TAREA GRUPAL 12 - MÉTODOS MOLECULARES (ARTÍCULOS) - SUBGRUPO 3

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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL 
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS 
CARRERA DE MEDICINA 
 
CÁTEDRA DE VIROLOGÍA 
 
TAREA GRUPAL #12 
 
SUBGRUPO # 3 
 
TEMA 
MÉTODOS MOLECULARES – ARTÍCULOS Y ANÁLISIS 
 
INTEGRANTES: 
SCARLET VIVIANA LAVID SANDOVAL 
ZINNA NAYELHI LINO ALVAREZ 
CELIA THAIS MOREIRA GARCIA 
 DOMENICA YULISSA MOLINA GARCES 
DIEGO ANDRES PAREDES JIMENEZ 
 
CATEDRÁTICO 
DRA. CARMEN EULALIA MOSQUERA HERRERA 
 
MED-S-CO-4-7 
 
2023-2024 CI 
 
 
 
HIBRIDACIÓN SOUTHERN 
ESTUDIANTE: DOMENICA YULISSA MOLINA GARCES 
 
ENLACE: https://www.elsevier.es/es-revista-gastroenterologia-hepatologia-14-pdf-
S0210570501701240 
ANÁLISIS: El virus de la hepatitis A (VHA) es un tipo de virus ARN de polaridad 
positiva que forma parte de la familia Picornaviridae. La estructura del VHA incluye tres 
polipéptidos llamados VP1, VP2, VP3, y posiblemente un cuarto, VP4, aunque este 
último aún no ha sido detectado en los viriones. La transmisión del VHA ocurre 
principalmente por vía enteral. En países en desarrollo, la mayoría de las infecciones por 
VHA ocurren en la infancia, mientras que, en países industrializados, las infecciones son 
más comunes en adultos jóvenes. En España, el patrón epidemiológico ha cambiado en 
las últimas décadas debido a mejoras en las condiciones higiénicas y ambientales, siendo 
similar al de zonas con baja endemicidad. 
El diagnóstico de la infección aguda por VHA se realiza generalmente mediante la 
detección de anticuerpos IgM específicos contra el VHA (anti-VHA IgM). Estos 
https://www.elsevier.es/es-revista-gastroenterologia-hepatologia-14-pdf-S0210570501701240
https://www.elsevier.es/es-revista-gastroenterologia-hepatologia-14-pdf-S0210570501701240
anticuerpos se detectan aproximadamente de 3 a 7 semanas después de la infección, en 
algunos casos incluso antes de que aparezcan los síntomas clínicos y antes de que 
aumenten los valores de las transaminasas en la sangre. Los anticuerpos alcanzan su pico 
máximo de concentración entre 15 y 30 días desde el inicio de los síntomas y disminuyen 
gradualmente hasta desaparecer en un período de 3 a 6 meses, cuando la enfermedad ha 
remitido. El objetivo de este estudio es aplicar un método que combina retro transcripción 
(RT) seguida de PCR y Southern blot para detectar ARN-VHA en el suero de pacientes 
con hepatitis aguda A, hepatitis aguda B y hepatitis aguda no A, no E. La presencia y el 
título de los anticuerpos anti-VHA de tipo IgM y los valores de las transaminasas séricas 
se relacionaron con la detección del ARN-VHA en muestras sucesivas de suero. 
Después de amplificar el fragmento de ARN-VHA mediante RT-PCR, se observó una 
banda en la electroforesis de gel de agarosa con un tamaño esperado de 189 pb. La 
sensibilidad del método de PCR simple fue de 4,000 partículas virales por ml, mientras 
que la sensibilidad del método de RT-PCR Southern blot fue de 400 partículas virales por 
ml. De las 26 muestras de pacientes con hepatitis aguda A, el ARN-VHA se detectó en 
10 (38%) de ellas. Cinco muestras fueron positivas mediante PCR simple y 10 mediante 
PCR-Southern blot. Todas las muestras positivas por PCR simple también resultaron 
positivas por Southern blot. 
Las cinco muestras de suero obtenidas durante la primera semana de inicio de los 
síntomas clínicos fueron positivas tanto por PCR simple como por Southern blot. Sin 
embargo, de las 10 muestras obtenidas durante la segunda semana, el ARN-VHA solo fue 
positivo mediante Southern blot. A partir de la segunda semana, no se detectó ARN-VHA 
en ninguna de las muestras de suero. 
Realizado por: 
 
 
 
 
 
PCR (REACCIÓN EN CADENA POLIMERASA) 
ESTUDIANTE: SCARLET VIVIANA LAVID SANDOVAL 
ENLACE: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34776394/ 
ANÁLISIS: La hepatitis viral aparece más frecuentemente al nacer o durante la infancia 
y es una enfermedad cuyas vías de transmisión incluyen lágrimas, bilis, fluidos sexuales, 
sudor, leche, orina, heces y saliva. El objetivo del presente estudio fue analizar la 
especificidad de la inmunocromatográfica y la prueba ELISA para el antígeno de 
superficie de hepatitis B y compararlas con la prueba PCR. 
Se utilizó el suero de 200 pacientes (140 hombres y 60 mujeres) que fueron atendidos en 
el hospital de la Escuela de Medicina de la Universidad de Urmia entre noviembre 2013 
y diciembre de 2014. Los resultados de dichos métodos fueron comparados con los 
resultados del procedimiento de PCR para VHB. 
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34776394/
Los datos de PCR e inmunocromatográfica presentaron altas sensibilidades, con lo que 
se identificó a la inmunocromatográfica como un método aceptable para diagnosticar 
hepatitis B. 
La PCR fue un método aceptable para diagnosticar hepatitis B, con buenos niveles de 
sensibilidad y especificidad, por lo cual es considerado el estándar de oro. Por lo tanto, lo 
consideramos un método satisfactorio para diagnosticar hepatitis B. 
Realizado por: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
HIBRIDACIÓN NORTHERN 
ESTUDIANTE: CELIA THAIS MOREIRA GARCIA 
 
ENLACE: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35105788/ 
ANÁLISIS: La hibridación Northern es una técnica molecular que se utiliza para detectar 
y cuantificar la presencia de ARN mensajero (ARNm) específico en una muestra. Esta 
técnica es una variante de la hibridación in situ, que se utiliza para detectar y cuantificar 
ácidos nucleicos complementarios a sondas de ADN o ARN. 
El artículo se centra en el desarrollo de una nueva estrategia de hibridación Northern para 
la detección de ARNm en tejidos vegetales. Los autores proponen una mejora en la 
técnica tradicional de Northern blotting, que permite una detección más sensible y precisa 
de los niveles de expresión génica. 
La técnica de Northern blotting ha sido ampliamente utilizada en estudios de expresión 
génica, pero presenta algunas limitaciones. Una de ellas es la variabilidad entre muestras 
debido a la hibridización no específica de las sondas. Esta hibridización no específica 
puede llevar a sobreestimar o subestimar los niveles de ARNm en una muestra. Por lo 
tanto, es importante desarrollar estrategias que mejoren la sensibilidad y especificidad de 
esta técnica. 
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35105788/
En este artículo, los autores proponen una estrategia de hibridación Northern utilizando 
sondas de ADN modificadas y condiciones de hibridación optimizadas. Para optimizar la 
técnica, los autores realizaron pruebas utilizando diferentes concentraciones de sondas y 
diferentes temperaturas de hibridación. Además, también evaluaron la eficiencia de 
diferentes sistemas de detección para mejorar la sensibilidad de la técnica. 
Los resultados obtenidos mostraron que la estrategia propuesta mejoró la sensibilidad de 
la detección de ARNm en tejidos vegetales. Los niveles de expresión génica detectados 
con la nueva estrategia fueron consistentes con los obtenidos utilizando técnicas de PCR 
cuantitativa en tiempo real, lo que sugiere que la hibridación Northern modificada es una 
técnica confiable y precisa para la detección de ARNm en tejidos vegetales. 
Realizado por: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PCR ANIDADA O NESTED PCR 
ESTUDIANTE: ZINNA NAYELHI LINO ALVAREZ 
 
ENLACE: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7424425/´ 
ANÁLISIS: La infección oculta por el virus de la hepatitis B (OBI) se refiere a la 
presencia de material genético del VHB (ADN del VHB) en el torrente sanguíneo de una 
persona, pero sin detectar la presencia del antígeno de superficie del VHB (HBsAg) en el 
suero sanguíneo mediante pruebas serológicas convencionales. En otras palabras, los 
pacientes con infección oculta de VHB pueden tener una carga viral baja o indetectable 
del VHB, lo que dificulta su detección con las pruebas de rutina. 
Para abordar esta cuestión, los investigadores han utilizado una técnica llamada PCR 
anidada (Nested PCR en inglés). La PCR anidadaes una variante de la reacción en cadena 
de la polimerasa (PCR) que permite una mayor sensibilidad y especificidad en la 
detección de material genético específico, como el ADN del VHB. 
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7424425/´
El estudio se realizó en el Hospital Vali-e-Asr en Irán, en 166 pacientes en hemodiálisis 
con HBsAg negativo. Se recopilaron datos de los registros de los pacientes, se recolecto 
10 ml de sangre y se transfirieron los viales al departamento técnico para la centrifugación 
y separación del suero. Los ensayos anti-HBc se realizaron en muestras negativas para 
HBsAg mediante ELISA. Y la OBI se evaluó mediante seropositivos (anti-HBc y anti-
HBs) y seronegativos (anti-HBc y anti-HBs) mediante PCR anidada. 
El proceso de PCR anidada implica dos rondas de amplificación. En la primera ronda, se 
utilizan cebadores externos para amplificar una región específica del ADN del VHB. 
Luego, en la segunda ronda, se toma una pequeña cantidad del producto amplificado de 
la primera ronda y se utiliza como plantilla para una amplificación adicional utilizando 
cebadores internos (cebadores anidados) que se encuentran dentro de la región 
amplificada en la primera ronda de PCR. Esto aumenta la sensibilidad y la capacidad de 
detección de la técnica, lo que permite identificar la presencia de ADN del VHB incluso 
en muestras con una carga viral muy baja. 
Es importante investigar la prevalencia de la infección oculta por el VHB en diferentes 
grupos de pacientes, como los sometidos a hemodiálisis, ya que esta población puede 
estar en mayor riesgo debido a factores relacionados con su condición de salud. 
Realizado por: 
 
 
 
 
 
 
 
 
SLOT/DOT BLOT 
ESTUDIANTE: DIEGO ANDRES PAREDES JIMENEZ 
 
ENLACE: 
https://currentprotocols.onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/0471142727.mb0209b
s21 
ANÁLISIS: El análisis nos presenta y enseña la prueba Dot/Slot Blot, la cual se basa en 
técnicas simples para inmovilizar ADN sin fraccionar en una membrana de nitrocelulosa 
o nylon. También hace énfasis en la diferencia entre slot blot y dot blot, las cuales difieren 
en la geometría del blot. El protocolo básico describe un blotting en una membrana 
virgen, Existen también protocolos alternativos (1ero y 2do), los cuales se diferencian en 
la carga de la membrana. 
Realizado por: 
 
 
 
 
https://currentprotocols.onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/0471142727.mb0209bs21
https://currentprotocols.onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/0471142727.mb0209bs21