VIROLOGÍA DIAPOSITIVAS 2 0 (1)

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CATEDRA DE VIROLOGIA
AÑO LECTIVO
2021 – 2022
DOCENTE
DRA. CARMEN MOSQUERA DE CHOEZ
 MICROBIÓLOGO – BIOLOGA MOELECULAR
MSC EN BIOTECNOLOGIA
FACULTAD DE CIENCIAS MEDICAS
ESCUELA DE MEDICINA
SEGUNDO AÑO
Métodos moleculares
1.DESNATURALIZACIÓN
2. TEMPLADO
(HIBRIDACIÓN)
3. ELONGACIÓN
(REPLICACIÓN)
REACTIVOS:
• Muestra del paciente
• Buffer de PCR
• 4 dNTP
• 2 primers o cebadores: forward y reverse
• Tubo de polietileno especial
• Ion de magnesio
• Cloruro de sodio
• DNA polimerasa termoestable Taq
OBJETIVO:
Conseguir una enorme 
amplificación del número 
de moléculas que 
contienen la SECUENCIA 
DIANA o de INTERÉS.
ETAPA DE MANTENCIÓN
• Rendimiento
• Duración
• Especificidad
• Capacidad de detención(sensibilidad)
• fidelidad
ELECTROFORESIS EN GEL
Una técnica utilizada para separar fragmentos de ADN según su
tamaño.
VARIANTES DEL PCR
temperatura empleada en la 
fase de hibridación y de la 
cantidad de iones divalentes 
que se
reacción
incorporan a la 
(además de
depender de la secuencia de
los cebadores).
NESTED PCR O PCR ANIDADA
diseñada para aumentar la especificidad . Esta modificación consta de dos grupos de 
cebadores dirigidos contra la misma diana. El primer grupo de cebadores se desarrolla de 
la manera usual, mientras que el segundo grupo son cebadores situados internamente o 
anidados con respecto al primer grupo
ESPECIFICIDAD
La especificidad de la PCR 
ANIDADA depende, 
fundamentalmente, de la
RT-PCR
-Se trata de una amplificación de RNA, 
especialmente mRNA a través de la síntesis 
previa de su cDNA, que después se amplifica 
por PCR.
-Es el método con mayor capacidad de 
detección de los disponibles para la medida de 
la expresión génica in vitro.
Puede utilizarse como método de detección 
molecular de genes, para estudiar el genoma de 
virus de ARN como los retrovirus (por ejemplo, 
el VIH) o el virus de la gripe (el virus de la 
influenza))
Puede amplificar una región de DNA de secuencia desconocida
PCR INVERSA
• Se emplea para clonar regiones desconocidas de un DNA
• Mide la velocidad de amplificación 
del ADN
• Se cuantifica el numero de ciclos 
que han sido necesarios para 
alcanzar una cantidad prefijada 
de DNA productos
• La cuantificación depende de 
sondas de hibridación
• Sondas TaqMan
• Sondas molecular Beacons
• Sondas scorpion
Las sondas 
TaqMan
Sondas 
Molecular 
Beacons
MÉTODOS DE HIBRIDACIÓN
MÉTODOS DE ENSAYO DE 
HIBRIDACIÓN
HIBRIDACIÓN EN SOPORTE SÓLIDO
DOT BLOT y SLOT-BLOT
• Gota a gota: dot blot
• Manchas alargadas: slot blot
• Se aplican sobre un filtro de nylon 
o nitrocelulosa, cuyas propiedades de 
absorción fijan las moléculas de ARN y 
proteína.
 
MUESTRAS1. Heces
2. Sangre
3. Esputo
RESULTADOS DE UN DOT BLOT
HIBRIDACIÓN SOUTHERN
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texto
l
HIBRIDACIÓN NOTHERN
DETECTA
FRAGMENTOS DE ARN
RESULTADOS Y DETECCIÓN
Diferencia entre southern y nothern
SOUTHERN NOTHERN
1. Gel de
agarosa
2. Uso de
sondas
3. Solo identifica 
ADN
1. Gel de
agarosa
2.Uso de sondas
3. Identifica
ARN
	Diapositiva 1
	Diapositiva 2: Métodos moleculares
	Diapositiva 3
	Diapositiva 4
	Diapositiva 5
	Diapositiva 6
	Diapositiva 7
	Diapositiva 8
	Diapositiva 9
	Diapositiva 10
	Diapositiva 11: OBJETIVO: Conseguir una enorme amplificación del número de moléculas que contienen la SECUENCIA DIANA o de INTERÉS.
	Diapositiva 12
	Diapositiva 13
	Diapositiva 14
	Diapositiva 15: ELECTROFORESIS EN GEL
	Diapositiva 16: VARIANTES DEL PCR
	Diapositiva 17: NESTED PCR O PCR ANIDADA
	Diapositiva 18: RT-PCR
	Diapositiva 19: Puede amplificar una región de DNA de secuencia desconocida
	Diapositiva 20: PCR INVERSA
	Diapositiva 21
	Diapositiva 22: Sondas Molecular Beacons
	Diapositiva 23: MÉTODOS DE HIBRIDACIÓN
	Diapositiva 24: MÉTODOS DE ENSAYO DE HIBRIDACIÓN
	Diapositiva 25: HIBRIDACIÓN EN SOPORTE SÓLIDO
	Diapositiva 26: DOT BLOT y SLOT-BLOT
	Diapositiva 27: RESULTADOS DE UN DOT BLOT
	Diapositiva 28: HIBRIDACIÓN SOUTHERN
	Diapositiva 29: HIBRIDACIÓN NOTHERN
	Diapositiva 30
	Diapositiva 31: Diferencia entre southern y nothern