Fraccionamiento_de_tejidos_en_sus_princi

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INFORME N° 1: Fraccionamiento de tejidos en sus principales biomoléculas: Carbohidratos, Lípidos, Proteínas y Ácidos Nucleicos. Caracterización de las fracciones obtenidas.
Grupo 1 (Miércoles) – Ing. Agroindustrial
Nicolás Rafael F. Robles Valderrama1
117003328
Juan Pablo Alzate Sanz[footnoteRef:1] [1: Estudiantes Ingeniería Agroindustrial Universidad de los Llanos] 
117003348
Daniel Aguilera[footnoteRef:2] [2: Docente Laboratorio Bioquímica Universidad de los Llanos] 
Bioquímica
Universidad de los Llanos
Resumen
En esta práctica de laboratorio se llevó a cabo el fraccionamiento de una muestra de hígado de pollo en sus principales biomoléculas para posteriormente realizar la caracterización de éstas, trabajo que se llevó a cabo durante tres sesiones diferentes. En la primera sesión se buscaba fraccionar un tejido de hígado en sus principales constituyentes, para lo cual se separó el tejido en sus macromoléculas utilizando métodos de solubilidades diferenciales y centrifugación, separando y almacenando los sobrenadantes de cada parte del procedimiento en 4 recipientes rotulados; en la segunda sesión se deseaba comprobar la presencia de carbohidratos y lípidos para lo cual se llevaron a cabo 4 pruebas específicas para la caracterización de carbohidratos y 3 para los lípidos; finalmente en la última sesión se llevó a cabo la caracterización de las proteínas y ácidos nucleicos, mediante 4 y 2 pruebas específicas de reconocimiento respectivamente. Al final se pudo comprobar la presencia de cada una de las biomoléculas, no obstante se presentaron en tipos específicos de cada una de éstas.
Palabras clave: Biomoléculas; lípidos; proteínas; carbohidratos; ácidos nucleicos; caracterización.
Introducción
Las biomoléculas son aquellas que hacen parte esencial de la vida y que están presentes en todo lo que respecta a ésta. Para reconocer la presencia de éstas es necesario llevar a cabo un fraccionamiento celular consistente en la separación de la célula en sus principales componentes y así permitir el estudio de cada uno de ellos sin la interferencia de los demás, para esto se debe elegir un tejido adecuado según el interés, que en este caso es un tejido de origen animal, del cual se obtendrían las fracciones de los diferentes constituyentes en términos de sus biomoléculas (carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos), utilizando para ello técnicas de centrifugación y propiedades de solubilidad diferencial.
Los carbohidratos están compuestos principalmente por carbono, oxígeno e hidrógeno e incluyen azúcares simples (monosacáridos) y sus polímeros (polisacáridos). Todos los monosacáridos y residuos de polisacáridos contienen varios grupos hidroxilo y un grupo carbonilo bien sea como cetosas o aldosas; estos grupos funcionales son los que permiten identificar la presencia y tipo de carbohidratos mediante ensayos basados en diferentes reacciones características: Ensayo de Molish, de Benedict, de Lugol y de Lugol con HCl.
Los lípidos son una clase diversa de moléculas ricas en carbono e hidrógeno y relativamente pocos átomos de oxígeno, que tienen una estructura muy variada. Debido a esa diversidad y de compuestos asociados a los lípidos en la célula, en la práctica sólo se realizaron pruebas específicas para tres clases de lípidos: Colesterol (Prueba de Lieberman-Burchard), Lípidos saponificables y fosfolípidos (Prueba de fosfatos).
Los 20 aminoácidos que forman parte de las proteínas de todas las células contienen un grupo amino y uno carboxilato, así como una cadena lateral (Grupo R) que es única para cada aminoácido. Las pruebas que se realizarán en esta práctica se basarán en pruebas generales de identificación de proteínas y aminoácidos así como algunas pruebas específicas según el grupo R del aminoácido. Pruebas de Biuret, Ninhidrina, Xantoproteica y Millon.
Los ácidos nucleicos son grandes macromoléculas compuestas por nucleótidos, que a su vez están compuestos por un azúcar de 5 carbonos, una base nitrogenada y al menos un grupo fosfato. La prueba de identificación en esta práctica se basará en la hidrólisis de nucleótidos para la posterior identificación de sus constituyentes, con la prueba de pentosas.
Métodos
Primera Sesión: Fraccionamiento del tejido de hígado en sus principales biomoléculas.
Tabla No. 1: Materiales y Reactivos Fraccionamiento de Tejido en sus principales Biomoléculas.
Para esta sesión se trajo un trozo de hígado de pollo, se dejó refrigerar hasta alcanzar los 0°C y se extrajo una muestra de 3,072g de éste. Se adicionaron 0,707g de arena lavada y se maceró en un matraz con 4,5mL de ATA 10% para luego centrifugar; el sobrenadante que quedó en el tubo de centrifugado fue la fracción de carbohidratos, que se separó y guardó como M1, y el residuo fueron los lípidos, proteínas, ácidos nucleicos y arena. Al residuo se le adicionaron 4,5mL de una solución etanol-éter-cloroformo 2:2:1 y se centrifugó nuevamente; el sobrenadante que quedó en el tubo de centrifugado fue la fracción de lípidos, que se separó y guardó como M2. Al residuo (ácidos nucleicos, proteínas y arena) se le agregaron 1,5mL de NaCl 10%, se puso en baño maría por 20 minutos y se centrifugó; en esta ocasión se separó y guardó el residuo como M3, que fue la fracción de proteínas desnaturalizadas y la arena. Al sobrenadante se le adicionó etanol 96%, se dejó enfriar a 0°C por 10 minutos y se centrifugó nuevamente; el sobrenadante se desechó y el residuo fue la fracción de ácidos nucleicos, que se rotuló como M4.
Figura No. 1: Fraccionamiento de Tejidos en sus principales Biomoléculas.
Segunda Sesión: Caracterización de las fracciones de carbohidratos y lípidos.
Tabla No. 2: Materiales y Reactivos Caracterización de Carbohidratos y Lípidos.
1. Carbohidratos: Para cada prueba se utilizaron 4 tubos de ensayo: Blanco (agua destilada), M1, patrón glucosa y patrón almidón.
a. Prueba de Molish: Se tomaron 0,5mL de cada muestra y se le adicionaron 2 gotas del reactivo de Molish, se mezcló lentamente y con el tubo inclinado se adicionó lentamente 1mL de H2SO4. Se observó la interfase y se anotaron los cambios.
b. Prueba de Lugol: Se tomaron 0,5mL de cada muestra y se le adicionó 1 gota del reactivo de Lugol. Se observó y se anotaron los cambios.
c. Prueba de Lugol + HCl: Se tomaron 0,5mL de cada muestra y se adicionaron 2 gotas de HCl 2N, se calentó en baño María por 15 minutos, se le agregó 1 gota de Lugol y se observaron y anotaron los cambios.
d. Prueba de Benedict: Se tomaron 0,5mL de cada muestra y se le adicionaron 15 gotas del reactivo de Benedict, se pusieron en baño María por 2 minutos, se observaron y anotaron los cambios, se pusieron nuevamente en baño María por 15 minutos y se observaron y anotaron los cambios.
Figura No. 2: Caracterización de Carbohidratos.
2. Lípidos: Para cada prueba se utilizaron 4 tubos de ensayo: Blanco (agua destilada), M2, patrón colesterol y patrón ácido oleico.
a. Prueba de Liebermann-Burchard: Se tomaron 0,5mL de cada muestra y se les adicionó 1mL de cloroformo, se mezcló bien, se le agregó 1mL de anhídrido acético y se agitó; se adicionaron cuidadosamente por la pared del tubo 3 gotas de H2SO4 para observar finalmente la coloración de la interfase al minuto y a los 15 minutos.
b. Prueba de Saponificación: Se tomaron 0,5mL de cada muestra y se les adicionaron 3mL de NaOH al 15%, se tapó el tubo de ensayo con papel aluminio, se puso en baño María por 20 minutos, se adicionaron 2mL de éter y se filtraron los jabones resultantes, finalmente se observaron y anotaron los cambios.
c. Prueba de Fosfatos: Se tomó 1mL del filtrado de la saponificación y se le agregaron 10 gotas de ácido molíbdico, se mezcló bien y se dejó reposar 5 minutos, se adicionaron 10 gotas de ácido ascórbico, se observó la coloración, y si no había coloración se puso al baño maría por 5 minutos.
Figura No. 3: Caracterización de Lípidos.
Tercera Sesión: Caracterización de las fracciones de proteínas y ácidos nucleicos.
Tabla No. 3: Materiales y Reactivos Caracterización de Proteínas y Ácidos Nucleicos.1. Proteínas: Para las pruebas de Biuret y Million se utilizaron 4 tubos de ensayo: Blanco (agua destilada), M3 (se le adicionó 1mL de NaCl 10%), patrón albúmina y patrón tirosina; para las pruebas de Ninhidrina y la Xantoproteica se utilizó adicionalmente un patrón de Glicina.
a. Prueba de Biuret: Se tomaron 0,5mL de cada muestra y se les adicionó 1mL del reactivo de Biuret, se mezcló y se dejó reposar por 10 minutos, se observó la coloración y se anotaron los cambios.
b. Prueba de Ninhidrina: Se tomaron 0,5mL de cada muestra y les adicionó 1mL de Ninhidrina al 0,2%, se calentó en baño de María por 5 minutos, se observaron y anotaron los cambios.
c. Prueba Xantoproteica: Se tomaron 0,5mL de cada muestra y se les adicionó 1mL de HNO3, se calentó durante algunos minutos, se dejó enfriar y se observó el color, se adicionaron cuidadosamente 10 gotas de NH4OH y se observó la coloración de la interfase.
d. Prueba de Million: Se tomaron 0,5mL de cada muestra y se les adicionaron 5 gotas del reactivo de Million, se agitó, se calentó en baño María por 10 minutos, se dejó enfriar, se adicionaron 5 gotas de nitrito de sodio, se agitó, se observaron y anotaron los cambios.
Figura No. 4: Caracterización de Proteínas.
2. Ácidos Nucleicos: Se realizaron las pruebas de Hidrólisis (sólo con M4) y la prueba de Pentosas (con el sobrenadante, el patrón blanco y el patrón de Xilosa).
a. Hidrólisis: Se tomaron 0,5mL de la M4 y se adicionaron 3mL de KOH 2M, se tapó el tubo de ensayo con papel aluminio, se calentó al baño María por 20 minutos, se determinó el pH con papel indicador, se acidificó la solución con HCl, se determinó el pH nuevamente, se observó si se había formado un precipitado, de ser así se debió separar del sobrenadante por centrifugación.
b. Prueba de Pentosas: Se tomaron 0,5mL del sobrenadante de la prueba anterior, patrón blanco y patrón xilosa, a cada uno se les adicionaron 2mL de HCl 6N, posteriormente 10mg de floroglucinol para finalmente dejarlos en baño María durante 3 minutos aproximadamente, se observaron y anotaron los cambios.
Figura No. 5: Caracterización de Ácidos Nucleicos.
Resultados
Tabla No. 4: Resultados Caracterización de Carbohidratos.
	Prueba
	Patrón
	Resultado
	Observaciones
	Molish 
(Ver Anexo 1)
	Blanco
	Negativo
	No presentó coloración.
	
	M1
	Positivo
	Se formó una fase blanca en la superficie y una morada en el fondo.
	
	Glucosa
	Positivo
	Presentó un color morado.
	
	Almidón
	Positivo
	Presentó un color morado.
	Lugol
(Ver Anexo 2)
	Blanco
	Negativo
	No presentó coloración.
	
	M1
	Positivo
	Tomó un color rojizo amarillo.
	
	Glucosa
	Negativo
	Tomó un color amarillento.
	
	Almidón
	Positivo
	Tomó un color violeta intenso.
	Lugol + HCl
(Ver Anexo 3)
	Blanco
	Negativo
	Sin coloración.
	
	M1
	Negativo
	Color amarillo transparentoso diferente a los demás.
	
	Glucosa
	Negativo
	Coloración amarillenta.
	
	Almidón
	Positivo
	Color similar pero de menor intensidad que con sólo Lugol.
	Benedict
(Ver Anexo 4)
	Blanco
	Negativo
	Coloración azul celeste.
	
	M1
	Negativo
	Coloración azul celeste.
	
	Glucosa
	Positivo
	Presentó una coloración amarillo-ocre.
	
	Almidón
	Negativo
	Coloración azul celeste.
Tabla No. 5: Caracterización de Lípidos.
	Prueba
	Patrón
	Resultado
	Observaciones
	Liebermann-Burchard (Ver Anexos 5 y 6)
	
	1 Minuto
	15 Minutos
	
	
	Blanco
	Negativo
	Negativo
	Al minuto no hubo cambio físico, a los 15 minutos se observba más espeso.
	
	M2
	Negativo
	Positivo
	Al minuto presentó una coloración verdosa en la fase de abajo y una más clara en la superior, a los 15 minutos tomó una coloración verdosa intensa.
	
	Colesterol
	Negativo
	Positivo
	Al minuto se observaba de un blanco espeso, luego de los 15 minutos tomó una coloración verde azulada.
	
	Ácido oleico
	Negativo
	Negativo
	Al minuto se formó una face café transparentosa en la parte superior y una negra en la parte inferior, a los 15 minutos se formó una única fase oscura.
	Saponificación
	Blanco
	Negativo
	No se formó precipitado.
	
	M2
	Positivo
	Se formó precipitado.
	
	Colesterol
	Negativo
	No se formó precipitado.
	
	Ácido oleico
	Positivo
	Se formó precipitado.
	Fosfatos
	M2
	
	
	
	Ácido oleico
	
	
Tabla No. 6: Caracterización de Proteínas.
	Prueba
	Patrón
	Resultado
	Observaciones
	Biuret
(Anexo 7)
	Blanco
	Negativo
	Presentó una coloración azul muy clara al igual que la tirosina.
	
	M3
	Positivo
	La coloración fue inmediata y persistente luego de los 10 minutos.
	
	Albúmina
	Positivo
	La coloración fue inmediata y persistente luego de los 10 minutos.
	
	Tirosina
	Negativo
	No presentó coloración característica.
	Ninhidrina
(Anexo 8)
	Blanco
	Negativo
	No hubo coloración.
	
	M3
	Positivo
	Se formó un color oscuro en el fondo del tubo de ensayo.
	
	Albúmina
	Positivo
	Tomó una coloración azul-violeta oscura.
	
	Tirosina
	Positivo
	Tomó una coloración azul-violeta oscura.
	
	Glicina
	Positivo
	Tomó una coloración azul-violeta oscura.
	Xantoproteica
(Anexo 9)
	Blanco
	Negativo
	No hubo cambio ni antes ni después de las gotas de NaOH.
	
	M3
	Positivo
	Antes de las 10 gotas tomó un color amarillo intenso en una sola fase, luego de adicionar las 10 gotas de NaOH se formó una fase más oscura en la parte superior pero mantuvo su color amarillo.
	
	Albúmina
	Negativo
	Antes de las 10 gotas de NaOH tomó un color amarillo pálido transparentoso de mucha menor intensidad que M3, y luego de las 10 gotas se formaron 2 fases, una superior del mismo color que anes de las 10 gotas y una inferior de coloración y aspecto aceitoso transparente.
	
	Tirosina
	Positivo
	Antes de las 10 gotas tomó un color amarillo intenso similar al del aceite quemado, luego de las 10 gotas de NaOH no hubo interfase y tomó una coloración vinotinto.
	
	Glicina
	Negativo
	No hubo cambio de coloración ni antes ni después de las 10 gotas de NaOH.
	Million
(Anexo 10)
	Blanco
	Negativo
	No hubo cambio en la coloración.
	
	M3
	Negativo
	Tomó una coloración amarilla pálida.
	
	Albúmina
	Negativo
	Tomó una tonalidad amarilla transparentosa más pálida que la M3.
	
	Tirosina
	Positivo
	Tomó un color rojo brillante.
Tabla No. 7: Caracterización de Ácidos Nucleicos.
	Prueba
	Patrón
	Resultado
	Observaciones
	Hidrólisis
	M4
	Positivo
	Antes de adicionarle el HCl el pH era de 13, posteriormente fue de 1. No hubo cambio en la coloración y no formó precipitado.
	Pentosas
	Sobrenadante M4
	Positivo
	Tomó una coloración roja.
	
	Blanco
	Negtivo
	No hubo cambio en la coloración.
	
	Xilosa
	Positivo
	Tomó una coloración roja intensa.
Discusión de Resultados
Tabla No. 4:
En primera instancia se aclarará que todas las pruebas fueron negativas para el patrón blanco en razón a que se trataba de agua destilada, es decir, no contenía ningún tipo de carbohidrato.
Ahora bien, de acuerdo con Quesada (2007) respecto a la prueba de Molish, ésta debía ser positiva para M1, el patrón glucosa y el patrón almidón, tal y como se evidencia en la tabla número 4 y el anexo 1, esto debido a que en esta reacción se utiliza el ácido sulfúrico en la reacción de deshidratación de los monosacáridos de cada muestra para luego llevar a cabo la reacción de condensación del furfural, obteniendo así como resultado una coloración morada en todas las muestras que contengan cualquier carbohidrato. La M1 tiene presencia de carbohidratos.
Reacciones correspondientes a la prueba de Molish.
Pérez (2013) plantea que la prueba de Lugol se lleva a cabo para identificar la presencia de polisacáridos, pues éste no reacciona con azúcares simples como los monosacáridos y disacáridos. De acuerdo con el mencionado autor, además del patrón blanco, el patrón glucosa también arrojará un resultado negativo debido a que es un azúcar simple; por otro lado, el color que dan los polisacáridos con el Lugol (solución de I2 y de IK) se debe a que el I2 ocupa espacios vacíos en las hélices de la cadena de unidades de glucosa, formando un compuesto de inclusión que altera las propiedades físicas del polisacárido, especialmente la absorción lumínica, es por esoque el Lugol da con el almidón color azul y con el glucógeno color rojo caoba; por lo tanto, según lo evidencia la tabla número 4 y el anexo 2, la M1 es un contiene polisacáridos, más específicamente glucógeno.
La prueba se repitió, pero esta vez hidrolizando antes cada muestra con HCl y calor, para descomponer cada glúcido en sus respectivos monosacáridos, acorde a esto, todas las pruebas debían dar negativas debido a que el Lugol no reacciona con azúcares simples, no obstante el patrón almidón no se hidrolizó totalmente y al adicionar el Lugol tomó una coloración azul, pero esta vez menos intensa en razón a que parte de éste se hidrolizó en residuos (glucosa).
De acuerdo a lo planteado por Pérez, la reacción de Benedict es específica para azúcares con grupo-reductores libres, es decir, su grupo carbonilo está intacto. Con los resultados obtenidos y reportados en la tabla 4 y anexo 4, se evidencia que la prueba fue únicamente positiva para el patrón glucosa, determinando así que tanto el glucógeno presente en la M1 como el almidón no poseen grupo-reductores libres.
Reacción de Benedict
Tabla No. 5:
De acuerdo a lo planteado por la facultad de ciencias naturales de la Universidad Nacional de la Patgonia San Juan Bosco, la reacción de Liebermann-Burchard se realiza para determinar la presencia de colesterol en una muestra; éste reacciona con anhídrido acético y ácido sulfúrico concentrado, donde se produce una pérdida de agua y una protonización del colesterol, y se constituyen en medio anhídrido polímeros de hidrocarburos no saturados de intenso color verde azulado, tal y como se observó durante la práctica para la M2 y el patrón colesterol, igualmente se plasmó en la tabla 5 y sus respectivos anexos.
Respecto a la saponificación, ésta sólo sucedió en la M2 y el patrón de ácido oleico, de acuerdo con lo cual se reconoce que estos 2 son lípidos saponificables, es decir, están compuestos por un alcohol unido a uno o varios ácidos grasos iguales o distintos mediante un enlace éster muy difícil de hidrolizar, por lo cual son aptos para fabricar jabones.
Tabla No. 6: 
La Universidad Nacional de la Plata plantea que la reacción de Biuret se utiliza para identificar la presencia de proteínas, sin especificar los grupos R de sus aminoácidos, es decir que debido a que ésta es una prueba general, los resultados obtenidos y reportados en la tabla 6 y el anexo 7 arrojan que la prueba fue positiva únicamente para la M3 y el patrón albúmina; lo anterior debido a que en estos 2 hay presencia de proteínas, mientras que en el patrón blanco al ser agua destilada no habrá presencia de éstas y en el patrón Tirosina, como éste se trata de un aminoácido específico y no de un péptido o polipéptido completos, no habrá formación de proteínas.
Respecto a la prueba de Ninhidrina, fue positiva para todas las muestras excepto el patrón blanco, esto se debe a que de acuerdo con la Universidad Interamericana de Puerto Rico (2009) ésta prueba es positiva para todo aminoácido y toda proteína con u grupo NH2 libre, que es el que reacciona con la Ninhidrina formando el complejo azul violeta.
Reacción Ninhidrina
En el caso de la tirosina y la glicina, se sabe que la prueba debe dar positiva en razón a que al ser cada uno un aminoácido, tendrán su grupo NH2 libre, por otro lado, la prueba identifica la presencia de este grupo libre en el patrón albúmina y en la muestra 3.
La Universidad Interamericana de Puerto Rico plantea también que la prueba Xantoproteica es específica para determinar la presencia de tirosina o triptófano en una proteína, obteniéndose un color amarillo como resultado positivo; se observó entonces que la M3 contiene Tirosina pues la prueba fue correcta únicamente para ésta y para el patrón Tirosina, tal y como se evidenció en el laboratorio y como se ve plasmado en la tabla 6 el anexo 9.
Reacción prueba Xantoproteica.
Donnesberger y Lesak (2002) plantean que la reacción de Millon es específica para tirosina así como la Xantoproteica. La tirosina contiene un anillo de benceno al que se une un grupo OH, y la presencia de ésta se confirma con un color rojo brillante, tal y como en el patrón tirosina.
De acuerdo a lo reportado en el presente, la prueba Xantoproteica fue positiva en la M3 corroborando la presencia de tirosina mientras que en la de Millon dio negativo para la misma muestra; hubo error en el procedimiento para la prueba de Millon, pues la tirosina es un aminoácido característico y presente en casi todas las proteínas, por lo cual se considera que el M3 debe haber tirosina, puesto que además la prueba Xantoproteica sí fue positiva.
Tabla No. 7:
Al hidrolizar la M4 no se presentó ningún cambio de color más sí se modificó el pH al acidular la solución con el ácido clorhídrico. Posteriormente al tomar el sobrenadante y las otras 2 muestras, se comprobó la presencia de pentosas en la M4. El patrón blanco no presento cambio pues no contenía ningún carbohidrato al ser agua destilada, y la xilosa coloró de inmediato en razón a que ésta es por sí misma una pentosa.
CONCLUSIONES
La muestra 1 correspondiente a los carbohidratos está compuesta por glucógeno, esto se concluye tras la marcha de pruebas, porque inicialmente al realizar la de Molish se confirmó la presencia de carbohidratos, posteriormente se identificó que estos eran glucógeno pues dio positiva la reacción de Lugol, adicional a esto se reconoció que el glucógeno no es un azúcar reductor, pues al no tener el grupo carbonilo libre la prueba de Benedict fue negativa para ésta.
La muestra 2 correspondiente a los lípidos está compuesta en su mayoría y casi totalidad por colesterol, lípido que al tener una cabeza polar constituida por el grupo hidroxilo y una cola apolar formada por el carbociclo de núcleos condensados y los sustituyentes alifácticos, es un lípido saponificable, lo cual permite formar jabón con éste.
La muestra 3 correspondiente a las proteínas contiene Tirosina en su estructura.
La muestra 4 correspondiente a los ácidos nucleicos confirman la presencia de pentosas en su estructura.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Quesada Mora, S. (2007) MANUEAL DE EXPERIMENTOS DE LABORATORIO PARA BIOQUÍMICA. San José, Costa Rica: Editorial Universidad Estatal a Distancia, Página 90.
Pérez Vallejo, M (2013) Práctica 1: IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS A TRAVÉS DE REACTIVOS. [En línea]. Recuperado el 2 de Marzo de 2015, de https://www.academia.edu/6347596/Identificaci%C3%B3n_de_Carbohidratos_a_trav%C3%A9s_de_reactivos
Universidad Nacional de la Patagonia, Facultad de Ciencias Naturales (s.f.) Química Biológica I, LÍPIDOS. [En línea] Recuperado el 2 de Marzo de 2015, de http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wp-content/uploads/2010/08/TP-LIPIDOS.pdf
Universidad Nacional de la Plata (s.f.) Reacción de Biuret. [En línea] Recuperado el 8 de Marzo de 2015, de http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qo3/Apuntes/Biuret.pdf
Universidad Interamericana de Puerto Rico (2009) Bioquímica: PROTEÍNAS Y AMINOÁCIDOS. [En línea] Recuperado el 8 de Marzo de 2015, de http://agu.inter.edu/halices/caseina.pdf
Donnerberger, A. & Lesak, A. (2002) Libro de laboratorio de Anatomía y Fisiología. Barcelona, España: Editorial Paidotribo.
ANEXOS
Del anexo 1 al 4: De izquierda a derecha: Patrón Blanco, M1, Patrón Glucosa y Patrón Almidón.
Anexo 1: Prueba de Molish
Anexos 2 Vs. 3: Prueba de Lugol Vs. Prueba de Lugol con HCl
 
Anexo 4: Prueba de Benedict
Anexos 5 Vs. 6: Prueba de Liebermann-Burchard
De izquierda a derecha: Patrón Blanco, M2, Patrón Colesterol, Patrón Ácido Oleico.
 Anexo 5: 1 Minuto Vs. Anexo 6: 15 Minutos
 
Anexo 7: Prueba Biuret
Patrones de izquierda a derecha: Blanco, M3, Albúmina y Tirosina.
Anexo 8: Prueba de Ninhidrina
Patrones de izquierda a derecha: Blanco, M3, Albúmina, Tirosina y Glicina.
Anexo 9: Prueba Xantoproteica
Patrones de izquierda a derecha: Blanco, M3, Albúmina, Tirosina y Glicina.
Anexo 10: Prueba de Millon
Patrones de izquierdaa derecha: Blanco, M3, Albúmina y Tirosina.
PREGUNTAS
¿Por qué cree usted que se elige un tejido de origen animal y no uno de origen vegetal?
Principalmente porque las células de origen vegetal cuentan con pared celular y harían más difícil su fraccionamiento, además de que en general un tejido de origen vegetal no garantiza la presencia de todas las biomoléculas, mientras que uno de origen animal como el hígado sí, pues los animales consumen diferentes tejidos vegetales para poder tener así en su organismo las biomoléculas que los ayudan en su metabolismo.
Consulte otras pruebas de identificación tanto de carbohidratos como de lípidos.
Para carbohidratos
PRUEBA DE FEHLING A Y B 
El catión cúprico (Cu++) del reactivo de Fehling reacciona con los glúcidos reductores pasando a óxido cuproso, que es un precipitado de color rojo ladrillo. Esta es una reacción que resulta positiva sólo si el glúcido es reductor. Los glúcidos reductores se manifiestan en medio alcalino, pero el Cu++ en ese medio tiende a precipitar espontáneamente como óxido cúprico (que en esa forma no reacciona), de manera que es necesaria la presencia de tartrato doble de sodio y potasio en el reactivo para "secuestrar" al catión Cu++, a fin de evitar la formación del óxido cúprico, y permitir que reaccione con los glúcidos reductores. 
La mezcla de Fehling A y Fehling B identifica la presencia de carbohidratos monosacáridos o disacáridos en el pan al resultar una reacción positiva.
REACCIÓN DE SELIWANOFF 
Los carbohidratos se clasifican como cetosas o aldosas. Vale decir, que las cetosas en el carbono 2 tienen una función cetona, que en presencia de un ácido fuerte producen rápidamente derivados furfúricos que reaccionan con un difenol llamado resorcina que está contenido en el reactivo de Seliwanoff. La sacarosa (un disacárido formado por glucosa y fructosa) y la inulina (un polisacárido de la fructosa) dan positiva la reacción, ya que el HCl del reactivo provoca en caliente la hidrólisis del compuesto liberando fructosa (responsable de la reacción positiva).
PRUEBA DE BARFOED 
Es débilmente ácido y solamente puede ser reducido por monosacáridos. Si se deja hervir por largo tiempo existe la posibilidad de hidrolizar disacáridos dando así reacciones falsamente positivas. El precipitado de óxido cuproso es menos denso que en otros métodos y se recomienda dejar el tubo hasta que el precipitado sedimente. El color del óxido cuproso es también diferente tendiendo a un rojo ladrillo que el que se obtiene en la prueba de benedict.
PRUEBA DE BIAL (para pentosas)
Cuando se calientan pentosas con HCl concentrado. Se forma furfural que se condensa con orcinol en presencia de iones férricos para dar un color verde azuloso. La reacción no es absolutamente específica para pentosas ya que el calentamiento prolongado de algunas hexosas produce hidroximetil furfural que también reacciona con orcinol dando complejos coloreados. 
PRUEBA DEL YODO 
El yodo forma complejos coloreados de adsorción con los polisacáridos; el almidón da un color azul con yodo, mientras que el glicógeno y el almidón parcialmente hidrolizados reaccionan dando una coloración pardo rojiza. 
PARA LIPIDOS:
PRUEBA DE IODO 
La positividad de esta reacción indica la presencia de ácidos grasos de la serie etilénica. La reacción positiva se manifiesta por la desaparición del color del Yodo, debido a que enlaza en el doble enlace.
PRUEBA DE SUDAN lll
El reactivo Sudán III es utilizado fundamentalmente para detectar la presencia de lípidos en una muestra, los cuales se colorean con dicho reactivo. Esto se debe a que el compuesto Sudán III, por su baja polaridad, es más soluble en los lípidos que en el solvente utilizado para su disolución (etanol). Ello gracias a las interacciones intermoleculares de tipo puente H y de London (cadena hidrocarbonada) que se establecen entre los lípidos y dicho reactivo. 
PRUEBA DE ACROLEINA 
La acroleína es un aldehído de olor desagradable que se forma al calentar el glicerol en presencia de un agente deshidratante, como el sulfato acido de potasio. Esta prueba es positiva para cualquier lípido que contenga glicerol en su molécula. 
PRUEBA DE FUSIÓN
 La positividad de esta reacción indica la presencia de fósforo inorgánico. Las sustancias orgánicas dan la reacción positiva, siempre que se haga una hidrólisis previa. La reacción positiva se manifiesta por la reacción de un precipitado amarillo de fosfomolibdato de amonio.
Consulte y explique otras pruebas de identificación tanto de proteínas como de ácidos nucleicos.
PARA LAS PROTEÍNAS 
REACCIÓN DE SAKAGUCHI
El grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la Arginina reacciona con soluciones de alfanaftol en presencia de Bromo en medio alcalino formando complejos coloreados rosados o rojos.
REACCIÓN DE EHRLICH
La presencia de anillos aromáticos fenólicos o nitrogenados en la cadena lateral de los Aminoácidos se puede identificar mediante la reacción con ácido sulfanílico y nitrito de Sodio por formación de sales de Diazonio fuertemente coloreadas permitiendo así detectar la presencia de Tirosina e Histidina libres o formando péptidos y proteínas.
REACCIÓN DE HOPKINS COLE
 el anillo indólico presente en la cadena lateral de los alfa-aminoácidos libres o haciendo parte de péptidos y proteínas se puede reconocer mediante reacción con el ácido glioxílico a ph ácido, puesto que forma complejos de coloración violeta o amarillo violeta, permitiendo así identificar al triptófano.
REACCIÓN CON ACETATO DE PLOMO ALCALINO
Los Aminoácidos azufrados como Metionina, Cisteina y Cistina se reconocen por la formación de precipitados de Sulfuro de Plomo de color gris oscuro o negro que se forman cuando reacciona con Acetato de Plomo en medio alcalino.