PRACTICA ADN

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Universidad Autónoma de Querétaro 
Facultad de Ciencias Naturales 
Licenciatura en Medicina Veterinaria y Zootecnia 
 
 
 
Rodríguez Magaña N. Gabriela 
Grupo 2 
 
Reporte de práctica #7 
“Visualización de ADN” 
Marzo 19, 2018 
 
 
Laboratorio de Biología Molecular 
Prof. Ulisses Moreno Celis 
 
 
 
Introducción 
Electroforesis en gel 
La electroforesis en geles de agarosa o poliacrilamida es una de las 
metodologías más utilizadas en el laboratorio en todo lo relacionado con el 
trabajo con ácidos nucleicos. Mediante la electroforesis podemos separar 
fragmentos de ADN y ARN en función de su tamaño, visualizarlos mediante 
una sencilla tinción, y de esta forma determinar el contenido de ácidos 
nucleicos de una muestra, teniendo una estimación de su concentración y 
grado de entereza. Podemos además extraer del gel los fragmentos de ADN 
que sean de interés, para posteriormente utilizarlos en diferentes 
aplicaciones. 
La electroforesis de ADN fue, y sigue siendo, una herramienta de 
importancia primordial en el desarrollo de las técnicas del ADN 
recombinante o ingeniería genética. La idea de utilizar la técnica de 
electroforesis a través de una matriz para analizar muestras de ADN 
corresponde a Vin Thorne, un bioquímico del 
Instituto de Virología de Glasgow, quien a mediados de los años 60 del 
pasado siglo estaba interesado en caracterizar las distintas formas de ADN 
que se obtenían de partículas purificadas de polyomavirus. Su razonamiento 
era que una combinación de fuerzas eléctricas y de fricción permitiría el 
desplazamiento y separación en función del tamaño o topología de 
diferentes moléculas de 
ADN. Éste es exactamente el principio en que se basa la electroforesis de 
ácidos nucleicos. 
El sufijo foresis significa "migración" o "movimiento". El prefijo electro nos dice 
que estamos utilizando electricidad para hacer que las moléculas migren. 
Todas las moléculas de ADN tienen la misma cantidad de carga por masa. 
Debido a esto, la electroforesis en gel separa los fragmentos de ADN 
únicamente por su tamaño. La electroforesis nos permite ver cuántos 
fragmentos diferentes de ADN están presentes en una muestra y cuán 
grandes son unos con respecto a otros. También podemos determinar el 
tamaño absoluto de un fragmento de ADN examinándolo junto a una 
"escala" estándar de fragmentos de tamaño conocido. 
La separación de moléculas en la electroforesis se basa en la carga (sobre 
lo que se aplica la fuerza) y la sección transversal efectiva de la molécula 
en el estado que se encuentre: plegada, desnaturalizada, ligada a otras 
moléculas, etc. 
Un conjunto de fragmentos de ADN se separan por tamaño porque todos 
pertenecen al mismo tipo de molécula. En general, la única diferencia 
importante entre los distintos fragmentos debería ser su longitud. 
Los geles para separar ADN suelen estar hechos de un polisacárido llamado 
agarosa, que se consigue como hojuelas secas pulverizadas. Cuando la 
agarosa se calienta en una solución amortiguadora (agua mezclada con 
algunas sales) y deja enfriar, se forma un gel sólido ligeramente blando. A 
nivel molecular, el gel es una matriz de moléculas de agarosa que se 
mantienen unidas por puentes de hidrógeno y que forman pequeños poros. 
En un extremo, el gel tiene muescas en forma de ranuras llamadas pozos, 
que son donde se colocarán las muestras de ADN. 
Antes de agregar las muestras de ADN, el gel debe colocarse en una 
cámara. Uno de los extremos de la cámara se conecta a un electrodo 
positivo y el otro extremo se conecta a un electrodo negativo. El cuerpo 
principal de la cámara, donde se coloca el gel, se llena con solución 
amortiguadora con sales que puede conducir la corriente. 
El extremo del gel que tiene los pozos se coloca hacia el electrodo negativo. 
El extremo sin pozos (hacia donde migrarán los fragmentos de ADN) se 
coloca hacia el electrodo positivo. 
 
 
 
 
 
 
Objetivo 
El alumno aprenderá el fundamento y la metodología de la electroforesis 
en gel y podrá visualizar fragmentos de ADN de distintas muestras. 
 
Materiales 
Matraz Erlenmeyer Cámara para electroforesis 
Balanza Peines 
Fuente de poder Transluminador (BIO-RAD) 
Papel higiénico Papel aluminio 
Horno de microondas 
 
 REACTIVOS: 
Muestras Bromuro de Etidio 
Buffer TAE 1x (Tris Acetato EDTA) Agua destilada 
Agarosa Buffer de carga 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Metodología 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Preparar el gel de agarosa* 
Colocar el marcador de peso molecular 
en el primer pozo y cargar cada uno de 
los pocitos correspondientes. 
Llenar la cámara de electroforesis 
con un Buffer TAE 1x 
Encender la cámara de electroforesis 
al voltaje correspondiente con el tipo 
de muestra. 
Esperar hasta que se vea la 
separación de las bandas. 
Llevar el gel hasta el Transluminador 
en el que se visualizarán las bandas 
obtenidas con las muestras 
estudiadas 
Preparación del gel de Agarosa: 
1) Preparar 1 l de solución de Buffer TAE 1x. 
2) En un matraz Erlenmeyer, mezclar 75 ml de la 
solución TAE 1x con 1.5 g de agarosa, pues requerimos 
que la solución de agarosa esté al 2%. 
3) Calentar la solución en el microondas para favorecer 
la solubilidad de la agarosa. Calentar en ciclos cortos, 
como de 20s cuidando que la solución no se derrame, 
y sacar del microondas para mezclar, continuar así 
hasta que la agarosa se disuelva por completo y la 
solución se vea transparente y sin grumos. 
Bromuro de Etidio* por cada 75 ml de la solución de 
agarosa caliente. Alternativamente, puede agregarse el 
Bromuro a las muestras y no al gel, pero de acuerdo 
con el asesor del curso, se obtienen mejores resultados 
cuando se adiciona al gel y no a las muestras. 
5) Mezclar y vaciar todo el contenido del matraz en la 
cámara de electroforesis que servirá de molde para 
hacer la placa del gel y colocar, con cuidado, los peines 
en los rieles correspondientes para formar los pozos 
que se requieran para colocar las muestras. 
6) Cubrir con papel aluminio para proteger de la luz (el 
bromuro de etidio es fluorescente, esta característica 
es la que nos ayuda a medir nuestros resultados, pero 
también se pierde en contacto con la luz). 
7) Dejar reposar por 20 minutos o hasta que el gel se 
endurezca. 
8) Retirar los peines. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Resultados 
Usando un ADN que el profesor previamente había preparado obtuvimos 
los siguientes resultados: 
 
 
Conclusión 
En esta ocasión nos pudimos dar cuenta que a pesar de parecer una 
práctica muy sencilla cualquier paso que hagas mal puede resultar en el 
fracaso total, haciendo que la práctica tenga que ser realizada de nuevo. 
Una preparación inadecuada del gel de agarosa hace que la resolución 
de las bandas que forman sea difusas. 
Afortunadamente al final la práctica resultó de manera exitosa, y para ver 
los resultados el equipo completo fue al laboratorio de Microbiología para 
usar el Transluminador. 
Bibliografía 
Aaij C. y P. Borst. 1972. The gel electrophoresis of DNA. Biochimica and 
Biophysica 
Fierro F., S. Gutiérrez, J. Casqueiro y J. F. Martín. 2001. Karyotyping of fungi 
by Pulsed 
Field Gel Electrophoresis. Págs. 105-125 En: S.G. Pandalai (ed.), Recent 
Research Developments in Genetics, vol. 1. Research Signpost, Trivandrum, 
India