Patologia

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@natural.k1ller 
Patologia 
Inmunohematologica 
 
Clase 1: Prueba de Antiglobulina Humana 
 
El antisuero es un anticuerpo IgG obtenido de conejos utilizado para 
demostrar la presencia de anticuerpos que sensibilizan (pero no 
aglutinan) GR. 
 
Principio de la prueba de Coombs: 
Los GR lavados, recubiertos con globulina humana son aglutinados 
por el SAGH. Éste reconoce las fracciones Fc de las Ig o las 
fracciones de Complemento específicas. 
 
¿Cómo se prepara el suero de antiglobulina humana? 
• Se inmunizan conejos, ovejas o cabras (se les inyecta suero 
humano), se espera a que los animales respondan haciendo una 
gammaglobulina anti ese suero humano inyectado. 
• Se recolecta el suero de estos animales. 
• Se purifica 
• Se ajusta el título de anticuerpos 
• Se valida la performance 
• Es necesario que este suero tenga actividad Anti-IgG y Anti-C3d 
en la proporción correcta. 
 
 
 
¿Cuál es el principio de la prueba de antiglobulina? 
Tanto los anticuerpos como el complemento son globulinas que, al 
ser inyectadas en un animal, van a producir el antisuero. El SAGH va 
a reaccionar con las globulinas humanas que estén tanto en la 
membrana del GR como libre en el suero. 
 
Tipos de SAGH 
Tipo IgG IgM IgA C3 C3b C3d C4 C5 
Poli-especifico + ± ± + ± + ± ± 
Oligo-
específico 
Anti- 
C3b-
C3d + + + 
IgG-
IgM-IgA + + + 
Mono-
específico 
Anti- 
IgG + 
IgM + 
IgA + 
C3d + 
C4 + 
C5 + 
 
 
Pruebas de Antiglobulina 
• Prueba de Coombs directa (PCD) 
Detecta GR sensibilizados “in vivo” 
 
• Prueba de Coombs indirecta (PCI) 
Detecta GR sensibilizados “in vitro”. 
 
 
 
@natural.k1ller 
Aplicaciones de PAGH (prueba antiglobulina humana) 
 
• PCD: 
Para diagnóstico: EHRN – RHPT (reacción hemolítica 
postransfusional tardía) – AHAI (anemia hemolítica autoinmune) – 
AHDI (anemia hemolítica inducida por drogas) 
 
• PCI: 
PCP (pruebas de compatibilidad) – DAI (detección de anticuerpos 
irregulares) – identificación de anticuerpos irregulares – Titulación – 
Tipificación de antígenos en el GR 
 
Técnica 
 
PCD: 
− Tomar alícuota de sangre 
− Lavar 3 veces con solución fisiológica 
− Realizar suspensión globular (si es en tubo debe ser al 3%, en 
tarjeta 0,8% pero sin los lavados, va directamente a la solución 
de Lizz) 
− Colocar 1 gota de suspensión globular al 3% en un tubo limpio 
− Colocar 2 gotas de SAGH 
− Centrifugar 15s a 1000g 
− Hacer la lectura 
− Anotar los resultados 
Resultado negativo: dejar a temp amb 10m la mezcla, centrifugar y 
leer 
− Si el resultado sigue negativo, agregar 1 gota de control de 
Coombs 
− Centrifugar 15s a 1000g 
− Volver a leer 
 
 
 
¿Qué es el control de Coombs? 
Es una suspensión de GR que sabemos están sensibilizados que se 
utiliza para corroborar la fase antiglobulínica de la prueba, esto es, si 
los lavados fueron hechos correctamente y si el tubo tiene el suero 
de Coombs. 
Si no lo realizamos podemos estar frente a un FALSO NEGATIVO y 
con ello pierdo una oportunidad terapéutica en el paciente. 
 
 
 
 
PCI: 
− Colocar 2 gotas de suero en estudio 
− Agregar 1 gota de suspensión globular al 3% del donante o panel 
globular (esto porque estamos en tubo) 
− Centrifugar 15s a 1000g 
− Leer y anotar los resultados a temp ambiente (nos permite ver 
IgM) 
− Incubar a 37°C durante 30m 
− Centrifugar 15s a 1000g 
− Leer y anotar los resultados 
− Lavamos 3 veces con solución fisiológica 
− Descartamos sobrenadante 
− Agregar 2 gotas de suero de Coombs 
− Centrifugar y leer 
@natural.k1ller 
− Si el resultado es negativo, agregar 1 gota de Coombs control 
− Centrifugar 15s a 1000g 
− Leer 
 
Necesitamos que el resultado de positivo, eso nos indica que la 
prueba funcionaba, que no fue neutralizado porque hicimos mal los 
lavados y que el Coombs estaba agregado en el tubo. 
Si el control de Coombs da negativo queda invalidada la prueba de 
Coombs, porque u omitimos poner el suero de Coombs, o el que 
pusimos no estaba funcionando o hicimos mal los lavados y el suero 
se neutralizó debido a eso. 
 
¿Cómo se hace correctamente el lavado de GR? 
Primero que nada, debemos estar usando un tubo de hemólisis 
(capacidad de 9ml) y son 100 microlitros + 50 microlitros de la gota 
de la suspensión globular, se agrega 9 cm2 de solución fisiológica 
para hacer los lavados. 
 
¿Qué es hacer un lavado? 
Es lograr la dilución del suero de tal manera que la cantidad de 
inmunoglobulina que pueda quedar sea indetectable. 
 
 
¿Por qué puedo obtener un resultado falso negativo? 
• Lavado inadecuado (Si no lavo o lavo poco los GR las 
inmunoglobulinas restantes van a estar ahí y esas tienen más 
sensibilidad por el suero de Coombs, entonces no habrá 
aglutinación) 
• Prueba interrumpida o diferida (los lavados deben hacerse de 
forma sucesiva y en corto tiempo) 
• Interpretación errónea de pruebas positivas débiles 
• Perdida de actividad de reactivos AGH 
• Omitir el agregado de SAGH 
• Sobrecentrifugar o subcentrifugación 
• Agitación inadecuada 
• Concentración de GR alta o baja (es necesaria 1 parte de masa 
globular a 66 partes de suero) 
• Concentración alta de IgG en suero en estudio (Los 3 lavados no 
serían suficientes) 
• pH de solución fisiológica 6.0 disminuye sensibilidad 
 
Falso Neg puntual en PCD, puede deberse a: 
• Omitir incubación a TA por 5-10m para demostrar la presencia 
de C 
• Cantidad de moléculas de IgG y C3d presentes en la membrana 
del GR estén por debajo del umbral de detección del SAGH (150-
500 moléculas por celulas) 
 
Falso Neg puntual en PCI, puede deberse a: 
• Almacenamiento inadecuando de los GR o el suero 
• Actividad anticomplemento del SAGH y presencia de C en la 
detección de raros ejemplos de anti-Kidd 
 
¿Por qué puedo obtener un resultado FALSO POSITIVO? 
• GR autoaglutinados o poliaglutinados 
• Presencia de contaminantes, partículas, precipitados, fibrinas 
presentes en tubos que producen agregación de GR 
• Sobrecentrifugación 
 
Falso Pos puntual en PCD, puede deberse a: 
• C4 se une a los GR en los coágulos o muestras conservadas a 
4°C con CPD-A 
• Tubos que contienen gel de silicona fijan C 
• C fijado a GR extraídos de una línea de infusión con dextrosa (fija 
inespecíficamente C a la membrana de los GR) 
 
Falso pos puntual en PCI, puede deberse a: 
• Uso de GR con PCD positiva para realizar los procedimientos 
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Técnica en gel 
Mucho más sensible, mucho más fácil para el operador, para 
trabajar con muestras contaminadas, no tengo que hacer lavados, no 
hay mucha manipulación. 
 
− Tarjeta con microtubos que tienen un gel de cefarosa ultrafina. 
− Las de uso diario además de ese gel tiene suero de Coombs. 
 
La copa de cada microtubo tiene un lugar donde se coloca primero la 
gota de suspensión globular al 0,8%. La gota es de 50 microlitros y 
luego se agrega el suero en una relación de 25 microlitros 
Se incuba 15m, allí se unen los anticuerpos a los antígenos si están 
presentes. 
Luego se centrifuga. 
Si están sensibilizados no pasan por la columna de gel, mientras que 
los que no están sensibilizados llegan al fondo. Si hay botón en el 
fondo es negativa, si vemos una tira en la parte superior o vemos 
diferentes aglutinatos estamos frente a un resultado positivo. 
 
 
Clase 2: Detección e identificación de Anticuerpos Irregulares 
 
¿En qué casos podemos encontrar AI? 
• Durante la pesquisa: 
o Donante 
o Embarazadas 
o Px con cx de anemia hemolítica 
• Pruebas de compatibilidad pretransfusional 
• Pruebas de compatibilidad conyugal 
 
¿Qué es un anticuerpo clínicamente significativo? 
Es aquel que puede destruir o acelerar la destrucción de eritrocitos 
portadores de los antígenos correspondientes. 
 
Una vez que detectamos un AI, necesitamos identificarlos ¿por qué? 
− Para evaluar su significado clínico 
− Seleccionar el medio más sensible para la búsqueda de sangre 
compatible 
− Transfundir GR carentes del antígeno implicado 
− Para estimar la probabilidad de encontrar sangre compatible 
− Colaboraren el diagnóstico y pronóstico de la EHFN 
 
Anticuerpos 
− Regulares o esperados (están en todos los individuos) 
− Irregulares o inesperados (no deberían estar presentes) 
− Naturales (está presente en el suero del px pero no podemos 
reconocer la causa por la cual apareció) 
− Inmunes (aparecen luego de la exposición a GR no propios) 
 
Regular NO es sinónimo de natural como TAMPOCO irregular es 
sinónimo de inmune. 
 
Irregulares o Inesperados: 
Aloanticuerpos INMUNES: en rta al estimulo con GR 
 Transfusión 
 Embarazo 
 Transplante 
Aloanticuerpos NATURALES: en rta a estímulos ambientales 
 Polen 
 Hongos 
 Bacterias 
 
 
 
 
 
 
 
@natural.k1ller 
Reactivos para la detección e identificación de AI 
 
Reactivos globulares 
− Cada frasco contiene suspensión globular (0,8-6%) de un 
individuo. 
− Deben estar tipificados para los antígenos: 
− D, C, E, c, e, P1, Lea, Leb, K, k, Fya, Fyb, Jka, Jkb, M, N, S, s. 
− Cada lote se manufactura con donantes diferentes 
− Cada lote se mantiene por 45 días 
 
Técnica de salina-antiglobulina 
 
Principio: La sensibilización de GRs por ac es detectada por la 
adición del SAGH 
 
Aplicaciones: Detección e identificación de ac y para las pruebas de 
compatibilidad 
 
Interpretación: 
¿En qué fase ocurrió la reacción? 
IgG reacciona mejor en fase antiglobulínica. Pueden ser aglutinantes 
a 37°C 
IgM reacciona mejor a temperatura baja y es capaz de aglutinar GR 
suspendidos en solución fisiológica a TA. 
Hay IgM que pueden reaccionar en SAGH debido a la fijación de 
complemento. 
 
 
 
 
 
 
 
TA 37 SAG Clase de Ig involucrada 
+ o o 1) IgM 
o 
+ 
o 
+ 
+ 
o 
2) IgG 
3) IgM (alto rango term) (rara) 
+ o + 4) IgM que fija C’ o 5) IgM + IgG 
o + + 6) IgG “aglutinante” 
+ + + 3, 4, 5 o 6 
 
¿Cuál es el resultado del control autólogo? 
− Se realiza enfrentando el suero del px con sus propios GR de la 
misma forma que se enfrenta a celulas del panel celular. 
− Control autólogo negativo en presencia de una detección de ac 
irregulares positiva indica la presencia de un Aloanticuerpo. 
− Control autólogo positivo indica la presencia de autoanticuerpos, 
anticuerpos inducidos por drogas. 
− Si el paciente ha sido recientemente transfundido el control 
autólogo positivo puede deberse a la presencia de un 
aloanticuerpo unido a los GR transfundidos. Se lo verá en un 
campo mixto. 
− La evaluación de muestras con control autólogo positivo o PCD 
positiva resulta en un problema complejo de resolver que 
necesita de la experiencia del operador. 
− El control autólogo puede omitirse durante la DAI, pero debe 
realizarse en la identificación 
 
 
 
 
 
 
@natural.k1ller 
¿Cuántas células reaccionan? ¿Reaccionan con la misma fuerza y en 
la misma fase? 
− Presencia de un único anticuerpo dirigido contra un antígeno 
presente en ambas celulas del panel  Todas las celulas 
reaccionan en la misma fase y con la misma intensidad. 
− Presencia de múltiples anticuerpos  Las celulas reaccionan 
con diferente intensidad o en diferentes medios 
− Presencia de autoanticuerpos  Autocontrol positivo 
 
 
¿Hay hemólisis o campo mixto? 
− Anti-Lea, anti-Leb, anti-Vel y anti-PP1Pk producen hemólisis in 
vitro 
− Anti-Sda, Lua y Lub producen reacciones en campo mixto 
 
 
¿Están realmente aglutinados los GR o se debe al fenómeno de 
Rouleaux? 
− Se observan en todas las pruebas que contengan el suero del 
paciente (autocontrol, inversa ABO) 
− Pacientes con relación albúmina-globulina alterada (ej: mieloma 
múltiple) 
− Pacientes que recibieron expansores plasmáticos (ej: Dextran) 
− No interfiere con la fase antiglobulínica de las pruebas de 
detección e identificación de anticuerpos irregulares 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Herramientas para la interpretación de resultados 
Score (Marsh) / Registro de la fuerza de la aglutinación 
Aspecto macroscópico Simb. Score 
Aglutinación completa. 
Un solo bloque 
4 12 
1 o 2 bloques grandes 3 10 
Varios aglutinatos grandes 2 8 
Muchos aglutinatos pequeños 1 5 
Débil granulado en una suspensión 
celular 
+/- 3 
Suspensión celular W 2 
Suspensión celular 0 0 
 
¿Por qué interesa el título y el score? 
Ac titulado: Anti-D Sin dil 
Px M1 4+ 
Px M2 4+ 
 
Ac 
titulado: 
Anti-D 
Sin 
dil 2 4 8 16 32 64 128 512 Tit Sc 
Px M1 4+ 3+ 2+ 1+ 0 0 0 0 0 1:8 35 
Px M2 4+ 4+ 4+ 4 ´3+ 3+ 2+ 1+ 0 1:128 81 
 
Efecto de dosis 
Capacidad que tienen los anticuerpos de reaccionar mejor o 
exclusivamente con aquellos GR que muestran una doble dosis del 
antígeno, es decir son homocigotas para esa característica. 
 
¿Qué antígenos del panel celulas no expresan efecto de dosis con 
sus respectivos anticuerpos? 
Aquellos no tienen en su conformación la presencia de dos genes 
antitéticos. Y estos son: 
I, i, Lea, Leb y P1 
 
@natural.k1ller 
Limitaciones: 
− Relación suero-células 
o Exceso de anticuerpos 
o Exceso de antígenos 
o Puede aumentarse la relación a 4 gotas de suero para 
detectar anticuerpos débiles sin agregar potenciadores 
− Temperatura 
− pH: 
o La mayoría de los ac reaccionan entre 6.8 y 7.2 
o Hay ejemplos de anti-M que reaccionan mejor a 6.5 
− Tiempo de incubación: 
o Reacciones Ag-Ac están en equilibrio dinámico 
El rango de tiempo es de 30-60 minutos para sistemas preparados 
en solución salina. Sabemos que en ese tiempo vamos a tener el 75% 
de moléculas de anticuerpo adheridas a la membrana del GR 
Los medios potenciadores pueden disminuir este tiempo a 10 
minutos 
 
Distintas fases de reacción 
Otros medios alternativos: Liss, PEG, Enzimas y policationes 
Reacciones con GR de cordón 
 
Variación de la expresión antigénica de GR de cordón. 
¿En qué se diferencian de los hematíes adultos? 
Los GR de cordón suelen reaccionar muy débilmente con ac hacia: 
I, Lea, Leb, Lua, Lub, Vel, Yta, Hy, Csa, Ch y Rg 
(Lo más importante es recordar que será I y Lewis negativos) 
 
 
Método para interpretar resultados de identificación: 
− Control antólogo 
− Exclusión: 
o Excluir aquellas especificidad que no son responsables 
de la reactividad observada 
o Examinar las celulas con resultados negativos en todas 
las fases 
o Los antígenos presentes en las celulas que no 
reaccionaron no son el blanco del anticuerpo presente en 
el suero 
EFECTO DE DOSIS 
− Inclusión: 
Evaluar los resultados obtenidos y comparar con la clave para cada 
especificidad 
− Tipificación GR del paciente: 
Debe estar ausente el antígeno hacia el cual está dirigido el/los 
anticuerpos 
− Cálculo de error 
Tablas de 2x2 para calcular niveles de probabilidad (Fisher) 
Reacción del 
suero 
Glóbulos rojos 
Ag 
presente Ag ausente Total 
Positivo 3 0 
Negativo 0 3 
Total 6 
 
 
¿Cuándo vamos a pensar que hay más de una especificidad? 
− La “clave” observada NO se ajusta a la de un solo anticuerpo 
− Se observan reacciones de intensidad variable, que NO se 
explican por “efecto de dosis” 
− Diferentes hematíes reaccionan en distintas fases 
− Al intentar confirmar la especificidad de un único Ac, se obtienen 
resultados inesperados 
 
 
 
 
@natural.k1ller 
Video 3: Algoritmo de estudio inmunohematológico 
 
 
Conocer historia clínica del paciente, porque ello nos ayuda a 
conocer su diagnóstico, que medicación está tomando ya que 
algunas medicaciones causan anemias por drogas y tambien porque 
sabemos que la gammaglobulina endovenosa o la inmunoglobulina 
hiperinmune anti-D que aportan pasivamente anticuerpos al paciente 
y por ende pueden aparecer en las pruebas de aparición de ac. 
 
 
Toma de muestra, visualizar el aspecto, sérica inversa del abo, 
globular directa del abo. 
 
(GR papainizado son los enzimatizados) 
 
Control autólogo + auto, - alo 
 
LI = lectura inmediata 
 
 
Siempre que hago un eluido tengo que guardar el sobrenadante del 
último lavado. Se corre en paralelo el sobrenadante del último 
lavado. El resultado del sobrenadante debe ser negativo, si da 
positivo se rechaza la prueba 
 
¿En qué situaciones usamos GR A y B para tipificar el eluido? 
En aquellos casos que tengamos sospechade una incompatibilidad 
menor  IM = administración de plasma ABO incompatible. 
 
Cuando hacemos DAI es de buenas prácticas hacerlo en dos medios. 
@natural.k1ller 
Video 4: Enfermedad Hemolítica Perinatal 
 
Enfermedad producida por anticuerpos clínicamente significativos, 
ac maternos dirigidos contra ag fetales. 
 
Definición: 
• Afección inmunológica de tipo aloinmune 
• Produce acortamiento de la sobrevida de los eritrocitos fetales y 
del RN 
• Es por acción de los anticuerpos maternos que están dirigidos 
contra antígenos de origen paterno presentes en los hematíes 
fetales. 
• Son ac capaces de atravesar placenta. 
 
Fisiopatología 
Para que esto ocurra necesitamos que exista 
− Aloinmunización materna por transfusión, HFM (hemorragia 
fetomaterna) previa o actual 
− Incompatibilidad eritrocitaria entre madre e hijo 
− Pasaje de acs maternos a circulación fetal y hemólisis 
 
 
 SRE (sistema retículoepitelial) 
 
 
 
 
@natural.k1ller 
Causas de sensibilización 
− Transfusión de componentes celulares 
− Obstétricos: 
o Abortos, embarazos ectópicos, placenta previa, acretismo 
placentario. 
o Manipulación uterina: versión externa, biopsia coriónica, 
transfusión intrauterina, amniocentesis 
o Parto: parto eutócico o distócico, fórceps, cesárea, 
remoción manual de la placenta 
o Traumatismos abdominales 
− Drogadicción endovenosa 
− Trasplantes de órganos 
− Haplotipos HLA: Alelo HLA-DQB1*0201 presente en 18% de 
mujeres con anti-Rh(D) (título: 16-256) y en 85% con títulos >512 
 
Exposición al antígeno 
Respuesta primaria: 
− IgM 
− IgG 
Respuesta dosis dependiente: mayor cant de volumen de sangre a la 
que se expone un paciente mayor respuesta 
− 15% con 1ml 
− 80% con 250ml 
 
¿Cuándo ocurre la hemorragia Feto-materna? 
− 3% en el 1er trimestre 
− 12% en el 2do trimestre 
− 45% en el 3er trimestre 
− 64% inmediatamente después del parto 
 
Según rta inmune: 
− Respondedoras 
− No respondedoras (30%) 
 
La hemorragia F-M aumenta con: 
• Edad gestacional 
• Abrupto placentae 
• Aborto espontaneo o terapéutico 
• Toxemia 
• Cesárea 
• Embarazo ectópico 
 
Riesgo de inmunización 
− Post aborto: 2-5% 
− Post-parto 2-16% 
− 16% feto ABO compatible 
− 2% feto ABO incompatible 
− Grado de sensibilización: 3% con <0.1mL, 22% con >0.1mL 
− Nueva exposición al antígeno 
− Rápido aumento de la producción de IgG 
− Dosis inicio de respuesta: 0.03ml 
 
Tipo de IgG 
IgG1 
− Atraviesa placenta más rápidamente 
− Se detecta a las 20 semanas 
− Provoca destrucción crónica de los GR in útero 
− Los niveles de sangre de cordón pueden exceder a los maternos 
 
IgG3 
− Aparece tardíamente a las 28-30 semanas 
− Producen menos destrucción in útero 
− El curso postnatal de las enfermedades más severo porque hay 
mayor actividad del C’ (fijación de complemento) y mayor fijación 
a los macrófagos 
 
La forma intrauterina es por la IgG1 y la extra-útero por la IgG3 
 
@natural.k1ller 
Anticuerpos implicados 
− Anti-D y anti-A, B: 97% 
− Anti-c, E, C, e, K: 2,5% 
− Anti-M, N, Dia: 0,5% 
 
Sistema ABO 
• Locus en el cromosoma 9 
• Ocupado por gen A, B o O en cada cromosoma 
• Los antígenos no son el producto primario de los genes 
• Genes A y B codifican glicosiltransferasas específicas 
• Gen O es considerado amorfo -> no genera ninguna 
glicosiltransferasa para cambiar la sustancia H 
 
Presentes en la membrana de: 
− GR 
− Plaquetas 
− Linfocitos 
− Cel endoteliales 
− Cel epiteliales 
 
• Se encuentran desarrollados a los 37 días de la vida fetal 
• El RN tiene del 25 al 50% del número total de sitios antigénicos 
del adulto 
• La expresión de antígenos A y B se desarrolla por completo a los 
2 a 4 años de vida y permanece constante 
• La expresión fenotípica puede variar con la edad, raza, 
interacciones genéticas y en estados de enfermedad 
• Anticuerpos naturales IgM 
• Regulares: presentes en todos los individuos a partir de los 3-6 
meses de vida 
• IgG anti-A, B en individuos de grupo O 
 
 
 
EHP Sistema ABO 
− Puede ocurrir en el primer embarazo 
− Madre: O RN: A, B 
− No existen casos intrauterinos 
− No son casos graves 
− Neutralización de los Acs. Por sustancias A y B en los tejidos 
fetales 
− El Ac implicado es una IgG2 
− Los ags fetales tendrían una estructura menos ramificada y no 
serían reconocidos por los Acs maternos 
 
Sistema Rh, Genética 
Colins: el locus del Rh está compuesto por 2 genes, ubicados en el 
cromosoma 1 y organizado en 10 exones. 
-Gen RHD  Ag D 
-Gen RHCE  Ags C, c, E, e 
Los individuos RhD negativos solo tienen el gen RHCE, y la ausencia 
del alelo del RHD puede deberse a una deleción 
Sistema complejo formado por 55 antígenos 
 
 
Sistema Rh. Antígeno D 
− Sitios antigénicos: 60000-90000 copias/GR 
− Es el de mayor inmunogenicidad entre todos los antígenos 
eritrocitarios 
− Mosaico compuesto por varios epitopes, actualmente se sugiere 
la existencia de 9 (DI a DIX) 
− Presenta variaciones cuantitativas y cualitativas 
 
 
 
 
 
 
@natural.k1ller 
Sistema Rh, Antígeno D. Variaciones cuantitativas 
− Se refieren al N° de sitios antigénicos D en la membrana 
eritrocitaria y se evidencian por el diferente comportamiento 
frente a los reactivos anti-D 
− Puede existir una fuerte reactividad (R2R2) hasta los que 
necesitan de una fase antiglobulínica para ser detectados 
− Causa: gen que codifica menor producción del Ag D o por efecto 
supresor del haplotipo DCe en posición trans 
 
Sistema Rh, Antígeno D. Variaciones cualitativas 
− Ausencia de 2 o más epitopes del Ag D 
− El fenotipo DVI carece de la mayoría de los epitopes (tiene el VI, 
pero no el resto), y es el que reviste mayor importancia clínica 
− Los GR DVI no reaccionan con el Anti-D policlonal por la 
presencia de solo 3 epitopes, y puede ser positivo con anti-D 
monoclonales 
− Pueden sintetizarse acs anti-D 
− Los DVI son D positivos portadores de anti-D 
 
Tipificación correcta de DVI 
− Tipificación con Anti-D policlonal (D débil): neonatos, parejas de 
embarazadas y donantes de sangre 
− Tipificación con anti-D monoclonal al que no detecta la variante 
DVI: embarazadas y receptores 
 
Sistema Rh. Anticuerpos 
− Resultan de la exposición al Ag (transfusión o embarazos) 
− Son de naturaleza IgG 
− Excepcionalmente naturales (anti-E, anti-CW) 
− El más potente es el anti-D, seguido del anti-c y anti-E 
− Reaccionan preferentemente a 37°, en medio antiglobulínico o 
enzimático 
− Persisten por años y pueden causar reacciones hemolíticas 
postransfusionales tardías 
− La EHP grave es producto de la presencia del Anti-D seguido por 
el anti-c 
− Anti-C, anti-E y anti-e rara vez causan EHP y si lo hacen 
generalmente es débil 
− Anticuerpos dirigidos hacia antígenos compuestos 
− G (D+C) y f (c y e en cis) 
 
• Es importante saber si es un ac anti-G o anti-D+C 
• Titulación: anti-C francamente mayor que Anti-D 
• Importancia clínica de la profilaxis anti-D 
• Diagnóstico de certeza: pruebas de adsorción-elución 
 
Anticuerpos en EHP 
− Anti-K es el anticuerpo inmune más frecuente luego de Rh 
− Asociado a EHP grave y a anemia aloinmune perinatal 
− Glicoproteína Kell aparece en progenitores eritroides en estadios 
más tempranos de eritropoyesis que Rh 
− Anti-K se asocia a fagocitosis de progenitores eritroides K 
positivos por macrófagos hepáticos fetales en estadios 
tempranos del desarrollo 
− Concentración de bilirrubina en líquido amniótico y la 
hiperbilirrubinemia del RN es menor que anti-D 
 
 
Ac en EHP. Titulo critico 
Anti-D: 
− Utilizar GR R2R2 
− 128 (equivale a 15U/ml obtenido por ELAT, técnica cuantitativa 
para valorar cantidad de ac) 
− Dinámicas de aumento: 2 o más diluciones en 4 semanas hasta 
la 28 y luego cada 2 
Anti-K: 
-32 
 
@natural.k1ller 
Anti-Fya: 
− 3 veces menos frecuente que Anti-K 
− Produce EHP leve 
− 68 pacientes solo 3 EHP severa 2 con requerimiento de TIU 
Anti-Fyb: 
− 1 solo caso reportado 
Anti-Jka/Jkb: 
− Raramente responsable de EHP 
− 1 solo caso de Kemicterus por anti-Jka 
Anti-M: 
−Raramente responsable de EHP 
− Hay reportes de muerte fetal y exsanguino transfusión??? 
− Alto título de IgG asociado a IgM asociado a aplasia pura de 
celulas rojas 
− Similar al anti-K, destrucción de progenitores hematopoyéticos 
Anti-N 
− No implicado en EHP 
Anti-S y anti-s 
− Producen EHP grave o fatal 
 
Ac Diego en EHP 
− Sistema Diego compuesto por 21 ag, los más importantes: Dia, 
Dib, Wra y Wrb 
− En proteína banda 3: Interviene en transporte de CO2 como 
intercambiador de aniones y favorece la unión de la membrana al 
citoesqueleto 
 
Antígeno Dia: 
− Marcador antropológico. En población mongoloide 
− Se expresa casi exclusivamente en población origen mongoloide 
− Raro en raza blanca, australianos aborígenes y africanos 
− Población asiática de 2% al 12% mayor incidencia en japoneses 
que chinos 
− Alta frecuencia en nativos americanos 60-70% 
Antígeno Dib 
− Alta frecuencia en todas las poblaciones 
 
Ambos completamente desarrollados al nacimiento 
 
Anticuerpos anti-dia y Anti-Dib 
− IgG tipo 1 y 3 
− Anti-Dia está presente en el 3,6% de los pacientes 
politransfundidos en Brasil y causa EHP severa 
− Anti-Dib es raro, solo 3 casos reportados requirieron EXT 
(exsanguino transfusión) 
 
 
EHP Estudios prenatales 
Objetivos: 
− Detectar inmunización materna 
− Detectar potenciales riesgos para el feto 
− Controlar la inmunización patológica: 
 1- Parámetros inmunohematológicos 
 2- Parámetros espectrofotométricos 
 3- Parámetros ecográficos 
 
1-. Historia clínica del px: antecedentes transfu, embarazos, abortos, 
inseminación artificial, inmunoprofilaxis, antecedentes de fetos o 
neonatos afectados por EHP. 
− Estudios inmunohematológicos: 
Gestante: ABO, D (sin variante DVI), fenotipo Rh 
− DAI (frente a GR de panel y de la pareja si son ABO compatibles) 
− Pareja: ABO, D(DVI), cigocidad del fenotipo Rh 
 
Si DAI es positiva, debemos identificar y caracterizar el Ac, titularlo 
y/o cuantificarlo. Analizar del fenotipo paterno: genotipo más 
probable, análisis de la cigocidad del antígeno Rh(D). 
Análisis del genotipo fetal en amniocitos, corion o plasma materno 
@natural.k1ller 
Titulación – Titulo critico 
Es el titulo por debajo del cual no suele haber afectación fetal, o bien 
es leve y no están justificadas las exploraciones invasivas. 
− En general la literatura lo sitúa en 32 para anti-Rh(D) en tubo, 
128 en gel 
− Por debajo de 128, excepcionalmente, habrá afectación fetal. 
− No se conoce el titulo crítico para otras especificidades 
− No existe título crítico para anti-K 
− Los títulos de referencia se han obtenido con la técnica en tubo 
− En tarjeta, el titulo suele ser superior en 2 diluciones 
− La primera determinación sirve de referencia para las siguientes 
− Se debe valorar la tendencia en el titulo 
− Un aumento en dos diluciones se considera significativo 
− Hay que conseguir la máxima estandarización de la técnica: 
Emplear el mismo sistema (tarjeta, tubo, microplaca), hematíes 
del mismo fenotipo, igual volumen suero/hematíes, a ser posible 
realizada por la misma persona y en paralelo con la muestra 
anterior 
 
EHP Biología molecular 
Diagnóstico y prevención 
 
− Determinación del grado de cigocidad del Ag D paterno: consejo 
genético 
− Análisis del genotipo RHD fetal en amniocitos o en corion 
− Análisis del genotipo RHD fetal en plasma materno: Aplicación 
racional de la profilaxis con Ig-antiD. Solo un 60% de las 
gestantes Rh D- son portadoras de feto Rh D+ 
 
 
 
 
 
 
 
2- Parámetros espectrofotométricos 
El grafico de Liley nos predice la gravedad de afectación fetal. 
La zona 1 muy poca afectación fetal, la zona 2 según si cae en baja o 
alta aumenta la afectación fetal y si cae en la zona 3 esta zona habla 
de una afectación grave del feto. 
 
@natural.k1ller 
3- Parámetros ecográficos 
− Control biométrico (cada 7 días) 
− Control de crecimiento intrauterino 
− Control de la placenta (espesor, estructura) 
− Diámetro abdominal 
− Diámetro de la vena umbilical 
− Hidropericardio – ascitis (agua en el peritoneo) 
− Líquido amniótico 
− Flujo por la vena umbilical 
− Pico sistólico de la arteria cerebral media 
 
 
EHP Medicina transfusional 
Laboratorio de inmunohematología: 
− Diagnostico 
− Pronostico 
− Prevención 
 
Unidad de transfusión: 
− Selección y preparación de hematíes TIU/EXT 
 
EHP objetivos del monitoreo inmunohematológico 
− Identificar embarazadas con riesgo a desarrollar EHP 
− Identificar mujeres D-negativo que necesiten IP anti-D 
− Disponer de sangre compatible para emergencias obstétricas y 
neonatales 
 
EHP tratamiento prenatal 
− Plasmaféresis: disminuye los niveles de Acs hasta un 75% pero 
hay efecto rebote 
− Gammaglobulina endovenosa: mejores resultados si se comienza 
antes de la semana 28 (400mg/kg peso/día) 
− Transfusión intrauterina (TIU) 
− Tratamiento combinado: 
o Método no invasivo  Actúa sobre los anticuerpos 
maternos (prometazina, corticoides, IGIV) 
o Método invasivo Actúa sobre la anemia fetal (TIU: 
Transperitoneal, intravascular umbilical o hepática o 
intracardiaca) 
 
 
Mecanismo de acción 
Se aplica la gammaglobulina, lo que esta va a hacer es competir por 
el anticuerpo anti-D a nivel de los receptores placentarios y va a 
atravesar la placenta y esta inmunoglobulina que atraviesa la 
placenta se va a fijar en los receptores Fc macrofágicos y de esa 
manera va a inhibir la hemolisis por bloqueo de esos receptores en 
el sistema mononuclear fagocítico fetal y por otro lado el aumento 
del catabolismo de IgG materna por el mecanismo de idiotipo anti-
idiotipo y el bloqueo de receptores Fc y pasaje de anti-D. Es un 
feedback negativo. 
 
Tratamientos invasivos 
La reposición de GR se utiliza para mantener la viabilidad fetal, el 
bienestar hemodinámico y hematológico, para prolongar su estadía 
uterina para maduración pulmonar y hepática 
 
Indicaciones: 
− Signos ecográficos de EHP 
− Pico sistólico máximo de la arteria cerebral media >1,49MOM 
− Test de Liley amniocentesis Zona III o Zona II alta en el 25% 
superior de la curva, limite ZIII 
− Cordocentesis HTO>30% o 2DS por debajo p/EG 
 
 
 
 
 
@natural.k1ller 
EHP Tratamiento prenatal 
 
TIU 
− Tipo de hemocomponente: GRD grupo 0, antígeno negativo para 
el cual la madre está sensibilizada 
− Dentro de 48 horas de extraído 
− Irradiado 
− Leucodepletado por filtración 
− Volumen: (Edad gestacional – 20) x 10ml 
− Objetivo: mantener valores de Hb >10g/dl 
 
TIU Transperitoneal: 
Eritrocitos irradiados y leucodepletados 0 Rh- HTO > 80% 
 
>50% absorbidos dentro de 72 horas en: 
− Linfáticos subdiafragmáticos 
− Conducto linfático derecho 
 
Sin ascitis se absorben 12 a 18% de GR por día al 7 a 10 días la 
absorción es completa. 
 
El volumen inyectado (EG- 20) x 10 es LIMITADO por la cavidad 
peritoneal ya que si la presión intraperitoneal supera la presión 
venosa umbilical la circulación placentaria se detiene. 
 
Complicaciones: ruptura prematura de membranas, desprendimiento 
de la placenta normoincerta, corioamnionitis, óbito fetal, lesión de 
órganos, hemolisis de sangre x TIU 
 
Se desconoce el HTO y HB ni grupo y factor del feto 
 
 
 
 
EHP estudios postnatales 
− Muestra: Sangre de cordón 
− Estudios de laboratorio: Hto, Hb, bilirrubina 
− Estudios inmunohematológicos: Grupo ABO, D(Dw), Fenotipo Rh, 
PAD, Identificación del Ac en eluido globular, detección de 
anticuerpos ABO en suero de cordón frente a GR testigos “A” o 
“B”. 
− No tiene sentido que titulemos el anticuerpo materno 
 
Estudios postnatales. Severidad EHP 
50% de los RN con PCD+ presenta formas leves: 
− Hb de cordón: >14g/dL 
− Bilirrubina de cordón: <4mg/dL 
Tratamiento: 
− Fototerapia temprana 
− Transfusión por anemia tardía 3-6 semanas de vida 
 
25% de los RN PCD+ presentan formas moderas: 
− Hb de cordón < 14g/dL 
− Bilirrubina de cordón > 4mg/dL 
− Ictericia dentro de las 24 hrs de vida 
Tratamiento: 
− Fototerapia intensiva 
− EXT inmediata 
− Transfusión por anemia tardía 6 semanas de vida 
 
25% de los RN conPCD+ presenta 
− Feto muerto 
− Hidrops la mitad antes de la semana 34 de gestación 
 
EHP tratamiento postnatal 
1- Fototerapia 
2- IgG EV en altas dosis 
3- EXT 
@natural.k1ller 
Fototerapia: 
Objetivo: disminuir de la bilirrubina 
 
Mecanismo de acción: 
− Producción de 2 foto isómeros solubles de bilirrubina que se 
excretan en bilis y heces 
− El efecto depende del espectro de luz visible azul-verde que 
recibe el RN 
 
Gammaglobulina EV en altas dosis: 
Esquema: -500 mg/kg/dosis en tres días 
 
− La 1° lo más rápido posible luego del nacimiento siempre antes 
de las 2hrs 
− Las otras 2 dosis separadas por intervalos de 24hrs 
− Administrada a un ritmo de infusión no mayor de 5ml/Kg/hora 
 
 
Exanguinotransfusión 
Objetivos: 
− Disminución bilirrubina 
− Remover la Bi del espacio extravascular 
− Disminuir el Ac circulante 
− Reemplazar los GR afectados 
− Inhibir la eritropoyesis 
− Aportar capacidad de transporte de Bi (albúmina) 
Volumen: debe ser igual al doble de la volemia del RN 
Calculo: 85-100ml/kg peso 
1 volumen remueve entre 60-65% de los GR sensibilizados y 2 
volúmenes el 80-85% 
Temperatura: por lo menos a T amb 
− Sangre total reconstruida (GRD + PFC) 
− GRD antígeno negativo para el Ac en cuestión 
− Dentro de las 48 horas de extraída 
− Leucodepletada por filtración (para evitar CMV) 
− Irradiada si correspondiere (feto pesa menos de 1200g o pesa 
más, pero recibió TIU) 
 
EHP tratamiento postnatal. ¿Por qué nos interesa bajar la 
Hiperbilirrubinemia? 
 
− Daño en los núcleos de la base del cerebro por deposito en los 
lípidos de membrana a pH bajo, o como complejos albumina-Bi 
que se transfiere Bi a los tejidos por contacto directo con la 
superficie celular. 
− Favorecido por el daño de la BHE producto de acidosis 
respiratoria e injuria vascular 
− Necrosis de los núcleos grises de la base del cerebro, 
hipocampo, núcleos subtalámicos y cerebelo 
− Decorticación 
− 50% tiene necrosis tubular neural, mucosa intestinal y celulas 
pancreáticas 
 
Mecanismo de neurotoxicidad 
− Inhibe fosforilación de enzimas críticas en el proceso de 
neurotransmisión 
− Disfunción mitocondrial 
− Deterioro de membranas celular, precipita en fosfolípidos de la 
membrana mitocondrial y afecta los canales iónicos 
− Interfiere con la actividad enzimática por unión de Bi a 
receptores específicos 
 
Encefalopatía Bi 
− Fase 1: hipotonía, ausencia de reflejo de succión, depresión del 
sensorio 
− Fase 2: hipotonía y fiebre opistótonos 
− Fase 3: llanto agudo, ceguera, sordera, atetosis y rechazo del 
alimento 
@natural.k1ller 
Secuelas: Parálisis cerebral, coreoatetosis, parálisis de la mirada 
ascendente, sordera y menos frecuente retardo mental 
 
Profilaxis Anti-D 
− Mecanismo de acción no claramente establecido 
− Solo efectiva para la respuesta inmune primaria 
− La eficacia dependerá de: Dosis adecuada, tiempo de 
administración, conservación de producto, controles posteriores 
a su administración 
− El 92% de las gestantes se sensibilizan en el 3er trimestre 
− No protege contra los GR D+ que ingresan en el momento del 
parto 
 
EFECTUAR PROFILAXIS PRE Y POSTNATAL 
 
Tipos de IgG Rh 
− Péptidos sintéticos: Rh en mucosa nasal de ratones transgénicos 
inducen inmunotolerancia 
− Monoclonal 
− Policlonal HUMANA LA + EFECTIVA 
 
¿A quién le vamos a dar esta inmunoprofilaxis anti-D? 
− Madre D negativo, no sensibilizada 
− RN D positivo, DVI+ y PAD negativa 
Dosis: 250-330 microgramos (1500 microgramos) 
Efectiva para evitar la inmunización que provocaría hasta 30ml 
(15ml de GR) de sangre fetal Rh+ 
 
¿Cuándo? 
− Después de un aborto 
− En amniocentesis 
− Anteparto: entre semanas 28-32 
− Postparto 
− Otras: rotura de embarazo tubárico, traumatismo abdominal, 
postransfusional (ST, GRD, Concentrado Plaquetario) 
 
Según el cálculo de la Hemorragia feto-materna: 
− Test de elución acida de Kleihauer-Betke 
− Prueba de roseta 
Dosis: 300 microgramos 
Se da dentro de las 72 horas postparto. Aunque se puede dar hasta 
el mes, pero no se asegura la eficacia. 
 
GR fetal es resistente a la elución ácida. 
 
Contraindicaciones para la inmunoprofilaxis anti-D 
− Madre sensibilizada al Ag D 
− RN Rh negativo 
 
Recordar: 
− Importancia de realizar estudios a todas las embarazadas 
− Importancia de la prevención de la EHFN por Rh. La 
inmunoprofilaxis disminuye la inmunización a menos del 1% en 
las gestantes Rh- 
− Evitar la transfusión de unidades Eh+ en mujeres Rh- en edad de 
procrear 
− Una mujer en edad de procrear no debe recibir unidades de la 
pareja sexual o de familiares consanguíneos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
@natural.k1ller 
Video 5: Prevención de la EHP 
 
Fenotipo del Rh: R2/r es más inmunogénico que R1/r 
 
Programa de prevención de la EHP  Evitar la anemia hemolítica 
fetal y conseguir un RN sano 
Mediante profilaxis inespecífica y especifica 
Acción multidisciplinaria: Med transfusional, obstetricia y 
neonatología 
 
Profilaxis inespecífica: 
Médicos prescriptores: terapia transfusional con criterio clínico 
Médicos obstetras: Conozcan el marco jurídico, envíen 
tempranamente a las gestantes al control IH, eviten una mayor HFM 
en el momento del parto (uso innecesario de oxitócicos, masajes 
uterinos (maniobras de Kristeler), formación de gran hematoma 
fetoplacentario por clampeo precoz del cordón y alumbramiento 
manual innecesario) 
 
Profilaxis especifica: 
Inmunoprofilaxis 
 
Reducción de niveles de sensibilización entre primíparas 
− Solo profilaxis postnatal: 1,12% 
− Antenatal y postnatal: 0,28% 
 
Cuantificación de HFM 
En el momento del parto de las mujeres D-, se deberá tomar una 
muestra de sangre materna y se deberá realizar una prueba que 
permita determinar la magnitud de la HFM para poder indicar dosis 
adicionales de gammaglobulina hiperinmune anti-D cuando sea 
requerida. 
 
Con el test de elución acida de Kleihauer-Betke: la elución acida va a 
hacer pelota los GR maternos, pero no los fetales y con eso se hace 
el recuento para cuantificar GR fetales en circulación materna 
 
 
Video 6: Antígenos plaquetarios TAN y NAN 
 
Trombocitopenia neonatal aloinmune 
 
Estructuras blanco 
− Trombocitopenias inmunes: destrucción de plaquetas mediada 
por anticuerpos dirigidos hacia: 
− Autoantígenos: glicoproteínas de membrana complejo GPIIb/IIIa 
proceso autoinmune purpura trombocitopenia autoinmune (PTA) 
− Aloantígenos: estructuras polimórficas e inmunogénicas en la 
superficie externa de la membrana 
 
Aloantígenos plaquetarios: 
− Estructuras genéticamente determinadas 
− Localizadas en proteínas y glicoproteínas 
− Pueden causar aloinmunización durante embarazo, transfusión o 
trasplante 
− Estudio de antígenos y anticuerpos radica en la importancia 
diagnostica, pronostica y terapéutica en los cuadros clínicos 
asociados a la Aloinmunización 
 
Cuadros clínicos asociados a la Aloinmunización hacia antígenos 
plaquetarios específicos: 
− Trombocitopenia neonatal aloinmune 
− Purpura postransfusional 
− Trombocitopenia pasiva postransfusional 
 
 
@natural.k1ller 
Cuadros clínicos asociados a la Aloinmunización hacia antígenos 
plaquetarios NO específicos: 
− Refractariedad a la transfusión de plaquetas 
 
Antígenos plaquetarios NO específicos: 
Están presentes en otras celulas 
− ABH 
− P 
− I 
− Lewis 
− HLA 
 
Antígenos plaquetarios específicos: 
− Restringidos a la membrana plaquetaria y sus precursores 
 
Aloantígenos plaquetarios no específicos: 
ABH: forman parte de las glicoproteínas (GP) intrínsecas: 
− GPIb, GPIIa, GPIIb, GOIV, GPV, moléculas de adhesión endotelial 
PECAM-1 y CD109 
− Y de las adsorbidas pasivamente de la porción glicolipídica del 
plasma 
 
Expresión ABH es insuficiente para que isoaglutininas puedan 
afectar la sobrevida de PQ incompatibles transfundidas, pero 
producen RFNH (reacción febril no hemolítica) e incremento del 
recuento postransfusional de hasta un 20% menos del esperado si 
presentan un título IgG>64 
 
HLA clase I son GP en la membrana de las PQ y de la mayoría de lascelulas nucleadas 
 
Ag y Ac HLA implicados en enfermedades como: 
− Aloinmunización 
− Refractariedad plaquetaria 
− RFNH 
− TRALI (Injuria pulmonar aguda asociada a la transfusión) 
− EIVH (Enfermedad injerto vs huésped) 
− Neutropenia neonatal aloinmune 
 
Aloantígenos plaquetarios específicos. Sistema HPA (Antígenos 
plaquetarios humanos) 
− Localizados en complejos GPIIb/IIIa, GPIb/IXV, GPIa/IIa y en 
CD109 
− 33 aloantígenos plaquetarios específicos definidos por 
anticuerpos humanos: 
o 12 agrupados en 6 sistemas de pares de Ag 
o 21 baja frecuencia 
− Muchos en las integrinas involucradas en interacción cel-cel o 
cel-matriz 
− Asociados a subunidad beta3 (GPIIIa): cel endotelial, m liso, 
fibroblasto 
− Asociados a subunidad alfa2 integrina (GPIa): Linfo T activado, 
cel endotelial 
− Asociados a CD109: Linf T Activados, cel endotelial, cel 
tumorales 
− Asociados a subunidad alfaIIb y GPIb son específicos del linaje 
megacariocitico 
 
Inmunohematología plaquetaria 
− Aloinmunización anti-HPA-Ia: 
Control genético restringida x HLA II (HLADRw52a en 1/3 
caucásicas)  Solo 10% de la población se sensibiliza 
 
 
 
 
 
 
@natural.k1ller 
Técnicas 
Detección e identificación de anticuerpos: 
Inmunofluorescencia indirecta (Coombs indirecto): antiglobulina 
marcada con fluoresceína 
 
MAIPA, MACE (ELISA/Fase solida) 
Para HPA-5 y HPA-15 
Para las mezclas de HPA más HLA 
 
Técnicas comerciales Fase solida: 
Capture-P 
MASPAT 
 
Tipificación de los antígenos plaquetarios 
− Serológica (antisuero de tipificación): antisueros policlonales, los 
reactivos monoclonales han llegado muy tarde, los antisueros 
están contaminados con acs HLA, no es posible la tipificación en 
pacientes con trombocitopenia 
− PCR: (molecular) no se necesitan plaquetas, DNA de celulas 
nucleadas, cabello, líquido amniótico, suero materno, etc. 
Relativamente rápida y sencilla 
 
Trombocitopenia aloinmune neonatal 
− Definición: afectación aloinmune que se produce como 
consecuencia de la destrucción de las plaquetas del feto/RN 
inducida por la presencia de aloanticuerpos antiplaquetarios en 
el suero materno dirigidos hacia antígenos plaquetarios 
específicos presentes en las plaquetas del feto/RN, heredados 
del padre. 
− Es una complicación de la gestación potencialmente muy grave 
que produce en el 20-30% de los casos que cursan con 
trombocitopenia extrema <20.000 plaquetas x ml, hemorragia 
intracraneal en el feto/RN que puede provocar la muerte o 
consecuencias neurológicas irreversibles. 
 
− La TAN (trombocitopenia aloinmune neonatal) es una citopenia 
aloinmune que muestra muchas similitudes con el EHFN por 
incompatibilidad RhD 
− El 30% de los casos la sensibilización se produce en el primer 
embarazo 
 
Anticuerpos 
− 75% anti-HPA-1a  esto se produce en personas gestantes 
HPA-1b1b (negativas para el HPA-1a) 
− HPA-1b1b: prevalencia 1:1000 nacimientos 
o 10% de mujeres HPA-1b1b se inmunizan durante el 
primer embarazo de feto HPA-1a positivo 
o Inmunización ligada a la expresión de HLA de clase II 
DRB3 
o 3% de la población es HPA-1a negativo 
o 30% de mujeres HPA-1b1b HLA-DRB3 se inmunizan 
durante embarazo de feto HPA-1a positivo 
o 1/3 fetos presenta <50.000mm3 
o 10-20% sufren HIC (hemorragia intracraneana) 
 
− 10-15% anti-HPA-5b, a diferencia de los anteriormente 
nombrados producen una trombocitopenia moderada con menor 
repercusión clínica 
o Ubicación en la GP Ia con menor densidad que la 
GPIIb/IIIa 
 
− Anti-HPA-1b, -5ª, -2, -3, -4 o -15 son mucho más infrecuentes 
− Anti-HPA-3 son infrecuentes, pero muestran características 
similares a los anti-HPA-1ª 
− HPA-4b se ve en Japón 
− HPA-15 inducen tambien anemia porque la molécula CD109 está 
presente tambien en las CD34+ (célula progenitora 
hematopoyética) 
@natural.k1ller 
Diagnóstico clínico 
− Rn sano diátesis hemorrágica al nacer o pocas horas después 
− Asintomático: hallazgo laboratorio 
− Purpura cutánea: patequias o equimosis 
− Sangrado digestivo, pulmonar, hematuria, hemorragia vítrea o 
retiniana, HIC 
− HIC 10-20% de pacientes asintomáticas 
− HIC 90% causada por anti-HPA-1ªa 
− 70% HIC es intrauterina 
− 50% antes de la semana 28 
− HIC >30% mortalidad, 50% secuelas neurológicas graves 
 
Neonato sano 
− >150.000 mm3 desde 2do trimestre de embarazo 
− 1-4% RNT (recién nacidos a términos) < 150.000mm3 
− 3:1000 <50.000mm3 (SEVERA) 
− Causa más frecuente: TAN 
 
UCI Neonatal 
− 25% neonatos admitidos en la UCI va a tener un recuento 
<150.000mm3 
− 50% neonatos pretérmino 
− >20% severa <50.000mm3 en pacientes complicados 
 
Causas de trombocitopenia en general 
Aumento de destrucción 
− Consumo: como fiebre, infecciones, sangrado 
Mediada por anticuerpos: que lise las plq 
 
− Disminución de la producción 
Megacariocitopoyesis alterada por 
Insuficiencia placentaria o hipoxia fetal 
 
 
− Dilución secundaria 
Como un paciente con sangrado excesivo, si le damos GR nomás se 
diluye la cant de plq 
 
− Distribución anormal 
Como un hiperesplenismo 
 
Ac contra Ag plaquetarios específicos 
− TAN 
− Inmuno-refractariedad plaquetaria 
− Purpura postransfusional 
 
Trombocitopenias inmunes en el neonato pueden ser: 
− Secundarias a PTI (purpura trombocitopénica idiopática) en la 
madre 
− TAN 
 
Trombocitopenia secundaria a PTI 
− 7-10% trombocitopenia moderada a severa 
− A partir de las 20 semanas 
− 1-3% HIC 
− Empeora durante los primeros días de vida 
− Tratamiento: GGEV (gammaglobulina endovenosa en altas dosis) 
 
TAN 
− Causa más frecuencia de trombocitopenia neonatal 
− Incidencia: 1:1000 
− 20% de todas las trombocitopenias se deben a esta 
− 1:350 embarazos pueden ser anti-HPA-1ª negativa 
− 1:2000 nacidos vivos trombocitopenia severa 
− 14-50% HIC intrautero 
− 30% muerte 
− 50% secuelas severas (disfunción motora, ceguera, retardo 
mental) 
@natural.k1ller 
− 85% petequias y purpuras 
− 10-15% sin síntomas hemorrágicos 
 
Inmunización: 
− Luego de Transfusión 
− Durante el embarazo: pasaje de plaquetas fetales a circulación 
materna a partir de semana 14 que se estimula la formación de 
ac IgG específicos que pueden atravesar la placenta y destruir 
las plaquetas fetales 
 
Inmunogenicidad 
− 78% anti-HPA-1a 
− 18% anti-HPA-5b 
− 4% todas las otras especificidades 
 
Aloinmunización HPA-1a 
− 2% HPA-1a negativas  embarazadas 
− 1:20 a 1:50 HPA-1a negativas desarrollan anti-HPA-1a 
− Afecta 40-60% del 1er embarazo 
− HIC en embarazos ulteriores puede detectarse desde las 14 
semanas 
 
Aloinmunización HPA-5 
− Solo afecta 30% el primer embarazo 
− Clínicamente menos severa 
− 8% HIC 
− 3% mortalidad 
− 50% se diagnostica después de 3 o más embarazos 
 
Aloinmunización HLA 
− 15-30% de embarazadas desarrollan anticuerpos anti-HLA 
(similar a la incompatibilidad ABO) 
 
 
Diagnóstico de TAN 
− Diagnóstico de exclusión 
− Sospecha en neonatos con: 
o Trombocitopenia inexplicada y aislada al nacimiento 
o Recuento plaquetario normal en la madre 
− Hemograma en donde descienden las plaquetas dentro de las 48 
horas de vida 
Una vez que tenemos sospecha diagnostica tenemos que: 
− Investigar aloanticuerpos plaquetarios en suero materno 
− Investigar autoanticuerpos plaquetarios en suero materno 
− Investigar anticuerpos HLA-I en suero materno 
− Genotipo HPA madre, padre y RN 
− Prueba cruzada entre suero y plaquetas del padre 
− ABO madre, padre y RN 
 
Tratamiento: 
GGEV: 
1 gr/kg/día x 2 días o 
0,4 gr/kg/día x 5 días 
 
Si la trombocitopenia es muy severa <30.000 es posible que sea 
necesario transfundir al paciente y en este caso para transfundir a 
ese RN vamos a necesitar plaquetas compatibles con el suero de la 
madre para lo cual tenemos que hacer el diagnostico de hacia qué ag 
está dirigido ese ac antiplaquetario. Si no podemos hacer el 
diagnóstico y tenemos la sospecha clínica lo que podemos hacer si 
necesitamos transfundir es utilizar plaquetas de la madre y estas 
deben ser lavadas o desplamatizadas. 
Si tiene signos de HIC el umbral de transfusión aumentaa 
<50.000mm3 
 
 
 
 
@natural.k1ller 
Tratamiento prenatal de TAN 
− GGEV: inicio semana 12-14 
− Esteroides 
− Transfusión intrautero de plaquetas compatibles 
− GGEV intrautero 
 
Mecanismo de acción GGEV 
− Down-regulation de la producción de ac maternos x idiotipo anti-
idiotipo 
− Bloqueo de los receptores Fc fetales 
 
Sistemas antigénicos leucocitarios 
− Expresan moléculas polimórficas 
− Presentes en celulas sanguíneas y en el plasma 
− Eficiente en provocar una respuesta inmune 
− Alta posibilidad de transfundir productos incompatibles 
 
Incidencia Neutropenia neonatal aloinmune: 0,2% 
Fisiopatología: 
− Ac maternos contra ags de los neutrófilos fetales (HNA-1ª, HNA-
1b y HNA-2ª) 
− Rto de neutrófilos<500 
− IgG que cruzan la barrera placentaria y destruyen los neutrófilos 
del neonato 
− La sensibilización materna se produce en cualquier momento de 
la gestación y puede presentarse en el primer embarazo 
− Generalmente se presenta al nacer, pero puede ser reconocida 
entre el primer y tercer día 
 
Cuadro clínico: 
La mayoría asintomáticas, con neutropenia autolimitadas, algunos 
presentan onfalitis, desprendimiento tardío del cordón, infecciones 
dermatológicas moderadas o neumonía en las primeras semanas de 
vida. 
El RN presenta fiebre cuando la neutropenia es severa y las 
infecciones generalmente son causadas por STF aureus, STT beta 
hemolítico y/o E. coli 
 
Diagnostico: 
RN infección, neutropenia severa y suero con acs reactivos contra 
los granulocitos paternos. 
 
Tratamiento: 
ATB (antibióticos), IgIV (inmunoglobulinas intravenosa), eventual 
transfusión de granulocitos fenotipados, obtenidos por aféresis. El 
uso de esteroides no muestra resultados alentadores. 
 
Video 7: Anemia Hemolítica Autoinmune e Inducida por Drogas 
 
Anemia hemolítica: 
Anemia producida principalmente por el acortamiento de la vida 
media del GR por debajo de 100-120 días 
 
Anemia hemolíticas pueden ser: 
− Hereditaria: causada por una anomalía hereditaria que afectan la 
estructura de la membrana o el contenido eritrocitario. 
Dentro de estas podemos encontrar: esferocitosis hereditarias, 
eritrocitosis hereditaria, talasemias, hemoglobinopatías y déficit 
enzimáticos 
− Congénita: aquellas que existen al momento del nacimiento, pero 
no es causada por un defecto hereditario, como la EHFN. 
− Adquirida: todas aquellas anemias hemolíticas excepto las 
producidas por defectos hereditarios 
No todas tienen patogenia INMUNE por lo tanto NO es sinónimo de 
AHAI 
Pueden ser: aloinmune (EHFN y reacción hemolítica neonatal), 
autoinmunes (AHAI caliente, fría o mixta y hemoglobinuria 
paroxística a Frigore), inducidas por drogas (efecto toxico directo, 
@natural.k1ller 
mecanismo idiosincrático u otros), asociada a trasplante, por defecto 
mecánico (AH microangiopática trombótica, AH mecánica), 
hemoglobinuria paroxística nocturna o asociada a agentes 
infecciosos (parásitos como malaria y bacterias como C. Perfringens 
(welchii)) 
 
AHAI 
− Anemia hemolítica adquirida 
− Producida por ac que reaccionan con los propios GR del paciente 
− Incidencia: oscila entre 1:25.000 1:80.000 casos al año 
− 70% se da en adultos mayores de 40 años 
 
Etiología 
− Idiopática 
− Secundaria: asociada a desregulación inmune asociado a 
infección, neoplasia o enfermedad autoinmune 
 
Clasificación AHAI 
AHAI caliente (son el 70%) 
− Idiopáticas 
− Secundarias. Están asociadas estas a: linfomas, leucemias, lupus 
estematoso sistémico, enfermedades autoinmunes, enfermedad 
inflamatoria crónica y tumor de ovario 
 
AHAI frías (son el 20%) 
− Idiopáticas 
− Secundarias: pueden ser agudas (por Ac policlonal) como 
infecciones, micoplasma y mononucleosis infecciosa o crónicas 
(ac monoclonal) como linfoma 
 
AHAI mixtas (son el 8%) 
− Idiopáticas 
− Secundarias: asociadas a linfoma y lupus estematoso sistémico 
(este último tiene el 25-42% de estas) 
Hemoglobinuria paroxística a Frigore (son el 2%) 
− Idiopáticas 
− Secundarias a infecciones: sarampión, parotiditis y sífilis 
 
AH inmunes inducidas por drogas 
− Producidas por la administración de fármacos 
 
Similitudes con AHAI: clínica y laboratorio 
Diferencias con AHAI: pronostico y terapéutica 
 
Tipos de hemolisis 
Intravascular: La lisis se produce primariamente en el espacio 
intravascular, interviene el complemento, generalmente asociada a 
anemias frías y produce la liberación de hemoglobina por lo tanto se 
produce: hemoglobinemia, hemoglobinuria y hemosiderinuria. 
Se asocia a las AH mecánicas, HP nocturna, HP a Frigore y AHAI fría 
(crioaglutininas) 
 
Extravascular: la lisis se produce principalmente en el sistema 
retículo endotelial  hay aumento de la bilirrubina y sus productos 
de degradación en orina y materia fetal. 
Es la forma más frecuente. Se producen por la interacción de GR 
sensibilizados por IgG y receptores Fc macrofágicos para IgG (IgG1 e 
IgG3) y C3b. 
El lugar donde se produce la hemolisis en el bazo y el hígado son 
capaces de lisar 400ml/día 
Una vez unidos los GR pueden ser fagocitados parcialmente 
(esferocitos) o completamente. 
Podemos ver productos de degradación de hemoglobina en el 
plasma 
 
 
 
 
@natural.k1ller 
Factores que modulan hemolisis 
− Número de sitios antigénicos 
− Clase y subclase de Ig 
− Cantidad de anticuerpo que sensibiliza el GR 
− Constante de equilibrio del anticuerpo 
− Capacidad del Ac para activar el complemento 
− Rango térmico 
− Actividad del sistema reticuloendotelial 
Hemolisis. La distinción no es precisa 
Intravascular: Solemos encontrar Hemoglobinemia y hemoglobinuria 
Extravascular: Solemos encontrar Haptoglobina, bilirrubina y LDH 
 
Diagnostico 
− Examen físico: síntomas de anemia, ictericia acolurica, 
hepatomegalia, esplenomegalia 
− Historia clínica 
− Laboratorio: clínico (Hemograma: Hto, hemoglobina, recuento 
GR. Recuento reticulocitos (se informa como % del recuento de 
GR, valor normal: 0,5 a 1,5%. ABSOLUTO: % reti x rto GR. 
CORREGIDO (Hb 15/hto 45/rto 5.000.000) (%reti x hto) /45 y 
frotis de sangre periférica) tambien se hace bilirrubina, LDH (se 
espera que esos dos den aumentada) haptoglobina y albumina 
(Se esperan que den baja) e inmunohematológico (Prueba de 
antiglobulina directa, 6-8% paciente hospitalizados PDC+, no 
siempre presentan manifestaciones clínicas de destrucción 
eritrocitaria inmune. PCD + NO es sinónimo de AHAI) 
 
− Determinar si la anemia es producida por hemolisis 
− Usar un número limitado de hallazgos clínicos y de laboratorio 
para realizar un diagnostico tentativo de la causa de hemolisis 
− Realizar test confirmatorios para establecer la etiología 
especifica 
 
 
Patrones de PCD en AHAI 
GR 
sensibilizados 
con 
Frecuencia 
de 
observación 
del patrón 
Hemolisis 
predomina en 
Frecuencia 
según tipo de 
AHAI 
IgG + C’ 54% Hígado 67% de las calientes 
Solo IgG 16% Bazo 20% de las calientes 
Solo C’ 30% Hígado y/o Intravascular 
100% de las frías 
13% de las 
calientes 
100% de las HPF 
(hemoglobinuria 
paroxística fría) 
 
AHAI PCD – 
− 7% de todas las AHAI 
− 1-4% de AHAI caliente 
− Causas: 
o Cantidad baja de IgG (<150 moléculas IgG/GR) 
o IgG de baja afinidad 
o No es IgG es una, IgA o IgM 
 
AHAI Caliente: 
− PCD: 
o IgG 20% 
o IgG+C3 67% 
o C3 15% 
− Eluido: 
o Encontraremos reactivos ac IgG 
− Tipo de Ig 
o IgG (Algunas veces IgA o IgM adicional) 
 
@natural.k1ller 
− Suero: 
o 50 a 90% reactivo en PCI 
o 90% aglutina GR tratados con enzimas 
o 13% hemoliza GR tratados con enzimas 
− Especificidad: 
o Usualmente dentro del sistema Rh 
o Otras: Lw, U, K, Kpb, K13, Ge, Jka, Ena y Wrb 
 
AHAI FRIA (Síndrome de aglutinina fría) 
− PDC positiva solo por: C3 
− Eluido: No reactivo 
− Tipo de Ig: IgM 
− Suero: Anticuerpos IgM con actividad aglutinante hasta 30°C en 
albumina 
Alto titulo a 4°C habitualmente >512 
En enfermedades crónicas con anticuerpos monoclonales 
− Especificidad: Habitualmente anti-I, otras i, Pr 
 
AHAI Mixtas 
− PCD + por: IgG, C3 
− Eluido: Reactivo 
− Tipo de Ig: IgG,IgM título <64 a 4°C, amplio rango térmico 
 
HP Frigore 
− PCD+: C3 
− Eluido: No reactivo 
− Tipo de Ig: IgG 
− Suero: Hemolisina bifásica de Donath-Landsteiner sensibiliza GR 
en frio y hemoliza a 37°C 
− Especificidad: Habitualmente anti-P (reacciona con todos los GR 
normales excepto p o pk) 
 
 
 
Investigación de las AHAI en el laboratorio Inmunohematológico 
Pueden darse dos casos: un medico nos manda un paciente con la 
sospecha de una AHAI o nos viene un paciente para una trasfusión y 
en el lab de IH descubrimos que tiene una AHAI 
 
No solo necesitamos la muestra, sino tambien los datos 
− Investigación de laboratorio 
− Investigación de los síntomas que presenta el paciente 
− Investigar la historia clínica completa 
− Una historia de medicamentos es especialmente importante, 
sobre todo si se sospecha una AHAI inducida por fármacos 
 
Desafíos en laboratorio de AHAI 
− Se imponen problemas serológicos propios de la autoinmunidad 
− Lograr fenotipicación ABO Rh sin interferencia de los auto-ac en 
suero y GR 
− Alcance y rendimiento de las pruebas de elución según el tipo de 
AHAI fría, caliente o inducida por drogas 
− Elección adecuada de las técnicas disponibles para cada 
paciente para detectar la presencia de alo-ac en presencia de 
auto-ac 
− Inferir la implicancia in vivo de los auto-ac y alo-ac subyacente 
en relación a la supervivencia de los GR transfundidos en la 
circulación 
 
Los estudios IH tendrán por objeto: 
− Contribuir al diagnósticos y su tratamiento farmacológico 
electivo 
− Contribuir al mejor tratamiento transfusional 
 
Pruebas de laboratorio en AHAI 
− Elusión 
− Auto adsorciones 
− Detección de aloac enmascarados 
@natural.k1ller 
 
Evolución serológica 
− Puede haber uno o más auto-ac 
− Pueden ir variando la especificidad y el tipo de Ig 
− Una tercera parte de los auto-ac están acompañados con alo-ac 
 
Especificidad de ac AHAI caliente 
En el 70% los ac IgG suelen tener una especificidad dentro del 
sistema Rh, aunque reaccionen con todos los dadores disponibles 
(reacción panaglutinante) 
 
Especificidades AHAI caliente 
Auto-ac  Reacciona c/ GR propios y además con 
Anti-e (RH5): fenotipo e+ 
Anti-nl: fenotipo Rh normal 
Anti-pdl (RH17): fenotipo Rh normal y D--/D-- 
Anti-dl (RH29) Fenotipos Rh normales D--/D—y --/-- 
 
Es importante conocer la: 
ESPECIFICIDAD RELATIVA 
− Si bien reaccionaran con todos los GR, pueden reaccionar con un 
titulo mayor contra celulas portadoras de un ag Rh en particular, 
mostrando una preferencia selectiva lo que explica la 
denominación de especificidad relativa. 
− Ha sido demostrada la importancia clínica a la hora de 
seleccionar unidades con fines transfusionales en relación a la 
sobrevida de los GR transfundidos y el resultado beneficio 
esperado 
− El método para determinar la especificidad Rh clínicamente 
significativa es la titulación diferencial del anticuerpo frente a 
hematíes de distintos fenotipos Rh 
 
 
 
Ejemplo de la titulación diferencial 
Fenotipo 
de GR 2 4 8 16 32 64 128 256 
R1R1 4+ 3+ 3+ 2+ 2+ 1+ 0 0 
R2R2 3+ 2+ 1+ 0 0 0 0 0 
rr 4+ 3+ 2+ 2+ 1+ 0 0 0 
 
Comparación de valores de título obtenidos en un procedimiento de 
titulación diferencial 
 Anti-D Anti-C Anti-E Anti-c Anti-e 
CDe/CDe 
(R1R1) ↑ ↑ ↑ 
cDE/cDE 
(R2R2) ↑ ↑ ↑ 
cde/cde 
(rr) ↑ ↑ 
 
− Especificidad cambia durante el curso de la enfermedad 
− Generalmente ocurre una ampliación de la especificidad (e->nl-
>pdl->nl) 
− Se ha sugerido que el tratamiento con prednisona o metrotexato 
puede destruir o suprimir selectivamente clones de linfocitos 
particulares, afectando la especificidad observadas 
− Tambien se han descripto pacientes que primero hacen un alo-
ac, luego hacen más alo-ac y finalmente hacen auto-ac 
 
Investigaciones séricas 
Auto-ac reactivos a TA: 
− Autoabsorción fría 
− Absorción con estroma de hematíes de conejo 
− Test precalentados 
− La autoabsorción fría no puede realizarse cuando el paciente ha 
recibido una transfusión en los últimos 3 meses 
@natural.k1ller 
− La autoabsorción fría se realiza mediante la mezcla de GRs del 
paciente tratados con enzimas con el suero del paciente y su 
incubación a 4°C durante al menos una hora. Pueden ser 
necesarias varias absorciones. 
 
Precalentamiento: 
− Calentamiento de los GRs y el suero del paciente por separado a 
37°C, para luego mezclarlos y realizar la detección de ac o panel 
− Podemos detectar la mayoría de los Ac clínicamente 
significativos 
 
Especificidad ac en AHAI fría 
− Anti-I (la que mayormente se encuentra) 
− Anti-i 
− Anti-H 
− Anti-HI 
− Anti-Pr 
− Otras: Anti-iH, -IP1, -IA, -iA, -It, -Gd, -Rx, Lud, -Vo, -Li, -Me, -
Om, -Ju 
 
 Grs “O” GRs “A1” GRs Enz Adulto Cordón Adulto Cordón 
Anti-I ↑↑ ↓/o ↑↑ ↓/o ↑↑↑ 
Anti-IH ↑↑ ↓ ↓/o ↓/o ↑↑↑ 
Anti-H ↑↑ ↑ ↓/o ↓/o ↑↑↑ 
Anti-i ↓/o ↑↑ ↓/o ↑↑ ↑↑↑ 
Anti-Pr ↑↑ ↑↑ ↑↑ ↑↑ o 
 
 
Procedimientos serológicos: 
Herramientas fundamentales para: 
Sospechar, confirmar y separar especificidades 
 
 
Procedimientos serológicos existentes: 
Uso de agentes reductores químicos. 
− Reductores de ag de membrana (AET, DTT (y ZZAP), 2-ME, 
glicina acida EDTA) son reactivos sulfhidrilos (actúan sobre 
puentes disulfuros) 
− Reductores de ac (DTT, 2-ME y reactivos IgG químicamente 
modificados) 
 
ZZAP 
− Mezcla DTT con papaína o fascina al 1% 
− Facilita al autoadsorción de suero y GR autólogos permitiendo la 
detección de alo-ac subyacentes 
− Utilizado para efectuar la tipificación ABO y Rh 
 
2-Mercaptoetanol 
− 2.ME 0.1 M pH 7.3 
− Disocia la IgM en subunidades 7 S 
− Estas pierden la actividad aglutinante de la IgM original 
(impedimento estérico) 
 
Problemas serológicos con los que me puedo encontrar: 
− Errores tipificación ABO y Rh por Ac fríos 
− Aglutinación espontanea de GR por ac fríos y calientes 
− Dificultad para la interpretación de los resultados de la DAI 
 
¿Cómo lo resuelvo? 
Directa ABO 
− Mantener las muestras a 37°C 
− Lavar GR con solución salina a 37-45°C (Control paralelo con 
albumina al 6%) 
− Tratar los GR con reactivos sulfdrilos (2-ME, DTT o ZZAP) 
 
 
 
@natural.k1ller 
Resolución ABO 
− Directa: incubación 10m a 45°C y luego lavar a la misma temp 
− Inversa: suero precalentado y GR a 37°C 
 
Resolución Rh 
Aglutinación espontanea de GR recubiertos por IgG con reactivos de 
alta concentración proteica: 
− Uso de reactivos de baja concentración proteica (mezcla 
mono/policlonales) 
− Disociación de IgG con difosfato de cloroquina o glicina 
acida/EDTA 
− GR con IgM: uso de DTT o 2-ME 
 
Aloac en AHAI 
− Presentes en un alto porcentaje 
− La detección de aloac propone un problema serológico 
− Los GR recubiertos por Alo y auto ac son removidos más 
rápidamente por el sistema mononuclear fagocítico que aquellos 
que solo están recubiertos por auto ac 
− Frecuencia: 11 a 47% aprox 
− Sospechar si la PCD débil y DAI fuerte 
− Suero y eluato pueden tener diferente especificidad 
− Especificidades variadas, las más frecuentes: Anti-E y Anti-K 
− 15% no corresponden a estas especificidades 
 
Detección aloac en presencia de autoac 
− Objetivo: remover el autoac y dejar, si está presente, el aloac en 
el sobrenadante de la adsorción 
− Método: autoadsorción 
 
 
 
 
 
Detección en fríos 
− Autoadsorción a 4°C con GR tratados previamente con ZZAP o 
enzimas 
− Pruebas estrictamente a 37°C: suero y GR preincubados, 
incubación 1-2 horas, centrifugación a 37°C y uso de SAGH anti-
IgG 
 
Detección en caliente 
− Sin transfusión reciente  adsorción autóloga: previo 
tratamiento de los GR con ZZAP 
− Termo-auto-adsorción 
A una alícuota de paquete globular tratado y lavado vamos a 
agregarle un volumen igual del suero del paciente. Vamos a 
incubar esa mezcla, al cabo de una hora la centrifugamos y el 
sobrenadante de ese suero lo vamos a testear, si tenemos 
actividad es probable que tengamos que hacer más de una 
autoadsorción, entonces lo que hacemos es tomar una alícuota 
de ese sobrenadante y exponerlo a otro paquete globular luego 
deincubación, centrifugamos separamos el sobrenadante y lo 
adicionamos nuevamente a otro paquete globular, incubar y 
centrifugar. Ahora ese suero autoadsorbido va a tener solamente 
aloac y los voy a poder enfrentar a un panel identificador para 
poder conocer la especificidad de ese aloac. 
 
− Con transfusión reciente  adsorción alogénica 
− Anticuerpos miméticos: es un ac que se mimetiza con una 
especificidad determinada. 
− Para la adsorción alogénica voy a tomar 3 juegos de GR de 
diferentes fenotipos asegurándome que en cualquiera de las 3 
celulas queden sobrenadando alguna de las especificidades mas 
frecuentemente esperadas. Entonces agrego a cada uno de estos 
tubos el suero del paciente, lo incubo durante 1 hora y voy a 
testear el sobrenadante y es probable que si este anti-ac anti-D 
está presente va a absorberse tanto a los GR R1/R1 como R2/R2 
@natural.k1ller 
porque tienen el antígeno D y no lo harán con la células D 
negativas por lo tanto el anticuerpo anti-D va a quedar 
sobrenadando contra, eventualmente, el remanente de autoac, 
pero vamos a tener también acá sobrenadando el ac presente 
 
Tratamiento AHAI caliente: 
− Tratamiento de enfermedad de base 
− Corticoides 
− Esplenectomía 
− Inmunosupresores (ciclofosfamida, ciclosporina A, azatioprina, 
rituximab) 
− Ultima opción: transfusión 
 
Tratamiento AHAI fría 
− Evitar exposición al frio 
− Tratamiento enfermedad de base 
− Inmunosupresores (Ciclofosfamida, clorambucilo, fludarabina, 
rituximab, alfa interferón 2b) 
− RPI (recambio plasmático intensivo) 
 
Transfusión: 
− PELIGROSA 
− NUNCA es el tratamiento de elección 
− Conveniencia está en relación con el grado de anemia 
− Condición clínica del paciente en reposo 
− SOLO en casos donde corra peligro la vida 
− NO transfundir una cifra de Hb 
 
Riesgo-Beneficio en caso de hacer transfusión: 
− Conveniencia de transfusión: severidad y progresión 
− Hay mayor riesgo de hemolisis asociada a transfusión 
− Hay mayor riesgo de no transfundir pacientes con anemia severa 
cuando tiene reticulocitopenia asociada a parvovirus B19 o a 
enfermedades de base inmune 
Evaluación de la progresión: 
− Determinación seriada de Hb/Hto: 2-4hrs y 12-24hrs 
− Síntomas y signos de hemolisis aguda: fiebre, dolor 
abdominal/lumbar, hemoglobinuria o hemoglobinemia 
 
Una anemia puede ser: 
− Estable durante evaluación inicial 
− Crónicamente estable 
− Hemolítica fulminante 
− Progresivamente severa 
 
Hb g/dl 
Probabilidad de 
deterioro clínico 
significativo 
Estrategia 
transfusional 
≥ 10 Muy bajo Evitar 
8-10 Bajo Evitar 
6-8 Moderado ↓ Actividad 
≤ 6 Alto Requerida 
 
Riesgo de transfusión a alguien con una anemia hemolítica 
autoinmune 
− Relacionados con aloac 
− Relacionados con autoac: por el autoac define la sobrevida 
postransfusional, IRA (Insuficiencia renal aguda asociada a la 
transfusión), CID (coagulación intravascular diseminada), 
hemoglobinuria/hemoglobinemia. Depende del volumen 
transfundido y de la velocidad de hemolisis 
− Relacionados con aumento de la masa de GR: numero de GR 
lisados en la unidad de tiempo es un % del total de GR 
disponibles. Cuanto mayor sea el N° de GR disponibles mayor 
será la cantidad de GR hemolizados por unidad de tiempo 
@natural.k1ller 
Volumen a transfundir: 
− Alícuotas de 100ml de GRD 
− Dependiendo de la severidad de la hemolisis hasta 2 veces al día 
− Volumen total debe ser administrado en forma lenta (hasta en 4 
horas) 
− No intentar elevar el Hto >8gr/dl 
 
Transfusión en AHAI fría: 
− GR I+ (porque la donación viene de adultos) y el paciente tiene 
Anti-I 
− Fase de destrucción acelerada que se va a extender hasta que 
los GR transfundidos adquieren resistencia a la lisis por C’ 
− GR transfundidos son hemolizados en minutos 
− Debe ser evitada 
− Usar calentadores en línea 
− Mantener al paciente en ambiente caliente 
− Si el ac frio es de amplio rango térmico = responde a corticoides 
− Se pueden utilizar Anti-CD20 
− RPI 
 
Transfusión en HPF 
− Rara vez es necesaria 
− Rango térmico <20°C no presenta anemia severa 
− Rango térmico ≥ 30°C puede ocasionalmente presentar anemia 
severa 
− Transitoria 
− RPI (Glader 2022) 
 
 
 
 
 
 
 
Transfusión en AHAI caliente 
− Aumento transitorio de Hb esta asociado con un aumento de 
riesgo de: inducir la formación de aloac, aumentar la potencia del 
autoac, inducir hemoglobinuria asociada a lisis por autoac. 
− Uso forma de freno de su sistema mononuclear fagocítico: 
corticoides 
− GGEV 
− Ciclosporina 
− Esplenectomía 
− Anti-CD20 
 
Indicación de transfusión: falla cardiaca, signos neurológicos o 
anemia rápidamente progresiva 
Tratamiento paliativo: reposo absoluto 
 
Autoac con especificidad relativa, si tenemos en cuenta la 
especificidad relativa en la transfusión la sobrevida de los GR es 
mucho mejor. 
 
Transfusión en AHAI 
− Seleccionar la unidad “más adecuada” 
− Leucodepletada 
− Usar alícuotas de 100-150ml 
− Lentamente hasta en 4 horas 
− Usar corticoides o GGEV 
 
Unidad “menos incompatible” 
− No es un término IH 
− No tiene definición en la nomenclatura medica 
− Su uso difiere en diferente servicios 
− No es el aspecto critico de las pruebas de compatibilidad en 
AHAI 
− No es la única alternativa aceptable para la adecuada selección 
de unidades para la transfusión en AHAI 
@natural.k1ller 
AHI por drogas 
− Muchos fármacos producen modificaciones en el sist inmune 
− Alguna de ellas presenta manifestaciones clínicas 
− Cuando el blanco de la modificación repercute en el GR pueden 
dar lugar a la aparición de una AHID 
− No son muy frecuentes 1:100.000 
− Presentación clínica variable 
− 16% de todas las AHAI 
− Mas de 100 drogas implicadas 
− Tiempo desde la exposición a la droga y la aparición de AHID es 
de 6 días 
− Independiente de la vía de administración 
− Una vez formados, los ac pueden permanecer por años 
− En general se producen tras la administración de altas dosis por 
periodos prolongados 
− El aumento de la dosis no aumenta la probabilidad de desarrollar 
AHID 
 
PCD+ se desarrolla en el: 
− 3% de los pacientes que reciben altas dosis de penicilina IV 
− 10% de los pacientes que reciben por mas de 3 meses alfa-
metildopa 
 
El diagnóstico es dificultoso porque: 
− Frecuente polimedicación 
− Drogas que inducen autoinmunidad pueden confundirse con 
AHAI idiopáticas 
− Relación temporal entre administración del medicamento y la 
hemolisis no es concluyente 
− Otras posibles causas concomitantes de anemia 
− Ac contra metabolitos de la droga 
− Ac contra excipientes o sus metabolitos 
 
 
Rta inmune a droga: 
− Naturaleza de la molécula carrier 
− El grado de conjugación (densidad de epitopes) 
− Naturaleza de la unión química 
 
Mecanismos de acción postulados que producen AHID: 
− Hapteno: Penicilina 
− Inmunocomplejos: cefalosporinas 2° y 3° generación 
− Adsorción no inmunológica: cefalotina 
− Inducción de la autoinmunidad: alfametildopa 
 
Rta inmune: 
− El medicamento puede fijarse: al propio fármaco solo, al propio 
fármaco unido a las proteínas de membrana, solo a las proteínas 
de la membrana. 
− Anticuerpos pueden ser: fármaco dependiente o independientes. 
 
Farmacodependientes: 
− Producen adsorción firme: penicilina, cefalosporinas, 
eritromicina, tolbutamida, estreptomicina. 
− Ac reconoce la droga adsorbida a la membrana del GR 
− Inmunocomplejos: cefalosporina, 
− Ac se une a la droga y el complejo se une inespecíficamente a la 
membrana del GR 
− Teoría del “espectador inocente” 
 
Farmacoindependientes: 
− Mecanismo propuesto: alteración de la membrana, inducción de 
IgG e inhibición de los Linf T supresores 
 
Adsorción no inmunológica de proteínas: 
− Alteración de la membrana produce adsorción inespecífica de 
proteínas plasmáticas: cefalosporinas 
 
@natural.k1ller 
Mecanismo de acción Droga prototipo Mecanismo de acción 
Adsorción. 
Hipótesis del Hapteno 
Penicilina 
Cefalosporinas 
Hemólisis 
extravascular 
Hipótesis de 
complejos inmunes 
QuinidinaQuinina 
Hemólisis 
intravascular aguda y 
falla renal 
Inducción de 
autoinmunidad Alfametildopa AHAI 
 
Adsorción de droga: 
− Hemolisis predominantemente extravascular 
− No interviene el complemento 
− El ac se pone de manifiesto enfrentando el suero del paciente a 
GR previamente sensibilizados por la droga 
 
Características AHAI por penicilina 
− Altas dosis de penicilina IV, al menos 10.000.000 unidades 
durante una semana 
− Hemolisis se desarrolla de 7 a 10 días 
− PAD+ IgG 45% también C 
− Ac se eluye y reacciona con GR sensibilizados in vitro con 
penicilina 
− Recuperación completa al discontinuar el tratamiento 
 
Mecanismo de complejo inmune: 
− Complejo inmune se une a la membrana del GR y fija 
complemento 
− Generalmente el Ac es una IgM 
− Clínica de hemolisis intravascular y falla renal 
− El Ac se demuestra mediante neutralización in vitro con una 
solución isotónica de la droga 
 
 
 
Características AHID adsorción no inmune de proteínas: 
− PCD+ sin AHAI 
− PCD por IgM, IgG, IgA, C, albúmina 
− Eluido no reactivo 
− Suero reacciona con GR tratados con droga, aunque los donantes 
normales también reaccionan 
 
Mecanismo de autoinmunidad 
− 10-30% de pacientes tratados con alfametildopa desarrollan 
autoac entre los 3-6 meses de inicio del tratamiento, cursando 
con PCD positiva 
− Incidencia de PCD es dosis dependiente 
− 0,5% desarrolla AHAI 
− Si tiene AHAI va a ser indistinguible de una AHAI caliente 
idiopática 
− AHAI resuelve dentro de las 2 semanas de discontinuado el 
tratamiento 
− PCD se mantiene reactiva hasta 2 años 
 
Teoría unificadora Mueller-Exkardt y Salama: 
− Interacción primaria del fármaco y sus metabolitos con la 
membrana celular, condicionado por: 
o Composición química del fármaco 
o Estructura de proteínas de la membrana 
o Susceptibilidad de las proteínas del paciente a unirse al 
fármaco: pH, Temp, fuerza iónica del medio y factores 
genéticos del receptor 
− Anticuerpos dirigidos a: 
o Complejo fármaco-antifármaco, antígenos celulares, 
ambos en el mismo paciente (complejos inmunes o 
adsorción firme (AD), mecanismo autoinmune (AI), 
ambos mecanismos concurrentes) 
 
 
@natural.k1ller 
Manifestaciones clínicas: 
− Hemolisis intravascular mediada por complemento: 
− Complejos inmunes. Cursan un 30-50% con IRA (insuficiencia 
renal aguda) 
− Hemolisis extravascular mediada por interacción con receptores 
macrofágicos: 
o Adsorción firme en altas dosis IV 
o Autoac: 30% PAD positiva y 1% hemolisis 
 
Conclusiones: 
Los medicamentos ejercen su influencia en los pacientes: 
A través de la acción terapéutica y a través de los efectos adversos 
que producen 
 
Video 8: Reacciones adversas asociadas a la transfusión 
 
Definición: Aquellas respuestas anormales o efectos adversos que 
un paciente presenta o desarrolla durante o después de la 
administración de hemocomponentes. 
 
Clasificación: 
− Dependiendo del momento de aparición: Agudas o tardías 
− Dependiendo del mecanismo: Inmunes y no inmunes 
 
Inmunológicos: 
− Inmediatos: 
o Reacción hemolítica 
o Reacción febril no hemolítica 
o Edema pulmonar no cardiogénico (TRALI) 
o Reacción alérgica 
o Reacción anafiláctica 
− Tardíos: 
o Reacción hemolítica 
o Purpura postransfusional 
o Aloinmunización 
o Enfermedad injerto vs huésped 
o Inmunosupresión 
 
No inmunológicos: 
− Inmediatos: 
o Hemolisis 
o Sepsis 
o Sobrecarga circulatoria 
o Embolia gaseosa 
o Hipotermia 
o Toxicidad por citrato 
o Toxicidad electrolítica 
− Tardíos: 
o Hemosiderosis (sobrecarga de hierro) 
o I T T (infecciones transmitidas por las transfusiones) 
 
Incidencia: 
− Reacción febril no hemolítica 1-2% 
− Reacción alérgica 1-2% 
− Reacción hemolítica aguda 1/20.000 
− Reacción hemolítica tardía 1/7.000 
− Reacción hemolítica fatal 1/600.000 
 
Reacción hemolítica post transfusional (RHPT) 
La reacción Ag-Ac desencadena el síndrome de respuesta 
inflamatoria sistémica como consecuencia de la liberación de 
citoquinas y sistemas enzimáticos de amplificación: 
− Citoquinas: TNF alfa, IL-1, IL-8 y IL-6 
− Sistemas enzimáticos: coagulación, fibrinolisis, calicreína-
bradicinina 
− RHPTA (A de aguda): ABO, Rh, Kell, Duffy o Kidd 
 
 
@natural.k1ller 
Incidencia RHPTAguda: 
− Error de compatibilidad ABO/Rh: 1:6.000 a 1:20.000 
− RHTA: 1:76.000 
− Evidencia de hemolisis clínica o de laboratorio: 1:80.000 
− Transfusión ABO incompatible: 1:40.000 
− RHTA fatal 1:1.800.000 
 
Incidencia RHTTardía 
− Mayor frecuencia: 1:2500 
− Es la reacción menos conocida y reportada 
− Ac de los sistemas Rh, Kidd, Duffy, Kell y MNSs 
 
Mecanismo RHPTA 
− Hemolisis intravascular IgM activa complemento hasta C5-9: 
hemoglobinemia y hemoglobinuria 
− Algunos GR no son lisados debido a la acción protectora de las 
proteínas inhibitorias de la membrana celular o por la presencia 
de IgG 
− SMF (sistema mononuclear fagocítico): fagocitosis o destrucción 
CCDA 
− Principales causantes: ABO 
 
− La reacción extravascular IgG no activa complemento o solo 
hasta C3 
− Capturados por macrófagos y monocitos 
− Lisis en bazo e hígado 
− Aumento de la bilirrubina indirecta 
− Algunas producen CCDA 
− Ac involucrados Rh, Kell, Duffy y Kidd 
 
Modulación de RHPTA 
− Clase y subclase de Ig 
− Capacidad de activar el sistema complemento 
− Concentración plasmática, afinidad y especificidad del Ac 
− Densidad y movilidad de Ag eritrocitarios 
− Actividad del SMF 
− Sensibilidad de la membrana al complemento 
− Cantidad de sangre incompatible transfundida 
− Condición clínica del paciente 
− Amplitud termina del Ac 
− Tipo de hemolisis 
 
Citoquinas proinflamatorias 
IL-1: 
- Pirógeno mediado por prostaglandina E2 
- Estimula hematopoyesis y moviliza neutrófilos 
- Está relacionada con el colapso vascular, shock y muerte 
- Activa linfo B y T 
- Induce la expresión de TNF-alfa, IL-8, IL-6, proteína 
quimiotáctica para monocitos (MCP), antagonista del 
receptor de IL-1, C, moléculas de adhesión (ICAM-1, ELAM-
1), endotelina y factor tisular. 
 
TNF-alfa: 
- Proteína multifuncional producida por monocitos y 
macrófagos 
- Actúa sobre celulas endoteliales produciendo la liberación de 
o IL-8 
o MCP 
o PG 
o Óxido nítrico 
o IL-6 
o Factor tisular 
- Permeabilidad vascular, vasodilatación y activación de 
coagulación 
- Estimula degranulación de neutrófilos y expresión en celulas 
endoteliales de moléculas de adhesión ICAM-1, ELAM-1, 
produce fiebre 
@natural.k1ller 
- Desregula la síntesis de la proteína S (pérdida de la 
propiedad anticoagulante) 
- Disminuye actividad fibrinolítica (protrombótico) 
 
IL-6 
- Producida por el sistema mononuclear fagocítico 
- Estimula proliferación y diferenciación de los linfo B 
- Activa linfo T 
- Es responsable de la síntesis de proteínas de fase aguda: 
fibrinógeno, complemento y proteína C reactiva 
 
IL-8 
- Tiene acción quimiotáctica sobre neutrófilos e induce su 
activación, desgranulación y altera la adhesión de las 
moléculas de superficie 
- Tiene acción quimiotáctica sobre linfo 
- Induce la liberación de histamina de los basófilos 
 
Citoquinas antinflamatorias 
Receptor antagonista de IL-1: 
- Producido por el sistema mononuclear fagocítico (SMF) 
- Antagonista competitivo de IL-1 
- Determina la variabilidad clínica de las reacciones mediadas 
por IgG 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Hemolisis por ABO 
 
 
 
@natural.k1ller 
Reacción hemolítica aguda 
Causas: 
- Incompatibilidad mayor (tx de GR portadores de un ag hacia 
el cual el px tiene ac) 
- Incompatibilidad menor 
- Incompatibilidad entre donantes 
 
¿Por qué se produce? 
Mayormente por error administrativo 
- Incorrecto rotulado de muestras 
- Mala identificación del paciente 
- Incumplimiento de las normas 
- Situaciones de emergencia 
 
Fisiopato 
- Reacción ag-ac activa vía clásica del complemento  
Hemolisis intravascular 
- Si se detiene en C3b  GR con IgG y C3b son removidos por 
los macrófagos hepáticos 
- GR recubiertos solo por IgG sin activación del C  son 
removidos por