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Cátedra de Química Biológica – Facultad de Ciencia Naturales – UNSa GUÍA DE ESTUDIO 8 TRANSFERENCIA DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA ACTIVIDADES Ejercicio 1: Estructura del ADN y ARN a. Complete la siguiente tabla a fines de comparar la estructura de las moléculas de ADN y ARN: ADN ARN Unidad estructural Desoxirribonucleótidos Ribonucleótidos Bases nitrogenadas Adenina, Timina Guanina, Citosina Adenina, Uracilo Guanina, Citosina Estructura primaria Polímero lineal de desoxirribonucleótidos Polímero lineal de ribonucleótidos Estructura secundaria Dos cadenas de nucleótidos se unen en una doble hebra, con sus bases nitrogenadas enfrentadas. La estructura tridimensional es una doble hélice. ARNm lineal, sin estructura secundaria ARNt estructura de tallos de bases complementarias y horquillas de bases no complementarias (También en ARNribosomico y ARN pequeños). Enlaces responsables de la estructura primaria -Fosfodiéster entre grupo OH del C3’ de la ribosa de un nucleótido y el grupo fosfato del C5` de la ribosa del nucleótido siguiente. - Fosfodiéster entre grupo OH del C3’ de la ribosa de un nucleótido y el grupo fosfato del C5` de la ribosa del nucleótido siguiente. Enlaces o interacciones de la estructura secundaria -Puentes hidrógeno entre bases nitrogenadas complementarias de cada hebra de la doble hélice -Interacciones entre bases apiladas (van der Waals) -En ARNt, ARNr y ARN pequeños puentes hidrógeno entre bases nitrogenadas complementarias en las regiones de tallo -Interacciones entre bases apiladas (van der Waals) Estabilidad Estable Inestable (prinmcipalmente en ARNm; ARNt, ARNr y ARN pequeños son mas estables por las estructuras secundarias que poseen) b. ¿En qué se diferencian un desoxirribonucleótido de un ribonucleótido? ¿Qué implicancias tiene para la estabilidad de la molécula? Cátedra de Química Biológica – Facultad de Ciencia Naturales – UNSa Se diferencian en que el grupo funcional unido al C2 de la pentosa del desoxirribonucleótido esta reducido, por lo tanto, se trata de una desoxirribosa. El desoxirribonucleótido tiene un H, mientras que la pentosa del ribonucleótido se trata de una ribosa con un grupo OH en el C2. En el caso de los ribonucleótidos, el grupo OH del C2 puede protagonizar un ataque nucleofílico al grupo fosfato del ribonucleótido siguiente provocando la ruptura del enlace fosfo-diester entre nucleotidos. c. ¿A qué se refiere que las cadenas de la doble hélice del ADN sean antiparalelas? Las hebras son antiparalelas debido a que los esqueletos de azúcar-fosfato en las hebras complementarias de ADN de doble hebra tienen orientaciones opuestas. Cada extremo del ADN de doble hebra está formado por el extremo 5’ de una hebra y el extremo 3’ de la complementaria. d. ¿Cuáles son las bases púricas y cuáles las bases pirimídicas? ¿Cómo se aparean entre ellas en el ADN y en el ARN? En base a sus respuestas indique cuál de las siguientes es la proporción de bases púricas y pirimídicas correcta en los ácidos nucleicos: - 2 purinas: 1 pirimidina - 1 purina: 1 pirimidima - 1 purina: 2 pirimidinas - 2 purinas: 3 pirimidinas Las bases púricas son Adenina y Guanina y las bases pirimídicas son: Citosina, Timina y Uracilo. En el ADN una A en una hebra se aparea con T en la otra, y G se aparea con C; en el ARN, la A se aparea con U y la G con C. Ejercicio 2: Replicación del ADN a. ¿A qué se refiere que la replicación del ADN sea un proceso semiconservativo? ¿Por qué la replicación en una de las hebras es continua y en la otra discontinua? Que sea semiconservativa quiere decir que cada una de las hebras de la doble hélice sirve como hebra molde para la formación de una hebra complementaria. Hacia el final de la replicación se originan dos moléculas de ADN hijas, cada una de las cuales está formada por una hebra molde proveniente de la molécula parental y una hebra complementaria sintetizada durante el proceso. La replicación siempre ocurre en sentido 5´ 3, debido a que la ADN polimerasa agrega nucleótidos trifosfatos en ese sentido, es decir que el molde debe estar en sentido 3´→5´. Al ser las hebras de la molécula antiparalelas, sólo una de ellas se encuentra en sentido 3´5´, por lo tanto, la síntesis en esa hebra a medida que avance la horquilla de replicación será continua sin interrupciones, sintetizándose una hebra complementaria a ese molde en sentido 5´3´. La otra hebra molde está en el sentido contrario, es decir 5´→3´y se replicará de forma discontinua a medida que avance la horquilla de replicación, primero se sintetiza cada vez un nuevo primer y se replica ese fragmento, y así va avanzando en pequeños tramos en forma discontinua. b. Ordene los eventos que ocurren durante la replicación: Cátedra de Química Biológica – Facultad de Ciencia Naturales – UNSa 1_Helicasa desenrolla la doble hélice en determinados sitios 2_Las tensiones originadas por el desenrollamiento de la hélice son estabilizadas por acción de las topoisomerasas. 3_El ADN monocatenario es estabilizado mediante la unión de determinadas proteínas que ayudan a mantener la doble hebra abierta y previenen su degradación. 4_Un cebador de ARN se sintetiza en el sitio de inicio de la replicación por acción de la primasa. 5_Un dNTP se aparea con su base complementaria en la hebra de plantilla y la ADN polimerasa cataliza la formación de un enlace fosfodiester entre ese desoxirribonucleótido y el ultimo nucleótido del cebador de ARN. 6_Se libera un pirofosfato que es degradado por la enzima pirofosfatasa. 7_Mas desoxirribonucleótidos trifosfato se agregan uno a uno a continuación del ultimo desoxirribonucleótico por acción de la ADN polimerasa. c. Si bien la replicación ocurre de manera similar en eucariotas y en procariotas, existen algunas diferencias. Investíguelas. Ejercicio 3: Transcripción a ARN a. ¿A qué se le denomina hebra codificante o sentido y a cuál hebra no codificante o antisentido? ¿Cuál de ellas es la que se transcribe a ARNm? La hebra codificante es la que tiene la secuencia de nucleótidos tal y como debe ser transcripta para generar una proteína funcional. La hebra no codificante es la hebra complementaria a la codificante. La hebra que se transcribe es la no codificante. Al sintetizarse un producto de ARN complementario a la hebra no codificante se obtiene, entonces, un ARN de secuencia idéntica a la de la hebra codificante, excepto que U sustituye a T. b. ¿Cuáles son las etapas de la transcripción y qué ocurre en cada una de ellas? Las etapas de la transcripción son: 1) iniciación, 2) elongación y 3) terminación. Durante la iniciación la ARN polimerasa se une al sitio promotor de la hebra de ADN antisentido. Cuando la ARN polimerasa se encuentra con la señal de inicio en la hebra de ADN, empieza la etapa de elongación en la cual se sintetiza la hebra de ARN complementaria mediante la adhesión de ribonucleótidos correspondientes. Cuando la ARN polimerasa se encuentra con la señal de terminación detiene la síntesis de la hebra de ARN. c. Complete el siguiente cuadro a fines de diferenciar la transcripción en eucariotas de la de procariotas: Eucariotas Procariotas Cantidad de genes por transcripto de ARN Un solo gen, Monocistrónico Varios genes (operón); Policistrónico ARN polimerasas participantes ARN polimerasa I (ARNr,), II (ARNm, ARN pequeños) , III (ARNt) ARN polimerasa mitocondrial Una única ARN polimerasa (se une al promotor directamente) Cátedra de Química Biológica – Facultad de Ciencia Naturales – UNSa ARN polimerasa del cloroplasto ARN polimerasa necesita de otras proteínas (factores de transcripción) que se una al sitio promotor en el ADN previamente Modificaciones postranscripcionales del ARNm -Agregado de capuchón de GTP metilado al extremo 5´ -Agregadode cola poli A en extremo 3´ -corte y empalme para eliminar intrones (regiones no codificantes) Sin modificaciones postranscripcionales Modificaciones postranscripcionales del ARNt Metilación de algunas bases, agregado de secuencia CCA en extremo 3´ Transcripto primario es recortado por acción de ARNasa, algunas bases pueden sufrir luego desaminación, metilación o reduccion Modificaciones postrascripcionales del ARNr Metilación Un transcripto policistronico es metilado y luego fraccionado en fragmentos de ARN mas cortos Ejercicio 4: Traducción de la información almacenada en el ARNm a proteínas a. Defina código genético con sus propias palabras. ¿Qué es un codón? Es la regla de correspondencia entre la secuencia de nucleótidos y la secuencia de aminoácidos en la proteína. Un codón es un triplete de tres bases que codifican para un determinado aminoácido. b. Enumere las características del código genético y explique cada una de ellas. Las características del código genético son: * Degenerado, por lo cual un aminoácido puede ser codificado por más de un codón (existen codones sinónimos) * Específico, cada codón codifica un único aminoácido o, en otras palabras, un mismo codón no puede codificar dos aminoácidos distintos. * No solapante, quiere decir que cuando se transcribe el mensaje se transcriben codón a codón, es decir triplete a triplete sin superponerse entre sí. *Universal, todos los seres vivos tienen el mismo código de correspondencia entre codones y aminoácidos. c. Indique para los siguientes aminoácidos la cantidad de codones que los codifican y su secuencia: Cátedra de Química Biológica – Facultad de Ciencia Naturales – UNSa d. Enumere las etapas de la traducción. 1. Activación de los aminoácidos 2. Iniciación 3. Elongación 4. Terminación de la cadena polipeptídica e. ¿Cómo se une al ARNt al aminoácido que será transferido a la cadena polipeptídica en formación? ¿Qué enzima se encarga de catalizar dicha reacción cuáles son sus cofactores? El último ribonucleótido en el extremo 3´del ARNt se une mediante un enlace éster del grupo OH de su C3´con el carboxilo del aminoácido. La reacción es catalizada por la aminoacil-ARNt sintetasa y sus cofactores son la coenzima ATP y el ion metálico Mg2+. f. 1. ARNm 2.Codón 3.ARNt 4.Subunidad mayor del ribosoma 5.Subunidad menor del ribosoma 6.Anticodón 7.cadena polipeptídica El ARNt que se unió primero al ribosoma es el que acaba de ser liberado del sitio E y que se encuentra libre sin aminoácido unido. Esta por ocurrir la formación del enlace peptídico entre el aminoácido Lisina de la cadena polipeptídica del ARNt en el sitio P y el aminoácido Valina que se encuentra en el ARNt del sitio A. La enzima que cataliza esa reacción es la peptidil transferasa. A continuación, ocurrirá la traslocación: todo el complejo se desplaza un codón sobre el ARNm. Por lo tanto, el ARNt que se encontraba en el sitio P y que ya no tiene la cadena polipeptídica adherida ahora se desplaza hacia el sitio E y es liberado. El ARNt con la cadena polipeptídica en el sitio A, se desplaza hacia el sitio P. Luego, un nuevo aminoacil-ARNt se une al sitio A por reconocimiento de su anticodón al codón sobre el ARNm. Ejercicio 5: Resumen. Complete la siguiente tabla resumen sobre los procesos que ocurren en relación a la transferencia de la información genética: Proceso Plantilla Sustratos y cosustratos Productos Enzimas (nombre al complejo enzimático y las enzimas que lo componen) Lugar de ocurrencia Replicación del ADN Las dos hebras del ADN hacen de Sustratos: -Hebras de ADN complemen En procariotas: -Replisoma: formado por primosoma (primasa, En procariotas: citoplasma Cátedra de Química Biológica – Facultad de Ciencia Naturales – UNSa molde simultáneamente -Desoxirribonucleótidos trifosfato: dATP, dTTP, dGTP, dCTP -ribonucleótidos trifosfato: ATP, UTP, CTP, GTP (para el ARN cebador) Cosustratos: Mg2+ taria a las hebras molde helicasa) y ADN Polimerasa III -Topoisomerasa (o girasa) -ADN Polimerasa I (eliminación de ARN cebador fragmento de Okasaki y síntesis de ADN) y II (reparación) -Ligasa (unión de fragmentos de Okasaki) En eucariotas: ADN polimerasa α (primasa), β (reparación), δ y γ (polimerasas en hebra líder y retrasada), ε (reparación y llenado de hueco en hebra retrasada) Helicasa Topoisomerasa Ligasa En eucariotas: núcleo Transcripci ón del ADN Hebra de ADN no codificante (antisentido) Sustratos: -Ribonucleótidos trifosfato: ATP, UTP, CTP, GTP Cosustratos: -Mg2+ -Hebra de ARNm, ARTt o ARNr -ARN polimerasa -Topoisomerasa En procariotas: citoplasma En eucariotas: núcleo Traducción ARNm Sustrato: -aminoácidos libres Cosustrato: -ATP -GTP -Factores proteicos - Polipéptido -Aminoacil-ARNt sintetasa -Peptidil-transferasa Ribosomas presentes en el citoplasma Ribosomas del RER (sólo eucariotas)
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