA RUGOSA DE E. RHUSIOPATHIAE CULTIVO MEDIOS ENRIQUESIDOS E. RHUSIOPATHIAE DIAGNOSTICO DE LABORATORIO DE E. RHUSIOPATHIAE Pruebas bioquímicas: Catalasa y Oxidasa negativo. Glucosa, lactosa, galactosa, fructuosa, maltosa: Positivo. Indol: negativo. Rojo de metilo: negativo. Voges-Proskauer: negativo. Citrato: negativo. No hidroliza esculina. Gelatina: No la licua pero crece en forma de “cepillo limpiador de tubos”. Tubo inclinado de TSI (triple sugar iron) a 24h de incubación se forma línea negra de Sulfuro de Hidrógeno (H2S). PRUEBAS BIOQUIMICAS DE E. RHUSIOPATHIAE IDENTIFICACIÓN BIOQUIMICA DE E. RHUSIOPATHIAE EN TSI AGAR Produce Sulfuro de Hidrógeno (H2S)
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