Tarea 3 Determinación de la actividad de catalasa_ZamudioSanchezAlicia

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Universidad Veracruzana
BIOQUIMICA CLINICA ENZIMATICA (89626)
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Determinación de la actividad de catalasa.
Alicia de los Ángeles Zamudio Sánchez
16 de febrero de 2023
ESTIMACIÓN DE LA CATALASA
(Sinha, 1972)
Principio
La catalasa provoca la rápida descomposición del peróxido de hidrógeno en agua.
H2O2CATH2O + O2
El método se basa en el hecho de que el dicromato en ácido acético se reduce a acetato crómico cuando se calienta en presencia de H2O2 con la formación de ácido perclórico como intermediario inestable. El acetato crómico así producido se mide colorimétricamente a 610 nm. Dado que el dicromato no tiene absorbencia en esta región, la presencia del compuesto en la mezcla de ensayo no interfiere con la determinación colorimétrica del acetato crómico. Se deja que la preparación de catalasa desdoble H2O2 durante diferentes períodos de tiempo. La reacción se detiene a intervalos de tiempo específicos mediante la adición de dicromato / mezcla acética y el H2O2 restante se determina midiendo colorimétricamente el acetato crómico después de calentar la reacción.
Materiales y equipo:
· Tubos de ensayo
· Fuente de catalasa
· Tampón fosfato
· Peróxido de hidrógeno
· Solución madre de dicromato/ácido acético
· Solución de trabajo de dicromato / ácido acético
· Espectrofotómetro
Procedimiento
La mezcla de ensayo contenía 0,5 ml de H2Om. 1,0 ml de tampón y 0,4 ml de agua. Se añadieron 0,2 ml de enzima para iniciar la reacción. Se añadieron 2,0 ml del reactivo dicromato / ácido acético después de 0,30,60,90 segundos de incubación. Al tubo de control se le añadió la enzima después de añadir el reactivo ácido. A continuación, los tubos se calentaron durante 10 minutos y el color desarrollado se leyó a 610 nm.
La actividad de la catalasa se expresó como ymol de H2o 2 descompuesto / min/mg de proteína.