TAREA GRUPAL 12

Vista previa del material en texto

UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS
CARRERA DE MEDICINA
CÁTEDRA DE VIROLOGÍA
TAREA GRUPAL #12
SUBGRUPO # 3
TEMA
MÉTODOS MOLECULARES – ARTÍCULOS Y ANÁLISIS
INTEGRANTES:
SCARLET VIVIANA LAVID SANDOVAL
ZINNA NAYELHI LINO ALVAREZ
CELIA THAIS MOREIRA GARCIA
	DOMENICA YULISSA MOLINA GARCES	
DIEGO ANDRES PAREDES JIMENEZ
CATEDRÁTICO
DRA. CARMEN EULALIA MOSQUERA HERRERA
MED-S-CO-4-7
2023-2024 CI
HIBRIDACIÓN SOUTHERN
ESTUDIANTE: DOMENICA YULISSA MOLINA GARCES
ENLACE: https://www.elsevier.es/es-revista-gastroenterologia-hepatologia-14-pdf-S0210570501701240 
ANÁLISIS: El virus de la hepatitis A (VHA) es un tipo de virus ARN de polaridad positiva que forma parte de la familia Picornaviridae. La estructura del VHA incluye tres polipéptidos llamados VP1, VP2, VP3, y posiblemente un cuarto, VP4, aunque este último aún no ha sido detectado en los viriones. La transmisión del VHA ocurre principalmente por vía enteral. En países en desarrollo, la mayoría de las infecciones por VHA ocurren en la infancia, mientras que, en países industrializados, las infecciones son más comunes en adultos jóvenes. En España, el patrón epidemiológico ha cambiado en las últimas décadas debido a mejoras en las condiciones higiénicas y ambientales, siendo similar al de zonas con baja endemicidad.
El diagnóstico de la infección aguda por VHA se realiza generalmente mediante la detección de anticuerpos IgM específicos contra el VHA (anti-VHA IgM). Estos anticuerpos se detectan aproximadamente de 3 a 7 semanas después de la infección, en algunos casos incluso antes de que aparezcan los síntomas clínicos y antes de que aumenten los valores de las transaminasas en la sangre. Los anticuerpos alcanzan su pico máximo de concentración entre 15 y 30 días desde el inicio de los síntomas y disminuyen gradualmente hasta desaparecer en un período de 3 a 6 meses, cuando la enfermedad ha remitido. El objetivo de este estudio es aplicar un método que combina retro transcripción (RT) seguida de PCR y Southern blot para detectar ARN-VHA en el suero de pacientes con hepatitis aguda A, hepatitis aguda B y hepatitis aguda no A, no E. La presencia y el título de los anticuerpos anti-VHA de tipo IgM y los valores de las transaminasas séricas se relacionaron con la detección del ARN-VHA en muestras sucesivas de suero.
Después de amplificar el fragmento de ARN-VHA mediante RT-PCR, se observó una banda en la electroforesis de gel de agarosa con un tamaño esperado de 189 pb. La sensibilidad del método de PCR simple fue de 4,000 partículas virales por ml, mientras que la sensibilidad del método de RT-PCR Southern blot fue de 400 partículas virales por ml. De las 26 muestras de pacientes con hepatitis aguda A, el ARN-VHA se detectó en 10 (38%) de ellas. Cinco muestras fueron positivas mediante PCR simple y 10 mediante PCR-Southern blot. Todas las muestras positivas por PCR simple también resultaron positivas por Southern blot.
Las cinco muestras de suero obtenidas durante la primera semana de inicio de los síntomas clínicos fueron positivas tanto por PCR simple como por Southern blot. Sin embargo, de las 10 muestras obtenidas durante la segunda semana, el ARN-VHA solo fue positivo mediante Southern blot. A partir de la segunda semana, no se detectó ARN-VHA en ninguna de las muestras de suero.
Realizado por: 
PCR (REACCIÓN EN CADENA POLIMERASA)
ESTUDIANTE: SCARLET VIVIANA LAVID SANDOVAL
ENLACE: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34776394/ 
ANÁLISIS: La hepatitis viral aparece más frecuentemente al nacer o durante la infancia y es una enfermedad cuyas vías de transmisión incluyen lágrimas, bilis, fluidos sexuales, sudor, leche, orina, heces y saliva. El objetivo del presente estudio fue analizar la especificidad de la inmunocromatográfica y la prueba ELISA para el antígeno de superficie de hepatitis B y compararlas con la prueba PCR.
Se utilizó el suero de 200 pacientes (140 hombres y 60 mujeres) que fueron atendidos en el hospital de la Escuela de Medicina de la Universidad de Urmia entre noviembre 2013 y diciembre de 2014. Los resultados de dichos métodos fueron comparados con los resultados del procedimiento de PCR para VHB. 
Los datos de PCR e inmunocromatográfica presentaron altas sensibilidades, con lo que se identificó a la inmunocromatográfica como un método aceptable para diagnosticar hepatitis B.
La PCR fue un método aceptable para diagnosticar hepatitis B, con buenos niveles de sensibilidad y especificidad, por lo cual es considerado el estándar de oro. Por lo tanto, lo consideramos un método satisfactorio para diagnosticar hepatitis B.
Realizado por:
HIBRIDACIÓN NORTHERN
ESTUDIANTE: CELIA THAIS MOREIRA GARCIA
ENLACE: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35105788/ 
ANÁLISIS: La hibridación Northern es una técnica molecular que se utiliza para detectar y cuantificar la presencia de ARN mensajero (ARNm) específico en una muestra. Esta técnica es una variante de la hibridación in situ, que se utiliza para detectar y cuantificar ácidos nucleicos complementarios a sondas de ADN o ARN. 
El artículo se centra en el desarrollo de una nueva estrategia de hibridación Northern para la detección de ARNm en tejidos vegetales. Los autores proponen una mejora en la técnica tradicional de Northern blotting, que permite una detección más sensible y precisa de los niveles de expresión génica.
La técnica de Northern blotting ha sido ampliamente utilizada en estudios de expresión génica, pero presenta algunas limitaciones. Una de ellas es la variabilidad entre muestras debido a la hibridización no específica de las sondas. Esta hibridización no específica puede llevar a sobreestimar o subestimar los niveles de ARNm en una muestra. Por lo tanto, es importante desarrollar estrategias que mejoren la sensibilidad y especificidad de esta técnica.
En este artículo, los autores proponen una estrategia de hibridación Northern utilizando sondas de ADN modificadas y condiciones de hibridación optimizadas. Para optimizar la técnica, los autores realizaron pruebas utilizando diferentes concentraciones de sondas y diferentes temperaturas de hibridación. Además, también evaluaron la eficiencia de diferentes sistemas de detección para mejorar la sensibilidad de la técnica.
Los resultados obtenidos mostraron que la estrategia propuesta mejoró la sensibilidad de la detección de ARNm en tejidos vegetales. Los niveles de expresión génica detectados con la nueva estrategia fueron consistentes con los obtenidos utilizando técnicas de PCR cuantitativa en tiempo real, lo que sugiere que la hibridación Northern modificada es una técnica confiable y precisa para la detección de ARNm en tejidos vegetales.
Realizado por:
PCR ANIDADA O NESTED PCR
ESTUDIANTE: ZINNA NAYELHI LINO ALVAREZ
ENLACE: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7424425/´ 
ANÁLISIS: La infección oculta por el virus de la hepatitis B (OBI) se refiere a la presencia de material genético del VHB (ADN del VHB) en el torrente sanguíneo de una persona, pero sin detectar la presencia del antígeno de superficie del VHB (HBsAg) en el suero sanguíneo mediante pruebas serológicas convencionales. En otras palabras, los pacientes con infección oculta de VHB pueden tener una carga viral baja o indetectable del VHB, lo que dificulta su detección con las pruebas de rutina.
Para abordar esta cuestión, los investigadores han utilizado una técnica llamada PCR anidada (Nested PCR en inglés). La PCR anidada es una variante de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) que permite una mayor sensibilidad y especificidad en la detección de material genético específico, como el ADN del VHB.
El estudio se realizó en el Hospital Vali-e-Asr en Irán, en 166 pacientes en hemodiálisis con HBsAg negativo. Se recopilaron datos de los registros de los pacientes, se recolecto 10 ml de sangre y se transfirieron los viales al departamento técnico para la centrifugación y separación del suero. Los ensayos anti-HBc se realizaron en muestras negativas para HBsAg mediante ELISA. Y la OBI se evaluó mediante seropositivos(anti-HBc y anti-HBs) y seronegativos (anti-HBc y anti-HBs) mediante PCR anidada. 
El proceso de PCR anidada implica dos rondas de amplificación. En la primera ronda, se utilizan cebadores externos para amplificar una región específica del ADN del VHB. Luego, en la segunda ronda, se toma una pequeña cantidad del producto amplificado de la primera ronda y se utiliza como plantilla para una amplificación adicional utilizando cebadores internos (cebadores anidados) que se encuentran dentro de la región amplificada en la primera ronda de PCR. Esto aumenta la sensibilidad y la capacidad de detección de la técnica, lo que permite identificar la presencia de ADN del VHB incluso en muestras con una carga viral muy baja.
Es importante investigar la prevalencia de la infección oculta por el VHB en diferentes grupos de pacientes, como los sometidos a hemodiálisis, ya que esta población puede estar en mayor riesgo debido a factores relacionados con su condición de salud.
Realizado por:
SLOT/DOT BLOT
ESTUDIANTE: DIEGO ANDRES PAREDES JIMENEZ
 
ENLACE: https://currentprotocols.onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/0471142727.mb0209bs21 
ANÁLISIS: El análisis nos presenta y enseña la prueba Dot/Slot Blot, la cual se basa en técnicas simples para inmovilizar ADN sin fraccionar en una membrana de nitrocelulosa o nylon. También hace énfasis en la diferencia entre slot blot y dot blot, las cuales difieren en la geometría del blot. El protocolo básico describe un blotting en una membrana virgen, Existen también protocolos alternativos (1ero y 2do), los cuales se diferencian en la carga de la membrana.
Realizado por: