Histologia Cuadro con tecnicas especiales

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Histología e inmunología
Tarea: Técnicas Especiales
Alumno: Peralta, Brisa Fernanda
	Técnicas Histoquímicas
	principio
	fundamento
	Utilización 
	• Muestra : Congelada , Fijada, Insoluble, Estructura tisular 
	• Principio – Precipitados insolubles •Componentes a utilizar – Fenómeno físico – Reactividad química – Utilización enzimática
	• Azul de Perls: Detecta Hierro
 • Gránulos de hemosiderina: Reactivo, Mezclas de HCl, azul de Prusia y hematoxilina
	• Identificación de los metales en estado natural
• Tinción de Perls, depósitos de hemosiderina en médula ósea
	
	• Se basa en principios físicos
• Colorantes a bases de anilinas como Sudán, III, IV, Negro B 
	Tejidos con inclusiones lipídicas: Colorantes liposolubles
 • Sudan IV (rojo)
 • Sudán Negro (negro)
	Se usa Sudán negro en hígado, para Grasas neutras
	
	• Reacción de Feulgen • 
	ADN (Reacción de Feulgen) – HCl 
• Schiff : No colorea ARN
• Colorantes básicos Azul de toluidina 
 
	Para teñir: Cromosomas y ADN
	
	Residuos de aminoácidos : Amino Fenol Uniones disulfuro : Sulfhidrilos »
	Se unen al grupo amino de carácter básico de los aminoácidos
	Tricrómico de Masson 
Fibras de colágeno
	
	• Acido peryódico de Schiff (PAS) y Ácido peryódico oxida los grupos glicol.
Los aldehídos reaccionan con la fucsina , Compuestos color magenta
	• Glucógeno – Ácido peryódico de Schiff 
• Amilasa o carmín de best : Demuestra presencia de carbonilos, demuestra PAS positivo Rojo o oscuro a magenta
• Azul de alcián▫ Mucopolisacáridos, ácido sulfatado y carboxílicos pH 2.4-2.6
Mucopolisacáridos sulfatados pH >1
• Azul de toluidina ▫ Estructuras basófilas (cromatina) Tiñe Ortocromático :Tejido nervioso (heterocromatina y gránulos de Nissl y células de la glía) Metacromático: Estructuras ricas en proteoglicanos, heparan sulfato
	Para teñir hidratos de carbono, glucógeno, mucosacaridos, etc, que presenten grupos aldehídos en sus moléculas.
	
Histoquímica enzimática
• Algunas enzimas mantienen funcional su centro activo tras el proceso de fijación.
	• Estas enzimas y las células que los poseen se ponen de manifiesto mediante una reacción enzimática – convierte a unos sustratos solubles e incoloros en productos insolubles y coloreados. – Peroxidasas – Fosfatasas – Deshidrogenasas – acetilcolinesterasas
	Fosfatasa (tejido congelado) ▫ Alcalina Exhiben actividad pH elevado ▫ Ácida Exhiben actividad pH disminuido ▫ Lisosomas
	
	Inmunohistoquímica 
	. Método directo: Solamente primer anticuerpo
. Método indirecto: Primer anticuerpo y Segundo anticuerpo
. Método indirecto ligado a enzima
	En la inmunofluorescencia directa, los anticuerpos marcados se unen directamente al antígeno en la muestra. En la inmunofluorescencia indirecta, se utiliza un anticuerpo secundario marcado con fluoróforo que se une a un anticuerpo primario que reconoce específicamente el antígeno en la muestra.
	Identificación de células en replicación
Localizar células apoptóticas
Permite Examinar el citoesqueleto
	
	Histoquímica con Lectina :
 Proteínas obtenidas de semillas de plantas, se unen a carbohidratos de la superficie.
	Glucoproteínas, proteoglucanos y glucolípidos Caracterizan ciertas membranas que contienen carbohidratos.
 Se marcan con peroxidasas
	Utiliza enzimas como señal de marcaje Debe hacer reacción con sustrato 
Pueden procesarse alto número de muestras 
Resolución de estructuras subcelulares no es tan detallada como en fluorescencia