1 - TECNICAS HISTOLOGICAS 2016

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TECNICAS HISTOLOGICAS
Definición de Histología Moderna
Histología: Ciencia	que	considera el estudio			de	la estructura de un de- terminado material biológico (órga- no) y el modo de cómo se interrela- cionan	estructural y funcionalmen- te	sus		constituyentes		celulares y tisulares (Histofisiología).
HISTOLOGÍA HOY
BIOQUÍMICA
BIOLOGÍA MOLECULAR
FISIOLOGÍA
HISTOPATOLOGÍA
APLICACIONES
DESCAMADOS (Epitelio bucal, etc)
BIOPSIAS (Colonoscopía, etc.)
OBSERVACION DE FLUIDOS CORPORALES (Vaginal, Nasal, etc.)
FROTIS (Sanguíneo, Médula ósea, etc.)
BIOPSIAS DE MAMAS
BIOPSIAS: MUESTRAS
M.O. = estructura celular
M.E. = ultraestructura celular
COLONOSCOPIA
ENDOSCOPIA
MICROBIOPSIA: TOMA DE MUESTRA
TRATAMIENTO DE BIOPSIAS
BIOPSIA GÁSTRICA
TOXOPLASMA EN HISTIOCITOS
FROTIS SANGUÍNEO
Confección
OBSERVACIÓN DE FROTIS SANGUÍNEO
MIELOGRAMA
ESTERNON
TOMA DE MUESTRA
Mucosa bucal
FROTIS VAGINAL
Mujer de 30 años Día 9 ciclo menstrual
Mujer menopáusica
Detección histológica de neoplasias
Carcinoma
Neoplasia
Técnica histológica
Microscopía de luz y muestras incluidas en parafina
1.-Toma de Muestra
2.- Fijación
3.- Deshidratación
4.- Inclusión
5.- Microtomía
6.- Tinción
7.- Montaje
1.-TOMA DE MUESTRA
Obtención de un trozo de tejido o descamado de éste, utilizando los instrumentos adecuados para la ocasión.
Dictado y muestreo
2.- FIJACIÓN
Su función principal es la conservación de las diversas estructuras celulares y tisulares, además de impedir la autolisis, destruir patógenos y endurecer el tejido.
Fijación Química
Identificación
Lavado
Rotulado
Carga
3.- DESHIDRATACIÓN
Extracción total del agua presente en las células y tejidos.
Procesador automático de tejidos
Programación y puesta en marcha
Procesador	con disco horario
4.- INCLUSIÓN
Es el proceso mediante el cual se agrega un medio de soporte a las células, tejidos e intersticios del tejido con el fin de poder realizar, posteriormente, cortes delgados y de grosor uniforme.
Formación del bloque de inclusión
Colocación de muestras
Individualización
Tacos o bloques
Unidad de corte en parafina
5.- CORTE (Microtomía)
Permite realizar cortes finos (5-10 micrones) con la finalidad de facilitar su adhesión y permitir el paso uniforme de la luz.
Tipos de micrótomos
Micrótomo rotatorio
Portanavajas desechables
Sujeción del bloque de inclusión
Desgaste
Obtención de una cinta
Estiramiento
Adhesión de la cinta a un portaobjeto.
Una serie adherida
Secado en estufa a 50 º C/ 2 hrs.
6.- TINCIÓN (Coloración)
Permite contrastar estructuras por medio de la unión selectiva de partículas capaces de comunicar color. La tinción utilizada de rutina en microscopía óptica es la Hematoxilina/Eosina (H/E).
Desparafinado e hidratación
Colorantes Topográficos (Núcleo/ Citoplasmas)
7.- MONTAJE
Medio hidrófilo o hidrófobo que se intercala entre el tejido y el cubreobjeto. Otorgan un medio homogéneo al paso de la luz.
Resina sintética
Montaje de una muestra ya teñida
Montaje final
Preparados Histológicos finales
Observación al microscopio de luz
Hematoxilina y Eosina (H/E)
PIEL
MICROSCOPIOS
MICROSCOPIOS
TÉCNICAS ESPECIALES
“Histoquímica”
Objetivo de la Histoquímica
Aplicación de Metodologías de laboratorio que permiten la identificación de moléculas, macromoléculas y/o actividades metabóli- cas en células y tejidos normales o patológi-
gicos.
Sustancias identificables mediante técnicas histoquímicas tradicionales
- LIPIDOS.
PIGMENTOS.
MICROSUSTANCIAS.
ÁCIDOS NUCLEICOS.
PROTEÍNAS Y PÉPTIDOS.
SALES INORGÁNICAS.
	ELEMENTOS DE LA MATRIZ EXTRACELULAR.
Histoquímica
TÉCNICAS ESPECIALES
“Inmunohistoquímica”
OBJETIVO DE LA INMUNOHISTOQUÍMICA
Aplicación de técnicas inmunomolecu- lares que permitan identificar y loca- lizar mediante la microscopía de luz o electrónica, diversos componentes celulares y tisulares mediante el em- pleo de anticuerpos específicos.
TÉCNICAS INMUNOHISTOQUÍMICAS
INMUNOFLUORESCENCIA
INMUNOENZIMATICAS
INMUNOMETÁLICAS
INMUNOFLUORESCENCIA
TÉCNICAS INMUNOENZIMÁTICAS
INMUNOHISTOQUIMICA
HORMONA
(Antígeno)
HORMONA
(Antígeno)
HORMONA
(Antígeno)
HORMONA
(Antígeno)
HORMONA
(Antígeno)
HORMONA
(Antígeno)
ANTI- HORMONA (Ac)
ANTI- HORMONA (Ac)
ANTI- HORMONA (Ac)
ANTI- HORMONA (Ac)
ANTI-
HORMONA (Ac)
ANTI- HORMONA (Ac)
ANTI – ANTI - Ac
ANTI – ANTI - Ac
ANTI – ANTI - Ac
ANTI – ANTI - Ac
Incubación en
diaminobencidina
Detección intracelular de las hormonas hipofisiarias Se trabaja con un corte histológico montado sobre un portaobjeto. Este se trata con una solución que contiene el Ac de la hormona a detectar. Posteriormente la prepara-
ción se somete a una solución que contiene una antigama- globulina marcada con peroxidasa. Finalmente se incuba en Diaminobencidina (Sustrato de la enzima) la cual precipita.
¡¡ ATENCIÓN !!
LECTURAS SUGERIDAS:
Capítulo 1: Microscopía
Techernitchin A. Pag. 3
Capítulo 2:Técnicas histológicas Techernitchin A. Pag. 9
Capítulo 3:Técnicas histoquímicas Tchernitchin A. Pag. 15
FIN